多基原兔耳草HPLC指纹图谱对比研究

目的建立现有国家药品标准收载的兔耳草基原全缘兔耳草Lagotis integra(药材名为兔耳草)及短管兔耳草L. brevituba(药材名为洪连)的HPLC指纹图谱方法,并通过所建立的方法对市场上其他3种较为常见的兔耳草(圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草L. alutacea及短穗兔耳草L. brachystachya)进行对比研究。方法全缘兔耳草与短管兔耳草的HPLC指纹图谱相似度低,故分别建立二者HPLC指纹图谱方法;采用Waters X-Bridge C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长328 nm;柱温35℃(全缘兔耳草)及25℃(短管兔耳草)。结果建立的全缘兔耳草HPLC对照指纹图谱指认了14个共有峰,并标定了大车前苷、鞭打绣球苷B、10-O-trans-p-methoxycinnamoyl-catalpol及10-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol峰;所建立的短管兔耳草HPLC对照指纹图谱存在13个共有峰,并标定松果菊苷、大车前苷及毛蕊花糖苷峰;建立的全缘兔耳草HPLC对照指纹图谱与所有批次全缘兔耳草及革叶兔耳草的相似度均大于0.9,与其他3种兔耳草相似度低;建立的短管兔耳草HPLC对照指纹图谱与所有批次短管兔耳草及圆穗兔耳草的相似度均大于0.9,与其他3种兔耳草相似度低。结论已建立的方法能有效地对各基原兔耳草进行鉴别,建议革叶兔耳草与全缘兔耳草同时收载于《卫生部药品标准(藏药第一册)》,圆穗兔耳草可作为《中国药典》2015年版一部收载的"洪连"的新基原。     

藏药短管兔耳草质量控制方法研究

目的建立短管兔耳草的质量控制方法,为短管兔耳草的合理开发提供科学依据。方法参照《中国药典》2010年版附录相关方法,对短管兔耳草的水分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定;以梓醇作为对照品建立短管兔耳草药材的薄层鉴别方法;以松果菊苷、大车前苷和毛蕊花糖苷作为指标性成分建立高效液相色谱含量测定方法。结果薄层色谱斑点清晰,特征性强,重复性好;高效液相色谱定量分析中,松果菊苷、大车前苷和毛蕊花糖苷线性范围分别为0.11~37.67μg/μl、0.12~31.33μg/μl、0.15~28.65μg/μl;平均加样回收率分别为99.7%、98.9%、98.5%。结论该文建立的实验检测方法科学合理,操作简便,稳定可靠,重复性好,可作为藏药短管兔耳草的质量控制方法。     

短穗兔耳草和短管兔耳草抗急性酒精肝损伤及其作用机制

目的 研究短穗兔耳草和短管兔耳草对急性酒精肝损伤的保护作用及其作用机制。方法 将小鼠随机分为9组,每组10只,分别为正常组、模型组、联苯双酯组（阳性对照组）、短穗兔耳草低、中、高剂量组、短管兔耳草低、中、高剂量组。采用灌胃50%乙醇的方法制备急性酒精肝损伤模型,连续灌胃给药7d,于造模后16h各组取血、取肝脏,测定血清中ALT、AST、TC、TG、TNF-α、NF-κB各项指标,测定肝组织匀浆中SOD、MDA、GSH、蛋白的含量,PCR检测肝组织中TNF-α相对表达量。结果 与模型组比较,短穗兔耳草和短管兔耳草高剂量组可显著降低血清中ALT、AST、TC、TG含量（P＜0.01或P＜0.05）,短穗兔耳草和短管兔耳草高剂量组可显著升高肝匀浆中SOD、GSH含量,降低MDA含量,具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。短穗兔耳草各剂量组和短管兔耳草高剂量组可显著降低TNF-α、NF-κB的含量,具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。短穗兔耳草提取物和短管兔耳草提取物给药组小鼠肝组织中TNF-α mRNA的相对表达量均显著降低（P＜0.01）。结论 短穗兔耳草和短管兔耳草乙醇提取物均具有抗急性酒精肝损伤作用,其作用与氧化应激及对炎症因子的调控相关。     

