西妥昔单抗联合照射对结直肠癌CL187细胞的抑制作用及机制探讨

目的 研究西妥昔单抗(C225)联合外照射对结直肠癌CL187细胞生物学效应的影响,并探讨相关分子机制。方法 结直肠癌CL187细胞分单纯照射组和C225处理的联合照射组,受6 MV X 射线照射0、4和8 Gy后24和48 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测吸光度(A)值,比较两组细胞死亡率的差异。利用克隆形成实验比较两组细胞增殖能力的差异。采用流式细胞仪,检测细胞周期和细胞凋亡。蛋白免疫印迹法分析两组细胞DNA-PKcs、Ku70和Ku80蛋白表达量的变化。结果 联合照射组较单纯照射组死亡细胞比例增加(t=-6.14、-6.53,P<0.05),细胞克隆形成能力下降。C225增强了射线对细胞的杀伤作用,放射增敏比SER为1.38。联合照射组G₀/G₁期细胞阻滞增加(t=-4.64, P<0.05),细胞凋亡比例增加(t=-9.16, P<0.05),DNA修复相关蛋白DNA-PKcs、Ku70和Ku80蛋白表达量减少。结论 西妥昔单抗增强照射对结直肠癌CL187细胞的杀伤作用,可能是通过影响细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤修复基因实现的。     

西妥昔单抗对125Ⅰ粒子照射结直肠癌细胞DNA修复能力和信号传导通路的影响

目的 探讨西妥昔单抗(C225)对125Ⅰ粒子照射下结直肠癌CL187细胞DNA损伤修复和信号传导通路的影响.方法 实验分为空白对照组,100 nmol/L C225处理组,单独125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组和C225联合125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组.在吸收剂量达4 Gy后48 h,经细胞免疫荧光检测各组细胞中γH2AX聚集点数量以及γH2AX聚集点阳性细胞比例.提取细胞内总蛋白,Western blot检测DNA修复蛋白的变化.在吸收剂量达4 Gy后即刻提取总蛋白,Western blot分析在照射过程中C225对EGFR下游信号通路中蛋白分子的影响.结果 与单独125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组细胞相比,C225联合125Ⅰ持续低剂量率照射组细胞内残余的γH2AX聚集点数量和γH2AX聚集点阳性的细胞比例均高(t=8.0和6.8,P＜0.05),并且细胞中DNA修复蛋白Ku70和DNA-PKcs的含量偏低(t=6.6和5.7,P＜0.05).Western blot结果显示,在125Ⅰ粒子持续低剂量率照射过程中,C225能够降低细胞内EGFR的水平(t=4.9,P＜0.05),抑制Akt的活化(t=5.5,P＜0.05).结论 在125Ⅰ放射性粒子持续低剂量率照射下,C225可以降低细胞内Ku70和DNA-PKcs的含量,并抑制Akt活化,减弱CL187细胞的DNA损伤修复能力.     

尼妥珠单抗及西妥昔单抗增强照射对人食管癌细胞系的作用

目的 观察尼妥珠单抗（h-R3）、西妥昔单抗（C225）联合照射对人食管鳞癌细胞系TE-13的作用。方法 分为无药对照组、h-R3组、C225组、单纯照射组、h-R3联合照射组、C225联合照射组,采用MTS法观察处理组对食管癌细胞增殖的影响,并计算细胞增殖率;采用克隆形成实验检测h-R3、C225对食管癌细胞系放射敏感性的影响,多靶单击模型拟合细胞存活曲线;通过流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡变化。结果 与单纯照射组相比,单抗联合照射组的细胞增殖率明显降低（F=325.59,P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（F=120.59,P<0.05）, SF₂、D₀、D_q及N值均显著降低,G₀/G₁、G₂/M期细胞比例均增加,S期细胞比例减少。C225联合照射组的细胞凋亡率高于h-R3联合照射组（F=120.59,P<0.05）,C225联合照射组SER（1.83）高于h-R3联合照射组SER（1.46）。结论 h-R3与C225均能提高照射对食管鳞癌细胞系TE-13的抗肿瘤作用,C225的杀伤作用略优于h-R3。     

EGFR抑制剂C225对人前列腺癌细胞的放射增敏作用

目的 探讨表皮生长因子抑制剂C225对人前列腺癌细胞株(DU145) 放射敏感性的影响。方法 实验组用表皮生长因子抑制剂C225(100 nmol/L)处理后,⁶⁰Co γ射线(吸收剂量率1.953 Gy/min)对体外培养的DU145细胞进行0、2、4、6 和8 Gy 照射,用MTT法、集落形成法检测细胞增殖和细胞存活率;用单击多靶模型拟合剂量存活曲线;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 C225对照射后DU145细胞增殖有明显抑制作用。C225组的放射生物学参数值(D₀、D_q、N、SF₂)较对照组低。C225组和对照组的RBE 比值为1.39。C225组处于S期的细胞比例降低,出现明显的G₀/G₁期阻滞。C225组细胞的早期凋亡率在照射剂量达4 Gy后明显高于对照组(t=-14.55,P＜0.05)。结论 表皮生长因子抑制剂C225通过抑制细胞增殖、G₀/G₁ 期阻滞和诱导凋亡来增加人前列腺癌细胞放射敏感性。     

