不同生物型羊种布鲁氏菌在新疆布鲁氏菌病流行病学中的意义

新疆维吾尔自治区地处祖国西部,地域辽阔,土地肥沃,有良好的天然牧场,宜农宜牧,是我国重要的畜牧业基地之一。各种牲畜遍布全疆,各地区人、畜间都有布鲁氏菌病的流行。据统计,自1960年至1987年从人和牲畜体内共分离出布鲁氏菌247株,其中羊种布鲁氏菌就有168株。羊种布鲁氏菌数量多,分布广,存在宿主转移,菌株毒力也有差别,在新疆布鲁氏菌病流行病学中起到重要的作用。     

布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅲ.牛种、羊种布鲁氏菌非典型株外膜蛋白SDS—PAGE图谱的特点

牛种、羊种布鲁氏菌非典型株的菌细胞经机械方法破碎、酶解后用两性离子去污剂提取其外膜蛋白并与光滑型菌株的相应成分进行SDS-PAGE图谱比较,发现两种类型的菌株外膜蛋白图谱有极大的相似之处(即布鲁氏菌光滑型菌株所共有的谱带,非典型株也全具备),但非典型株与光滑型菌株不同的是分子量大于97.4kD的热修饰蛋白电泳谱带发生丢失现象:即这一组的谱带除一条明显变宽外,其余着色变浅或基本消失,当热修饰蛋白在高温SDS系统解聚成单体后,其电泳谱带牛种菌两种类型的菌株基本一致,但对羊种菌非典型株的单体却明显增加了两条谱带,以此显示与光滑型菌株的不同。     

我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究

目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型（Multiple locus sequence typing,MLST）技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及1个基因间区的序列进行测定,将各个基因的序列与标准菌株的等位基因型进行比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型（STS）,分析与其它ST型间的遗传关系。结果 47株布鲁氏菌中,19株omp25基因与目前已有的等位基因型不同,被定义为1个新的等位基因型,即ST28。其余28株与已知的ST8型的各等位基因型一致。结论我国流行的羊种布鲁氏菌主要是羊3型菌株,国内的菌株与国外菌株遗传背景上有差异。MLST分型可以作为研究布鲁氏菌进化关系的重要手段之一。     

布鲁氏菌非典型菌株及R型菌株生物学特性和产生原因的探讨

本文报告了布鲁氏菌非典型菌株部分生物学特性的研究，从而发现了犬种布氏菌过氧化氢酶活性高于其它种布氏菌２～８倍的特性，同时完了过氧化氢酶活性与布氏菌毒力无线性关系，并对羊种布氏菌Ｓ型、Ｒ型或Ｉ型及非典型株ＯＭＰ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱进行了比较，找出非典型菌株不能用常规鉴定方法定种的可能原因，同时对出现非典型株原因进行了探讨。     

用羊种布鲁氏菌16M菌株感染豚鼠脾组织的超微病理学观察

本实验采用强毒羊种布鲁氏菌16M菌株感染豚鼠,于感染后3个月时取脾组织在透射电镜下观察其超薄切片,发现了亚细胞结构(细胞器)的病理改变。所见到的主要改变为线粒体普遍发生肿胀增大,嵴减少和断裂等表现,同时有高尔基复合体和溶酶体明显地增多。     

