雷公藤甲素对2型糖尿病大鼠足细胞损伤的影响及机制

目的:探讨雷公藤甲素对2型糖尿病(DM)模型大鼠肾脏的足细胞损伤及其机制.方法:高糖高脂喂养加小剂量链脲佐菌素诱导建立2型糖尿病模型,将模型大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和雷公藤甲素治疗组[DT组,200 μg/(kg*d)灌胃给药],另设对照组(NC组).8周末检测血压、血糖、肾重、肾肥大指数、24小时尿白蛋白(24 UAL)、Ccr及肾组织电镜改变.免疫组化染色检测肾组织ED-1表达的变化,免疫印迹法检测肾组织中Nephrin、OPN、TGF-β表达的改变.结果:DM大鼠24 UAL明显高于NC组(P＜0.05),雷公藤甲素治疗组大鼠24 UAL明显低于DM组(P＜0.05).DM组大鼠肾小球ED-1阳性细胞数明显高于NC组(P＜0.01),雷公藤甲素治疗后肾组织巨噬细胞浸润明显低于DM组(P＜0.05).DM组肾组织Nephrin表达较NC组显著降低(P＜0.01),雷公藤甲素可明显恢复肾组织Nephrin 表达(P＜0.01).与NC组比较,DM组肾组织OPN、TGF-β蛋白表达上调(P＜0.01),雷公藤甲素可显著抑制肾组织OPN、TGF-β的过度表达(P＜0.01).结论:雷公藤甲素可能通过抑制肾组织巨噬细胞浸润、炎症反应,从而减轻足细胞损伤,达到肾脏保护作用.     

非诺贝特对糖尿病大鼠肾组织MCP-1、FN表达的影响

目的:探讨非诺贝特对糖尿病大鼠肾组织MCP-1、 FN表达的影响.方法:选择健康雄性SD大鼠36只, 随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DN组)和非诺贝特治疗组(DF组), 每组12只, 模型组及治疗组以链脲佐菌素诱发糖尿病, 治疗组给予非诺贝特灌胃.分别于第4、 8周观察各组大鼠脂代谢、血肌酐及24 h尿蛋白定量.肾组织标本行免疫组化检测肾组织MCP-1、 FN的表达水平.结果:模型组胆固醇、甘油三酯、肌酐及24 h尿蛋白定量水平的表达水平较同期正常组(P＜0.01)和治疗组(P＜0.05)有明显的增加.模型组大鼠肾组织MCP-1、 FN表达较同期正常组(P＜0.001)和治疗组(P＜0.01)有明显的增加.结论:非诺贝特可以下调糖尿病大鼠肾组织MCP-1、 FN表达对试验性糖尿病大鼠具有部分肾保护作用.     

PKCβ抑制剂LY333531对大鼠糖尿病模型肾脏巨噬细胞浸润的影响

探讨PKCβ抑制剂LY3335 31对大鼠糖尿病模型肾组织巨噬细胞浸润的影响。建立STZ诱导的大鼠糖尿病模型 ,随机分对照组、模型组与LY3335 31给药组 ,每组 1 0只。 8周后检测 2 4h尿白蛋白排泄率 (AER )及肾组织PKC活性 ;PAS染色观察肾小球病理形态学指标 ;应用免疫组化方法检测肾组织ED 1及MCP 1、ICAM 1表达。结果 :(1 )模型组大鼠肾重、肾重/体重、AER及肾小球面积、肾小球容量、系膜区面积明显高于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 ) ,LY3335 31给药组这些改变明显减轻 (P <0 0 5 ) ;(2 )LY3335 31给药组肾组织细胞膜、细胞浆PKC活性明显低于模型组 (P <0 0 5 ) ;(3)模型组肾小球ED 1阳性细胞数及MCP 1、ICAM 1表达明显高于对照组 ,LY3335 31给药组肾小球ED 1阳性细胞数及MCP 1、ICAM 1表达明显低于模型组 (P <0 0 5 )。表明LY3335 31对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用 ,其机制可能部分与抑制肾组织巨噬细胞浸润有关。     

