靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

生长激素和生长抑素对人结肠癌裸鼠移植瘤模型的影响

目的观察外源性生长激素（GH）和生长抑素（SS）对人结肠癌细胞株HT-29裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和裸鼠血清蛋白水平的影响。方法接种结肠癌细胞株HT-29建立裸鼠移植瘤模型。比较移植肿瘤体积、细胞周期分布、增殖指数（PI）、凋亡率、bcl-2和bax mRNA水平．以及裸鼠血清蛋白水平。结果生长抑素能够明显抑制移植瘤的生长（P〈0．05）、降低移植瘤PI（P〈0．05）、促进移植瘤细胞凋亡（P〈0．01）、降低移植瘤bcl-2mRNA表达（P〈0．05）、提高移植瘤baxmRNA表达（P〈0．05），生长激素则表现出相反的作用。生长激素能够改善移植瘤导致的低蛋白血症（P〈0．05）。结论外源性生长抑素能够显著抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长，外源性生长激素单独或联合生长抑素应用能够改善荷人结肠癌移植瘤裸鼠低蛋白血症，但具有潜在的促进肿瘤生长的作用。     

肝糖原贮备对热缺血再灌注大鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨肝糖原贮备对热缺血再灌注肝细胞凋亡及肝损伤的影响。方法建立大鼠肝热缺血模型。实验分组：术前24h静脉注射25％葡萄糖组，2ml／只，每6h1次，高糖饮食（H组）；术前禁食24h，饮水不限（L组）；正常饮食对照组（N组）和假手术组（S组）。缺血45min，再灌注2、24h取材。流式细胞术检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白。同时进行肝酶学检测、肝组织形态学观察。结果1．细胞凋亡及蛋白表达：（1）24h细胞凋亡百分率。s组〈H组〈N组〈L组（P〈0．01），各组24h凋亡率均高于2h（P〈0．01，S组除外）。（2）Bcl-2、Bax蛋白表达量。①再灌注24hBcl-2表达量：H组明显高于其余3组（P〈0．01），L组〈N组（P〈0．05），与2h比较H组表达升高（P〈0．01）；②再灌注24hBax表达量：S组明显低于其余3组（P〈0．01），L组〉N组（P〈0．01）。2．肝酶学指标：各时相点4组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），S组〈H组〈N组〈L组。3．肝脏病理组织学改变：再灌注24hH组明显轻于N组及L组，并接近S组，L组最严重。结论预防性增加肝糖原贮备可抑制热缺血再灌注过程中肝细胞凋亡，减轻肝损伤，并可能通过影响Bcl-2、Bax的表达发挥作用。     

塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗增敏作用的机制研究

为探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗增敏作用的机制,本研究应用人结肠癌SW480细胞建立裸鼠移植瘤模型,并将32只裸鼠随机分为A组（对照组）、B组（塞来昔布组）、C组（放疗组）和D组（塞来昔布＋放疗组）,观察各组裸鼠结肠癌移植瘤的生长情况,并应用免疫组化法检测移植瘤组织中COX-2、8-catenin、血管内皮生长因子（VEGF）、CD34表达,并对CD34阳性血管进行计数,计算微血管密度（MVD）。结果显示,（1）干预30d后,B、C、D组移植瘤瘤体质量及体积均明显小于A组,P〈0．05;而D组移植瘤瘤体质量和体积明显小于B、C组,P〈0．05。（2）免疫组化检测显示,COX-2、β—catenin、VEGF及CD34在各组移植瘤组织中均呈阳性表达。B、c、D组COx-2、p—catenin、VEGF表达水平及MVD均明显低于A组,P〈0．05;而D组各指标明显低于B、c组,P〈0．05。（3）相关性分析显示,COX-2、VEGF、β-catenin及MVD,各指标两两之间均具有显著相关性,P〈O．05。结果表明,塞来昔布可能是通过抑制wnt信号通路来抑制肿瘤新生血管的生成,最终发挥放疗增敏作用。     

