体外培养骨髓单个核细胞分泌促血管生长因子的实验研究

目的分析体外培养的骨髓单个核细胞持续分泌促血管生长因子的能力。方法从大鼠胫骨及股骨采集骨髓,密度梯度离心法分离出骨髓单个核细胞进行体外培养,并连续收集4周培养上清液。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定培养上清液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和白介素-1β(IL-1β)等因子水平。结果第1、2、3、4周骨髓单个核细胞体外培养上清液中VEGF分别为(24.40±7.99)pg/m、l(89.28±5.13)pg/m、l(115.24±10.08)pg/m、l(157.00±15.64)pg/m l;bFGF含量分别为(52.72±2.13)pg/m、l(48.10±6.41)pg/m、l(44.71±3.21)pg/m、l(25.61±2.42)pg/m l;IL-1β含量分别为:(31.28±5.44)pg/m、l(71.87±3.01)pg/m、l(55.77±11.94)pg/m、l(41.75±9.14)pg/m。l结论体外培养骨髓单个核细胞可持续分泌VEGF、bFGF、IL-1β等多种促血管生长因子。     

血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在结直肠腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在结直肠腺癌组织中的表达情况，探讨VEGF、bFGF在肿瘤血管生成中的作用及其可能的作用机制。方法应用免疫组织化学方法检测30例结直肠腺癌患者的癌症组织、癌旁组织和正常组织（对照组织）中VEGF、bFGF、CD。的表达情况，并进行比较。结果VEGF在癌症组织中阳性表达率为93．33％，在癌旁组织中为90．00％，在对照组织中为16．67％。bFGF在癌症组织中阳性表达率为90．00％，在癌旁组织中为83．33％，在对照组织中为6．67％。CD34在三种组织中阳性表达率均为100％。VEGF、bFGF、CD。的平均光密度在癌症组织比癌旁组织和对照组织均高。VEGF和bFGF的表达在癌症组织、癌旁组织的相关系数分别为0．76和0．96。结论结直肠腺癌组织中VEGF、bFGF表达增多对肿瘤血管生成起促进作用，VEGF、bFGF在促进血管形成中有协同刺激作用。     

试析血管内皮抑素及碱性成纤维细胞生长因子在人胃癌组织中的表达

目的：分析探讨血管内皮抑素及碱性成纤维细胞生长因子在人胃癌组织中的表达情况。方法：选取来本院就诊的36例胃癌患者，采用免疫组化sP法检测患者胃癌组织中血管内皮抑素和碱性成纤维细胞生长因子的表达水平。结果：发生淋巴结转移和未发生淋巴结转移胃癌患者其胃癌组织中的血管内皮抑素阳性表达率分别为46．7％、81．0％。碱性成纤维细胞生长因子阳性表达率分别为93．3％、61．9％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：血管内皮抑素及碱性成纤维细胞生长因子是人胃癌组织肿瘤血管的生成过程中的重要调节因子，两者的消长关系可能与胃癌的发生发展等生物学行为相关。     

糖尿病不同时期的血管内皮功能及血清VEGF变化

目的观察糖耐量减低（IGT）、2型糖尿病（DM）患者的内皮依赖性血管舒张功能（EDF）及血清血管内皮生长因子（VEGF）的变化。方法30例IGT患者、30例2型DM患者及33例正常对照者（NGT），空腹静脉血测定葡萄糖（FPG）、胰岛素（FINS）、超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、VEGF，并行75g口服葡萄糖耐量试验（OGTF）。采用高分辨率血管外彩超测定肱动脉的血管内径，以肱动脉反应性充血前后血管内径变化百分比反映EDF。结果（1）IGT组、DM组的EDF较NGT组显著下降（P均〈0．01），DM组较IGT组更低（P〈0．01）。（2）IGT组、DM组的SOD较NGT组显著下降（P均〈0．01），而MDA显著上升（P均〈0，01）。DM组与IGT组比较SOD显著下降（P〈0．01），MDA显著上升（P〈0．01）。（3）VEGF在NGT、IGT、DM组逐渐上升，两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）。（4）多因素逐步回归分析显示：EDF与SOD明显正相关（r=0．418，P〈0．01，n=93），与HOM小IR、VEGF明显负相关（r=-0．553、-0．221，P均〈0．01，n=93）；而VEGF与SOD明显负相关（r=-0．552，P〈0．01，n=93）。结论EDF的损害在IGT阶段即可出现，而在DM患者中损害更为严重。胰岛素抵抗、VEGF、SOD、MDA与EDF的损害密切相关。     

碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子在糖尿病骨骼肌病变中的变化及意义

目的 探讨糖尿病骨骼肌碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化及其在糖尿病骨骼肌病变中的作用。方法 选用Wistar大鼠，随机分成4组：正常对照组、单纯后肢缺血组、糖尿病组和糖尿病后肢缺血组。以四氧嘧啶50mg／kg尾静脉注射制造糖尿病模型。糖尿病造模后2周结扎右股动脉制造缺血模型。10周后，观察腓肠肌病理形态学改变，同时采用免疫组化方法检测bFGF和VEGF蛋白表达情况。结果 糖尿病组骨骼肌表现为普遍性肌萎缩，肌纤维变性坏死。单纯缺血组和糖尿病组bFGF蛋白表达减弱（表达阳性率分别为53．66％和35．51％），糖尿病后肢缺血组bFGF的阳性率为25．42％，下降明显（P〈0．01）。糖尿病缺血组VEGF表达阳性率为20．68％，低于单纯缺血组（54．04％，P〈0．01）。结论 高血糖和缺血引起肌肉中bFGF及VEGF等生长因子的变化可能是糖尿病骨骼肌萎缩的重要原因之一。     

阿司匹林干预脑胶质细胞瘤相关巨噬细胞表达VEGF、bFGF和YKL-40成血管生长因子

目的 阐明阿司匹林对脑胶质细胞瘤相关巨噬细胞表达VEGF、bFGF和YKL-40蛋白的影响和意义。方法 诱导人白血病THP-1单核细胞为M2型巨噬细胞。单独培养U-87MG细胞为U-87M组;单独培养M2型巨噬细胞为M2组;U-87MG细胞与M2型巨噬细胞非接触共同培养为共培养M2组;共培养细胞用2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L阿司匹林进行干预分别为2mM、4mM、8mM阿司匹林组。免疫组化、酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组细胞VEGF、bFGF和YKL-40蛋白表达。结果 与对照组相比,共培养组巨噬细胞表达VEGF、bFGF和YKL-40蛋白明显升高（P<0.01）相对于共培养组,2mM、4mM、8mM阿司匹林组巨噬细胞表达的VEGF、bFGF和YKL-40蛋白含量均降低（P<0.01）,2mM、4mM、8mM阿司匹林组间相比,随着阿司匹林浓度增高,VEGF、bFGF和YKL-40蛋白含量逐渐降低。结论 阿司匹林能够抑制人脑胶质细胞瘤相关巨噬细胞表达VEGF、bFGF和YKL-40等血管活性相关蛋白。     

血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在放置IUD出血子宫内膜中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在置器出血子宫内膜组织中的表达及其意义。方法:在宫腔镜协助下,利用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术,对3组受试者子宫内膜中VEGF、bFGF进行检测。Ⅰ组为置器后有异常子宫出血妇女30例,其中金属O型IUD 15例;T型IUD 15例。Ⅱ组为置器后月经正常的妇女16例,其中金属O型IUD 8例,T型IUD 8例;Ⅲ组为无置器月经正常的妇女15例。结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间VEGF在子宫内膜腺上皮表达差异有显著性(P<0.05)。金属O型IUD和T型IUD在各组之间无显著性差异(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间bFGF在子宫内膜腺上皮、间质部表达差异有显著性(P<0.05)。O型IUD和T型IUD在各组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:VEGF、bFGF表达下降,影响受损伤的子宫内膜血管的再生修复能力,引起放置IUD出血;在放置金属O型IUD与T型IUD的子宫内膜中VEGF、bFGF的表达无差异性。     

