甲状腺乳头状癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的标志物及其在甲状腺乳头状癌(PTC)患者外周血中含量的变化和临床意义。方法:选择40例PTC患者(PTC组)及34例甲状腺腺瘤(TA)患者(对照组),以CD4+CD25+FoxP3+及CD4+CD25+CD127low/-为标记物,通过流式细胞术检测2组患者外周血中CD4+CD25+Treg的比例,分析其与PTC临床病理特征的关系。结果:与对照组比较,PTC组患者外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg的比例明显升高(P<0.05);PTC组中不同临床分期、有无颈淋巴结转移患者,外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg的比例组间比较均差异有统计学意义(均P<0.05)。PTC组患者外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例明显升高(P<0.05);PTC组中不同临床分期、有无颈淋巴结转移患者,外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例均差异有统计学意义(均P<0.05)。外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的比例与CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞的比例在PTC组和对照组呈正相关(r=0.889,P<0.05)。结论:CD4+CD25+CD127low/-可以作为鉴定外周血中CD4+CD25+Treg细胞的标志物。PTC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平显著增加,且与PTC不同临床分期、有无颈淋巴结转移等因素密切相关,CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞可能参与了PTC的发生、发展。     

CD4+CD25+调节性T细胞在变应性鼻炎患者外周血淋巴细胞中的含量研究

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在变应性鼻炎外周血淋巴细胞中的比例,并探讨其临床意义.方法:采用流式细胞术分别检测20例季节性变应性鼻炎患者发作期外周血CD4+CD25+Treg在淋巴细胞中的比例,并与8例健康对照者进行比较.结果:变应性鼻炎患者外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highTreg所占比例与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:变应性鼻炎患者外周血CD4+CD25+Treg在外周血中的比例明显减少,可能与该病的发病机制有关.     

γδT细胞、调节性T细胞、白细胞介素17及转化生长因子β1在变应性鼻炎患者外周血中的表达

目的 探讨变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者外周血中γδ T细胞、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、白细胞介素(interleukin,IL) 17及转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的表达及临床意义.方法 2012年3-7月,收集32例AR患者(AR组)和20例健康志愿者(对照组)的外周血,采用流式细胞术检测外周血中γδ T细胞和Treg细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清中IL-17、TGF-β1的水平,并分析它们之间的相关性.采用SPSS 16.0软件进行数据分析.结果 γδ T细胞百分比在AR组和对照组分别为(13.30±8.62)％、(5.18±1.86)％,差异有统计学意义(t =5.18,P＜0.01);Treg细胞百分比分别为(1.75±0.56)％、(4.76±1.74)％,差异有统计学意义(t =7.46,P＜0.01).AR组血清中IL-17的表达水平为(668.55 ±45.15) pg/ml,高于对照组的(573.53±17.42) pg/ml,差异有统计学意义(t=8.97,P＜0.01);AR组TGF-β1的表达水平为(0.34±0.04) pg/ml,低于对照组的(0.49 ±0.06) pg/ml,差异有统计学意义(t=9.51,P＜0.01).AR组患者外周血中γδ T细胞百分比与Treg细胞百分比呈负相关趋势(r=-0.561,P＜0.01),γδ T细胞百分比与IL-17呈正相关趋势(r=0.469,P＜0.01),γδ T细胞百分比与TGF-β1呈负相关趋势(r=-0.622,P＜0.01),Treg细胞百分比与TGF-β1呈正相关(r=0.738,P＜0.01),IL-17表达水平与Treg细胞百分比、TGF-β1无相关性(r值分别为-0.111、-0.196,P＞0.05).结论 AR患者外周血中γδ T细胞和Treg细胞之间存在免疫平衡失调,γδ T细胞可能参与了IL-17的分泌,这可能在AR的发病和发展过程中发挥重要作用.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中的表达和免疫抑制功能研究

目的　分析鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达数量,并评估其免疫抑制功能。方法　入选鼻腔鼻窦鳞状细胞癌患者（均为T1-2N0M0）和正常对照者各15例,分别采集研究对象外周血标本、患者肿瘤组织及正常对照者鼻黏膜组织。应用流式细胞术分析组织匀浆和外周血中调节性T细胞、Th1细胞和Th2细胞数量。免疫组化染色计数局部组织内调节性T细胞数量。将外周血调节性T细胞与外周血效应性T细胞共培养,72 h后采集细胞培养上清液,应用ELISA方法检测IFN-γ和IL-4水平,比较两组患者调节性T细胞的免疫抑制功能。结果　鳞癌组肿瘤组织内调节性T细胞、Th2细胞数量显著高于正常鼻黏膜,而Th1细胞数量显著降低。与正常对照组相比,鳞癌组患者外周血中调节性T细胞增加,Th1细胞减少,Th2细胞无显著差异。外周血调节性T细胞对Th1细胞的抑制功能在鳞癌组较正常对照组增强。结论  鼻腔鼻窦鳞状细胞癌肿瘤组织内和外周血中的调节性T细胞数量升高、对Th1细胞免疫抑制能力增强。调节性T细胞参与鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的肿瘤局部免疫和全身免疫调节,可作为预后的生物学指标之一。     