凋亡相关基因Bax和bcl-2在骨关节炎软骨中的作用

目的探讨原发性骨关节炎与继发性骨关节炎发病机制的异同。方法收集原发性骨关节炎、继发性骨关节炎的关节软骨各8例，并以9例正常关节软骨作对照，采用RT—PCR和免疫组化方法分别检测Bax和bcl-2的mRNA和蛋白的表达，应用细胞核荧光染色的方法进行软骨细胞凋亡的检测。结果1．原发性骨关节炎组BaxmRNA表达明显升高，与继发组、对照组差异均有统计学意义（P〈0．01，P〈0．01），而继发性骨关节炎组Bax mRNA的表达与对照组之间的差异没有统计学意义（P〉0．05）；bcl-2mRNA在两类骨关节炎中的表达较对照组均升高（P〈0．01，P〈0．05），而两组间差异没有统计学意义（P〉0．05）。2．免疫组化发现两类骨关节炎中Bax、bcl-2蛋白表达水平与其mRNA表达相一致。3．原发性骨关节炎组、继发性骨关节炎组和正常对照组细胞凋亡率分别为10％～20％，8％～13％，2％～5％。原发性骨关节炎组细胞凋亡比例最高。结论软骨细胞凋亡是骨关节炎发病的重要原因，受Bax和bcl-2的共同调节；Bax表达水平的升高可能是原发性骨关节炎发病的重要原因。     

塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗增敏作用的实验研究

为探讨环氧化酶2（COX～2）抑制剂塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗的增敏作用,本研究应用人结肠癌SW480细胞建立裸鼠移植瘤模型,并将32只裸鼠随机分为A组（对照组）、B组（塞来昔布组）、C组（放疗组）和D组（塞来昔布＋放疗组）。观察各组裸鼠结肠癌移植瘤的生长情况。结果显示,B、C、D组移植瘤的生长明显受到抑制,干预后期移植瘤瘤体质量及体积均明显小于A组,P〈0．05;而D组移植瘤瘤体质量和体积显著小于B、C组,P〈0．05。结果表明,塞来昔布不仅能抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长,而且具有放疔增敏作用。     

全身热疗联合放化疗治疗Ⅲ、Ⅳa期鼻咽癌的临床研究

目的提高中晚期鼻咽癌的疗效是肿瘤临床医学研究中的重要方向。本研究采用全身热疗联合放化疗治疗Ⅲ、Ⅳa期鼻咽癌患者,分析能否改善局控率,防止或延缓其远处转移的发生。方法全身热疗联合放疗和化疗组21例,对照组放疗联合化疗组为39例。两组均接受6 MV X线外照射放疗及全身化疗,热放化组则在顺铂化疗当天进行全身热疗,每3周1次。加热前留置直肠传感器测温,治疗温度设置为39.8～40.5℃。达到治疗温度后予静脉输注顺铂化疗药,并恒温2 h。结果全部结束后3个月进行近期疗效评定。热放化组完全缓解率为90.5%（19/21）,常规放化组为66.7%（26/39）,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;鼻咽部肿瘤放疗消退剂量热放化疗组平均为52.38 Gy,常规放化疗组为64.10 Gy,两组差异有统计学性意义（P〈0.05）;颈部淋巴结放疗消退剂量热放化疗组为46.19 Gy,常规放化疗组为54.35 Gy,两组差异有统计学性意义（P〈0.05）。治疗相关毒副反应两组相似。结论全身热疗联合放射治疗和药物化学治疗Ⅲ、Ⅳa期鼻咽癌能明显改善局控率,且不增加患者毒副反应,值得进一步临床研究和应用。     

LY294002联合SN50对裸鼠胃癌模型肿瘤细胞生长和凋亡的影响

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）抑制剂LY294002与NF—KBP65核转运抑制剂SN50联合应用对裸鼠荷人胃癌模型的影响。方法采用裸鼠皮下胃癌SGC7901细胞注射法建立移植瘤模型,将模型鼠分为对照组、LY294002干预组、SN50干预组、LY294002与SN50联合干预组,每组5只。干预处理10d后观察各组肿瘤大小并计算每组肿瘤抑制率。用免疫组织化学法检测Bcl-2、P53、Bax蛋白表达,并用透射电子显微镜从形态变化上观察各组肿瘤细胞凋亡情况。结果药物干预10d后,联合干预组裸鼠胃癌细胞生长抑制率为（49．2±2．5）％,明显高于LY294002干预组（29．4±1．5）％和SN50干预组（19．7±1．6）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。此外,与LY294002干预组和SN50干预组相比,联合干预组Bcl-2表达下调和P53、Bax表达上调更为显著（P〈0．05）,胃癌细胞凋亡程度更为严重。结论LY294002与SN50联合应用可以显著抑制人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤的生长并促进胃癌细胞凋亡。     