羊种布鲁氏菌OMP16蛋白结构的生物信息学分析

目的 使用生物信息学方法预测羊布鲁氏菌OMP16蛋白的结构特点,并预测可能的B细胞和T细胞优势表位。方法 从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌的OMP16蛋白的氨基酸序列。通过ProtParam分析OMP16蛋白的理化性质;利用DNAstar和SOMPA分析OMP16蛋白二级结构;利用Phyre2和Rasmol构建并分析OMP16蛋白三级结构;利用IEDB、DNAStar、ABCpred和BepiPred预测OMP16蛋白的B细胞抗原表位;利用SYFPEITHI和IEDB预测OMP16蛋白的T细胞抗原表位。结果 OMP16蛋白有426个氨基酸序列,理论等电点为9.72,原子组成为C2026H3209 N499O536S17,为稳定性疏水性蛋白。二级结构显示α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲分别是40.61%,19.01%,8.45%和31.92%。预测出4个B细胞优势表位,分别是93-102,183-187,273-289,294-301;5个CTL细胞优势表位,分别是69-77,175-183,267-275,373-381,408-416;5个Th细胞优势表位,分别是4-20,32-46,63-77,316-330,352-366。结论 羊布鲁氏菌OMP16蛋白结构中有4个B细胞优势表位,5个CTL细胞优势表位和5个Th细胞优势表位,为进一步为布鲁氏菌诊断和疫苗研究的奠定基础。     

羊种布鲁氏菌疫苗株M5和强毒株16M的比较蛋白质组学研究

目的阐明羊种布鲁氏菌疫苗株M5致弱的分子基础,更加深入地理解布鲁氏菌的毒力机制。方法利用双向电泳技术对相同条件下培养的羊种布鲁氏菌疫苗株M5和强毒株16M总蛋白进行分离,两株间差异蛋白点利用基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱技术进行鉴定。每个蛋白质点的肽指纹图谱均使用Mascot在NCBInr蛋白质数据库中进行检索。结果共成功鉴定了13个差异蛋白,代表了8种不同的开放阅读框(ORFs),功能涉及能量代谢,应激,物质运输等。结论上述发现为羊种布鲁氏菌疫苗株M5致弱分子基础的阐明提供了新依据。     

布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅱ.牛、羊、猪三种布鲁氏菌光滑型菌株外膜蛋白SDS-PAGE图谱的比较

用两性离子去污剂(Zwittergent 3-14)从牛、羊、猪三种布鲁氏菌不同生物型的光滑型菌株中提取外膜蛋白并进行了SDS-PAGE图谱的比较。发现三种布鲁氏菌光滑型菌株的外膜蛋白在电泳谱型上有极为相似的共同规律:即在大于97.4kD、28～31kD以及小于28kd的三个分子量区段内有着一致的谱带;除此,羊种和猪种布鲁氏菌的外膜蛋白在42.7kD附近有共同的谱带,而牛种布鲁氏菌的外膜蛋白却无。分子量大于97.4kD的一组外膜蛋白在SDS系统中经热解聚后变成一组分子量较小(约为31～42.7kD)的谱带,而该组谱带类型在牛、羊、猪三种布鲁氏菌的光滑型菌株之间存在着极其显著的种的特异性。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析

目的 利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析。方法 提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基因连入原核表达载体pET-28a(+),并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。运用PSIPRED和SWISS-MODEL进行蛋白结构分析。结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-ILP,该基因全长831 bp。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白条带出现在相对分子量约33 kD的位置,与预期相符。Western blot结果表明,大肠杆菌成功表达了重组蛋白。结论 成功克隆、表达并分析C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白,为蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白结构与功能的研究提供了有价值的资料。     

冠心病不同类型间C反应蛋白与氧化型低密度脂蛋白自身抗体的比较研究

目的 研究C反应蛋白(CRP)、氧化型低密度脂蛋白自身抗体(anti-oxLDL)与冠心病斑块稳定性的关系。方法 2003-07～12第一军医大学南方医院分别测定21例急性心肌梗死(AMI)、22例不稳定型心绞痛(UAP)、20例稳定型心绞痛(SAP)和21例对照者的CRP、oxLDL自身抗体和LDL自身抗体水平,比较各组中上述指标有无显著差异,并评估CRP分别与两种抗体水平的相关性。结果 急性冠状动脉综合征(ACS)组(包括AMI组和UAP组)的CRP明显高于SAP组和对照组(P<0.05);ACS组的oxLDL自身抗体水平明显高于SAP组和对照组(P<0.05);各组LDL自身抗体水平比较无显著差异(P>0.05);各组中CRP与oxLDL自身抗体水平是显著正相关(P<0.01),CRP与LDL自身抗体水平无显著相关性(P>0.05)。结论 对特异性抗原oxLDL的免疫反应,在导致斑块的不稳定及急性冠状动脉综合征的发生中可能起着重要的作用,oxLDL自身抗体水平可能是评价CHD斑块不稳定的重要特异性标志物。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析北大核心CSCD

