高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的探讨高浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化（EMT）的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型。方法体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含60、120 mmol/L葡萄糖的M199培养基分别培养48、72 h;以正常M199培养基和含120 mmol/L甘露醇的M199培养基为对照。采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cad-herin、α-SMA、Collagen I mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果高浓度葡萄糖（60、120 mmol/L）刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I mRNA和α-SMA蛋白表达水平显著增加（P〈0.05）;大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cad-herin蛋白表达水平显著下降（P〈0.05）。结论高浓度葡萄糖能上调α-SMA、Collagen I表达和下调E-cadherin表达,高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的探讨高浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型。方法体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含60、120 mmol/L葡萄糖的M199培养基分别培养48、72 h;以正常M199培养基和含120 mmol/L甘露醇的M199培养基为对照。采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cad-herin、α-SMA、Collagen I mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果高浓度葡萄糖(60、120 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I mRNA和α-SMA蛋白表达水平显著增加(P0.05);大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cad-herin蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论高浓度葡萄糖能上调α-SMA、Collagen I表达和下调E-cadherin表达,高浓度葡萄糖诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响。方法晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

清肾颗粒对5/6肾切除大鼠肾组织线粒体自噬及肾小管上皮-间质细胞转化的影响

目的：探讨清肾颗粒对5/6肾切除大鼠肾组织线粒体自噬及肾小管上皮细胞转分化（Epithelial-mesenchymal,EMT）的影响。方法：雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、清肾颗粒组,每组各10只。除假手术组外,其余20只大鼠均制作5/6肾切除模型。清肾颗粒各组分别给予相应剂量清肾颗粒水溶液;假手术组、模型组以生理盐水灌胃。连续给药8周后,无菌采取腹主动脉血,代谢笼留取24h尿液,摘取左侧肾脏。检测血、尿肌酐浓度,并计算内生肌酐清除率;Western blot法检测肾组织中Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、α-SMA;免疫荧光法检测肾组织中LC3-Ⅱ和线粒体膜蛋白VDAC1共定位表达;HE和Masson染色光镜观察大鼠肾脏病理改变;透射电镜检测肾小管上皮细胞中线粒体的超微结构。结果：与假手术组比较,模型组大鼠的线粒体自噬相关蛋白Pink1、Parkin、LC3Ⅱ表达量均显著下降,肾小管EMT标志蛋白α-SMA显著升高（P<0.05）。与模型组比较,清肾颗粒组大鼠的Pink1、LC3Ⅱ蛋白表达量显著升高,α-SMA表达量显著降低（P<0.05）,Park...     

晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的探讨晚期糖基化终产物对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型。方法体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含40 mmol/L晚期糖基化终产物(AGEs)、80 mmol/L AGEs的M199培养基分别培养48、72 h;以正常M199培养基和含80 mmol/LBSA的M199培养基为对照。采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA的表达;应用Western blot检测E-cadher-in、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果①AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;②AGEs(40 mmol/L、80mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著增加(P<0.05);③AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 AGEs能上调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达和下调E-cadherin表达,AGEs诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

整合素连接激酶在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨整合素连接激酶（ILK）在转化生长因子β1（TGF-β1）介导的肾小管上皮细胞转分化（EMT）中的表达及作用。方法采用不同浓度的TGF-β1刺激体外培养的人肾小管上皮细胞（HKC）,观察HKC形态学改变,并应用Western blotting方法检测其ILK、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,实时RT-PCR法测定ILK、α-SMA、纤维连接蛋白（FN）、E钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA的表达。结果（1）细胞形态学改变：在TGF-β1刺激下HKC细胞由正常状态下的圆形或卵圆形变为梭形,且随着孵育时间的延长,梭形细胞比例增大。（2）Western blotting和实时RT-PCR检测结果：在TGF-β1刺激下,ILK和α-SMA的蛋白表达量显著增加;ILK、α-SMA和FN的mRNA表达量也明显升高,而E-cadherin mRNA表达量明显减少。TGF-β1呈时间和剂量依赖性刺激HKC表达ILK蛋白和mRNA。（3）相关分析：ILK蛋白表达量与α-SMA蛋白表达量呈正相关（r=0.940,P〈0.01）;ILK mRNA表达量与α-SMA mRNA、FN mRNA表达量呈正相关（r=0.926,r=0.915,P〈0.01）,与E-cadherin mRNA表达量呈负相关（r=-0.820,P〈0.01）。结论ILK参与TGF-β1诱导的肾小管EMT,并在其中发挥关键作用。     

