佐剂白细胞介素2对乙型肝炎病毒核酸疫苗免疫效应的影响

核酸免疫是指将编码外源蛋白的核酸表达载体直接导入机体以激发机体产生特异性免疫应答。由于核酸疫苗可诱导机体产生较强的细胞免疫应答 ,故有望应用于慢性病毒性感染如乙型肝炎的治疗。探讨如何增强乙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫效应 ,尤其细胞免疫效应具有重要意义。为此 ,我们构建了编码乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ ,ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ)表面抗原蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ3 1 Ｓ作为ＨＢＶ核酸疫苗 ,研究了人白细胞介素 2 (ｒｈＩＬ 2 ,ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 2 )对ＨＢＶ核酸疫苗诱导ＢＡＬ…     

不同剂量白细胞介素2作为乙型肝炎病毒核酸疫苗佐剂的效应

目的构建表达乙型肝炎病毒 (HBV) S蛋白的重组质粒 p CR3.1- S作为核酸疫苗 ,观察重组人白细胞介素 2(rh IL - 2 )作为佐剂对其诱导 BAL B/ c小鼠产生免疫应答的影响。方法分别以 EL ISA法、3H- Td R掺入法、Cr5 1 4h释放法等测定免疫小鼠的血清抗 HBs、淋巴细胞增殖活性、淋巴细胞杀伤效应 ,初步研究不同免疫组体液和细胞免疫应答的差异。结果血清抗 HBs EL ISA效价 ,rh IL - 2组与对照组相比较差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;淋巴细胞增殖指数、淋巴细胞杀伤率 ,10 0 0 U (只·次 ) rh IL - 2 /组和 2 0 0 0 U (只·次 ) rh IL - 2 /组与对照组相比较差异显著 (P<0 .0 5 ) ,而 5 0 0 U (只·次 ) rh IL - 2 /组与对照组相比较无显著差异 (P>0 .0 5 )。结论一定剂量的 rh IL - 2作为佐剂可增强 HBV核酸疫苗的免疫效应     

乙肝病毒核酸疫苗诱导H-2b小鼠特异性免疫反应的初步研究

目的：观察并证实adr和adw亚型NHBs核酸疫苗单独应用，或与HBc核酸疫苗联合免疫诱导H－2^b小鼠的特异性体液和细胞免疫反应，方法：C57BL／6（H－2^b)小鼠随机分为4组：pJW4303组（P组，5只），pJW4303/MHBs/adw组（W组，6只）；pJW4303/MHBs/adr组（R组，6只）;pJW4303/MHBs/adr pJW4303/HBc组（R＋C组，6只），免疫方法为各组小鼠每只每次注射相应的质粒DNA疫苗100μg(100μl)，免疫程序为0，2，4w，小鼠血清抗HBs和抗HBc水平以及小鼠脾淋巴细胞培养上清中的IFN－γ和IL－4浓度用ELISA法检测，小鼠淋巴细胞抗原特异性增殖试验采用3H－TdR掺入法，计算刺激指数（SI），结果：W，R，R＋C各免疫组在末次免疫后4w所有小鼠均产生抗－HBs，但各免疫组间无明显差异，抗－HBs以R＋C组最早出现，R＋C组小鼠在第1次免疫后2w抗－HBc即全部阳性，P组免疫后始终末出现抗－HBs和抗－HBc，核酸疫苗免疫的W，R，R＋C各组免疫小鼠HBsAg特异性脾淋巴细胞增殖指数（SI）均高于P组（P＜0．01－P＜0．001），R＋C（n=6)组小鼠脾淋巴细胞HBsAg特异性SI比R组显著升高（P＜0．05），R＋C免疫小鼠HBcAg特异性脾淋巴细胞增殖指数（SI）均≥2，与P组（其SI均＜2）相比差异非常显著（P＜0．001），W，R，R＋C各免疫组小鼠脾淋巴细胞与HBsAg共培养的上清中IFN－γ的浓度比P组显著升高（P＜0．001），而它们的IL－4 浓度比P组明显下降（P＜0．001），R＋C免疫组小鼠脾淋巴细胞与HBcAg共培养的上清中IFN－γ浓度也较P组明显升高（P＜0．05），但其IL－4浓度与P组无差别（P＞0．05），结论：adr亚型和adw亚型HBV外膜中蛋白（MHBs)核酸疫苗和HBcAg核酸疫苗能诱导H－2b小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答，具有良好的体液和细胞免疫原性，MHBs核酸疫苗与HBcAg核酸疫苗联合免疫能加强MHBs核酸疫苗诱导的体液和细胞免疫反应，所诱导出的辅助性T细胞免疫反应为Th1型。     