羟丁酸钠对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠大脑皮层Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察不同剂量羟丁酸钠对缺血缺氧性脑损伤（HIBD）新生大鼠大脑皮层Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法新生7dSD大鼠，随机分为假手术组（S组）、生理盐水对照组（C组）和羟丁酸钠组（γ1,γ2，γ3组），每组又分为5个亚组，分别为缺血缺氧（HI）后1h、3h、1d,3d,7d（n=6）。按Rice法制作HIBD模型。C、γ1、γ2和γ3组分别在HI后即刻腹腔注射生理盐水0．2ml／10g、羟丁酸钠50、100、200mg／kg，3次／日。免疫组化方法检测HI后各时间点大脑皮层Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与S组比较，C、γ1、γ2、γ3组Bcl．2及Bax蛋白表达在HI后1、3h即增高，HI后1d达到高峰，HI后3d下降（P〈0．05），HI后7d时基本恢复正常；与C、γ3比较，HI后1、3d时γ1、γ2组Bcl-2蛋白表达增高，Bax蛋白表达降低（P〈0．05）；73组与C组间Bcl-2、Bax蛋白表达比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论羟丁酸钠上调HIBD新生大鼠大脑皮层Bcl-2蛋白表达，下调Bax蛋白表达。     

ERK1／2MAPK通路在甲羟戊酸促进人类肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的探讨甲羟戊酸（MVA）促进人类肾小球系膜细胞（HMC）增殖中，细胞外信号调控蛋白激酶1／2（ERK1／2）丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路的作用及机制。方法将体外培养的HMC根据不同的处理因素分为正常对照组、MVA组（100nmol／L）、MVA（100nmol／L）加PD98059（50μmol／L）组即MVA加PD组，以不含干预因素正常培养细胞为对照组，分别于干预后12、24h收集各组细胞，应用Western blot法检测P-ERK1／2、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①p-ERK1／2蛋白的表达：MVA组在各个时间点的表达均明显上调，且随时间延长，蛋白表达增加（P〈0．05）；而MVA加PD组在各个时间点的表达均无明显变化（P〉0．05）。②Bcl-2与Bax蛋白的表达：MVA组与MVA加PD组在各个时间点Bcl-2蛋白表达均明显上调，且随时间延长表达增加（P〈0．05）；而各个时间点Bax蛋白的表达均明显下调（P〈0．05）；但随时间延长，MVA组表达下降（P〈0．05），而MVA加PD组表达下降不明显（P〉0．05）；③Bcl-2／Bax：MVA组与MVA加PD组在各个时间点均升高，且随时间延长Bcl-2／Bax升高（P〈0．05）；而在各个时间点，MVA加PD组较MVA组Bcl-2／Bax明显下降（P〈0．05）。结论MVA可通过Ⅱ水1／2信号转导通路促进HMC增殖；ERK1／2信号转导通路促进HMC增殖可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达，并最终通过上调Bcl-2／Bax而实现。     

右美托咪定预处理对内毒素血症大鼠海马区Bcl-2、Bax表达及认知功能的影响

目的 探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预处理对内毒素血症大鼠海马区凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达及认知功能的影响. 方法 健康清洁SD雄性大鼠24只,6周龄,体重200～250 g,采用随机数字表法将其分为3组(每组8只):对照组(C组)、内毒素组(E组)和Dex组(D组).D组腹腔注射Dex 50 μg/kg,30min后尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)5 mg/kg;E组腹腔注射等容量(2ml)生理盐水,30 min后尾静脉注射LPS 5 mg/kg;C组腹腔注射等容量生理盐水,30 min后尾静脉注射等容量生理盐水.各组于给药后12h,用Morris迷宫测试大鼠认知功能的变化,其后处死大鼠,取大脑海马组织.TUNEL法检测组织凋亡指数(apoptosis index,AI),免疫组织化学法分别检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 与C组比较,E组和D组潜伏期和游泳总距离增加,穿越平台次数减少(P＜0.05);与C组比较,E组Bcl-2表达差异无统计学意义(P＞0.05),Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05);D组Bcl-2和Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).与E组比较,D组AI明显降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05). 结论 Dex可以改善内毒素血症大鼠的认知功能,其机制可能与调节Bcl-2和Bax蛋白表达,减轻海马区神经元凋亡有关.     

