CCK-B受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断时海马神经元[Ca~(2+)]i、CaM活性和CaMKⅡα表达的影响

目的 探讨胆囊收缩素-B(CCK-B)受体拮抗剂--CR-2945对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断时海马神经元内游离Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]i)、钙凋蛋白(CaM)活性和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠45只,体重180～240 g,随机分为9组(n=5):吗啡依赖组(MD组)采用剂量递增法建立吗啡依赖大鼠模型;生理盐水组(Ns组)以等容量生理盐水替代吗啡;纳洛酮催促戒断组(NPW组)于末次皮下注射吗啡后1 h,腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;伏核给药组(NA组)、杏仁核给药组(A组)和侧脑室给药组(LCV组)于末次皮下注射吗啡后1 h,相应靶核团注射10μg CR-2945,30 min后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;急性腹腔给药组(ACA组)于末次皮下注射吗啡后1 h,腹腔注射1 mg/kg CR-2945,30 min后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;慢性腹腔给药组(ACC组)给予吗啡的同时,腹腔注射1 mg/kg CR-2945,连续6 d,末次给药后30 min腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;安慰剂组(P组)以生理盐水替代CR-2945,其余处理同LCV组.处理完毕后冰浴下分离海马,采用流式细胞技术检测海马神经元内[Ca~(2+)]i和CaM活性,采用Western blot法测定CaMKⅡα表达.结果 与NS组比较,MD组[Ca~(2+)]i和CaM活性升高,CaMKⅡα表达上调(P<0.01);与MD组比较,NPW组[Ca~(2+)]i和CaM活性降低,CaMKⅡα表达下调(P<0.01);与NPW组比较,ACA组、ACC组和LCV组[Ca~(2+)]i和CaM活性升高,CaMKⅡα表达上调(P<0.01),NA组、A组和P组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 CCK-B受体拮抗剂通过升高海马神经元内[Ca~(2+)]i、CaM活性,上调CaMKⅡα表达,从而抑制吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应.     

抗氧化酶对隐睾生精细胞凋亡的影响

目的 :探讨超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHPx)对隐睾生精细胞凋亡的影响。　方法 :4 8只未成熟SD雄性大鼠随机分为隐睾组和对照组 ,于术后第 1、3、7d采集睾丸。TUNEL法检测其生精细胞凋亡 ;化学比色法测定其SOD、CAT、GSHPx的活性和丙二醛 (MDA)含量。　结果 :术后第 7d ,与对照组相比 ,隐睾重量、SOD活性、CAT活性和SOD/ (CAT +GSHPx)比值均显著降低 (P均 <0 .0 1) ,GSHPx的活性无显著变化 (P >0 .0 5 ) ,生精细胞凋亡指数和MDA含量均显著增加 (P均 <0 .0 1)。　结论 :隐睾生精细胞的凋亡与抗氧化酶活性的降低密切相关     

患糖尿病12周大鼠睾丸生精细胞周期及其凋亡与抗氧化水平的变化

目的:探讨患糖尿病12周大鼠睾丸生精细胞周期及其凋亡和血清与睾丸抗氧化水平的变化。方法:W istar大鼠随机分为正常对照组10只,糖尿病组20只。腹腔注射链佐脲菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,12周末记录其存活率、体重和睾丸重量;采用流式细胞术检测生精细胞周期各时相细胞百分率和细胞凋亡率,应用硫代巴比妥酸法(TBAR s)、硝酸还原酶法、黄嘌呤氧化酶法、二硫代二硝基苯甲酸法(DTNB)和分光光度法分别检测血清及睾丸丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和NO合酶(NOS)活性。结果:大鼠患糖尿病12周后,其存活率、体重和睾丸重量显著低于正常对照组(P<0.05);G0/G1期生精细胞显著增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞减少,即发生了G0/G1期细胞阻滞;生精细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。与正常对照组相比,糖尿病大鼠血清和睾丸MDA含量增加,其中后者增加明显(P<0.01);血清及睾丸SOD活性降低;血清GSH-Px活性显著低于对照组(P<0.05),而睾丸GSH-Px活性显著增高(P<0.01);血清和睾丸NO含量增高,尤其前者显著升高(P<0.01);血清NOS活性显著降低(P<0.05)。结论:睾丸组织及血清MDA和NO含量增加,以及抗氧化酶活性降低,可能与糖尿病大鼠生精细胞G0/G1期阻滞和凋亡增多所致生精障碍有关。     