鸢尾素在腺嘌呤诱导慢性肾病大鼠模型中的表达及意义

目的 探讨血清鸢尾素在腺嘌呤诱导的慢性肾病（chronic kidney disease, CKD）大鼠模型中的表达和变化,及鸢尾素与其相关通路在CKD肾纤维化中的作用。方法 采用简单随机法将20只雄性SD大鼠分为对照组和模型组（CKD组）,每组各10只。观察比较建模后第2、4周末两组大鼠的生化指标、血清鸢尾素和血清BMP7水平与肾脏病理改变及肾纤维化程度,并检测其肾脏组织的α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen type I, Col-Ⅰ）、骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein 7, BMP7)、Smad1蛋白和信使RNA(messenger RNA, mRNA)表达水平。结果 与对照组比较,CKD组在建模后第2、4周末的血清肌酐、血清尿素氮和24 h蛋白尿定量均升高（P<0.05）,α-SMA、Col-Ⅰ蛋白及mRNA表达水平均增加（P<0.05）,血清鸢尾素和血清BMP7均降低（P<0.05）,BMP7、Smad1蛋白和mRNA表达水平均降低（P<0.0...     

TGF-β1/Smad信号通路在大黄素干预人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨大黄素干预白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化过程中是否涉及对TGF-β1/Smad信号通路的调控.方法:用5 mg/mL人白蛋白刺激体外培养的HK-2细胞,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达水平.结果:白蛋白呈时间依赖性诱导α-SMA、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调.使用一定浓度的大黄素干预后,明显抑制了白蛋白诱导的上述效应.相关性分析显示:TGF-β1、Smad2 mRNA的表达与α-SMA mRNA的表达呈正相关,与E-cadherin mRNA的表达呈负相关.结论:大黄素抑制人白蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程中,TGF-β1/Smad信号通路发挥了重要作用.     

厄贝沙坦联合普罗布考对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1表达的影响

目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及厄贝沙坦联合普罗布考对其表达的影响。方法采用高糖高脂高胆固醇饮食并配合链脲佐菌素（STZ）腹腔注射的方法建立2型糖尿病肾病大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组（NC）、糖尿病肾病组（DN）、厄贝沙坦组（DI）,厄贝沙坦＋普罗布考组（DP）,检测各组大鼠体重、随机血糖、24h尿量、24h尿蛋白定量（24hUTP）、SCR、BUN,行HE染色观察大鼠肾脏一般结构;免疫组化观察MCP-1的表达;RT-PCR观察MCP-1mRNA的表达。结果与NC组比较,各组大鼠肾脏病理损伤加重,24h尿量、24hUTP、随机血糖、SCR、BUN、肾脏MCP-1mRNA及蛋白均明显增加,体重减轻（P＜0.05）;与DN组比较,DI组、DP组大鼠肾脏病理损伤减轻,24h尿量、24hUTP、肾脏MCP-1mRNA及蛋白下降,体重增加（P＜0.05）;与DI组比较,DP组大鼠肾脏病理损伤减轻,24h尿量、24hUTP、肾脏MCP-1mRNA及蛋白水平下降（P＜0.05）;其余指标无明显改善（P＞0.05）。结论 MCP-1参与了糖尿病肾病的发生发展;厄贝沙坦及普罗布考能够降低糖尿病肾病MCP-1的表达,缓解肾脏病理损伤,联合后效果更明显。     

缬沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞相关蛋白Nephrin和TRPC6表达的研究

目的观察足细胞相关蛋白Nephrin、TRPC6在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小球中的表达,探讨缬沙坦对其干预的可能机制,为DN的防治提供理论依据。方法雄性SD大鼠40只按体重随机分为正常对照组(NC组,n=7)、DN组(n=11)、缬沙坦干预组H0组、缬沙坦干预组H1组。干预8周后检测大鼠血糖、体重、24 h尿蛋白、血肌酐、尿肌酐,计算肌酐清除率(Ccr);免疫组化法观察肾组织Nephrin、TRPC6的蛋白表达;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Nephrin、TRPC6的m RNA表达,并进行统计分析。结果 (1)与NC组相比,DN组大鼠Ccr明显减低、24 h尿蛋白定量增加(P<0.05);与DN组相比,H0组及H1组均出现Ccr增加、24 h尿蛋白定量减少(P<0.05),与H0组相比,H1组出现Ccr增加、24 h尿蛋白定量减少(P<0.05)。(2)与NC组比较,DN组大鼠肾脏Nephrin m RNA及蛋白表达均下调,TRPC6 m RNA及蛋白表达均上调(均P<0.05);与DN组比较,H0组及H1组Nephrin m RNA及蛋白表达均上调,TRPC6 m RNA及蛋白表达均下调(均P<0.05);H1组与H0组比较,Nephrin m RNA及蛋白表达均上调,TRPC6m RNA及蛋白表达均下调(均P<0.05)。(3)相关分析:采用直线相关分析后发现,24 h尿蛋白与肾脏Nephrin蛋白及基因表达呈负相关,与TRPC6蛋白及基因表达呈正相关;Ccr与肾脏Nephrin蛋白及基因表达呈正相关,与TRPC6蛋白及基因表达呈负相关。结论缬沙坦可通过上调Nephrin的表达及下调TRPC6表达维持足细胞裂孔膜的完整性,减轻足细胞裂孔膜的损伤,减少蛋白尿产生;在一定剂量范围内,缬沙坦的肾脏保护作用呈剂量依赖性。     