IL-2／IFN-γ融合蛋白基因质粒联合HBVDNA疫苗治疗HBV转基因小鼠效果评价

目的评价融合蛋白基因质粒（pFP）联合在体电脉冲（EP）介导的HBVDNA疫苗（pS2．S）免疫HBV转基因（Tg）小鼠的治疗效果。方法HBVTg小鼠随机分成3组，每组5只，分别为pS2．S＋pFP、pS2．S＋pcDNA3．1免疫治疗和pcDNA3．1对照组。联合免疫质粒总剂量40μg／只，按1：1比例混合接种。初次免疫后第4、8周分别进行第一、二次增强免疫，免疫前后分别检测血清学、组织学及HBV特异性免疫应答。结果HBVDNA血清定量检测结果，pS2．S＋pFP组免疫第8周（13317±2539）拷贝／ml、第12周（6462±3359）拷贝／ml时分别较免疫前（36159±7769）拷贝／ml明显减低，差异具有统计学意义（P〈0．01）；pS2．S＋pcDNA3．1组第4周（20618±9523）拷贝／ml及第8周（23818±5319）拷贝／ml时均较其免疫前水平（36090±4421）拷贝／ml明显降低（P〈0．01），但不能持续到12周（27691＋13071）拷贝／ml。并明显高于此时pS2．S＋pFP组水平，差异有统计学意义（P〈0．01）；观察终点（12周）pS2．S＋pFP组强小鼠个体血清HBVDNA及肝组织HBsAg表达水平降低的同时，伴随其血清ALT水平及HBsAg特异性IFN-γ分泌细胞数目的升高。结论，Th1类细胞因子IL-2／IFN-γ融合蛋白基因表达质粒能够增强HBVDNA疫苗抑制强鼠HBVDNA复制和表达的治疗作用。     

重组IL-12对乙肝疫苗在小鼠诱导免疫应答的作用

目的:观察重组IL-12对乙肝疫苗在小鼠诱导应答的强度与性质的作用,探讨将重组IL-12用作乙肝治疗性疫苗分子佐剂的可能性.方法:将乙肝疫苗联合重组IL-12肌注免疫小鼠,检测小鼠产生的抗乙肝表面抗原特异性体液和细胞免疫应答.结果:乙肝疫苗联合重组IL-12能明显增强小鼠T淋巴细胞的增殖活性、促进分泌细胞因子IFN-γ和IL-2并提高IgG2a抗体水平.结论:重组IL-12可显著增强乙肝疫苗诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型.     

IL-12对结构优化的HBV核心抗原DNA疫苗诱导免疫应答的影响

目的 探讨IL-12对一种结构优化的HBV核心抗原(HBcAg)DNA疫苗免疫效果的影响。方法 将小鼠IL-12基因插入结构优化的DKA疫苗pST-HBc，构成pST-HBc/IL12，将pST-HBc／IL12转染COS7细胞，ELISA检测培养上清中的HBcAg和小鼠IL-12。分别将pST-HBc／IL12和pST-HBc肌肉注射接种BALB／c小鼠，检测小鼠的体液和细胞免疫应答。结果 ELISA检测到培养上清液中的HBcAg和小鼠IL-12，pST-HBc／IL12诱导的抗-HBc总IgG阳转率和抗体水平不及pST-HBc，但其诱导的脾细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应均强于pST-HBc。结论 IL-12可进一步增强这种HBcAgDNA疫苗诱导的细胞免疫应答。     