变应性鼻炎患者血清维生素D与Treg/Th17细胞的相关性研究

目的　通过检测变应性鼻炎（AR）患者血清中维生素D（vitamin D,VD）及外周血调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）、Th17细胞的表达水平,研究Treg细胞、Th17细胞及VD在AR发病机制中的作用,探讨VD与Treg/Th17细胞间的相互关系以及治疗AR的价值。方法  选取38例AR确诊患者为AR组,健康体检者38例为对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测受试者外周血25（OH）D3的含量;电化学发光免疫分析法检测血清总VD含量;流式细胞术（FCM）检测外周血CD4+IL-17+Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分率。结果　AR组血清总VD及25（OH）D3的表达水平显著低于对照组（t =-7.791、-2.439,P 均<0.05）;AR组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显低于对照组（t =-17.011,P <0.05）;AR组CD4+IL-17+Th17细胞占CD4+T细胞的百分率明显高于对照组（t =8.986,P <0.05）;AR组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达水平与血清25（OH）D3含量呈正相关（r =0.713,P <0.05）;AR组外周血CD4+IL-17+Th17细胞含量与血清25（OH）D3含量呈负相关（r =-0.658,P <0.05）。结论　AR患者中VD含量显著低于对照组,提示血清VD的缺乏有可能影响AR发病;而VD缺乏可能与Treg/Th17细胞失衡存在一定的相关性。     

鼻炎冲剂治疗变应性鼻炎的免疫调节机制探讨

目的 探讨鼻炎冲剂治疗变应性鼻炎的免疫调节机制.方法 选择30例常年性变应性鼻炎患者,予鼻炎冲剂连续口服2月,进行疗效评估;采用流式细胞仪测定20例正常对照组及30例患者组治疗前后外周血单个核细胞的CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+CD25+T细胞比例;同时采用ELISA法测定血清IL-10、IFN-γ的含量.结果 治疗组有效率为86.7％;外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+CD25+T细胞比例:治疗组治疗前16.83±2.94％,治疗后19.38±3.71％;对照组20.75±4.64％.血清IL-10含量(pg/ml):治疗组治疗前6.87±1.08,治疗后11.97±1.62;对照组13.18±1.56.血清IFN-γ含量(pg/ml):治疗组治疗前14.77±2.13,治疗后14.56±2.29;对照组15.65±1.93.结论 本研究提示鼻炎冲剂可通过提高外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞数量及血清IL-10含量有效治疗变应性鼻炎.     

CD4+ Treg细胞对变应性鼻炎患者外周血单个核细胞的作用

目的 探讨CD4⁺ Treg细胞对变应性鼻炎（AR）患者外周血单个核细胞（PBMCs）的作用。方法 招募正常人（对照组）和AR患者（AR组）各15例,分别从两组志愿者外周血中获取PBMCs,接着从PBMCs中分离、提纯CD4⁺ Treg细胞,检测该细胞在总CD4⁺ T细胞中所占的百分比,并将其进行体外培养,然后检测CD4⁺ Treg细胞培养基中白介素（IL）-10和转化生长因子（TGF）-β及其mRNA的含量,最后,将体外培养的CD4⁺ Treg细胞加入到AR患者的PBMCs培养基中进行干预,并检测培养基中IL-4和IL-5的浓度。结果 AR患者CD4⁺Treg细胞（2.523±0.260）在总CD4⁺ T细胞中所占的百分比较对照组（4.716±0.390）减少,但AR组患者CD4⁺ Treg细胞培养基中IL-10（96.19±6.96 vs 33.69±3.88）和TGF-β（77.73±7.96 vs 31.39±3.15）及其mRNA（3.30±0.27 vs 0.26±0.05;3.29±0.26 vs 0.26±0.03）的含量却显著增多,AR组PBMCs培养基中IL-4（260.40±12.49）和IL-5（287.10±18.52）的浓度较对照组（23.07±3.26;19.62±2.46）为高,径AR患者的CD4⁺ Treg细胞干预后,AR患者PBMCs培养基中IL-4（120.60±9.58）和IL-5（137.60±12.33）的浓度显著降低,但对照组CD4⁺ Treg细胞的干预没有改变培养基中这些细胞因子（241.70±12.44;262.40±18.88）的含量。结论 CD4⁺ Treg细胞在变应性炎症状态下可以激活并起到抑制炎症的作用。     