目的利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析。方法提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基因连入原核表达载体pET-28a(+),并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。运用PSIPRED和SWISS-MODEL进行蛋白结构分析。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-ILP,该基因全长831bp。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白条带出现在相对分子量约33kD的位置,与预期相符。Western blot结果表明,大肠杆菌成功表达了重组蛋白。结论成功克隆、表达并分析C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白,为蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白结构与功能的研究提供了有价值的资料。     

肠道病毒71型结构蛋白VP1的原核表达及初步鉴定

目的利用大肠杆菌表达系统表达EV71 VP1蛋白并对其抗原性进行初步鉴定;为EV71疫苗研制奠定基础。方法采用PCR扩增EV71 VP1基因2-274aa片段,并将其插入表达载体pET30a（＋）,转化Transetta（DE3）菌株,SDS-PAGE和Western Blot初步分析蛋白表达及抗原性;探讨目的蛋白的最佳表达条件。结果获得相对分子质量约为30 kD的融合蛋白,Western Blot证实其抗原性良好;该蛋白的最佳表达条件是37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导表达4 h。结论表达并鉴定了EV71 VP1抗原;本研究为EV71疫苗研制及检测试剂盒的建立奠定了基础。     

H型高血压合并脑梗死患者血清CXCL16和热休克蛋白70的表达及意义

目的检测H型高血压合并脑梗死患者血清趋化因子CXCL16和热休克蛋白(HSP)70的表达特征,分析其在不同临床特征中的表达差异及相关性。方法观察组为89例H型高血压合并脑梗死的患者,对照组为36例同型半胱氨酸(HCY)10μmol/L的高血压伴脑梗死患者,正常对照组为36例无明显器质性疾病的健康成年人,均留取血清标本,应用酶联免疫吸附实验检测3组中CXCL16和HSP70的表达量。结果 3组血清中CXCL16和HSP70的表达差异有统计学意义(P0.05),观察组血清中CXCL16和HSP70的表达与梗死体积和病变严重程度相关,线性相关分析显示观察组中CXCL16和HSP70的表达无明显相关性。结论 H型高血压合并脑梗死患者血清中CXCL16和HSP70高表达,在病变的形成和进展中有重要意义。     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16—17区基因的分子克隆及序列分析

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供进一步科学依据。方法 :应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对中国 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕 CMH/YN分离株和云南省盈江县农场 CYJ/YN分离株基因组 DNA裂殖子表面蛋白 1( MSP1)第 13— 17区基因进行扩增 ,将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I双酶切后 ,回收的 MSP1第 16— 17区基因分子定向克隆M13mp18和 M13mp19载体 ,按 Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定 ,并与 MAD2 0、K1和Wellcome株原型基因进行同源性分析比较。结果 :发现脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/YN和 CYJ/YN分离株 MSP1第 16— 17区基因之间的序列完全相同 ,全长为 918bp,编码 30 6个氨基酸 ,含 12个半胱氨酸组成的 2个表皮生长因子 ( EGF)单体结构域 ;除了在核苷酸第 4 869位缺失 1个碱基和散在分布 5个碱基点突变之外 ,与 MAD2 0、K1和 Wellcome株相应基因之间的核苷酸同源性分别为 98.6%、2 3.3%和 2 2 .8%。结论 :本研究在世界上首次报道脑型疟患者恶性疟原虫分离株MSP1第 16— 17区 DNA序列测定分析结果 ,确证该基因与 MAD2 0株高度同源性 ,并发现在1691— 170 1位氨基酸存在 TCTEEDSGSSR表位。     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1 第16- 17 区基因和MSP2 基因的分子克隆与鉴定