两种兔耳草对四氯化碳致肝损伤小鼠保护作用的比较研究

目的比较短管兔耳草和短穗兔耳草对四氯化碳(CCl_4)所致肝损伤小鼠的保护作用。方法采用腹腔注射含0.2%CCl_4的花生油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药7d,末次给药1h后取血、取肝脏,检测血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量;部分肝脏甲醛固定、HE染色后显微镜下观察肝组织形态学变化。结果与模型组比较,短穗兔耳草2.0,4.0,8.0 g·kg~(-1)均能显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST和TNF-α的水平,同时显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH的含量,并降低肝匀浆中MDA含量,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);短管兔耳草8.0 g·kg~(-1)可显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST和TNF-α的水平(P0.05,P0.01),短管兔耳草2.0,4.0,8.0 g·kg~(-1)均可显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH的含量(P0.01),但MDA含量无显著变化(P0.05)。病理切片显示短穗兔耳草各剂量组和短管兔耳草8.0 g·kg~(-1)给药组能显著改善肝组织的病理变化。结论短管兔耳草与短穗兔耳草均对CCl_4所致小鼠肝损伤有保护作用,短穗兔耳草效果较优。     

藏药短管兔耳草中1个新苯乙醇苷类化合物

目的:对藏药短管兔耳草的化学成分进行研究.方法:用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱和半制备HPLC分离纯化化合物,并用波谱学方法进行结构鉴定.结果:从藏药短管兔耳草的醋酸乙酯提取物中分离得到2个化合物,经鉴定均为苯乙醇苷类化合物.结论:化合物1为新化合物,命名为兔耳草苷A(lagotiside A),化合物2为毛蕊花糖苷.     

基于靶细胞捕集与分子对接的藏族药短管兔耳草调控URAT1活性成分筛选

目的:集成靶细胞捕集、液-质联用及分子对接技术研究藏药短管兔耳草调控尿酸转运体1(URAT1)成分及其与URAT1的结合机制,为基于藏族药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定物质与理论基础。方法:以可表达URAT1的HK-2细胞为靶细胞捕集藏族药短管兔耳草成分,运用超高压液相色谱飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对捕集成分进行鉴定,基于分子对接技术研究捕集成分与URAT1的结合机制。结果:HK-2细胞共捕集了短管兔耳草8个成分,经UPLC-Q-TOF-MS鉴定,分别为金丝桃甘、大车前苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、黄大花洋地黄苷、假荆芥属苷、异黄大花洋地黄苷、高车前苷和木犀草素。分子对接结果显示这些成分可与URAT1通过氢键,范德华力,pi-pi作用和疏水作用等方式进行结合,但化合物与URAT1的结合机制和强弱,与化合物结构和类型密切相关。结论:靶细胞捕集,UPLC-Q-TOF-MS与分子对接集成技术可成功阐明藏族药短管兔耳草调控URAT1成分及成分与URAT1的结合机制,研究结果为基于藏族药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定一定的物质与理论基础。     

短穗兔耳草和短管兔耳草抗急性酒精肝损伤小鼠作用机制的研究

目的研究短穗兔耳草和短管兔耳草对急性酒精肝损伤的保护作用及其作用机制。方法将小鼠随机分为9组,每组10只,分别为正常组,模型组,联苯双酯组(150 mg·kg~(-1)),短穗兔耳草低、中、高剂量组(1.0,2.0,4.0 g·kg~(-1)),短管兔耳草低、中、高剂量组(1.0,2.0,4.0 g·kg~(-1))。采用灌胃50%乙醇的方法制备急性酒精肝损伤模型,连续灌胃给药7 d,于造模后16 h各组取血、取肝脏,测定血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子kappa B(NF-κB)各项指标,测定肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,PCR检测肝组织中TNF-α相对表达量。结果与模型组比较,短穗兔耳草和短管兔耳草高剂量组可显著降低血清中ALT、AST、TC、TG含量可显著升高肝匀浆中SOD、GSH含量,并降低MDA含量,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);短穗兔耳草各剂量组和短管兔耳草高剂量组可显著降低TNF-α、NF-κB的含量,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);短穗兔耳草和短管兔耳草高、中剂量组小鼠肝组织中TNF-α mRNA的相对表达量均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论短穗兔耳草和短管兔耳草均具有抗急性酒精肝损伤作用,其作用与氧化应激及对炎症因子的调控相关。     