重组人IL-18和IL-18-GFP融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

目的在大肠杆菌中表达重组人ＩＬ－１８（ｒｈＩＬ－１８）及ｒｈＩＬ－１８－绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）融合蛋白并测定其生物活性。方法构建原核表达质粒ｐＥＴ２８ａ／ｈＩＬ－１８及ｐＴｒｃ９９／ｈＩＬ－１８－ＧＦＰ,并分别转化大肠杆菌ＢＬ２１。用ＩＰＴＧ诱导重组蛋白的表达,超声裂菌上清中的ｒｈＩＬ－１８用镍金属螯合层析柱进行纯化,ｒｈＩＬ－１８－ＧＦＰ用抗ＧＦＰ亲和层析柱及ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛柱纯化。以人的外周血单核淋巴细胞测定两重组蛋白的生物活性。结果表达的ｒｈＩＬ－１８及ｒｈＩＬ－１８－ＧＦＰ均具有促进Ｔ细胞增殖,增强ＮＫ细胞细胞毒作用及诱导外周血单核淋巴细胞合成ＩＦＮ－γ的能力,ｒｈＩＬ－１８－ＧＦＰ还具有ＧＦＰ的绿色荧光特性,可对Ｐ８１５细胞进行标记。结论表达并纯化的ｒｈＩＬ－１８及ｒｈＩＬ－１８－ＧＦＰ具有生物活性,可用于进一步的功能研究。     

HIV-1重组核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫应答的研究

目的：研究白细胞介素6（IL－6）对人类免疫缺陷病毒（HIV）gp120基因免疫小鼠的调节作用。方法：构建表达中国流行株HIV－1B亚型gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV－1B亚型gp120基因与IL－6基因的核酸疫苗质粒pGPIL-6，检测其在哺乳动物细胞中的表达并 将上述两种质粒注射Balb/c鼠，检测小鼠产生的CD4^ 和CD8^ T细胞数情况及诱导CTL反应能力。结果：以间接免疫荧光法（IFA）检测到gp120在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL-6免疫鼠，小鼠产生的CD4^＋和CD8^ T细胞数及诱导产生CTL反应的能力明显高于单纯注射gp120的小鼠。结论：协同应用IL－6基因可明显加强HIV－1gp120基因免疫效果，为中国流行株HIV－1核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。     

乙型肝炎核酸疫苗NV—HB／s肌注小鼠后HBsAg的表达和抗 …

目的 研究乙型肝炎核酸疫苗肌注小鼠后在体内的表达及小鼠体液免疫应答的规律,同时观察接种局部组织的病理变化。方法 以乙型肝炎核酸疫苗ＮＶ－ＨＢ／ｓ肌注小鼠,然后定期分批处死,采集肌注局部组织检测ＨＢｓＡｇ（ＡＢＣ免疫组化法）,采集外周血标本检测ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｓ（ＥＬＩＳＡ法０,并常规病理检查。     

小鼠IL-18基因修饰瘤苗的抗白血病作用研究

我们在前期工作中成功制备了IL-18基因修饰的白血病疫苗,为了探讨IL-18基因修饰瘤苗的体内抗白血病作用,实验采用L1210小鼠淋巴细胞白血病模型,在小鼠体内接种IL-18基因修饰瘤苗,观察瘤苗对L1210细胞致瘤性的影响及免疫保护作用,并进一步对其抗白血病作用机制进行了探索。结果显示,IL-18基因修饰瘤苗能够明显延长荷瘤小鼠存活时间,大部分小鼠达到长期生存,且长生存小鼠用野生型L1210细胞二次攻击后大多数仍能长期生存,表明IL-18基因修饰瘤苗有显著的抗白血病作用,并可诱导小鼠产生免疫记忆和免疫保护。机制探讨发现,接种IL-18基因修饰瘤苗后,小鼠脾脏淋巴细胞对L1210肿瘤细胞的CTL及NK细胞杀伤活性明显高于对照组(P<0.05),提示IL-18基因修饰瘤苗能够显著增强抗肿瘤CTL和NK细胞反应。接种瘤苗可使小鼠IFN-γ水平升高,但与对照相比无统计学意义,提示IFN-γ可能在IL-18基因修饰瘤苗诱导的抗肿瘤免疫应答中作用不大。     

