miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。     

全反式维甲酸对A549细胞株增殖和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对A549肺腺癌细胞增殖和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响.方法:①取对数生长期的人肺腺癌细胞株A549细胞,消化后于96孔板上按1×10-5 mol/L,1×10-6 mol/L,1×10-7 mol/L 3组ATRA药物浓度组和空白对照组培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ATRA作用2 d,4 d,6 d对A549细胞增殖的影响.②用Hoechest33258荧光染色观察1×10-5 moL/LATRA培养24 h后A549细胞胞核形态变化.③利用免疫印迹法(Western blot)检测经1×10-7 mol/L,1×10-6 mol/L,1×10-5 mol/L ATRA作用12 h,24 h后A549细胞中Caspase-3蛋白表达的变化.结果:ATRA处理组与空白对照组相比细胞的增殖活性明显受到抑制(P＜0.05);经1×10-5 mol/L ATRA处理后的细胞呈典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光.ATRA处理组的Caspase-3蛋白表达与空白对照组相比明显增高.结论:ATRA可抑制人肺癌细胞株A549的增殖,并通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞的凋亡.     

胃泌素释放肽前体及其单克隆抗体对肺癌细胞株增殖的影响

目的 探讨胃泌素释放肽前体(Pro-GRP)和Pro-GRP单克隆抗体(McAb)对人肺癌细胞株(A549)增殖的影响. 方法 将浓度为1×10-6-1×10-3mol/L的Pro-GRP和效价为1:80-1:10的Pro-GRP McAb及浓度为1×10-5 mol/L的Pro-GRP与效价为1:80-1:10的Pro-GRP McAb作用于人肺癌细胞株,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖水平. 结果 Pro-GRP在1×10-6-1×10-3 mol/L浓度范围内A549细胞密度逐渐增加;用效价为1:80-1:10的Pro-GRP McAb处理A549细胞密度逐渐减少,而且使预先用1×10-5mol/LPro-GRP处理过的A549细胞逐渐减少. 结论 Pro-GRP能促进人肺癌细胞株的增殖;Pro-GRP McAb可抑制人肺癌细胞株的增殖,且能阻断Pro-GRP对细胞的促增殖作用.     

微小RNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能分析

目的分析miRNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能影响。方法 Real-time PCR对正常肺支气管上皮细胞16HBE、肺癌细胞SK-MES-1、NCI-H520、A549及25例非小细胞癌癌旁组织与癌组织内miR-200a表达量检测,CCK-8法检测肺癌A549细胞增殖活性受miRNA-200a影响状况,生物信息学对miRNA-200a靶基因进行预测,双荧光素酶联合Western blot及Real-time PCR检验YAP1受miRNA-200a调控影响。CCK-8法检测肺癌549细胞受YAP1增殖影响。结果肺癌细胞株SK-MES-1、NCI-H520及A549内miR-200a表达量均低于正常细胞株16HBE,差异有统计学意义(P0.05)。miR-200a mimics组内A549细胞在48、72及96 h时其吸光度均低于Mimics-NC,差异有统计学意义(P0.05)。肺癌A549转染siRNA-NC或者siRNA-YAP1后,PCR检测显示siRNA-YAP1内YAP1 m RNA表达量为(0.37±0.06),siRNA-NC内YAP1 mRNA表达量为(1.03±0.07),差异有统计学意义(P0.05);Western blot显示siRNA-YAP1内YAP1蛋白表达量比siRNA-NC低;siRNA-YAP1内YAP1细胞吸光度在48、72及96 h时均低于siRNA-NC,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-200a对肺癌细胞增殖的抑制作用主要是经过靶向作用YAP1基因来实现的,进而在肺癌内起到抑癌功能。     

miR-557通过Notch2/hes1信号通路对肺癌细胞的影响

目的 探讨miR-557通过Notch2/发状分裂相关增强子1(hes1)信号通路对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B及肺癌细胞SPC-A-1、A549、NCI-H446、PC-9中miR-557表达水平。将A549细胞分为对照组(A549细胞在RPMI-1640培养基中正常培养)、miRNC组[A549细胞转染miR-557模拟物(mimic)阴性对照]、miR-557组(A549细胞转染miR-557mimic)、Notch通路激动剂组(5mg/L Jagged1蛋白处理A549细胞)、miR-557+Notch通路激动剂组(转染miR-557mimic成功后加入5mg/L Jagged1蛋白处理A549细胞);qRT-PCR检测A549细胞中miR-557表达水平;细胞计数试剂盒-8检测A549细胞增殖;Transwell检测A549细胞侵袭;划痕实验检测A549细胞迁移;蛋白免疫印迹法检测A549细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch2、hes1蛋白表达水...     