伊贝沙坦联合舒洛地特对糖尿病大鼠肾脏协同保护作用的研究

目的： 探讨伊贝沙坦联合舒洛地特对大鼠糖尿病肾脏协同保护作用及其机制。 方法：将雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组（C）、糖尿病模型组(D)、伊贝沙坦组(I)、舒洛地特组（S）及伊贝沙坦与舒洛地特联合给药组（I+S）,糖尿病大鼠模型用STZ诱导。 12周后观察尿白蛋白的排泄率(UAER),做肾组织病理检查,测定肾组织中MDA含量与SOD、CAT、GSH-PX的活性变化。RT-PCR法检测肾组织中ICAM-1 mRNA的表达。EMSA 检测NF-κB的活性。结果：各给药组均可抑制糖尿病大鼠UAER的增加及肾组织病理结构损害,联合组优于单独给药组。对肾组织MDA含量增加及抗氧化应激的SOD、CAT、GSH-PX活性降低的改善作用,联合组优于单给药组。各给药组均可抑制肾组织NF-κB活性,以联合组最明显;糖尿病大鼠肾组织ICAM-1 mRNA表达明显高于对照组,各给药组肾组织ICAM-1 mRNA表达明显低于模型组,其中以联合组最明显。 结论：伊贝沙坦与舒洛地特联合用药对糖尿病肾脏保护作用优于任一单种用药,其机制可能部分是通过对糖尿病肾组织氧化应激、NF-κB 活性及 ICAM-1 mRNA表达协同抑制而实现的。     

辛伐他汀降低脂质肾损害大鼠肾组织中骨调素表达

目的 观察高脂血症肾损害大鼠肾组织中骨调素（OPN）和单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）表达变化及辛伐他汀对其表达的影响。方法 将雄性wistar大鼠随机分为对照组，高脂组，辛伐他汀治疗组，每组10只。观察12周。实验监测尿蛋白量、血脂、肾功能及肾组织病理学改变；免疫组化技术检测肾组织MCP-1表达，用RT-PCR、免疫印迹检测OPN mRNA和蛋白表达。 结果 实验结束时，高脂模型组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白显著高于对照组（P＜0.01）；辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白明显低于高脂组（P＜0.01），而 HDL-C则明显高于高脂组（P＜0.01）；高脂组大鼠肾小球系膜细胞增生，系膜区增宽，小管间质炎性细胞浸润，而辛伐他汀组病理改变较高脂组有所减轻；高脂组和辛伐他汀组大鼠肾组织中MCP-1、OPN mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.01）；而辛伐他汀组大鼠肾组织中上述指标的表达较高脂组有明显下调（P＜0.05）；肾组织中OPN蛋白表达与其MCP-1表达和尿蛋白量呈高度正相关。结论 辛伐他汀可能通过降低大鼠肾组织中OPN和MCP-1的表达，从而减轻小管间质巨噬细胞浸润，从而降低了高脂血症肾损害。     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1与Nephrin表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与肾小球足细胞跨膜蛋白(Nephrin)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测3组大鼠肾组织MCP-1与Nephrin蛋白的表达,RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织MCP-1 m RNA与Nephrin m RNA的表达。结果模型组肾组织MCP-1蛋白和m RNA的表达量显著高于假手术组(P0.05),而LY294002处理组明显低于模型组(0.05)。模型组肾组织Nephrin蛋白和m RNA的表达量显著低于假手术组(0.05),而LY294002处理组显著高于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1的表达,上调Nephrin的表达。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肝、肾组织氧化应激的影响

目的：探讨灯盏花素对糖尿病大鼠肝、肾组织氧化应激的影响。方法： 建立STZ诱导的糖尿病模型，随机分3组：正常对照组、模型组、灯盏花素给药组。8周后应用HE、油红O染色对肝组织、PAS染色对肾组织作病理检查。分光光度法检测肝、肾组织丙二醛(MDA)含量及抗氧化物酶活性。结果： HE染色显示模型组部分肝细胞脂肪变性，评分为1.54±0.65，灯盏花素给药组评分为0.55±0.43，差异高度显著(P<0.01)。油红O染色模型组肝组织评分为2.11±0.82，灯盏花素给药组为0.75±0.66，差异高度显著(P<0.01)。模型组大鼠肾重、肾重/体重、24 h尿白蛋白排泄率(AER)与肾小球面积(AG)、肾小球容量(VG) 及系膜区面积(AM)均明显增加，灯盏花素给药组这些改变减轻。灯盏花素给药组肝、肾组织MDA含量明显低于模型组(P<0.05，P<0.01)。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显高于模型组(P<0.05，P<0.01)。结论： 灯盏花素对糖尿病大鼠肝、肾组织有明显保护作用，其机制部分可能与抑制肝、肾组织氧化应激增加有关。     

Megsin基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响及其机制研究

目的观察megsin基因转染对糖尿病小鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨megsin在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组(B组),剩余30只每周1次经尾静脉分别注射空质粒(C组),megsin表达质粒(D组),并设立正常对照组(A组)。实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用Western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中megsin、MCP-1、ICAM-1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变。结果糖尿病小鼠肾组织megsin、MCP-1及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;megsin基因转染后上述变化趋势更加显著。结论 megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