不同时期浅低温对大鼠脑缺血再灌注时谷氨酸、Bcl-2和Bax水平的影响

目的 评价不同时期低温对大鼠脑缺血再灌注时脑组织谷氨酸、Bcl-2和Bax水平的影响.方法 成年雄性SD大鼠24只,随机分为4组(n=6),A组、B组、C组和D组均采用四血管阻断20 min的方法制备全脑缺血再灌注模型.B组、C组和D组均采用鼻咽腔降温的方法维持海马温度32.5～33.5℃1 h,B组降温结束时进行缺血;C组缺血的同时开始降温;D组再灌注的同时开始降温,3组降温结束后开始复温.缺血和再灌注100 min期间每隔10 min收集一次海马CA1区微透析液,测定谷氨酸浓度,反映海马CA1区谷氨酸释放水平.再灌注3 h时,取脑组织,测定海马CA1区Bcl-2和Bax的表达水平,并计算Bcl-2和Bax表达的比值(Bcl-2/Bax).结果 与A组比较,其他3组再灌注期间海马谷氨酸释放水平降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05);与B组比较,C组海马Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05);与C组比较,D组再灌注期间海马谷氨酸释放水平升高,Bax表达上调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).结论 降温实施越早减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的效应越强.     

探讨脑缺血大鼠骨髓基质细胞移植后减少神经细胞凋亡的作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后骨髓基质细胞移植对神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法取大鼠股骨髓基质细胞,分化培养为骨髓基质细胞源神经干细胞。将32只健康SD大鼠随机平均分为4组。A组不建立局灶性脑缺血模型,不做任何移植,其余步骤同其他组。B、C、D组均建立局灶性脑缺血再灌注模型。B组将1mlPBS经尾静脉注入大鼠体内;C组将1ml3×106个骨髓基质细胞经尾静脉注入大鼠体内;D组将1ml3×106个骨髓基质细胞源神经干细胞经尾静脉注入大鼠体内。分别在移植后7d和14d行脑灌注固定取材,应用免疫组织化学染色检测脑组织中Bcl2、Bax蛋白表达阳性的细胞,原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡数。结果C组和D组各时点的神经细胞凋亡数均少于B组(P<0.01),C组和D组移植14d时,神经细胞凋亡数显著少于移植7d时(P<0.01),移植14d时D组神经细胞凋亡数显著少于C组(P<0.05)。C组和D组Bcl2表达阳性的细胞数显著高于B组(P<0.01)。C组和D组Bax蛋白表达阳性的细胞数明显低于B组(P<0.01)。结论骨髓基质细胞源神经干细胞可能通过上调Bcl2蛋白,下调Bax蛋白的表达,减少神经细胞凋亡,从而对脑缺血再灌注损伤后的神经细胞起保护作用。     

多烯紫杉醇靶向放疗增敏对结肠癌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的：探讨免疫脂质化的多烯紫杉醇在LoVo细胞放射增敏过程中， 对其凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法：制备偶联癌胚抗原（CEA）抗体的多烯紫杉醇脂质体，作用于LoVo细胞后再经2Gy照射，然后再进行相关检测：DNA末端原位标记染色法(TUNEL) 计算凋亡指数(AI);检测p53和Bax和Bcl-2，Fas，FasL及survivin 的表达。结果：多烯紫杉醇免疫脂质体联合放射组（A组）LoVo的AI为(43.6±5.2)% ，均显著高于多烯紫杉醇脂质体联合放射组（B组） (17.7±3.9)%及单纯放射组（C组） (16.8±3.5)% （P< 0. 01）。而B,C组间差异无统计学意义（P>0. 05）。A组的Bax,Fas和FasL的表达显著高于B组;而A组的survivin的表达显著低于B组（P<0.01）,但两组对p53和Bcl-2表达影响均无明显差异。结论：多烯紫杉醇经多种通路调节细胞凋亡，并能增加肿瘤细胞的放疗敏感性。     