软组织内热针对大鼠慢性损伤后血管内皮生长因子及内源性碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的 比较软组织内热针与其他微创疗法对大鼠骨骼肌、腓肠神经慢性损伤后血管内皮生长因子(VEGF)及内源性碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)活性的影响.方法 将75只雄性Wistar大鼠随机分为损伤对照组、内热针组、银质针加热组、银质针未加热组、小针刀组、射频组各12只及正常对照组3只.各治疗组在治疗3、7、14、28 d时分别处死实验大鼠3只,对损伤部位的组织进行VEGF、BFGF测定.结果 (1)治疗3d后腓肠肌肌肉肌腱接头处组织和腓肠神经中VEGF和BFGF活性升高,且各治疗组高于损伤对照组(P＜0.01),内热针组、银质针加热组高于其他组(P＜0.05);(2)7 d和14d,内热针组、银质针加热组VEGF、BFGF明显高于其他治疗组(P＜0.01),且内热针组高于银质针加热组(P＜0.05); (3)28 d,各治疗组VEGF、BFGF低于损伤对照组(P＜0.01),内热针组、银质针加热组低于银质针未加热组、小针刀组、射频组(P＜0.01),且内热针组低于银质针加热组(P＜0.05).结论 软组织内热针和银质针加热疗法可以明显提高大鼠骨骼肌和神经慢性损伤组织中VEGF、BFGF活性,促进组织修复,增强机体恢复能力.软组织内热针治疗效果优于银质针可能与其针刺内热稳定性高有关.     

bFGF预诱导的BMSCs移植对tMCAO大鼠治疗效果的实验研究

目的研究bFGF诱导的BMSCs移植到纹状体对tMCAO大鼠神经功能的恢复作用。方法将BMSCs进行体外分离、纯化,扩大培养后用bFGF进行预诱导和BrdU标记。对成年雄性Wistar大鼠进行tMCAO手术,7天后进行同侧纹状体移植。实验动物随机分为5组,包括3个对照组:1、假手术组(n=7):正常大鼠纹状体植入预诱导的BMSCs;2、卒中对照组(n=7):MCAO模型;3、假移植组(n=7):MCAO手术后给予等量生理盐水移植;2个实验组:4、MCAO手术后纹状体移植bFGF预诱导的BMSCs(n=10);5、MCAO手术后纹状体接受BMSCs移植(n=10)。分别于移植前、移植后7、14、21、28天对大鼠进行行为学神经功能评分,于移植后28天处死动物取材,电镜观察,同时进行BDNF染色。结果移植后28天。(1)与假移植组相比,实验组神经功能评分较显著改善,且4组优于5组。(2)1、4、5组均可见BrdU阳性细胞,其中第4组最显著。(3)与假移植组相比,实验组BDNF分泌显著增加,且4组高于5组。(4)移植细胞大部分存活,与周围宿主细胞形成紧密连接,且部分细胞具备向神经元方向分化的特征,以4组尤为明显。结论移植后BMSCs可以存活,促进大鼠神经功能恢复。与单纯BMSCs移植相比,接受bFGF预诱导BMSCs移植的MACO大鼠神经功能恢复更为显著。     

Norplant使用者子宫内膜血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及转移生长因子β_1的研究

为探讨Norplant使用者子宫不规则出血的相关因素,对使用Norplant月经规律和有不规则子宫出血者的子宫内膜与正常子宫内膜的形态、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转移生长因子β1(TGFβ1)进行比较观察。结果显示:Norplant使用者子宫内膜无典型的周期特点,子宫内膜VEGF比正常子宫内膜减少,尤其是不规则出血组减少更为明显,但bFGF及GFβ1无明显差异。提示Norplant使用者子宫异常出血与子宫内膜VEGF的减少有关。     