急性或慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织CREB-1表达的影响

目的研究急性或慢性吗啡依赖和戒断大鼠脑组织环腺苷酸反应元件结合蛋白-1（CREB-1）表达的变化。方法雄性SD大鼠30只，随机分为5组（n=6）：空白对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组。急性吗啡依赖组每次背部皮下注射吗啡5mg／kg，间隔2h，连续8次；急性吗啡戒断组在急性吗啡依赖后3h腹腔注射纳洛酮5mg／kg，催促戒断30min后处死大鼠。慢性吗啡依赖组每日吗啡用量分3次腹腔注射，从第一天用量5mg／kg起，直到第12天递增至260mg／kg，慢性吗啡戒断组在慢性吗啡依赖后的次日腹腔注射纳洛酮5mg／kg，催促戒断24h后处死大鼠。用Western-blot法测定大脑皮层、伏隔核及海马CREB-1表达。结果与空白对照组比较，急性吗啡依赖、戒断组皮层、伏隔核和海马CREB-1表达差异无统计学意义（P〉0．05），慢性吗啡依赖、戒断组皮层、海马CREB-1表达上调，伏隔核CREB-1表达下调（P〈0．05）；与慢性吗啡依赖组比较，慢性吗啡戒断组伏隔核CREB-1表达下调（P〈0．05）。结论急性吗啡依赖、戒断对脑组织CREB-1表达无影响；而慢性吗啡依赖、戒断后不同脑区CREB-1表达不同。     

淫羊藿苷与睾酮治疗亚急性衰老雄性大鼠的实验研究

目的观察淫羊藿苷及睾酮对D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠血清SOD活性、T、E2含量,睾丸组织P16蛋白表达与细胞凋亡的影响。方法随机将40只SD成年雄性大鼠分为正常对照组、模型组、淫羊藿组、睾酮组。检测各组大鼠血清SOD活性、T、E2含量,HE染色观察睾丸组织变化,SP法观察睾丸组织P16蛋白表达情况,TUNEL法检测睾丸生殖细胞凋亡情况。结果D-半乳糖致亚急性衰老大鼠血清SOD活性、T含量下降,与正常组比较差异显著(P<0．01,P<0．01);各组E2变化无统计学意义。睾丸组织出现退行性变化,睾丸生殖细胞P16阳性细胞百分率(PI)和凋亡指数增加,较正常组差异显著(P<0．01);淫羊藿组和睾酮组SOD活性增加,T水平升高,生殖细胞凋亡指数下降,较模型组差异显著,睾丸组织的退行性变化明显改善。淫羊藿组生殖细胞P16阳性细胞百分率较模型组差异显著(P<0．01),而睾酮组变化无显著意义。结论与睾酮相比,淫羊藿不仅可以提高亚急性衰老雄性大鼠血清SOD活性和雄激素水平,减少生殖细胞凋亡,改善睾丸组织的退行性变化,还可通过抑制生殖细胞衰老基因P16蛋白表达这一途径延缓性腺衰老。     

吗啡处理对海马神经元细胞中钙调蛋白的影响

目的 研究急、慢性吗啡处理对原代培养的海马神经元中钙调蛋白(CaM)的影响.方法 取原代培养7d的成熟海马神经元,随机分为吗啡急性作用组(M1组)、纳洛酮急性戒断组(N1组)、吗啡慢性作用组(M2组)、纳洛酮慢性戒断组(N2组)及空白对照组(C组),每组6皿细胞.采用细胞免疫荧光染色(双抗体夹心法染色)技术及相对含量检测技术测定CaM的表达水平.结果 荧光显微镜下各组都可见绿色荧光,表明在原代培养的海马神经元内存在CaM.M2组和N2组海马神经元内CaM的荧光强度明显高于C组(P＜0.01).结论 慢性、多次使用成瘾药物才引起CaM表达增加,其机制可能是多次使用吗啡通过反复对细胞内信号转导途径的影响引起神经元细胞核CaM的改变.     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠精索静脉曲张生精细胞Caspase-3酶及bcl-2基因的影响