区域性动脉灌注化疗对胰腺癌bcl-2、bax基因的影响

目的　探讨区域性动脉灌注化疗对胰腺癌bcl-2、bax基因表达的影响,寻找胰腺癌治疗的新手段。方法　应用TUNEL法检测32例未经区域性动脉灌注化疗和19例经区域性动脉灌注化疗的胰腺癌细胞凋亡指数(AI);并采用免疫组织化学方法检测区域性动脉灌注化疗对胰腺癌细胞bcl、bax基因表达的影响。结果　区域性动脉灌注化疗组胰腺癌细胞AI比未区域性动脉灌注化疗组明显升高(0.65%vs1.10%,P＜0.05);与未区域性动脉灌注化疗组相比,区域性动脉灌注化疗组肿瘤细胞bcl-2基因表达明显减少(36.7%vs75.0%,P＜0.05),而bax基因的表达显著增加(73.6%vs34.0%,P＜0.05)。结论　区域性动脉灌注化疗可以诱导胰腺癌肿瘤细胞凋亡的增加,是胰腺癌综合治疗的有效措施之一。     

活血止痛汤对硬膜外瘢痕中线粒体凋亡途径相关基因的影响

目的:探讨中药活血止痛汤对硬膜外瘢痕中线粒体凋亡途径及Caspase3,9,Bax,Bcl2相关基因表达水平的影响。方法:雌性新西兰白兔60只(体重:2.5～3.0kg)按随机数目表分成假手术组(A)、空白对照组(B)、透明质酸钠组(C)和活血止痛汤组(D,主要药物有当归20g、赤芍20g、红花20g、乳香15g、没药15g等11味),每组15只。除A组外,其余各组手术切除L4,5椎板,造成1.0cm×1.0cm硬脊膜裸露区。C组于硬膜囊外均匀地涂上一层透明质酸钠约0.5ml,B、D组以等量生理盐水处理,术后2周内D组予活血止痛汤(2.5ml/kg,每日1次,连续14d)灌胃。术后第2、4、8周末每组各处死5只,逆转录酶链反应(RT-PCR)测定其硬膜外瘢痕组织中Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达水平。结果:RT-PCR检测发现各组Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达水平在各个时期均与A组存在统计学差异(P0.01)。第2、4、8周时,C组和D组Caspase3,9,Bcl2的表达水平均明显低于B组(P0.05),Bax则明显高于B组(P0.05);在第8周时,D组Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达水平与C组亦有统计学意义(P0.05)。结论:活血止痛汤通过调节Caspase3,9,Bax,Bcl2的表达,可进一步诱导线粒体的凋亡通路,从而达到预防硬膜外瘢痕增生、粘连的效果。     

Effect of hyperbaric oxygen on cytochrome C,Bcl-2 and bax expression after experimental traumatic brain inlury in rats

Objective： To explore the effects of hyperbaric oxygen （HBO） treatment on the neuronal apoptosis at an earlier stage and the expressions of Cytochrome C （Cyt C）, Bcl-2 （B-cell lymphoma-2 family） and Bax （Bcl-2 associated X protein） in rat brain tissues after traumatic brain injury （TBI）. Methods： Forty adult rats were divided into two groups, i.e. ,Group A （the rats with untreated TBI） and Group B （ rats with HBO treatment after TBI）. Sections of brain tissues of these two groups were then detected at 3,6, 12,24,72 hours after TBI by immunohistochemistry and Results： HBO treatment could up-regulate the expression of Bcl-2 within 72 hours, reduce the release of Cyt C from mitochondria, attenuate the formation of dimeric Bax and alleviate the mitochondrial edema within 24 hours after TBI. Conclusions： HBO treatment can alleviate neuronal apoptosis after TBI by reducing the release of Cyt C and the dimers of Bax and up-regulating the expression of Bcl-2.     

Effect of hyperbaric oxygen on cytochrome C, Bcl-2 and bax expression after experimental traumatic brain injury in rats

Objective: To explore the effects of hyperbaric oxygen (HBO) treatment on the neuronal apoptosis at an earlier stage and the expressions of Cytochrome C (Cyt C), Bcl-2 ( B-cell lymphoma-2 family) and Bax ( Bcl-2 associated X protein) in rat brain tissues after traumatic brain injury (TBI). Methods: Forty adult rats were divided into two groups, i.e. , Group A (the rats with untreated TBI) and Group B (rats with HBO treatment after TBI). Sections of brain tissues of these two groups were then detected at 3,6, 12,24, 72 hours after TBI by immunohistochemistry and electronmicroscope, respectively. Results: HBO treatment could up-regulate the expression of Bcl-2 within 72 hours, reduce the release of Cyt C from mitochondria, attenuate the formation of dimeric Bax and alleviate the mitochondrial edema within 24 hours after TBI. Conclusions: HBO treatment can alleviate neuronal apoptosis after TBI by reducing the release of Cyt C and the dimers of Bax and up-regulating the expression of Bcl-2.     