目的: 为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法: 根据MAD20 株裂殖子表面蛋白1 (MSP1) 和FC27 株裂殖子表面蛋白2 (MSP2) 基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物, 应用多聚酶链反应(PCR) 技术对5 例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株CMH/YN 和云南省盈江县农场CYJ/YN 分离株基因组DNA MSP1 第13- 17 区基因和MSP2 基因进行扩增, 并将扩增产物分别经EcoRI 和KpnI, BamHI 和HindIII 双酶切后, 分子定向克隆M13mp18 和M13mp19 载体, 转染大肠杆菌(E. coli) TG1, 从含X-gal 和IPTG 的LB平板上, 将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经E. coli JM 103 扩增, 用碱裂解法抽提重组子复制型DNA (RFDNA ) 后, 再分别经EcoRI 和KpnI, BamHI 和HindIII 双酶切鉴定。结果: 证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫CMH/YN 和CYJ/YN 分离株MSP1 第16- 17 区基因和MSP2 基因分子克隆M13 载体。结论: 首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫CMH/YN 和CYJ/YN 分离株MSP1 第16- 17 区基因和MSP2 基因分别与MAD20 株MSP1 和FC27 株MSP2 相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16-17区基因和MSP2基因的分子克隆与鉴定

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( E.coli) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 E.coli JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。     

不同潮气量机械通气对大鼠肺组织Clara细胞分泌蛋白及分泌型磷脂酶A2的影响

目的 通过观察不同潮气量机械通气大鼠肺组织Clara细胞分泌蛋白(CC16)及分泌型磷脂酶A2(sPLA2)的表达,探讨CC16和sPLA2在呼吸机所致肺损伤(VILI)发生中的作用.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、小潮气量组和大潮气量组,测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)总蛋白含量及中性粒细胞计数,采用免疫组织化学染色法检测肺组织Clara细胞计数和CC16蛋白表达,采用逆转录聚合酶链反应法检测肺组织sPLA2 mRNA的表达.结果 大潮气量组大鼠BALF总蛋白含量、中性粒细胞的计数和肺组织sPLA2 mRNA表达水平均明显高于对照组和小潮气量组(P值均＜0.01),而肺组织Clara细胞计数和CC16蛋白表达水平则明显低于对照组和小潮气量组(P值均＜0.01);小潮气量组各项指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大潮气量机械通气通过诱导肺组织sPLA2 mRNA高表达,使Clara细胞合成及分泌CC16减少,导致肺组织炎症反应扩大,可能是VILI发生的重要因素之一.     

不同中医证型冠心病心绞痛患者血清超敏C反应蛋白和低密度脂蛋白胆固醇的表达及意义

目的检测心血瘀阻型和气阴两虚型冠心病心绞痛患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)表达,探讨其临床意义。方法冠心病不稳定型心绞痛(UAP)患者64例,冠心病稳定型心绞痛(SAP)患者66例,选取60例正常体检成人作为对照组,检测血清hs-CRP和LDL-C含量。结果 UAP和SAP组患者血清hs-CRP和LDL-C表达明显高于对照组(P<0.05),UAP组患者血清hs-CRP和LDL-C表达明显高于SAP组(P<0.05),UAP组和SAP组患者中心血瘀阻型和气阴两虚型患者血清hs-CRP和LDL-C含量均差别显著(P<0.05)。结论 hs-CRP和LDL-C在冠心病心绞痛患者血清中高表达,在疾病发生发展中可能具有一定作用。二者的水平作为中医关于冠心病病机转归的客观指标,为中医同病异治及辨证辨病结合提供客观依据,可作为冠心病病情发展的一种监测指标。