变应性鼻炎患者白细胞介素23和白细胞介素27对调节性T细胞/辅助性T细胞17细胞平衡的调控作用

目的　探讨白细胞介素23（IL-23）、白细胞介素27（IL-27）对于调节性T细胞/辅助性T细胞17（Treg/Th17）细胞平衡的调控作用,以及它们在变应性鼻炎（AR）免疫治疗中可能存在的价值。方法　选取确诊为AR的患者30例为AR组,健康体检者29例为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测受试者外周血IL-23及IL-27的表达水平。采用流式细胞术对受试者外周血中CD4+IL-17+Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分率进行检测。结果　AR组血清IL-23表达水平显著高于对照组（t =34.061,P＜0.05）,IL-27低于对照组（t =-16.669,P＜0.05）,二者呈负相关关系（r =-0.662,P＜0.05）;AR组CD4+IL-17+Th17细胞占CD4+T细胞百分率显著高于对照组（t =19.951,P＜0.05）,其与IL-23呈正相关关系（r =0.499,P＜0.05）,与IL-27呈负相关关系（r =-0.377,P＜0.05）;AR组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于对照组（t =-17.105,P＜0.05）,其与IL-23呈负相关关系（r =-0.671,P＜0.05）,与IL-27呈正相关关系（r =0.639,P＜0.05）;Th17与Treg细胞二者占CD4+T细胞的百分率呈负相关关系（r =-0.413,P＜0.05）。结论　IL-23分泌增加、IL-27分泌减少及Th17/Treg细胞比例失调,可能参与AR的发病;IL-23的高表达有助于Th17细胞的发育和维持,同时降低Foxp3+细胞出现的频率;IL-27的低表达削弱对Th17细胞原有的抑制作用,并不利于Foxp3+细胞生成。     

在喉鳞状细胞癌中的表达

目的:研究癌基因STK15在喉鳞状细胞癌中的表达，探讨STK15与喉鳞状细胞癌的相关性。方法：应用SP免疫组织化学法检测40例喉鳞状细胞癌及30例声带息肉中STK15的蛋白表达。结果：STK15在喉鳞状细胞癌和声带息肉中的阳性率分别为67.5%（27/40）、33.3%（10/30），二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。STK15蛋白表达与喉鳞状细胞癌的TNM分期及淋巴结转移有关（P＜0.05），与喉鳞状细胞癌病理学分级、原发部位及患者的性别、年龄无关（P＞0.05）,且STK15蛋白阳性表达强度与喉鳞癌患者的TNM分期有关（P＜0.05）。结论：STK15在喉鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用，可能成为喉鳞状细胞癌基因治疗的新靶点。     

术后临床分期及CD57+细胞水平对喉癌患者生存预后的评价

目的探讨喉癌患者术后临床分期(pTNM)及其外周血CD     

141例中年期阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并高血压患者的睡眠监测分析

目的分析中年期阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome, OSAHS) 合并高血压患者的多导睡眠监测特点。方法对中年期OSAHS患者141例中并高血压者69例（高血压组）、血压正常者72例（对照组）,进行两组间多导睡眠监测(polysomnography,PSG)资料的比较。结果高血压组患者体块指数(body mass index,BMI)平均(30.67±3.46)kg/m2,与对照组差异有统计学意义(P＜0.05);高血压组呼吸暂停低通气指数 (apnea-hypopnea index,AHI)平均(54.59±26.48),明显高于对照组(P＜0.05);高血压组最低血氧饱和度明显低于对照组(P＜0.05)。睡眠结构比较显示,高血压组和对照组间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论中年期高血压OSAHS患者呼吸暂停指数及最低血氧饱和度明显重于血压正常OSAHS患者,但睡眠结构紊乱的程度基本接近。     

CD44+喉癌细胞的干细胞生物学特性初步研究

目的 初步研究透明质酸盐受体(hyalurate receptor)CD+44喉癌细胞的干细胞生物学特性.方法 原代培养喉痛细胞,利用亲和板结合分离法,将CD+44和CD+44肿瘤细胞分选出来,继续常规培养,比较CD+44与CD+44肿瘤细胞在功能状态、细胞周期、分化状态、克隆形成能力及形态等方面的差异.结果 CD+44细胞在喉癌细胞中所占的百分率为49.8%～53.5%,中位数为51.3%,亲和板结合法分选出CD+44细胞,继续常规培养后恢复原始比例.CD+44细胞中RNA含量低,细胞处于GO和G1期的比例高于CD+44细胞.CD+44细胞中正常鳞状上皮干细胞角蛋白(cytokeratin 14,CK14)表达强阳性或阳性,而分化的上皮细胞标记物外皮蛋白(involucrin)表达弱阴性或阴性.倒置显微镜下观察,CD+44细胞为多角形,突起多;而CD+44细胞为梭形,突起较少.对CD+44细胞进行有限稀释单细胞克隆培养,产生的子代克隆集落出现了异质性细胞,而CD-44细胞未能产生异质性子代细胞.与CD-44细胞相比,CD+44细胞表现出较高的克隆形成能力说明其具有较强的增殖能力.结论 CD+44喉癌细胞具有干细胞的某些特性,肿瘤干细胞可能存在于CD+44细胞内.     