局部联合应用NGF及胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面血管形成及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨局部应用NGF联合胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面血管中凋亡相关因子Bcl-2、Bax表达的影响及创面愈合的机制。方法取75只清洁级雄性Wistar大鼠,体重200～220 g,随机分为正常对照组(A组)、糖尿病对照组(B组)、胰岛素治疗组(C组)、NGF治疗组(D组)、NGF联合胰岛素治疗组(E组),每组15只。B、C、D、E组大鼠采用两步给药法腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病模型,STZ剂量分别为第1天10 mg/kg,第3天50 mg/kg;A组给予相同剂量柠檬酸缓冲液。模型制备后1个月,采用水蒸气烫伤法于各组大鼠背部制备2个深Ⅱ度烫伤创面。烫伤模型制备后,A、B组创面外敷3层生理盐水纱布;C组创面外敷3层浸润5 U胰岛素诺和灵30R的纱布,并每日腹部皮下注射诺和灵30R 4～6 U/kg;D组创面外敷3层浸润5 mL NGF溶液(25 U/mL)的纱布;E组联合C、D组方法处理。观察大鼠一般情况,伤后7、11、15、21 d大体观察各组创面愈合情况并计算创面愈合率,伤后3、7、11、15、21 d取创面组织行组织学及免疫组织化学染色观察,检测创面Bcl-2、Bax、CD34的表达并计算微血管密度。结果各组大鼠均存活至实验完成。随时间延长,各组创面逐渐缩小,其中E组创面愈合速度、皮肤角化、毛发生长及肉芽组织和胶原纤维生长均优于其余各组。伤后各时间点E组创面愈合率均高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。伤后随时间延长,各组CD34、Bcl-2表达逐渐增强,至15 d达高峰,21 d表达减弱;E组各时间点表达均强于其他各组(P<0.05)。伤后3 d各组均未见Bax表达,7 d后开始见新生血管内皮细胞Bax表达,且随时间延长表达逐渐增强,其中E组表达强度均低于其余各组(P<0.05)。结论局部联合应用NGF和胰岛素可通过抑制创面血管内皮细胞凋亡、增加创面血管生成,促进糖尿病大鼠创面愈合。     

二氮嗪预处理联合低温对大鼠海马神经元缺氧复氧时Bcl-2和Bax表达的影响

目的 二氮嗪预处理联合低温对大鼠海马神经元缺氧复氧时Bcl-2和Bax表达的影响.方法 清洁级SD大鼠,出生<24 h,体重5～6 g,离体培养海马神经元,接种于培养皿或96孔板.海马神经元随机分为8组,每组36孔或12皿:常温组(NT组)、二氮嗪预处理+常温组(DP+NT组)、浅低温组(MiH组)、二氮嗪预处理+浅低温组(DP+MiH组)、中低温组(MoH组)、二氮嗪预处理+中低温组(DP+MoH组)、深低温组(DeH组)和二氮嗪预处理+深低温组(DP+DeH组).DP+NT组、DP+MiH组、DP+MoH组和DP+DeH组培养液中加入二氮嗪,终浓度为100μmol/L,孵育1 h,1次/d,连续2 d,随后分别在37、34、30和22℃下缺氧4 h,37℃复氧48 hoNT组、MiH组、MoH组和DeH组分别在37、34、30和22℃下行缺氧4 h,37℃复氧48 h.于复氧48 h时测定海马神经元活力、凋亡率和Bcl-2和Bax 的表达水平,计算Bcl-2/Bax.结果 与NT组比较.DP+NT组、MiH组、MoH组和DeH组海马神经元活力升高,凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl/21Bax升高(P<0.05);与DP+NT组比较,DP+MiH组、DP+MoH组和DP+DeH组海马神经元活力升高,早期凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax 表达下调,Bcl-21Bax升高(P<0.05),晚期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与MiH组比较,DP+MiH组和DeH组海马神经元活力升高,早期凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bel-2/Bax升高(P<0.05),晚期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),MoH组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与DP+MiH组比较,DP+DeH组海马神经元活力升高,早期凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P<0.05).结论 二氮嗪预处理联合低温减轻大鼠神经元缺氧复氧损伤的机制可能与纠正Bcl-2与Bax失衡,抑制神经元早期凋亡有关.