目的 探讨精索静脉曲张大鼠睾丸组织中一氧化氮(NO)与生精细胞凋亡之间的关系并研究其机制.方法 实验分3组:对照组(假手术组)、曲张组(精索静脉曲张组)和药物组,每组10只大鼠.(45±5)d的SD雄性大鼠复制左侧曲张模型.药物组为术后8周起腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),剂量:50mg/lg·d-1),每组10只大鼠.术后10周用流式细胞仪检测睾丸生精细胞凋亡,分光光度法检测Caspase3活性,用硝酸还原酶法测定睾丸组织NO含量和NOS活性.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因mRNA的表达.结果 与对照组对应侧相比较,曲张组大鼠双侧睾丸组织NO含量增加,NOS活性显著升高(P＜0.01),流式细胞仪枪测生精细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著升高(P＜0.01),bcl.2基因mRNA表达明显减少(P＜0.01).药物组较曲张组大鼠对应侧睾丸组织NO含量、生精细胞凋亡显著减少(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著降低(P＜0.01),bcl-2基因mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论 精索静脉曲张明显诱导大鼠睾丸组织生精细胞凋亡.其机制可能与NO含量增加,NOS活性升高,生精细胞中Caspase-3酶的活性升高及bcl-2基因表达下调有关.L-NAME对曲张大鼠乍殖细胞有保护作用.曲张对睾丸的影响是是双侧性的.     

Ν-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用。　方法 :用 2 2dSD雄性大鼠复制单侧隐睾模型。实验分假手术组、隐睾组、隐睾 +L NAME组 [术后腹腔注射L NAME ,10mg/(kg·d) ],每组大鼠各 10只。术后 7d ,用生物素 dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡 ,用硝酸还原酶法测定睾丸组织中N0含量 ,用化学比色法测定睾丸组织中NOS活性。　结果 :术后第 7d ,与假手术组睾丸相比 ,隐睾组睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加 ,隐睾 +L NAME组睾丸发生凋亡的生殖细胞数比隐睾组显著减少 (P <0 .0 1) ,隐睾 +L NAME组睾丸组织中NO含量及NOS活性与隐睾组相比显著降低 (P<0 .0 1)。　结论 :隐睾组织中NO和NOS升高是隐睾生殖细胞凋亡增加的病理机制之一 ,L NAME通过抑制NOS活性、减少NO的产生来降低睾丸组织生殖细胞的凋亡发挥其保护作用。     

大鼠睾丸扭转生殖细胞凋亡与抗氧化酶和Bcl-2基因表达的关系

目的　探讨睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡及其发生机制。方法　建立单侧睾丸扭转复位大鼠模型(72 0° ,2h)。术后 72小时取手术侧睾丸 ,采用TUNEL法检测生殖细胞凋亡 ,免疫组化SP法检测Bcl 2基因表达 ,并测定睾丸组织中超氧化物歧化酶 (SOD)和过氧化氢酶 (CAT)活性。结果　实验组手术侧睾丸生殖细胞凋亡增多 ,Bcl 2基因低表达 ,SOD和CAT活性下降 ,与对照组相比 ,两组差别具有极显著性意义 (P <0 .0 1)。结论　睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡增多与Bcl 2基因低表达和抗氧化酶活性下降有关。     

急、慢性吗啡依赖对大鼠脑组织μ阿片受体的调节差异

目的 观察急、慢性吗啡依赖时大鼠脑组织μ阿片受体（MOR）的调节及基因表达,探讨急、慢性吗啡依赖对MOR调节的差异性。方法40只SD大鼠随机分为对照组、急性依赖组、慢性依赖组、急性戒断组、慢性戒断组。急性依赖组大鼠背部皮下注射5mg/kg吗啡8次,间隔2h;慢性依赖组大鼠按小剂量递增法背部皮下注射吗啡,剂量为5、10、20、40、50、60mg·kg-1·d-1,每日3次（8:00,15:00,22:00）共6d。急、慢性戒断组在末次给药3h后腹腔注射5mg/kg纳洛酮,催促戒断24h。完成处置程序30min后,取脑组织,以3H-DAMGO进行Scatchard分析求出MOR的Bmax和Kd值,采用RT-PCR方法半定量测定MOR mRNA的表达。结果 1.急性吗啡依赖时大鼠脑组织MOR Bmax显著增高,亲和力显著下降,戒断后Bmax迅速恢复,而亲和力仍未能回到正常水平;吗啡慢性依赖时MOR的Bmax非常显著地下调,戒断后仍低于对照组,Kd值未发生明显改变。2.急性吗啡依赖使 MOR mRNA的表达非常显著地增高,戒断后迅速恢复,而吗啡慢性诱导无论依赖还是戒断状态,MOR mRNA的水平均明显低于正常。结论 急、慢性吗啡依赖对大鼠脑组织 MOR的调节方向不同,它们有着相类似的受体后机制。     

