Ａｄ-ＩＮＧ４抑制裸鼠人肝癌移植瘤生长的体内实验研究

目的　研究携带ＩＮＧ４基因的重组腺病毒（Ａｄ-ＩＮＧ４）对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１移植瘤生长的抑制作用及其潜在的分子机制。方法　将扩增的Ａｄ-ＩＮＧ４感染ＳＭＭＣ-７７２１细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测Ａｄ-ＩＮＧ４在ＳＭＭＣ-７７２１细胞中的转录。用ＳＭＭＣ-７７２１细胞建立裸鼠人肝癌移植瘤模型,予Ａｄ-ＩＮＧ４（１×１０^９ｐｆｕ／ｍｌ）５０μｌ对移植瘤瘤体注射治疗,观察肿瘤生长变化;３周后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;免疫组化法检测ｐ２１、ＣＯＸ-２、Ｆａｓ、Ｂｃｌ-２、Ｂａx、Ｃａｓｐａｓｅ-３、ＶＥＧＦ、ＣＤ３４等因子的表达。结果　Ａｄ-ＩＮＧ４在ＳＭＭＣ-７７２１细胞中成功表达;Ａｄ-ＩＮＧ４对裸鼠人肝癌移植瘤有明显的生长抑制作用,Ａｄ-ＩＮＧ４组瘤体显著减小（Ｐ＜０.０１）,抑瘤率达４１.６４％;免疫组化检测显示,Ａｄ-ＩＮＧ４抑癌的分子机制可能与上调ｐ２１、Ｆａｓ、Ｂａｘ和Ｃａｓｐａｓｅ-３的表达及下调ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２、ＶＥＧＦ和ＣＤ３４的表达有关。结论　Ａｄ-ＩＮＧ４能有效抑制ＳＭＭＣ-７７２１裸鼠人肝癌移植瘤的生长,其机制可能通过抑制肿瘤细胞生长、血管形成和激活细胞凋亡等多个途径共同发挥抑癌效应。     

ＴＲＡＩＬ联合蛋白酶抑制剂ＭＧ１３２诱导肺癌Ａ５４９细胞凋亡的实验研究

目的　观察ＴＲＡＩＬ对肺癌Ａ５４９细胞的体外生长抑制及诱导凋亡作用,并探讨ＴＲＡＩＬ与蛋白酶抑制剂ＭＧ１３２联合用药诱导细胞凋亡的作用及其机制。方法　采用ＭＴＴ法检测不同浓度ＴＲＡＩＬ对肺癌Ａ５４９细胞增殖的影响;应用流式细胞仪技术检测ＴＲＡＩＬ、蛋白酶抑制剂ＭＧ１３２及其两药联合干预２４ｈ对肺癌Ａ５４９细胞凋亡率的影响;采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测药物干预前后细胞凋亡相关蛋白Ｃａｓｐａｓｅ-８、Ｃａｓｐａｓｅ-９以及核转录因子ＮＦ-κＢ的表达情况。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度ＴＲＡＩＬ对肺癌Ａ５４９细胞的体外抑制作用与剂量效应正相关,２４ｈＩＣ５０为９６.３２２μｇ／ｍｌ,４８ｈＩＣ５０为４３.５９μｇ／ｍｌ;流式细胞术显示ＴＲＡＩＬ与ＭＧ１３２联合用药后肺癌Ａ５４９细胞凋亡率明显增高（平均６７.６５％）,与ＴＲＡＩＬ（平均２３.５５％）、ＭＧ１３２（平均２５.９１％）单药组比较,有显著性差异（Ｐ＝０.０１６）;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示,与ＴＲＡＩＬ单药组比较,两药联合后细胞凋亡相关蛋白Ｃａｓｐａｓｅ-８、Ｃａｓｐａｓｅ-９表达明显增强（Ｐ＝０.００６）,抑制细胞凋亡因子ＮＦ-κＢ表达则明显减弱（Ｐ＝０.０４）。结论　ＴＲＡＩＬ可抑制Ａ５４９细胞的增殖,呈浓度依赖关系;ＴＲＡＩＬ与蛋白酶抑制剂ＭＧ１３２联合应用可以明显提高细胞凋亡率,可能与蛋白酶抑制剂ＭＧ１３２降低ＮＦ-κＢ的活性,增强细胞对ＴＲＡＩＬ诱导凋亡的敏感性,促进凋亡相关蛋白Ｃａｓｐａｓｅ-８及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达有关。     