CD105和VEGF在水泡状胎块中的表达与意义

目的:研究CD105及VEGF在水泡状胎块与水肿性流产的绒毛滋养细胞中的表达差异及意义。方法:采用免疫组化SP法检测20例正常妊娠(NP),30例水肿性流产(HA),20例部分性水泡状胎块(PHM)和20例完全性水泡状胎块(CHM)患者绒毛滋养细胞中CD105和VEGF的表达水平。结果:①CD105在NP、HA、PHM和CHM中的阳性表达率分别是55.00%、36.67%、85.00%、95.00%,CD105在HM中阳性表达率明显高于HA和NP(P<0.05);②VEGF在NP、HA、PHM和CHM中的阳性表达率分别是50.00%、33.33%、25.00%、15.00%,VEGF在HM中阳性表达率低于HA和NP(P<0.05);③经Spearman等级相关检验,CD105和VEGF在HA与HM中表达呈负相关(r=-0.447,P<0.05)。结论:CD105和VEGF可作为标记绒毛滋养细胞的免疫组化标记物,用于水泡状胎块和水肿性流产的鉴别诊断。     

内皮素与血管内皮细胞生长因子在非小细胞肺癌中的表达及相关性

目的研究内皮素(endothelin-1,ET-1)与血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在非小细胞肺癌中的表达及两者的相关性。方法应用免疫组化SABC染色法,检测101例非小细胞肺癌标本中ET-1、VEGF的阳性表达,分别评价ET-1和VEGF与非小细胞肺癌临床病理特征间的关系,并分析ET-1和VEGF表达的相关性。结果 ET-1表达与肿瘤组织学分级、病理分期有关(P0.05),与病理分型无关联;VEGF表达与肿瘤病理分期有关(P0.05),与组织分级、病理分型无关联。ET-1高表达的区域VEGF也呈高表达,两者的表达呈正相关(P0.05)。结论 ET-1和VEGF的表达与非小细胞肺癌的发生发展密切相关,可以作为该病恶性生长的检测指标。ET-1与VEGF可能具有协同作用,促进血管生成。     

大鼠内皮祖细胞的培养及鉴定

目的 探索大鼠内皮祖细胞的分离培养,为缺血性疾病细胞移植治疗提供实验方法.方法 采集大鼠骨髓,梯度密度离心法分离单核细胞,内皮细胞培养液M199培养基培养(含20%FCS+15 ng/ml VEGF),种植于提前包埋了纤维连接蛋白的六孔板培养,应用免疫荧光和流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133.并通过检测其对FITC标记的UED-1的吸附和内吞DiI-acLDL来进行细胞功能学的鉴定.结果 经过梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、Flk-1,部分表达CD133.大鼠骨髓单个核细胞经体外诱导分化,培养第5～14天的贴壁细胞不同程度的表达CD34、CD133、Flk-1和CD31.培养第9天流式细胞仪检测其阳性率分别为(40.12±6.28)%、(15.62±4.31)%、(44.05±8.20)%和(76.1±7.20)%,细胞能特异性吸附FITC标记的荆豆凝集素并内吞DiI-acLDL,并且在Matrigel上可以形成毛细血管样.结论 大鼠骨髓可以分离培养内皮祖细胞并能体外扩增,为内皮祖细胞的移植研究奠定了基础.     

细胞核相关抗原、血管内皮生长因子与子宫腺肌症发生发展的相关性

目的:探讨细胞核增殖抗原(Ki67)及血管内皮生长因子(VEGF)在子宫腺肌症中在位和异位内膜的表达及意义。方法:用免疫组化EnVision法检测30例子宫腺肌症在位子宫内膜和肌间异位内膜Ki67和VEGF的表达情况。结果:Ki67和VEGF在子宫腺肌症病变中均有不同程度的阳性表达,子宫肌层异位内膜Ki67阳性表达率为53.3%,VEGF阳性表达率为96.7%。异位内膜的腺上皮Ki67和VEGF表达高于在位内膜的腺上皮(P0.05)。腺上皮表达高于间质(P0.05)。月经周期中VEGF的表达差异无统计学意义(P0.05)。异位内膜腺体VEGF和Ki67的表达具有相关性(P0.01)。结论:子宫腺肌症是一种细胞增殖性疾病。子宫腺肌症异位和在位子宫内膜组织中均有Ki67和VEGF的阳性表达,与子宫腺肌症的临床症状可能有关。     