温筋通对糖尿病大鼠心血管组织糖基化终产物的形成及其受体和ICAM-1表达的影响

目的:研究中药复方温筋通(WJT)对糖尿病大鼠心血管糖基化终产物(AGEs)的形成以及AGEs受体(RAGE)和细胞间粘附因子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:用链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型。采用荧光法、RT-PCR和原位杂交的方法对心血管组织AGEs的沉积以及RAGE和ICAM-1的表达进行检测。结果:WJT治疗组AGEs形成量明显低于糖尿病模型组(P＜0.01),其治疗作用与AG相当;RAGE和ICAM-1主要在内皮细胞表达,其表达量与AGEs的沉积量呈明显正相关(P＜0.01)。结论:WJT可明显降低糖尿病大鼠主动脉和心肌组织AGEs的形成量以及RAGE和ICAM-1的表达。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病模型大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法SD大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病模型组和糖尿病治疗组。治疗12周后,检测大鼠血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肾肥大指数(肾重KW/体重BW)、肌酐清除率(Ccr)和24h尿蛋白(24Upro)。肾组织做常规光镜和电镜检查。用免疫组织化学方法检测肾组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,半定量RT-PCR的方法检测肾组织中ICAM-1mRNA的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠BG、KW/BW、24Upro、BUN、Scr和Ccr均显著升高(P<0.05或0.01);系膜密度和肾小球基底膜厚度均显著增加(P<0.01);肾组织内ICAM-1和PCNA的蛋白质表达及ICAM-1的mRNA表达均显著上调(P<0.05或0.01)。除血糖外,治疗组上述指标均显著回降(P<0.05或0.01)。结论MMF对糖尿病肾病有保护作用,其机制可能与下调ICAM-1和PCNA的表达有关。     

Renoprotective effects of combination of angiotensin converting enzyme inhibitor with mycophenolate mofetil in diabetic rats

Objective and design Previously it was shown that blocking of the renin-angiotensin system (RAS) by angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors, or suppression of inflammatory responses by immunosuppressive drugs such as mycophenolate mofetil (MMF) could attenuate renal injury in diabetic rats. Whether RAS blockade combined with an immunosuppressive drug provides superior renoprotection against diabetic nephropathy has not been clearly delineated. Materials Diabetes was induced by injection of streptozotocin after uninephrectomy. Treatment Rats were randomly separated into five groups: control, diabetes, diabetes treated with enalapril (an ACE inhibitor, 10 mg/kg/d by gastric gavage), diabetes treated with MMF (10 mg/kg/d by gastric gavage), or diabetes treated with a combination of both agents and were followed for 8 weeks. Methods 24 h urinary albumin excretion rate (AER) was determined, renal injury was evaluated, immunohistochemistry for ED-1 macrophage marker, intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) were performed, and expression of transforming growth factor (TGF)-β1 protein was determined by Western blotting analysis. Results Diabetes was associated with a considerable increase in AER. Both enalapril and MMF retarded the increase in albuminuria, which was nearly completely abrogated by combination therapy. Increased glomerular volume and tubulointerstitial injury index in diabetic rats was attenuated by treatment with either enalapril or MMF and further reduced by the combination of the two. Elevated malondialdehyde levels in renal tissue were reduced by enalapril or MMF and, more effectively, by combined enalapril with MMF. Renal overexpression of ICAM-1 was not retarded by enalapril and attenuated by MMF or combined enalapril with MMF. Combination therapy was associated with a superior suppression of diabetes-induced macrophage recruitment and overexpression of MCP-1 and TGFβ1 compared to either monotherapy in renal tissue. Conclusion The combination of enalapril and MMF confers superiority over monotherapy in renoprotection, a mechanism which may be at least partly correlated with synergistic suppression of increased macrophage recruitment and overexpression of MCP-1 and TGF-β1 in renal tissue in diabetic rats. Received 26 July 2005; returned for revision 5 October 2005; returned for final revision 9 January 2006; accepted by M. Katori 23 January 2006     