ｓｉＲＮＡ沉默ＳＴＡＴ５对ＨｅＬａ细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的：研究ＳＴＡＴ５对宫颈癌ＨｅＬａ细胞生物学特性的影响及其分子机制。方法：用ＭＴＴ法测定ＳＴＡＴ５ｓｉＲＮＡ对ＨｅＬａ细胞增殖的影响,流式细胞仪检测ＳＴＡＴ５ｓｉＲＮＡ对ＨｅＬａ细胞周期和细胞凋亡的影响,用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＲＴ- ＰＣＲ分析ＳＴＡＴ５、Ｂｃｌ-２和ｐ５３的变化。结果：ＳＴＡＴ５ｓｉＲＮＡ能够抑制ＨｅＬａ细胞的增殖,Ｓ和Ｇ２／Ｍ期肿瘤细胞比例减少,Ｇ０／Ｇ１期肿瘤细胞比例显著增加（Ｐ＜０.０１）,并诱导肿瘤细胞凋亡（Ｐ＜０.０１）。ＳＴＡＴ５ｓｉＲＮＡ下调ＳＴＡＴ５、Ｂｃｌ-２表达且上调ｐ５３表达。结论：ＳＴＡＴ５ｓｉＲＮＡ可以有效地诱导肿瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖。     

整合素 β１诱导人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞迁移侵袭及三苯氧胺耐药

目的：研究整合素 β１（ｉｎｔｅｇｒｉｎβ１,ＩＴＧＢ１）在人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞过表达对其迁移侵袭能力及三苯氧胺 （ｔａｍｏｘｉｆｅｎ,ＴＡＭ）耐药的影响。方法：构建携带 ＩＴＧＢ１的质粒（ｐＢＡＢＥ ｐｕｒｏ ｍｙｃ ＩＴＧＢ１）,通过包装反转录病毒转染人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞系,构建稳定高表达 ＩＴＧＢ１的细胞株 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１;实验设置 ＭＣＦ-７组（对照组）、ＭＣＦ-７ ｖｅｃｔｏｒ 组（阴性对照组）和 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１（实验组）;采用 ｑＲＴ ＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术分别检测各组 ＩＴＧＢ１ｍＲＮＡ和蛋白表 达量;ＭＴＴ法检测不同 ＴＡＭ浓度下细胞增殖活性;Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测不同 ＩＴＧＢ１表达情况下细胞迁移及侵袭能力; Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测上皮间质转换（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）标志物 Ｅ 钙黏蛋白（Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ）、Ｎ 钙黏蛋白 （Ｎ ｃａｄｈｅｒｉｎ）、间质表型标志物波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、纤维黏连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）等相关蛋白的表达情况。结果：在人 乳腺癌细胞 ＭＣＦ-７中,成功构建稳定高表达 ＩＴＧＢ１细胞系;ＭＣＦ-７及 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１的 ＴＡＭ半数抑制浓度（ｈａｌｆ ｍａｘｉ ｍａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ,ＩＣ５０）分别为 １．２４ｎｍｏｌ／Ｌ和 ２０．２８ｎｍｏｌ／Ｌ;ＭＣＦ ７ ＩＴＧＢ１的耐药指数为 １６．３５。ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１较 ＭＣＦ-７及 ＭＣＦ-７ ｖｅｃｔｏｒ细胞迁移及侵袭能力显著增强,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１的 ＥＭＴ标志物 Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ显著下调（Ｐ＜０．０５）,ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、Ｎ ｃａｄｈｅｒｉｎ、ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白显著上调（Ｐ＜０．０５）。结论：稳定 过表达 ＩＴＧＢ１促进乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞迁移侵袭能力增强及三苯氧胺的耐药,其作用机制可能与 ＩＴＧＢ１活化上皮间质转换通路诱导细胞 ＥＭＴ相关。     

