Lewis y抗原促进卵巢癌细胞RMG—I血管内皮生长因子受体的表达

目的：探讨α1,2-岩藻糖转移酶（α1,2-fucosyltransferase,α1,2-FT）基因转染对卵巢癌细胞系RMG—I血管内皮生长因子受体（VEGFR）的影响。方法：利用已经建立的α1,2-岩藻糖转移酶及LewisY稳定高表达的RMG—I—H细胞系、裸鼠移植瘤模型,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）测定基因转染前后细胞中VEGFRmRNA的变化,采用免疫组织化学法测定基因转染前后细胞及裸鼠移植瘤组织中VEGFR蛋白的变化。结果：基因转染后细胞中KDRmRNA表达明显增高（P〈0．01）,细胞、裸鼠移植瘤组织中KI）R蛋白表达也明显增高,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：LewisY抗原可能通过VEGF的自分泌和旁分泌途径引起KDR受体数目增多,从而促进肿瘤血管生成,介导卵巢癌的生长、侵袭、转移和耐药等生物学行为。     

Lewis y高表达对人卵巢癌RMG-Ⅰ细胞裸鼠体内致瘤性及移植瘤VEGF和VEGFR表达的影响

目的:比较α1,2岩藻糖转移酶基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织血管内皮生长因子及其受体VEGFR1和VEGFR2表达的变化.方法:利用已建立的Lewis y抗原稳定高表达卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ-H及转染前细胞株RMG-Ⅰ为细胞模型,将转染前后细胞株种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况.第5周处死动物,测量移植瘤重量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表达.结果:转染组及未转染组裸鼠均有荷瘤形成,但转染组的成瘤时间(5.2±0.8 d)早于未转染组(8.8±1.3 d),且转染组的瘤重和体积与未转染组相比均明显增加(P＜0.05).转染组裸鼠移植瘤组织VEGF及VEGFR2表达量明显高于未转染组(P＜0.05).结论:Lewis y抗原高表达能增加卵巢癌RMG-Ⅰ细胞的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤VEGF及VEGFR2的表达.提示Lew-is y抗原能提高癌细胞的恶性程度,且该作用与VEGF及VEGFR2表达增高关系密切.     

Lewis y抗原对人卵巢癌细胞RMG-Ⅰ裸鼠移植瘤p-Akt蛋白表达的影响

目的:探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对人卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤中磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达的影响。方法:利用已经建立的Lewis y抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG-I-H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学染色法检测基因转染前后裸鼠移植瘤组织中Lewis y抗原及p-Akt蛋白的表达。结果:基因转染后的裸鼠移植瘤组织细胞表面Lewis y抗原及p-Akt蛋白的表达均明显增加,转染组与非转染组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Lewis y抗原明显促进卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤p-Akt蛋白的表达。     

Lewis y高表达对人卵巢癌RMG-I细胞裸鼠体内致瘤性及移植瘤VEGF和VEGFR表达的影响

目的：比较α1,2岩藻糖转移酶基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-I的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织血管内皮生长因子及其受体VEGFR1和VEGFR2表达的变化。方法：利用已建立的Lewisy抗原稳定高表达卵巢癌细胞株RMG-I-H及转染前细胞株RMG-I为细胞模型,将转染前后细胞株种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况。第5周处死动物,测量移植瘤重量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表达。结果：转染组及未转染组裸鼠均有荷瘤形成,但转染组的成瘤时间（5.2±0.8d）早于未转染组（8.8±1.3d）,且转染组的瘤重和体积与未转染组相比均明显增加（P〈0.05）。转染组裸鼠移植瘤组织VEGF及VEGFR2表达量明显高于未转染组（P均〈0.05）。结论：Lewisy抗原高表达能增加卵巢癌RMG-I细胞的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤VEGF及VEGFR2的表达。提示Lewisy抗原能提高癌细胞的恶性程度,且该作用与VEGF及VEGFR2表达增高关系密切。     

Lewisy抗原对人卵巢癌细胞RMG—I裸鼠移植瘤P—Akt蛋白表达的影响

目的：探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对人卵巢癌细胞株RMG—I裸鼠移植瘤中磷酸化Akt（P—Akt）蛋白表达的影响。方法：利用已经建立的Lewis y抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG—I—H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学染色法检测基因转染前后裸鼠移植瘤组织中LewisY抗原及P—Akt蛋白的表达。结果：基因转染后的裸鼠移植瘤组织细胞表面LewisY抗原及P—Akt蛋白的表达均明显增加,转染组与非转染组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Lewis y抗原明显促进卵巢癌细胞株RMG—I裸鼠移植瘤P—Akt蛋白的表达。     

α1，2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞中HER2/neu表达及活性的影响

目的:探讨α1,2-岩藻糖转移酶（α1,2-fucosyltransferase,FUT1）基因转染对人卵巢癌细胞中HER2/neu表达及活性的影响。方法:分别应用Real time PCR、免疫细胞化学染色和Western blot方法检测转染前后卵巢癌细胞中HER2/neu在基因、蛋白水平上的表达和磷酸化情况,利用免疫共沉淀方法检测HER2/neu蛋白上是否有Lewis(y) 结构。结果:Real time PCR结果显示转染后细胞中HER2/neu mRNA表达明显增高。免疫细胞化学染色、免疫共沉淀结合Western blot检测到转染后卵巢癌细胞中HER2/neu蛋白和Lewis(y)抗原的表达均较转染前显著增加,HER2/neu蛋白上有Lewis(y)抗原结构。Western blot结果显示基因转染后HER2/neu的酪氨酸磷酸化水平显著升高。结论:Lewis(y)抗原是HER2/neu结构上的一部分,其表达增加不但促进卵巢癌细胞中HER2/neu的表达,还激活了HER2/neu受体酪氨酸激酶。     