锌指转录因子Snail 1在糖尿病大鼠肾组织中的表达

目的： 观察锌指转录因子Snail 1在糖尿病大鼠肾组织中的表达并探讨其与糖尿病肾病（DN）发生、发展的关系。方法: 链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠糖尿病（DM），分为2、4、8、12、16、20、24周以及16周A、20周A和24周A组，其中A组动物从第13周起用胰岛素控制血糖至正常水平，每个时点均设鼠龄匹配的正常对照组。测定各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐（Scr）、肾脏指数。PAS染色光镜观察肾脏病理改变。免疫组化、RT-PCR方法检测肾皮质Snail 1和纤连蛋白（FN）的蛋白及mRNA水平，Western blotting检测Snail 1蛋白表达。结果: DM各组大鼠的血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、肾脏指数明显高于正常对照组（P<0.05,P<0.01），A组上述指标均明显低于DM组（P<0.05,P<0.01）。Snail 1免疫组化阳性染色见于各组DM大鼠肾小管，正常对照组未见阳性表达，A组见弱阳性表达，并随治疗时间延长而减少。DM组肾皮质Snail 1、FN蛋白和mRNA的表达水平高于正常对照组（P<0.01），而A组显著低于DM组（P<0.01）。Snail 1与FN mRNA的表达水平呈显著正相关（P<0.01），Snail 1蛋白表达水平与血糖、尿蛋白、血肌酐、肾脏指数亦呈正相关（ P<0.01）。结论: Snail 1基因和蛋白在DM大鼠肾组织过度表达，提示Snail 1可能参与了DN的发生、发展机制。     

核黄素对STZ诱导的大鼠糖尿病肾病的治疗作用

目的:探讨核黄素对STZ诱导的大鼠糖尿病肾病的治疗作用及机制。方法:将雄性Sprague-Daw-ley大鼠随机分为3组,即正常对照组、糖尿病模型组、核黄素治疗组,采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型,收集各组血、尿及肾组织,生化方法检测24h尿蛋白量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,并计算肾脏脏器系数(KW/BW);Western blotting检测不同组别肾皮质TGF-β1、纤溶酶原活化抑制因子-1(PAI-1)蛋白质水平;光镜观察肾组织形态改变。结果:与糖尿病模型组大鼠比较,核黄素治疗组大鼠尿蛋白量显著降低(P0.01),肾组织及血清SOD、CAT活性升高(P0.01),肾组织MDA含量显著降低(P0.01),核黄素治疗组肾皮质TGF-β1及PAI-1蛋白表达明显低于糖尿病模型组。结论:核黄素对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏有一定的保护作用,其机制可能与其降低肾组织TGF-β1、PAI-1蛋白表达有关。     

螺内酯对DM2大鼠肾脏保护及ICAM-1表达的影响

目的:观察螺内酯对2型糖尿病(DM2)大鼠血、尿细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及肾脏组织结构和功能的影响.方法:将30只健康SD雄性大鼠随机分为正常对照组(NC组)n=10,DM2模型组(DM组)n=10,DM2模型+螺内酯治疗组(SPI组)...     

缬沙坦对高糖环境中肾小球系膜细胞Megsin表达的影响

目的观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用。方法高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12 h、24 h、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,缬沙坦干预组上述变化明显减弱。结论缬沙坦可下调megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用。     

ERK1/2信号蛋白在糖尿病小鼠肾组织中的表达

目的： 研究细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠肾组织中的表达及活化情况，从分子信号角度探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制。方法：采用STZ腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型，并检测血糖、血肌酐、24 h尿白蛋白排泄率、肾重/体重、肾小球体积；用免疫组织化学方法检测糖尿病小鼠肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2和collagen Ⅲ的表达。结果： 腹腔注射STZ后，模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体重下降等糖尿病症状，血糖明显升高，血肌酐水平出现一过性增高，24 h尿白蛋白排泄率明显增加，肾重/体重比值增加，肾小球体积增大，肾小球细胞外基质明显增宽。正常肾组织有TGF-β₁和磷酸化ERK1/2的基础表达［分别为：5.26%±2.35%；（12.31±3.97）个/mm²］，糖尿病形成后，TGF-β₁、磷酸化ERK1/2水平在肾组织中的表达明显高于对照组，并持续增加到12周［分别为：15.63%±5.38% vs 对照组,P<0.01；（136.84±25.94）个/mm² vs 对照组,P<0.01］。正常肾组织有collagen Ⅲ的基础表达（1.58%±0.52%），糖尿病形成后collagen Ⅲ在肾组织中的表达均明显高于对照组，并持续增加到16周（15.28%±3.78% vs 对照组,P<0.01）。肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2的表达时相相似，并呈明显的正相关（r=0.87,P<0.01），并与肾组织collagen Ⅲ的表达相关（r=0.83,P<0.01）。结论： 细胞外信号调节激酶1/2的表达和活化可能参与小鼠糖尿病肾病肾纤维化的发病过程。