短管兔耳草的研究进展

短管兔耳草具有多种主治功能,广泛应用于中藏药制剂中。该文综述了近二十几年来短管兔耳草的研究状况,包括化学成分研究、提取工艺研究、药理作用研究、生理活性研究及临床应用。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的短管兔耳草化学成分快速识别研究

采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术快速分析鉴别短管兔耳草的化学成分,为其临床应用提供参考依据,试验采用UPLC-Q-TOF-MS/MS仪器,YMC-Triart C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以乙腈-0.2%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在负离子模式下采集数据,通过保留时间、精确分子离子峰和二级质谱裂解碎片,并结合参考文献,对短管兔耳草成分进行鉴定,该实验共鉴别出22个化合物,其中黄酮类化合物11个,苯乙醇苷类化合物6个,环烯醚萜类化合物1个,有机酸类化合物4个。UPLC-Q-TOF-MS/MS方法能快速鉴别短管兔耳草中的各类化学成分,方法简单,快速,可为短管兔耳草的临床应用提供物质依据。     

藏药兔耳草常用基原的ITS2序列鉴定研究

目的 利用DNA条形码内转录间隔区2（internal transcribed spacer 2,ITS2）序列针对自采及流通使用环节的不同基原兔耳草进行分析,建立一种快速鉴定常用兔耳草的方法,并分析市场流通的主流品种。方法 采用试剂盒提取101份兔耳草样品的DNA,针对其ITS2片段进行PCR扩增并双向测序,获取ITS2序列信息;并从GenBank上下载相关序列28条。运用MEGA6.0对129条ITS2序列进行比对分析,计算种内和种间K2P遗传距离,构建邻接法（neighbor-joining,NJ）系统进化树,并预测ITS2二级结构。采用BLAST法及NJ聚类分析法分析市场流通兔耳草基原。结果 除四川部分区域所产全缘兔耳草Lagotis integra与革叶兔耳草L.alutacea种间亲缘关系近外,短筒兔耳草L.brevituba、全缘兔耳草、圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草、短穗兔耳草L.brachystachya及紫叶兔耳草L.praecox的种内最大遗传距离均小于种间最小遗传距离,具有明显的条形码间距。系统进化树显示短筒兔耳草、圆穗兔耳草、短穗兔耳草及紫叶兔耳草单独聚为一支,四川部分区域所产全缘兔耳草与革叶兔耳草聚为一支,其余全缘兔耳草聚为一支。通过ITS2二级结构发现,各基原兔耳草在茎环数目、大小及位置均有一定差异,可区分亲缘关系近的全缘兔耳草与革叶兔耳草。市场分析显示,市面上流通的兔耳草有6种基原,以全缘兔耳草使用占比最高,短筒兔耳草次之,短穗兔耳草及圆穗兔耳草较低,紫叶兔耳草及革叶兔耳草最低。结论 ITS2序列可以作为DNA条形码用来鉴别常用藏药兔耳草的基原,市场主流兔耳草品种为全缘兔耳草、短筒兔耳草及短穗兔耳草。     

短管兔耳草正丁醇提取物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:探讨藏药短管兔耳草正丁醇提取物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的活性。方法:MTT比色法检测其对SGC-7901胃癌细胞株增殖的抑制作用;荧光显微镜及电镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖电泳法检测细胞凋亡过程中DNA碎片的形成;流式细胞仪分析测定细胞的凋亡率。结果:藏药短管兔耳草正丁醇提取物在0.34~21.60 mg/mL范围内,对SGC-7901胃癌细胞株的增殖有明显抑制作用;荧光显微镜及电镜下可观察到凋亡的形态学改变;流式细胞仪通过对单个细胞的快速测定,可以观察到“亚G1峰”;DNA凝胶电泳呈现梯形条带。结论:藏药短兔耳草正丁醇提取物能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增值并诱导凋亡。     