姜黄素对受X线辐射损伤雄性大鼠睾丸组织保护作用的研究

目的探讨姜黄素（CUR）对大鼠睾丸受X线辐射损伤的保护作用。方法选取雄性SD大鼠60只,体重160～180g,随机分为4组。B组（单纯辐射组）、C组（辐射＋溶剂对照组）及D组（辐射＋CUR组）大鼠进行剂量为2.0Gy X射线一次性全身照射,对照组（A组）不进行照射。C组大鼠于辐射开始1h后给予腹腔注射二甲基亚砜;D组于辐射开始1h后给予腹腔注射姜黄素溶液。照射1周后将所有大鼠处死。采用TUNEL法检测生殖细胞凋亡;检测睾丸组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSHPx）活性及丙二醛（MDA）含量。结果 B组及C组SOD和GSHPx活性明显降低,MDA含量明显升高,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）。而CUR能有效升高SOD和GSHPx活性并降低MDA含量（P〈0.01）。B组及C组睾丸脏器系数明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。CUR能有效增加睾丸脏器系数（P〈0.01）。B组及C组凋亡指数明显高于A组（P〈0.01）,而CUR可以使凋亡指数显著下降（P〈0.01）。结论本实验为CUR作为治疗睾丸辐射损伤的有效物质提供了组织学及生化依据,为临床预防和治疗睾丸辐射损伤提供了理论依据。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用.方法用22 d SD雄性大鼠复制单侧隐睾模型.实验分假手术组、隐睾组、隐睾+L-NAME组[术后腹腔注射L-NAME,10 mg/(kg·d)],每组大鼠各10只.术后7 d,用生物素-dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡,用硝酸还原酶法测定睾丸组织中NO含量,用化学比色法测定睾丸组织中NOS活性.结果术后第7 d,与假手术组睾丸相比,隐睾组睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加,隐睾+L-NAME组睾丸发生凋亡的生殖细胞数比隐睾组显著减少(P＜0.01),隐睾+L-NAME组睾丸组织中NO含量及NOS活性与隐睾组相比显著降低(P＜0.01).结论隐睾组织中NO和NOS升高是隐睾生殖细胞凋亡增加的病理机制之一,L-NAME通过抑制NOS活性、减少NO的产生来降低睾丸组织生殖细胞的凋亡发挥其保护作用.     

鞘内注射NR2B反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响

目的 评价鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重230～270 g,腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下,于L3,4间隙穿刺置管.取鞘内置管成功的大鼠32只,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、反义寡核苷酸组(AO组)和正义寡核苷酸组(SO组).MD组、AO组和SO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型;C组皮下注射等量生理盐水.AO组和SO组于注射吗啡的同时分别鞘内注射15 nmol NR2B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,用生理盐水稀释至5μl;C组和MD组鞘内注射等量生理盐水.各组在末次注射吗啡或生理盐水后4 h时,腹腔注射纳洛酮4 mg/kg诱发吗啡戒断.给予纳洛酮后30 min内观察戒断反应,并进行评分.计算大鼠体重变化幅度.给予纳洛酮后1 h时处死大鼠,测定海马NR1、NR2A和NR2B的mRNA表达水平.结果 与C组比较,MD组、AO组和SO组戒断反应评分和体重变化幅度升高,MD组和SO组海马组织NR2B mRNA表达上调(P<0.05或0.01);与MD组比较,AO组戒断反应评分和体重变化幅度降低,海马组织NR2A mBNA表达上调,NR2B mRNA表达下调(P<0.05或0.01),SO组各指标差异无统计学意义(P>0.05).各组海马组织NR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射NR2B反义寡核苷酸可抑制纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应,其机制与海马NMDA受体亚基水平和构成的变化调节有关.     

鞘内注射NR2B反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响

目的 评价鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重230～270 g,腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下,于L3,4间隙穿刺置管.取鞘内置管成功的大鼠32只,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、反义寡核苷酸组(AO组)和正义寡核苷酸组(SO组).MD组、AO组和SO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型;C组皮下注射等量生理盐水.AO组和SO组于注射吗啡的同时分别鞘内注射15 nmol NR2B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,用生理盐水稀释至5μl;C组和MD组鞘内注射等量生理盐水.各组在末次注射吗啡或生理盐水后4 h时,腹腔注射纳洛酮4 mg/kg诱发吗啡戒断.给予纳洛酮后30 min内观察戒断反应,并进行评分.计算大鼠体重变化幅度.给予纳洛酮后1 h时处死大鼠,测定海马NR1、NR2A和NR2B的mRNA表达水平.结果 与C组比较,MD组、AO组和SO组戒断反应评分和体重变化幅度升高,MD组和SO组海马组织NR2B mRNA表达上调(P<0.05或0.01);与MD组比较,AO组戒断反应评分和体重变化幅度降低,海马组织NR2A mBNA表达上调,NR2B mRNA表达下调(P<0.05或0.01),SO组各指标差异无统计学意义(P>0.05).各组海马组织NR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射NR2B反义寡核苷酸可抑制纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应,其机制与海马NMDA受体亚基水平和构成的变化调节有关.     