Genistein抑制乳腺癌细胞生长的机制

目的 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法 研究主要应用于Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交,质粒转染技术以及细胞凋亡检测法,探讨Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制乳腺癌细胞生长的机制。结果 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可明显抑制不同ＥＲ状态和不同ｐ５３状态的乳腺癌细胞系的生长,同时显著诱导ｐ５３下游基因ｐ２１＾ＷＡＦ／ＣＩＰＩ蛋白和ｍＲＮＡ的表达,而导致ｐ２１＾ＷＡＦＩ／ＣＩＰＩ的表达增强主     

高氧刺激下ＰＡＣ１诱导乳腺癌细胞凋亡的机制探讨

目的　初步探讨高氧刺激下ＰＡＣ１对人乳腺癌细胞株ＭＤＡ-ＭＢ４３５的凋亡诱导作用及其机制。方法　通过脂质体法转染目的质粒ｐｃＤＮＡ３.１（＋）／ＰＡＣ１进入人乳腺癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ４３５,筛选稳定表达ＰＡＣ１的细胞克隆,并使用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法鉴定高表达ＰＡＣ１的ＭＢ４３５细胞克隆。应用台盼蓝染色法检测不同细胞在Ｈ２Ｏ２处理后的存活率变化,同时进一步使用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测ＭＢ４３５／ＰＡＣ１细胞克隆经Ｈ２Ｏ２处理后其ＥＲＫ１／２磷酸化的水平。结果　在细胞克隆ＭＢ４３５／ＰＡＣ１-Ｃ２和ＭＢ４３５／ＰＡＣ１-Ｃ６中均有高水平的ＰＡＣ１表达,这些高表达ＰＡＣ１的肿瘤细胞经高氧化合物Ｈ２Ｏ２刺激后细胞存活率相对于对照组均明显降低（Ｐ＜０.０１）,而且ＰＡＣ１的高表达可以引起细胞内ＭＡＰＫ激酶ＥＲＫ１／２的活性受到抑制,使磷酸化水平降低。结论　ＰＡＣ１可以通过抑制ＥＲＫ１／２的磷酸化水平而介导细胞对高氧刺激的反应,从而诱导细胞发生凋亡。     

腺病毒介导的ＢＩＲＣ５-ｓｈＲＮＡ增强索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的　研究ＢＩＲＣ５靶向基因治疗联合索拉非尼分子靶向治疗肝癌的协同效应以及对肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法　构建ＢＩＲＣ５特异性小发卡ＲＮＡ的腺病毒ＡｄＥＧＦＰ ｓｈＢＩＲＣ５,用免疫细胞化学染色法检测其对ＢＩＲＣ５的沉默作用。建立肝癌移植瘤模型验证ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼治疗的疗效,采用免疫组化染色法鉴定ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５对癌细胞ＢＩＲＣ５基因表达的抑制作用;ＴＵＮＥＬ法标记ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡。结果　腺病毒介导的ＢＩＲＣ５-ｓｈＲＮＡ表达能有效沉默肝癌细胞ＢＩＲＣ５表达,ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＣｔｒｌ对照组的ＢＩＲＣ５阳性表达率为（７８.８±１２.６）％,ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５实验组为（２０.６±８.２）％,两组差异有统计学意义（Ｐ＜０.０１）。Ｈｅｐ３Ｂ裸鼠移植瘤治疗后５周,与空白对照组相比,ＡｄＥＧＦＰ ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼组、单用ＡｄＥＧＦＰ ｓｈＢＩＲＣ５组、单用索拉非尼组的抑瘤率分别为６１.７８％（Ｐ＝０.００３２）、４２.３６％（Ｐ＝０.００５９）和２９.２０％（Ｐ＝０.０１６９）;与此对应,ＡｄＥＧＦＰ-ｓｈＢＩＲＣ５联合索拉非尼组与单用索拉非尼组相比,肝癌细胞ＢＩＲＣ５表达被抑制（Ｐ＝０.０３６４）,细胞凋亡比例明显升高（Ｐ＝０.０２９６）。结论　针对ＢＩＲＣ５的基因治疗能提高肝癌细胞对索拉非尼的敏感性,显著诱导癌细胞凋亡。     

ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的　探讨环氧合酶-２（ＣＯＸ-２）选择性抑制剂ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法　用不同浓度ＮＳ-３９８作用ＭＣＦ-７细胞后,采用四甲基唑蓝法（ＭＴＴ）检测ＮＳ-３９８对ＭＣＦ-７细胞增殖的抑制率;流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞周期、细胞凋亡以及ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２和Ｂａｘ蛋白的表达;用放射免疫分析（ＲＩＡ）检测培养液上清中前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）含量。结果　ＮＳ-３９８可显著抑制ＭＣＦ-７细胞的生长,并随药物的浓度升高、时间延长其抑制作用增强。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７Ｇ_０／Ｇ_１期细胞显著增多（Ｐ＜０.０１）,Ｓ期及Ｇ_２／Ｍ期细胞显著减少（Ｐ＜０.０１）,并引起显著的细胞凋亡。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７细胞ＣＯＸ-２和Ｂｃｌ-２表达显著降低（Ｐ＜０.０１）,而Ｂａｘ表达显著增高（Ｐ＜０.０１）,并使ＭＣＦ-７细胞产生的ＰＧＥ２显著降低（Ｐ＜０.０１）。结论　ＮＳ-３９８可抑制乳腺癌细胞ＭＣＦ-７的增殖并可诱导其凋亡,其作用机制可能通过抑制ＣＯＸ-２活性,使ＰＧＥ_２产量降低,从而下调Ｂｃｌ-２表达及激活Ｂａｘ表达。     

外源性p16基因表达可抑制人胃癌细胞的恶性增殖

目的探讨ｍｔｓｌ／ｐ１６基因在肿瘤发生发展过程中的作用及在临床基因诊断和基因治疗中的应用前景。方法构建ｍｔｓｌ／ｐ１６基因的表达载体并导入表达水平下调的ＰＡＭＣ８２细胞,用ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、ｍＲＮＡ原位杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交对获得Ｇ４１８抗性的细胞进行外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因整合及表达的鉴定。对导入外源性ｐ１６基因的细胞进行裸鼠致瘤能力及病理学特性分析。结果转染ｐ１６基因的ＰＡＭＣ８２细胞（命名为ＰＡＭＣｐ１６）有外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因的整合及表达,在裸鼠中的致瘤性显著降低。肿瘤组织病理分析结果显示,ＰＡＭＣｐ１６细胞形成的肿瘤,其分化程度优于ＰＡＭＣ８２细胞。结论导入外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因可抑制肿瘤细胞的恶性增殖和促进细胞分化。     

吴茱萸碱逆转人肺癌细胞株Ａ５４９／ＤＤＰ耐药机理的实验研究

目的　观察吴茱萸碱逆转人肺腺癌耐药株Ａ５４９／ＤＤＰ细胞耐药性的效果并探讨其与阻断ＮＦ κＢ信号传导通路的相关性。方法　采用ＭＴＴ法检测单用吴茱萸碱、顺铂（ＤＤＰ）以及两药联用在不同时间对Ａ５４９／ＤＤＰ细胞的增殖影响,计算ＩＣ５０及耐药逆转倍数。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。ＲＴ ＰＣＲ检测各组ＭＤＲ１、ＮＦ κＢ、Ｂｃｌ-２、ＭＭＰ-２和ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组细胞的ｐＩκＢ-α、pＩＫＫα蛋白表达水平。结果　吴茱萸碱０.１２５ｍｇ／Ｌ、０.２５ｍｇ／Ｌ针对Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ的耐药逆转倍数分别为３.６６８和１1.４８。ＲＴ ＰＣＲ显示在吴茱萸碱作用下检测基因的ｍＲＮＡ表达随着吴茱萸碱浓度的增加和时间的延长其表达逐渐下降。当吴茱萸碱与ＤＤＰ联用时,可明显提高Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加（Ｐ＜０.０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法结果提示Ａ５４９／ＤＤＰ细胞中ｐＩκＢ-α的表达水平随着吴茱萸碱作用时间的延长逐渐下降,ｐＩＫＫα表达则无显著变化。结论　吴茱萸碱可以通过抑制ＩκＢ-α的磷酸化阻断ＮＦ-κＢ信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对ＤＤＰ的敏感性。     

靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法：构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果：靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强（P＜0.05）.结论：利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.     