藏药短管兔耳草与几种易混淆药材的显微鉴别研究

目的:探讨短管兔耳草与易混淆药材的显微鉴别方法。方法:取短管兔耳草和长萼兔耳草全草药材,软化后分别将各药材的根、茎、叶进行石蜡制片,全草制作粉末片,分别进行显微组织观察并对组织切片进行显微照相。结果:根:表皮细胞特征有差异,导管的大小和排列方式有不同;茎:中柱鞘纤维列数有明显差别,细胞内含物的颜色不同,最大的区别是中央髓部的有无;叶:气道数量有差异;粉末:粉末颜色有微小差异,导管纹理、气孔轴式、薄壁细胞内含物不同,淀粉粒、腺毛的有无差别。结论:采用显微鉴别可以对两种药材进行鉴别。     

短管兔耳草乙醇提取物对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的探讨不同浓度的短管兔耳草乙醇提取物对H_(22)荷瘤小鼠肿瘤细胞生长及血清IL-2和TNF-ɑ的影响。方法采用细胞接种的方法建立小鼠肝癌H_(22)移植瘤模型,随机分为模型对照组,顺铂组,短管兔耳草乙醇提取物高、中、低剂量组,另设正常对照组。观察各组小鼠一般状况,检测有效体质量变化及抑瘤率、肿瘤指数、肝脏、脾脏、胸腺、和肾脏的器官指数,比色分析法检测肝组织中SOD和MDA的含有量,ELISA检测血清中IL-2和TNF-ɑ的含有量。结果短管兔耳草乙醇提取物各干预组的一般状况优于模型对照组和顺铂组;各治疗组瘤体质量均低于模型对照组瘤质量(P0.05或P0.01);短管兔耳草乙醇提取物各干预组有效体质量增加,胸脾指数高于模型对照组(P0.05或P0.01);同时,短管兔耳草乙醇提取物各干预组血清SOD的活性、IL-2和TNF-ɑ的含有量均高于模型对照组(P0.05或P0.01),血清MDA的含有量及肝肾指数低于模型组(P0.05或P0.01)。结论短管兔耳草乙醇提取物可抑制小鼠肝癌H_(22)肿瘤细胞的增殖,其机制可能与增强血清IL-2和TNF-ɑ的含有量有关,也可能与增强机体的抗氧化能力有关。     

藏药短管兔耳草的化学成分研究

短管兔耳草Lagotis brevitubaMaxim是玄参科兔耳草属植物,生长在海拔3 000~4 850 m的高山草甸、倒石堆、碎石带上。主要分布于青海、西藏、甘肃等省区。该植物为常用的藏药,其藏药名为洪连,全草入药,藏医主要用于治疗全身发烧、肾炎、肺病、阴道流黄黑色液物、湿热泻痢、高血压病、动脉粥样硬化症、综合性毒物中毒及“心热”等疾病。经药理实验证明,该植物具有体外抑菌、抗炎、降血糖和抗肿瘤等药理功效[1]。但有关短管兔耳草的....     

天枣益冠宁调血脂作用的研究

天枣益冠宁为藏药复方制剂,由深红景天、广枣、短管兔耳草3味藏药按3:2:1组方而成.主要用于冠状动脉粥样硬化的治疗.本实验对其调血脂作用进行了研究.     

藏族药兔耳草属药用植物化学成分与药理作用研究进展

藏族药兔耳草属药用植物资源充足,品种丰富,具有行血解毒,清热调经的功效,在藏族医药体系中应用广泛,是藏族药中常用的上品药材,在多种方剂中作为主药。但目前兔耳草属药用植物的研究报道较少,其研究成果主要集中在革叶兔耳草Lagotis alutacea,短穗兔耳草L.brachystachya,短管兔耳草L.brevituba,圆穗兔耳草L.ramalana,云南兔耳草L.yunnanensis这几个种的兔耳草属植物的药理和化学成分的研究,其他种的兔耳草属植物罕见报道。目前研究表明,兔耳草属药用植物含有黄酮类、环烯醚萜苷类、苯丙素苷类、甾体类、三萜类等多种化学成分。现代药理研究表明其具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗肝损伤、抗炎、抗痛风等多种药理活性。兔耳草属药用植物应用前景非常广阔,但对其的研究开发较少。本文搜集了对近年来兔耳草属植物的资源分布、化学成分、药理作用及其在藏族医药体系的应用进行系统的文献综述,以期为其临床合理应用和深入开发提供科学参考。     