鼻咽癌患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞分析

目的:探讨鼻咽癌患者外周血CD4 CD25h igh调节性T(Tr)细胞比例变化的特点及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测54例初治鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和15例健康者(对照组)外周血中CD3 、CD4 、CD8 及CD4 CD25h ighT细胞比例。结果:鼻咽癌患者CD4 T细胞比例、CD4 /CD8 比值均低于对照组(均P<0.05),但CD4 CD25h ighTr细胞比例明显高于对照组(P<0.01)。随疾病进展鼻咽癌患者外周血CD4 CD25h ighTr细胞比例升高[Ⅰ Ⅱ期为(2.28±1.07)%,Ⅲ期为(3.65±1.21)%,Ⅳ期为(4.72±0.87)%],Ⅰ Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较,均P<0.01;Ⅲ期与Ⅳ期比较,P<0.01。结论:CD4 CD25h ighTr细胞可能是鼻咽癌患者免疫抑制的重要原因之一,与鼻咽癌免疫逃逸有关。外周血CD4 CD25h ighTr细胞比例可能成为鼻咽癌一种新的预后判断指标,去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫,为肿瘤治疗提供一种新的方法。     

超声乳化术治疗膨胀期白内障继发青光眼34例

目的〓〖HTK〗评价透明角膜切口超声乳化白内障吸除联合人工晶体植入术,治疗膨胀期白内障继发青光眼的临床疗效。〖HTW〗方法〓〖HTK〗回顾分析34例(41眼)膨胀期白内障继发青光眼患者临床资料,其中用药后眼压控制良好择期手术34眼、高眼压条件下急诊手术7眼,均采用透明角膜切口白内障超声乳化联合后房折叠型人工晶体植入术。术后随访2个月～3年,对比术前术后视力、眼压、前房深度和房角开放范围。〖HTW〗结果〓〖HTK〗术中、术后所有患者均未发生严重手术并发症。术后最佳矫正视力明显好于术前(P＜0.01);眼压比入院接诊时明显下降(P＜0.001);前房深度加深,术前术后差异有统计学意义（眼中有2眼术后半年加用抗青光眼药物。所有患者原狭窄房角增宽,关闭的房角部分开放。〖HTW〗结论〓〖HTK〗白内障超声乳化摘除联合人工晶体植入术是治疗膨胀期白内障继发青光眼的一种有效手段。     

喉癌患者外周血中Th17/Treg比率变化

目的 测定喉癌患者外周血Treg细胞和Thl7细胞比率,研究其变化与意义。方法 采用流式细胞技术检测健康志愿者(15例)和喉癌患者(33例)外周血Treg细胞和Thl7细胞比率,并观察Th17/Treg 在病变不同时期的变化。结果 与健康正常人群比较,喉癌患者外周血Treg细胞和Th17细胞比率明显升高(P＜0.01);发生淋巴结转移患者的较无淋巴结转移患者的Treg细胞比率增高、Th17细胞比率减低（P＜0.05）;Thl7细胞比率与Treg细胞比率在健康人群显著正相关 (P＜0.05),在喉癌组,二者相关性无统计学意义;淋巴结转移患者的Thl7/Treg低于无淋巴结转移患者(P＜0.01)。 结论 喉癌患者体内Thl7细胞及Treg细胞比率增高,Thl7细胞在喉癌进展中更倾向于抑制肿瘤,Treg细胞可能通过介导对肿瘤的免疫抑制,促进恶性肿瘤的进展。     

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系。方法应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）,流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8^＋、CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-、CD28^＋细胞亚群分布和双香豆素（phytohemagglutinin,PHA）刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达。结果喉癌患者CD8^＋T细胞比率为（32.11±5.07）%,CD8^＋CD28^-T细胞比率为（21.03±5.69）%,均明显高于正常对照组（均P〈0.01）;CD28^＋T细胞比率为（45.53±4.51）%,CD8^＋CD28^＋T细胞比率为（12.70±3.41）%,均明显低于正常对照组（P均〈0.01）。CD137^＋T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137^＋T细胞比率分别为（1.90±0.71）%和（3.52±1.64）%,明显高于正常对照组（P均〈0.01）。但经PHA刺激48小时后,外周血和TIL中CD137^＋-48h/CD137^＋-0h值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均〈0.01。结论共刺激分子CD28在CD8^＋T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137^＋T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一。 还原