AEG-1基因促进乳腺癌细胞株MCF-7转移

目的 观察AEG-1基因在细胞水平对乳腺癌细胞MCF-7转移的影响。方法 通过将siRNA转染进MCF-7细胞,沉默细胞中AEG-1表达量,以转染阴性siRNA作为对照组。分别采用Transwell小室检测细胞迁移侵袭能力、CCK8实验检测细胞增殖能力。同时通过检测细胞中VEGF的变化及HUVEC细胞体外管腔形成实验考察AEG-1对于血管新生的影响。结果 沉默AEG-1,MCF-7细胞的迁移能力、侵袭能力和增殖能力明显受到抑制。沉默AEG-1,MCF-7细胞的VEGF表达明显降低。上清处理HUVEC细胞,沉默AEG-1组的血管新生能力明显受到抑制。结论 沉默AEG-1基因能显著抑制MCF-7细胞转移的多个层面,包括细胞迁移、侵袭、增殖以及血管新生。表明AEG-1基因在乳腺癌转移过程中起着重要作用,也为将来乳腺癌治疗开拓了新思路。     

Knockdown of the c-Jun-N-terminal kinase expression by siRNA inhibits MCF-7 breast carcinoma cell line growth

We have examined the effect of two small interference RNA against Jnk-1 and Jnk-2 in the breast cancer cell line MCF-7. The expression of the JNK-1 and JNK-2 is frequently elevated in breast cancer and is a frequent genetic abnormality in this malignancy. For a better understanding of its role in maintaining the malignant phenotype, we used small RNA interference (siRNA) directed against Jnk-1 or Jnk-2. We made control and Jnk-1 and Jnk-2 siRNA using vector plasmid, which was then transfected to reduce its expression in MCF-7 cells. We assessed the effects of JNK-1 or JNK-2 silencing on cell growth by western blot analysis, soft agar assay, cell proliferation assay, cell viability by MTT assay and caspase assay in vitro. Our data showed that siRNA against Jnk-1 or Jnk-2 markedly and durably reduced its expression in MCF-7 cells by up to 70%, decreased the growth rate of MCF-7 cells, inhibited colony formation in soft agar and significantly reduced cell growth in MCF-7 carcinoma culture cell line. We also found that depletion of JNK-1/2 in this manner promoted apoptosis of MCF-7 cells upon serum withdrawal. In addition, we found that MCF-7 cells did not exhibit any caspase-3 activity. In conclusion, we observed that JNK-1 and JNK-2 have a pivotal function in the development of breast cancer. Our data show that decreasing the JNK-1 or JNK-2 protein level in MCF-7 cells by siRNA could significantly inhibit MCF-7 cell growth in in vitro assay, and imply the therapeutic potential of siRNA on the treatment of breast cancer by targeting overexpression kinases such as JNK-1/2 and might be a potential therapeutic target for human breast cancer.     

RNAi靶向沉默乳腺癌细胞系MCF-7中EphA2表达的实验研究

目的探讨逆转录病毒介导的RNAi对乳腺癌细胞系MCF-7中EphA2表达的影响。方法构建重组的表达EphA2siRNA的逆转录病毒载体,将重组载体和空载体转染入MCF-7细胞中,筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养,并用Westen blot检测EphA2蛋白的表达情况。结果 Western blot分析,与对照空载体及未转染细胞比较,重组逆转录病毒载体转染的MCF-7细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论通过逆转录病毒载体介导的RNAi,能够抑制MCF-7细胞中EphA2的蛋白表达,为观察转染siRNA的逆转录病毒表达载体的乳腺癌细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础,为以EphA2为靶向的乳腺癌的基因治疗提供了新的思路和手段。     