基于环烯醚萜苷成分的不同基原兔耳草及药用部位差异性研究

目的建立藏药兔耳草环烯醚萜苷类主要成分（梓醇、桃叶珊瑚苷）的含量测定方法,并对不同基原兔耳 草及不同药用部位进行对比研究。方法 采用 Waters Atlantis T3 C1（8 4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱;流动相： 乙腈-0.1%磷酸水（1∶99）;检测波长：210 nm;流速：1 mL·min-1。采用单因素方差分析方法进行数据分析。 结果所建立的梓醇、桃叶珊瑚苷含量测定方法分离度高,在测定的浓度范围内线性关系好,精密度、重复 性、稳定性的RSD 均小于2.0%。梓醇、桃叶珊瑚苷平均加样回收率分别为102.94%、100.85%。各基原兔耳 草环烯醚萜苷类主要成分（梓醇、桃叶珊瑚苷）比较：全缘兔耳草>紫叶兔耳草>短穗兔耳草>圆穗兔耳草>革叶 兔耳草>短筒兔耳草。同一基原不同药用部位比较：梓醇含量地下部位优于地上部位,而桃叶珊瑚苷含量地上 部位优于地下部位。结论所建立的方法快速、简便、重复性好,可用于藏药兔耳草梓醇、桃叶珊瑚苷的含量 测定,为兔耳草的质量控制提供参考。短筒兔耳草环烯醚萜苷类成分含量低于其他5 种基原。建议将各基原兔 耳草均作为藏药兔耳草使用。     

基于TLR2/MyD88/NF-κB和NALP3信号通路探讨藏族药短穗兔耳草提取物抗慢性酒精性肝损伤大鼠的作用机制

目的:通过酒精灌胃8周建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,研究藏族药短穗兔耳草提取物对Toll样受体(TLR2/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)和NOD样受体蛋白3(NALP3)信号通路的影响,探讨其提取物抗慢性酒精性肝损伤的作用机制。方法:60只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、联苯双酯组(0.1 g·kg^-1)及短穗兔耳草低、中、高剂量组(0.5,1,2 g·kg^-1),每日上午各给药组按10 m L·kg^-1给予相应的药物,下午梯度乙醇灌胃法给予56度白酒灌胃,连续8周后,取血,测定各组大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),甘油三酯(TC),总胆固醇(TG)及肝脏谷胱甘肽(GSH)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中TLR2,MyD88,NF-κB和NALP3蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理学形态改变。结果:与正常组比较,模型组血清中AST,ALT,TC,TG,IL-1β水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,藏族药短穗兔耳草各剂量组能降低血清AST,ALT,TC,TG,IL-1β水平,其中高剂量组的效果尤为显著(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组肝匀浆中GSH水平下降;模型组肝组织中TLR2,MyD88,NF-κB和NALP3蛋白水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,藏族药短穗兔耳草各剂量组能降低肝脏中GSH水平以及TLR2,MyD88,NF-κB和NALP3的蛋白表达(P<0.05,P<0.01);肝脏病理切片表明,藏族药短穗兔耳草能改善大鼠肝组织病理变化。结论:藏族药短穗兔耳草对酒精诱导的慢性酒精性肝损伤大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与TLR/MyD88/NF-κB和NALP3信号通路有关。     

兔耳草药材薄层色谱鉴别与含量测定

兔耳草为玄参科植物短管兔耳草Lagotis brevitubaMax-im.或全缘兔耳草L.integra W.Smith.的干燥全草,是藏族习用药材之一。具有清热解毒,行血调经之功效。治全身发热,肾炎,肺病,高血压,动脉粥样硬化,月经不调,综合物毒物中毒及“心热”症[1]。本品含梓醇(catalpol)、桃叶珊瑚苷     

藏药短管兔耳草的化学成分研究

目的:对藏药短管兔耳草的化学成分进行研究。方法:用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱和半制备HPLC等方法分离纯化化合物,并用波谱学方法进行结构鉴定。结果:从藏药短管兔耳草石油醚提取物和醋酸乙酯提取物中分离得到8个化合物,经鉴定分别为β-谷甾醇(1),琥珀酸(2),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),尿嘧啶(4),芹菜素(5),柯伊利素(6),柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷(7)和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(8)。结论:化合物4~8为首次从该植物中分离得到,7和8为首次从该属植物中发现。