Canstatin分泌增强体系的建立及其抗肺癌作用

目的:评估canstatin分泌增强体系在不同氧条件下的生物学效应,观察其对裸鼠肺癌模型的抗肿瘤作用。方法:基因重组技术构建canstatin分泌型载体,将其转染肿瘤细胞观察其在不同氧条件下的canstatin mRNA表达量,稳定转染的肺癌细胞与人脐静脉内皮细胞混合培养,观察混合培养对内皮细胞增殖、凋亡的效应。建立裸鼠肺癌移植瘤模型,将此体系转染荷瘤裸鼠,观察其对裸鼠移植瘤血管生成的作用,及肿瘤体积重量等指标,评估其抗肺癌效果。结果:成功构建canstatin缺氧增强分泌体系。缺氧条件下其转染的肺腺癌A549细胞canstatin mR-NA的表达显著增加。其稳定转染的A549细胞与人脐静脉内皮细胞HUVEC混合培养可使HUVEC生长增殖缓慢并大量凋亡,此体系转染的裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤重、瘤体积及血管生成均显著低于对照组。(P<0.01)。结论:canstatin分泌增强体系在缺氧条件下能显著增加目的基因表达量及其生物学效应,并具有显著抑制肺癌生长和血管生成的作用。     

岩藻糖基化抗原对卵巢癌细胞增殖信号通路PI3K/Akt的影响

目的:探讨岩藻糖基化抗原对人卵巢癌细胞系RMG-I增殖的影响,初步探讨其与增殖信号通路磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的关系。方法:观察PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对岩藻糖基化抗原致卵巢癌细胞增殖的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测岩藻糖基化抗原对细胞增殖的增强情况;Western blot观察RMG-I的Akt磷酸化蛋白表达。结果:α1,2-FT基因转染后细胞中Lewis(y)抗原含量明显增高。随着Lewis(y)含量的增加,RMG-I细胞增殖明显加快。Lewis(y)高表达卵巢癌细胞中磷酸化Akt的表达水平明显增高。PI3K抑制剂LY294002显著抑制Lewis(y)高表达卵巢癌细胞的增殖。抗Lewis(y)抗体和LY294002不仅降低了转染前后细胞中磷酸化Akt的表达水平,还消除了存在于细胞间的高低差别。结论:过表达的Lewis(y)抗原通过激活PI3K/Akt信号转导通路促进卵巢癌RMG-I细胞的增殖。抑制Lewis(y)抗原表达可能是一种治疗Lewis(y)高表达肿瘤的新方法。     

转染α1,2-岩藻糖转移酶基因对人卵巢癌细胞系RMG-1癌相关基因表达的影响

背景与目的:前期研究证明转染外来α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-fucosyl transferase,α1,2-FT)基因后人卵巢癌细胞系RMG-1的恶性生物学行为加强.本研究的目的是探讨转染α1,2-FT基因对卵巢癌细胞系RMG-1癌相关基因表达的影响.方法:将基因表达载体pcDNA3.1-HFT-H和空载体pcDNA3.1转染至RMG-1细胞中分别生成RMG-1-H细胞和RMG-1-C细胞,利用基因芯片对这两种细胞的基因表达序列进行分析,使用GoMiner在线数据库进行信息查询.结果:与RMG-1细胞比较,RMG-1-H细胞中有88种差异性表达基因,其中60种基因表达增强,28种基因表达降低.检索其基因功能,发现在分子功能、生物学行为和细胞成分定位三个分支上,差异表达的基因参与到了诸如蛋白质结合、核苷酸结合,细胞增殖、DNA依赖性转录的调节、信号转导、蛋白氨基酸磷酸化、转录、细胞粘附等多方面.结论:转染α1,2-FT基因使卵巢癌RMG-1细胞的基因表达发生了改变.     

紫杉醇治疗卵巢癌裸鼠移植瘤过程中WT1的表达及意义

研究紫杉醇治疗卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤过程中WT1基因的表达和意义。方法:建立卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型,随机进行紫杉醇化疗（紫杉醇组）及生理盐水（对照组）处理,测量移植瘤体积并对移植瘤标本进行苏木精-伊红染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期改变、免疫组化检测Bcl-2及WT1蛋白表达、RT-PCR检测WT1 mRNA的表达。结果:紫杉醇化疗对裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,与对照组相比,紫杉醇组细胞凋亡率增加（P<0.05）;同时,移植瘤组织中Bcl-2、WT1蛋白及WT1 mRNA的表达均显著下降（P<0.05）。结论:WT1基因在卵巢癌凋亡过程中可能发挥着一定的作用,其作用机制或许与抗凋亡基因Bcl-2有关。