B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠HBsAg免疫效果影响的初步研究

目的:应用HBV转基因小鼠动物模型,研究B7-H1对HBsAg免疫效果的影响.方法:用重组人B7-H1与血源性HBsAg联合免疫HBV转基因小鼠,采用ELISA方法观察对转基因小鼠所诱生的HBsAg特异性Th1类细胞因子的影响,ELISPOT方法检测不同免疫方案对小鼠HBsAg特异性分泌IFN-γ T细胞数量的影响,同时检测对小鼠淋巴细胞增殖及血清HBsAb水平的影响.结果:HBsAg组及HBsAg+B7-H1组免疫后脾细胞产生的Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)、HBsAg特异性分泌IFN-γ T细胞、T细胞增殖及血清HBsAb水平较对照组显著增加(P<0.05),但HBsAg组及HBsAg+B7-H1组之间无显著性差异.结论:HBsAg可以诱导乙肝转基因小鼠产生高水平Th1类细胞因子,并诱导小鼠产生特异性的体液免疫,打破免疫耐受.B7-H1对HBsAg在HBV转基因小鼠中的免疫效果无影响.     

反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断乙肝病毒C基因表达

目的 探讨针对乙肝病毒C基因反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断病毒基因表达的效果.方法 各实验组经尾静脉给药后,采用real-time PCR、时间分辨免疫荧光技术、免疫组织化学法等技术分别检测血清HBV DNA、HBeAg含量及肝细胞内HBcAg的表达情况.结果 注射锁核酸后,对乙肝病毒核酸的复制和乙肝病毒e抗原的合成均有较强的抑制作用,注射后1、3 和5 d,HBV DNA的平均抑制率分别19.24％、39.20％和44.47％;HBeAg的平均抑制分别为30.71％、51.14％和63.46％;小鼠肝细胞的HBcAg阳性细胞数也较对照组明显减少.结论 针对乙肝病毒C基因的反义锁核酸在转基因小鼠体内能有效抑制病毒基因的复制和表达,提示C基因可作核酸药物治疗的有效靶位.     

小鼠白细胞介素18的基因克隆及其融合蛋白的表达

白细胞介素１８（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １８，ＩＬ－１８）是一种能诱导ＩＦＮ－γ产生的新型细胞因子，在调节Ｔｈ１型细胞免疫应答中起重要作用。采用逆转录ＰＣＲ从活化的小鼠腹腔巨噬细胞中获得了小鼠ＩＬ－１８（ｍＩＬ－１８）ｃＤＮＡ，测序鉴定正确的片段经ＥｃｏＲＩ酶切后克隆入ＧＳＴ融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，再转化至大肠杆菌ＤＨ５ａ高效表达，经纯化获得了有活性的ｍＩＬ－１８融合蛋白。     

核酸疫苗与蛋白疫苗的免疫特点及其联合免疫的研究进展

核酸疫苗和蛋白疫苗具有各自的免疫特点,分别诱导以细胞免疫和体液免疫为主的免疫应答,并能通过联合免疫提高机体预防病原体的免疫保护力,而核酸疫苗和蛋白疫苗的免疫特点以及联合使用核酸疫苗与蛋白疫苗协同免疫可以提高疫苗免疫效果。     

狂犬疫苗与白细胞介素2联合免疫小鼠的实验研究

组织培养制备的狂犬病毒灭活疫苗与重组白细胞介素２同时免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠，检测不同时间的鼠血清中抗病毒ＩｇＧ抗体和中和抗体效价。结果显示：在白细胞介素２的作用下，抗体产生的时间提前，抗体效价提高，ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠比较，前者的 抗体效价更高。     

乙肝核酸疫苗诱导BALB/C小鼠的CTL免疫应答

目的：研究携带HBsAg基因的载体质粒pcDHBs诱导小鼠CTL应答效果。方法：将HBsAg基因连接到真核表达载体pcDNA3．1上，构建成载体质粒pcDHBs。将纯化后的质粒pcDRBs和pcDNA3．1肌肉注射免疫小鼠，眼眶采血检测血清中抗体水平。用质粒pcDHBs转染P815细胞制备乙肝疫苗诱导BALB／C小鼠CTL活性检测的靶细胞。免疫后，取脾细胞，按效靶比为10：1、25：1、50：1进行CIL杀伤检测。结果：免疫pcDHBs疫苗后，检测到小鼠血清中的RBsAb。用pcDHBs进行转染的P815细胞能够检测到HBsAg基因片段和蛋白质抗原的表达。用pcDHBs免疫组小鼠的CTL杀伤率均明显高于pcDNA3．1免疫组。结论：质粒pcDHBs作为核酸疫苗能够诱导小鼠体液免疫应答和CTL免疫应答。     