siRNA沉默hTERT基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的应用小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）抑制乳腺癌MCF-7细胞hTERT的表达，探讨其对乳腺癌细胞增殖和凋亡的效应。方法体外化学合成针对hTERT基因的siRNA序列，在脂质体介导下转染MCF-7细胞，实时定量PCR检测hTERTmRNA表达水平，Westernblot检测hTERT蛋白表达水平，流式细胞仪检测细胞凋亡状况，MTT法检测细胞增殖活性，平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比均可有效抑制hTERT的表达，hTERTsiRNA转染MCF-7细胞48h后，siRNAl-siRNA3组hTERTmRNA表达分别为（35．3±4．2）％、（30．7±2．8）％、（31．3±3．6）％，与阴性对照组（96．4±2．8％）相比，差异有统计学意义。MTT结果显示MCF-7细胞增殖能力显著降低，转染48h后，siRNAl～siRNA4细胞抑制率分别为（57．6±3．6）％、（61．3±4．3）％、（65．6±6．3）％和（3．1±4．5）％，细胞克隆形成能力下降，凋亡率明显增加。结论体外化学合成的hTERTsiRNA可以有效地抑制MCF-7细胞hTERT的表达，从而抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。     

siRNA-TRF2对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的 构建表达端粒重复序列结合因子2基因小干扰RNA的腺病毒表达载体（rAd-shRNA-TRF2）,探讨其对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法 根据预实验筛选出的针对人TRF2 mRNA的特异性siRNA靶序列,构建表达siRNA-TRF2的重组腺病毒载体rAd-shRNA-TRF2,转染人乳腺癌MCF-7细胞后,用MTT比色法检测MCF-7细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布情况。结果 rAd-shRNA-TRF2转染MCF-7细胞后,MCF-7细胞增殖抑制、细胞周期阻滞于G₀/G₁期、增殖指数显著下降。结论 通过RNAi抑制TRF2基因表达进而抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的方法有望成为肿瘤基因治疗的一个新策略。     

人端粒酶逆转录亚单位(hTERT)基因特异性siRNA对MCF-7细胞生长抑制作用的研究

目的 研究人端粒酶逆转录亚单位（hTERT）特异性siRNA对MCF-7细胞体外生长及体内肿瘤形成能力的抑制作用。方法 设计并化学合成针对hTERT的siRNA，用脂质体转染法将其导入MCF-7细胞内，通过软琼脂克隆形成试验及接种裸鼠的肿瘤形成实验，观察hTERT-siRNA对人乳腺癌MCF-7细胞体外及体内的生长抑制作用。结果 软琼脂克隆形成试验显示，hTERT-siRNA转染的MCF-7细胞克隆形成数量明显少于对照组，抑制率达到84．1％。裸鼠体内实验结果显示，hTERT-siRNA转染组肿瘤生长速度也明显慢于对照组。结论 hTERT-siRNA在体内外均显示可以有效、特异地抑制肿瘤细胞的生长。     

利用siRNA阻抑survivin基因表达诱导乳腺癌细胞系MCF-7细胞凋亡的研究

背景与目的:survivin属IAP基因家族成员,表达于多种肿瘤组织中,能促使细胞逃避凋亡,并促进细胞的异常有丝分裂。本研究旨在探讨敲除survivin基因后,癌细胞的增殖和凋亡情况。方法:利用RNAi阻抑人乳腺癌细胞内survivin基因的表达,RT-PCR和Westernblot法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:survivinsiRNA转染组,survivin基因表达水平与未转染组比较下调了64%。随着siRNA浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,200nmol/L剂量组细胞增殖抑制率最高,可达60.9%。不同浓度的siRNA可不同程度地诱导细胞凋亡,200nmol/L剂量组凋亡率最高,可达29.0%。结论:survivinsiRNA有可能成为治疗乳腺癌的新药物。