microRNA-192在晚期糖基化终产物诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化中的作用

目的探讨microRNA-192(miR-192)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的调控作用。方法人腹膜间皮细胞、转染miR-192抑制物后人腹膜间皮细胞和转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞在含AGEs的培养基培养72 h,以M199培养基和含80 m M BSA的M199培养基为对照,然后运用实时荧光定量PCR法检测miR-192和mRNA的表达情况,运用蛋白质印迹法检测蛋白的表达情况。结果在AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞miR-192、胶原蛋白I(Collagen I)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05)。与转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞相比,转染miR-192抑制物的人腹膜间皮细胞miR-192、Collagen I mRNA、α-SMAmRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05)。结论 AGEs可能通过上调miR-192表达诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192抑物可能通过下调miR-192表达阻止AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192在AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT中起重要调控作用。     

抗纤灵对5/6肾切除诱导慢性肾脏纤维化小鼠模型细胞外基质的影响

目的探讨抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾脏纤维化小鼠模型肾组织细胞外基质(ECM)的影响。方法C57BL/6J雄性小鼠,采用5/6肾切除制备慢性肾脏纤维化模型,2周后根据肌酐水平把手术组小鼠分为模型组,雷帕霉素和抗纤灵组,同时设立假手术组,每组10只,雷帕霉素,抗纤灵组分别给予雷帕霉素(0.00 016 g/kg),抗纤灵(0.4 g/(kg·d)灌胃治疗,模型组和假手术组等量蒸馏水,连续用药4周后处死小鼠,免疫荧光法测定肾组织I型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(Col Ⅲ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)纤维化面积;RT-PCR法检测肾组中,Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMAmRNA的表达。结果与假手组比较,模型组Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA胶原纤维化面积比值明显增加,Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMAmRNA显著增高(P < 0.01),与模型组比较,雷帕霉素,抗纤灵组胶原纤维面积比值,mRNA表达水平均有所降低(P < 0.01)。雷帕霉素与抗纤灵组比较,两者之间无显著性差异。结论抗纤灵具有雷帕霉素类似的作用,能够通过抑制小鼠肾组织Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMAmRNA的表达,减少Co Ⅰ,Col Ⅲ,α-SMA纤维化面积,对肾纤维化有一定的改善作用。      

肝细胞生长因子对肾小管上皮细胞转分化及整合素连接激酶表达的影响

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）在转化生长因子β1（TGF-β1）介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用及对整合素连接激酶（ILK）表达的影响。方法将体外培养人肾小管上皮细胞（HKC）分为正常对照组、TGF-β1刺激组和HGF干预组。应用Western blotting方法检测ILK、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达,实时RT-PCR法测定ILK、α-SMA、纤维连接蛋白（Fn）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的mRNA表达。结果在TGF-β1刺激组,ILK和α-SMA的蛋白表达量显著增加,ILK、α-SMA和Fn的mRNA表达量也明显升高,E-cad-herin mRNA表达量则明显降低（与正常对照组比较,P〈0.001）。而在HGF干预组,ILK、α-SMA的蛋白表达量以及ILK、α-SMA、Fn的mRNA表达量均较TGF-β1刺激组显著降低,E-cadherin mRNA表达量则明显升高（与TGF-β1刺激组比较,P〈0.01）。结论HGF能抑制TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化,并可降低ILK蛋白和mRNA表达水平。     