吡喹酮联合IL-18基因治疗血吸虫 感染小鼠对免疫功能的影响

目的 探讨白细胞介素18（IL－18）对吡喹酮治疗后的血吸虫感染小鼠免疫功能的影响对其对虫卵肉芽肿的作用。方法 采用ELISA方法和图像分析技术,分析吡喹酮治疗后血吸虫感染小鼠血清IL－18、γ－干扰素（IFN－γ）、IL－4、转化生长因子β1（TGF－β1）的水平以及虫卵肉芽肿面积和羟脯氨酸水平,在感染后6周,将小鼠IL－18重组腺病毒转染的肝细胞经脾移植到吡喹酮治疗后的感染小鼠,探讨IL－18对小鼠免疫功能的影响及对虫卵肉芽肿的作用。结果 吡喹酮治疗后小鼠血清IL－18、IFN－γ水平明显下降,IL－4、TGF－β1水平虽有所降低,但仍维持在较高水平;同时可见,虫卵肉芽肿面积和肝脏羟脯氨酸含量无明显降低,与同期感染组比较差异均无显著性。IL－18基因修饰的肝细胞经脾移植后能稳定表达IL－18,显著升高IFN－γ水平,明显降低IL－4、TGF－β1水平,减轻虫卵肉芽肿和肝纤维化程度。结论 IL－18基因治疗能有效地发挥抗血吸虫病肝纤维化作用。     

IL-18基因佐剂协同HSV-1 gB DNA疫苗免疫诱导的特异性免疫应答

目的研究IL-18 cDNA协同单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）糖蛋白B（gB）核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响。方法利用pcDNA3载体分别构建HSV-1gB和IL-18的真核表达质粒pgB和pIL-18,分pcDNA3、pgB和pgB＋pIL-18三组,肌肉注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用ELISA检测特异性抗体滴度;利用^3H-TdR掺入法进行T细胞特异性抗原刺激实验;耳廓肿胀实验检测迟发型超敏（DTH）反应。结果与pgB单独免疫组相比,pIL-18的协同免疫可以显著增强ELISA特异性抗体滴度、T细胞增殖反应和DTH反应。结论IL-18cD-NA的协同免疫可以显著提高pgBDNA疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫水平,增强核酸疫苗对机体的免疫保护作用。     

共表达HIV-1 gag-gp120与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫研究

目的探讨共表达HIV-1 gag-gpl20与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法以重组鸡痘病毒首免，以表达相同抗原的核酸疫苗质粒追加免疫，检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果联合免疫组脾特异性CTL杀伤活性比重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组、鸡痘病毒疫苗株对照组和空白质粒对照组高，血清抗体水平显著高于空白质粒对照组和鸡痘病毒疫苗株对照组，但与重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组之间差异无显著性。结论重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫可诱导小鼠产生更强的细胞免疫应答。     

IL-18、IL-10和IL-6与急性冠状动脉综合征的关系研究

目的：研究白细胞介素（IL）-18、IL-10和IL-6血清浓度与急性冠状动脉综合征之间的关系。方法： 采用酶联免疫吸附法（ELISA）和放射免疫法检测62例冠心病患者（急性心肌梗死17例、不稳定性心绞痛30例、稳定性心绞痛15例）和20例正常健康者血清IL-18、IL-10和IL-6水平，并比较上述指标水平之间的相关关系。 结果： 血清IL-18、IL-6水平在急性心肌梗死（AMI）组和不稳定性心绞痛（UAP）组显著高于稳定性心绞痛（SAP）组和对照组(P＜0.05, P＜0.01)；AMI组和UAP组血清IL-10水平明显低于SAP组和对照组（P＜0.01）。血清IL-18和IL-6水平与血清IL-10水平呈显著负相关（r＝－0.827, P＜0.01; r＝－0.231, P＜0.05)； 血清IL-6水平与IL-18水平相关性不明显（r＝0.119, P＞0.05）。 结论： 急性冠状动脉综合征患者血清IL-18、IL-6水平明显升高而IL-10水平显著降低；IL-18、IL-6与IL-10的平衡失调可能是促进斑块不稳定的重要因素。