抑癌基因ING2真核表达质粒的建立及其对肺癌细胞生长的影响

目的 构建抑癌基因生长抑制因子2(ING2)真核表达载体,研究p33ING2对人肺腺癌细胞A549及人小细胞肺癌细胞NCI-H446体外生长的影响.方法 构建ING2基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING2,采用脂质体法分别转染A549和NCI-H446细胞,以未转染组和转染pcDNA3.1(+)空质粒组作为对照,应用RT-PCR、细胞免疫组化和Western blot法分析目的基因及其蛋白表达,CCK8试剂盒分析其对细胞生长的影响,Annexin V-FITC和PI双染流式细胞术观察细胞凋亡的情况.结果 成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1(+)- ING2,转染后细胞株高水平表达ING2 mRNA及p33ING2蛋白.CCK8法检测结果显示:转染pcDNA3.1(+)-ING2的A549细胞和NCI-H446细胞增殖受到抑制,抑制率与pcDNA3.1(+)空质粒转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞术凋亡检测结果显示:转染pcDNA3.1(+)-ING2的A549细胞和NCI-H446细胞组凋亡率均高于未转染组和pcDNA3.1(+)空质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 ING2蛋白表达能抑制人肺腺癌细胞A549和人小细胞肺癌细胞NCI-H446增殖及增加细胞凋亡率.     

生长抑素受体2亚型在NCI-H446细胞和裸鼠肺组织细胞中的表达

目的研究生长抑素受体2(SSTR2)亚型在NCI-H446细胞和正常裸鼠肺组织细胞中的表达特性。方法选择体外培养的小细胞肺癌NCI-H446细胞株及裸鼠正常肺组织的冷冻切片,应用免疫荧光技术检测SSTR2亚型的分布与表达。结果NCI-H446细胞在激光共聚焦显微镜下呈现明亮的绿色荧光,肺组织的冷冻切片也可见闪亮荧光。SSTR2在NCI-H446细胞和正常裸鼠肺组织中表达的阳性率分别为100.0%、93.8%,两者比较差异无显著性(χ2=0.004,P>0.05);但两种标本细胞SSTR2强阳性表达数构成比之间比较,差异有显著意义(χ2=5.661,P<0.05)。结论体外培养的NCI-H446小细胞肺癌细胞株和正常裸鼠肺组织细胞均有SSTR2亚型表达,但小细胞肺癌细胞上的表达密度明显高于正常肺组织。     

DADS诱导小细胞肺癌细胞株NCI-H446凋亡及其分子机制

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人肺癌细胞株NCI-H446凋亡及其分子机制.方法 流式细胞仪检测DADS诱导NCI-H446细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测NCI-H446细胞内Ca2+水平变化;利用免疫细胞化学法检测NCI-H446细胞内Bcl-2蛋白表达.结果 与对照组相比,DADS处理组细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05);DADS处理组细胞内Ca2+水平升高(P＜0.05).DADS下调Bcl-2(P＜0.05).结论 DADS诱导小细胞肺癌细胞株NCI-H446凋亡,其具体机制可能与DADS下调Bcl-2蛋白表达和促进细胞内Ca2+水平升高有关.     

Sorcin蛋白高表达与肺癌细胞株NCI-H446多药耐药的关系

目的探讨Sorcin高表达与肺癌细胞NCI-H446多药耐药的相关性。方法研究对象为肺癌细胞NCI-H446,以顺铂为诱导药物,建立多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP;应用反义核酸技术抑制NCI-H446/CDDP细胞Sorcin的表达建立转染细胞,为反义核酸组,同时设空白对照组。通过RT-PCR及Western-blot分别检测各组细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平的表达;MTT法测定NCI-H446组、反义核酸组、NCI-H446/CDDP组3组细胞在不同化疗药物DDP、VCR、ADM、VP-16作用下生存率;用Pearson相关分析Sorcin高表达与肺癌细胞株NCI-H446多药耐药的相关性。结果各组细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平的表达,NCI-H446/CDDP组与空白对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05),NCI-H446组、反义核酸组、NCI-H446/CDDP组各组间比较均具有显著性意义(P<0.05);NCI-H446/CDDP细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平均明显高于NCI-H446细胞,分别为NCI-H446细胞的9.81倍和7.67倍。各组细胞在不同化疗药物作用下IC50:NCI-H446/CDDP组>反义核酸组>NCI-H446组,各组间比较差异具有显著性意义(P<0.05)。Pearson相关提示:Sorcin核酸及蛋白水平的表达与在不同化疗药物作用下各组细胞的IC50值呈负相关(P<0.05)。结论 Sorcin蛋白的高表达与肺癌多药耐药相关,抑制Sorcin蛋白的表达可以逆转肺癌多药耐药性。     

PET in lung cancer

Accurate tumor staging is essential for choosing the appropriate treatment strategy in patients with lung cancer. It has already been shown that FDG-PET is highly accurate in classifying lung nodules as benign or malignant. Integrated PET-CT enables the exact matching of focal abnormalities on PET to anatomic structures on CT. PET-CT is superior in diagnostic accuracy for T staging and differentiation between tumor and peritumoral atelectasis. PET has also proved to be a very effective staging modality for mediastinal nodal staging. It has been demonstrated to assist mediastinoscopy to reveal additional mediastinal disease in 6% of patients. PET detects unexpected extrathoracic metastases in 10-20% of patients and changes therapeutic management in about 20% of patients. A very high accuracy of FDG-PET in distinguishing recurrent disease from benign treatment effects has been shown. Patients should be evaluated after a minimum of 2 months after completion of therapy. FDG-PET can be clinically used for selecting biopsy sites. At our institution PET-CT has become the standard imaging modality for staging patients with lung cancer. Although not all tumors take up FDG, other radiotracers are being studied to expand the utility of PET-CT. PET-CT offers many opportunities for the patients, the clinicians, and the researchers. PET-CT has the potential to become the most efficient oncologic examination in the near future.