COX-2和VEGF在子宫腺肌病组织中的表达及其意义

目的:观测子宫腺肌病异位子宫内膜组织COX-2和VEGF表达及其临床意义。方法:34例经病理证实为子宫腺肌病标本为研究组,30例非子宫腺肌病子宫标本为对照组。采用免疫组化法检测研究组原位内膜和腺肌病病灶、对照组内膜和子宫平滑肌层中COX-2和VEGF的表达。采用RT-PCR检测COX-2mRNA和VEGFmRNA的表达。结果:COX-2和VEGF在研究组原位内膜和腺肌病病灶中的表达率均高于对照组内膜,研究组腺肌病病灶表达率均高于原位内膜(P<0.01)。增殖期和分泌期二者在腺肌病病灶表达率均无统计学差异(P>0.05)。分泌期二者在研究组和对照组中内膜的表达均高于增殖期(P<0.05)。COX-2和VEGF蛋白表达存在线性相关(r=0.787,0.562,P<0.01)。RT-PCR检测表明,COX-2mRNA在研究组腺肌病病灶存在高表达,对照组肌层和内膜不存在COX-2mRNA表达。比较对照组正常肌层,腺肌病病灶中VEGF165和VEGF121呈现高表达(P<0.01)。结论:COX-2和VEGF的高表达可能与子宫腺肌病的发生、发展有关。     

bFGF和CD105在胃癌组织中的表达及其生物学行为

目的 探讨缄性成纤维细胞生长因子(bFGF)和CD105在胃癌组织中的表达及其生物学行为.方法 采用免疫组化检测60例胃癌组织及20例正常胃组织中bFGF与微血管密度(MVt))的表达和胃癌细胞增殖指数(SPF).用TUNEL原位凋亡法检测胃癌组织中胃癌细胞凋亡,计算凋亡率(AR).结果 胃癌组织中bFGF蛋白表达、MVD、SPF明显高于正常胃组织,而AR低于正常胃组织.bFGF、MVD和SPF呈正相关(r=0.48、0.51、0.46,P<0.05).bFGF和MVD与AR呈负相关(r=-0.44、-0.47、0.43,P<0.05).结论 bFGF可能通过上调MVD的表达,从而促进胃癌细胞增殖,抑制胃癌细胞凋亡.     

低氧对rAAV-2介导的 hVEGF165基因在大鼠心肌细胞中表达的影响

目的探讨低氧对人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达的影响。方法以重组2型腺相关病毒(rAAV-2)为载体,构建rAAV2/hVEGF165,转染大鼠原代心肌细胞。对心肌细胞进行低氧培养,并于培养的0、24、48、72h,分别应用RT-PCR技术检测VEGF165 mRNA表达、ELISA法检测hVEGF165蛋白的水平,并与对照组(予以常氧培养)进行比较。结果rAAV2/hVEGF165体外转染后,低氧培养的心肌细胞在24、48、72hhVEGF165 mRNA转录水平均明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05);在低氧培养的24、48、72h其培养上清中hVEGF165蛋白含量亦明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。结论低氧可促进重组2型腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达。     

VEGF和MMP-2在大鼠脑出血灶周脑组织中的表达

[目的]观察脑出血灶周脑组织中VEGF与MMP-2蛋白的表达情况,探讨二者之间的相互联系。[方法]50只SD大鼠随机分成假手术对照组和脑出血模型组,两组又分为术后6h,24h,72h,7d,21d5个亚组,每个亚组5只大鼠。应用SP免疫组织化学方法检测各组VEGF与MMP-2蛋白的表达情况,并对VEGF与MMP-2的表达进行相关分析。[结果]脑出血后,VEGF与MMP-2的表达大量增加,并于24～72h达到高峰。VEGF和MMP-2蛋白的表达呈正相关。[结论]脑出血灶周脑组织中VEGF和MMP-2蛋白均有明显表达,而且二者表达之间的关系密切。