E-钙黏附蛋白、骨膜蛋白在高血压肾病中的诊断价值

目的探讨E-钙黏附蛋白、骨膜蛋白在高血压肾病中的诊断价值。方法选取2017年1月至2019年1月该院收治的108例高血压患者为研究对象,依据患者的严重程度分成单纯高血压组(35例)、高血压肾病Ⅰ~Ⅱ期组(40例)、高血压肾病Ⅲ~Ⅳ期组(33例),选择同期参加体检的35例健康志愿者纳入对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中E-钙黏附蛋白、骨膜蛋白水平。并对各项指标进行相关分析和Logistic回归分析。结果与对照组比较,单纯高血压组、高血压肾病Ⅰ~Ⅱ期组、高血压肾病Ⅲ~Ⅳ期组E-钙黏附蛋白水平明显降低,骨膜蛋白水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与单纯高血压组比较,高血压肾病Ⅰ~Ⅱ期组、高血压肾病Ⅲ~Ⅳ期组E-钙黏附蛋白水平明显降低,骨膜蛋白水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与高血压肾病Ⅰ~Ⅱ期组比较,高血压肾病Ⅲ~Ⅳ期组E-钙黏附蛋白水平明显降低,骨膜蛋白水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,E-钙黏附蛋白与24h尿清蛋白排泄率(UAER,r=-0.487,P=0.012)、尿素氮(r=-0.312,P=0.021)、血清肌酐(r=-0.341,P=0.043)呈负相关,与肾小球滤过率(r=0.512,P=0.017)呈正相关。骨膜蛋白与UAER(r=0.412,P=0.033)、尿素氮(r=0.447,P=0.029)、血清肌酐(r=0.337,P=0.036)呈正相关,与肾小球滤过率(r=-0.486,P=0.028)呈负相关。而E-钙黏附蛋白与骨膜蛋白呈负相关(r=-0.509,P=0.015)。多因素回归分析显示E-钙黏附蛋白、骨膜蛋白是影响高血压肾病的独立危险因素(P<0.05)。结论 E-钙黏附蛋白、骨膜蛋白水平可以作为诊断高血压肾病的标志物。     

TGF—β1诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的影响

目的观察TGF-β1在诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的调节作用。方法选择正常大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E,经TGF-β1（15μg／L）体外诱导3天,RT-PCR检测细胞廿平滑肌动蛋白（α-SMA）评价细胞的转分化状态,观察细胞形态,同时检测细胞骨架成分β-actin、α—tubulin mRNA的表达;免疫荧光染色观察上述细胞骨架蛋白在细胞内的排列。结果培养的NRK52E细胞经TGF-81体外诱导3天后,细胞中α—SMAmRNA的表达水平明显增多,高于相应的对照组细胞（P〈0．001）,说明NRK52E上皮细胞出现了表型转化,此时培养细胞的形态也发生了改变,由典型的鹅卵石样变为成纤维细胞样,并有多个突起;细胞骨架蛋白β-actinmRNA的表达也明显增多（P〈0．05）;β—actin蛋白的排列也发生了改变,其在胞膜下形成的厚的板样结构消失,转而在胞浆中形成粗大的束状应力纤维,沿细胞长轴纵行排列,此外,β-actin尚在某些细胞边缘形成了片层样伪足和丝状伪足。微管成分α-tubulinmRNA的表达和分布与对照组比较无明显不同。结论TGF-β1能够诱导体外培养的NRK52E细胞转分化,在此过程中细胞形态发生了改变,骨架蛋白β-actin的表达增多并发生了重建,同时骨架蛋白α—tubulin未见明显变化。     

低分子量肝素治疗糖尿病肾病的临床研究

目的观察低分子量肝素治疗糖尿病肾病的临床疗效和安全性。方法将 6 4例糖尿病肾病患者根据 2 4h尿白蛋白或蛋白定量分为早期糖尿病肾病 (30例 )和临床期糖尿病肾病 (34例 ) ,再随机分为治疗组和对照组。所有患者均给予降糖降压治疗 ;治疗组再予以低分子量肝素治疗 ,疗程 8周 ,观察血脂、血小板、纤维蛋白原、凝血酶原标准化比率、肝肾功能、内生肌酐清除率、2 4h尿白蛋白或蛋白定量变化及副作用。结果两期治疗组疗程后 ,血脂、胆固醇、纤维蛋白原、2 4h尿白蛋白或蛋白定量下降 ;临床糖尿病肾病治疗组血尿素氮、肌酐降低 ,内生肌酐清除率升高与治疗前及对照组治疗后比较均有显著性差异 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。结论低分子量肝素可安全有效的用于糖尿病肾病的临床治疗。