鞘内注射NR2B反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响

目的 评价鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重230～270 g,腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下,于L3,4间隙穿刺置管.取鞘内置管成功的大鼠32只,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、反义寡核苷酸组(AO组)和正义寡核苷酸组(SO组).MD组、AO组和SO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型;C组皮下注射等量生理盐水.AO组和SO组于注射吗啡的同时分别鞘内注射15 nmol NR2B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,用生理盐水稀释至5μl;C组和MD组鞘内注射等量生理盐水.各组在末次注射吗啡或生理盐水后4 h时,腹腔注射纳洛酮4 mg/kg诱发吗啡戒断.给予纳洛酮后30 min内观察戒断反应,并进行评分.计算大鼠体重变化幅度.给予纳洛酮后1 h时处死大鼠,测定海马NR1、NR2A和NR2B的mRNA表达水平.结果 与C组比较,MD组、AO组和SO组戒断反应评分和体重变化幅度升高,MD组和SO组海马组织NR2B mRNA表达上调(P<0.05或0.01);与MD组比较,AO组戒断反应评分和体重变化幅度降低,海马组织NR2A mBNA表达上调,NR2B mRNA表达下调(P<0.05或0.01),SO组各指标差异无统计学意义(P>0.05).各组海马组织NR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射NR2B反义寡核苷酸可抑制纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应,其机制与海马NMDA受体亚基水平和构成的变化调节有关.     

A study on the mechanism of the spermatogenic damage after vasectomy in rats

PURPOSE: Vasectomy may result in damage to spermatogenesis. There are several explanations for this damage, including an increase of pressure in the seminiferous tubules and an autoimmune reaction. Recently, vasectomy has been reported to induce germ cell death by apoptosis. However, the exact mechanism of this vasectomy-induced germ cell apoptosis is unclear. To elucidate this mechanism, we designed a vasectomized rat model and examined the testiscular alterations and apoptotic degeneration biochemically and microhistopathologically. Particularly, we analyzed the expression of nitric oxide synthase (NOS) and nuclear factor kappa B (NF kappa B), which plays a critical role in the induction of the iNOS gene, in the testis after vasectomy to gain insight into the association between germ cell apoptosis and these factors. MATERIALS AND METHODS: The testes of 40 Wistar rats (10-weeks old) were studied at 1, 2, 5 and 10 weeks after unilateral (left) vasectomy. Wistar rats weighting 290 to 310 g were divided into 2 groups and subjected to underwent either unilateral vasectomy or sham surgery under ether anesthesia. Bilateral testes were carefully observed biochemically and histopathologically. Apoptosis was detected by an in situ end-labeling technique (detection of cellular DNA fragmentation) and electron microscopy. Neuronal NOS (nNOS), endothelial NOS (eNOS) and inducible NOS (iNOS) protein was detected by Western blotting and immunohistochemical studies using each NOS monoclonal antibody. To confirm the co-localization of cellular DNA fragmentation in germ cells and each NOS, each set of consecutive testis sections (one stained for cellular DNA fragmentation and the others for each NOS) were examined. Expression of NF kappa B proteins was examined immunohistochemically using a NF kappa B p65 polyclonal antibody. RESULTS: At 5 and 10 weeks after vasectomy, the vasectomized left testis was significantly lighter than the unvasectomized right testis and sham-operated testis. At that time, the seminiferous tubules of vasectomized testes were highly damaged, presenting narrow tubular diameter, disorder of cellular arrangement, depletion of the germ cells, and local interstitial fibrosis. Vasectomized testes demonstrated a significantly increased number of apoptotic germ cells per cross-sectional area compared with sham-operated testes at 5 and 10 weeks after operation (p < 0.01). Electron microscopy revealed apoptotic germ cells each with a darkly stained nucleus. Western blotting and immunohistochemical studies demonstrated that iNOS proteins were more strongly expressed on vasectomized testes as time passed after vasectomy. Examination of consecutive sections from the vasectomized testis revealed that visibly apoptotic germ cells that exhibited positive staining for cellular DNA fragmentation were also intensely stained for eNOS and iNOS. NF kappa B p65 proteins were more strongly expressed in the nucleus of germ cells in the vasectomized testis than in the sham-operated testis. CONCLUSIONS: We found that vasectomy results in damage to spermatogenesis in adult rats, that may induce germ cell apoptosis, and that iNOS and NF kappa B may play a critical role in the germ cell apoptosis after vasectomy.