X线不同剂量照射诱发C6细胞凋亡的研究

为研究体外X线不同剂量照射C6细胞可否诱发其凋亡,应用大鼠C6胶质瘤细胞系,以15、20、30及40GyX线分别照射体外C6细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察其细胞凋亡发生的情况.结果显示,15、20及30Gy组在照射后2h便出现明显的DNA降解(“梯形结构”),其中15Gy组持续到8h,20、30Gy组持续到24h.但对照及40Gy组无明显“梯形结构”出现,后者DNA小片段条带明显,表明该组细胞坏死明显.提示X线不同剂量照射体外C6细胞可诱使其早期产生凋亡,但若剂量增大(如40Gy)则可致其坏死.     

Toll样受体4对肿瘤细胞放射敏感性的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)对肿瘤细胞放射敏感性的影响.方法 将体外培养的RAW264.7、Lewis、MFC、Hepal-6、B16和NIH3T3细胞各分为假照组和5 Gy照射组,采用流式细胞术检测照射24 h后TLR4表达变化,从中筛选出照射后高表达和低表达TLR4的细胞,将其各自分为TAK242阻滞组、LPS刺激组和空白对照组,采用CCK-8试剂盒检测其增殖活性,用克隆形成实验计算其细胞存活分数,用Annexin V凋亡试剂盒检测其凋亡率,用流式细胞术观察细胞周期进程的变化.结果 5 Gy照射24 h后Lewis细胞TLR4表达水平明显高于照射前(t=-8.68,P＜0.01),MFC细胞则相反,照射后TLR4表达水平明显低于照射前(t=25.80,P＜0.01),而RAW264.7、Hepa1-6、B16细胞的TLR4表达水平比照射前有升高趋势,但无明显差异.5 Gy照射后Lewis和MFC细胞的增殖活性均明显降低(t=57.62、-6.23,P＜0.01),而用TAK242阻滞TLR4后Leiws细胞增殖活性更加降低(t=5.96,P＜0.01),但MFC细胞增殖活性反而明显升高(t=4.16,P＜0.01).5 Gy照射后Lewis和MFC细胞的存活分数均明显降低(t=13.37、19.24,P＜0.01),用TAK242阻滞TLR4后Leiws和MFC细胞存活分数更加降低(t=4.90、4.42,P＜0.05).5 Gy照射后Lewis细胞的凋亡率明显高于假照组(t=-167.85,P＜0.01),阻断TLR4后明显高于单纯照射组(t=-4.73,P＜0.01).照射后MFC细胞的凋亡率升高(t=-26.45,P＜0.01),阻断和激动TLR4其凋亡率均显著低于单纯照射组(t=8.87、-3.05,P＜0.05).Lewis和MFC细胞受照后G0/G1期、S期细胞明显降低(t=8.68、14.80、20.31、4.48,P＜0.01),G2/M期细胞上升(t=-37.48、-13.06,P＜0.01).两种细胞的TAK242阻断组和LPS刺激组各周期进程均无明显变化.结论 Lewis细胞的TLR4高表达与其受照后的增殖活性和凋亡率变化有关,而与其周期进程无关,TLR4影响肿瘤细胞的放射敏感性.     

厄洛替尼和塞来昔布联合应用对人肺腺癌 A549细胞放射增敏的研究

目的 探讨联合应用厄洛替尼和塞来昔布阻断表皮生长因子受体和环氧化酶-2受体对人肺腺癌A549细胞株的放射增敏效应及机制.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测厄洛替尼和塞来昔布的IC20作为后续实验浓度.体外培养克隆形成实验检测厄洛替尼和塞来昔布联合或不联合X射线对人肺腺癌A549细胞的作用,计算其存活分数,绘制细胞存活曲线.流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blot检测Akt和pAkt的表达.结果 厄洛替尼和塞来昔布的IG20分别为(5.15 ±0.14)和(40.32±1.26) μmol/L.照射+联合用药组的Dq、D0及SF2均明显低于单纯照射组、照射+塞来昔布组及照射+厄洛替尼组(t=6.62,P＜0.05);照射+联合用药组、照射+厄洛替尼组和照射+塞来昔布组的SER为2.217、1.503和1.299.厄洛替尼和塞来昔布与射线联合作用后,使S期细胞比例减少,联合用药组作用更明显.药物作用前后及药物增敏照射后Akt在蛋白表达水平没有明显改变;塞来昔布和厄洛替尼均能抑制pAkt的表达,照射能够略提高pAkt蛋白的表达,与单纯照射组相比,塞来昔布或厄洛替尼联合照射组pAkt蛋白的表达减低,两药联用并联合照射组pAkt蛋白的表达最低(t=4.89,P＜0.05).结论 厄洛替尼和塞来昔布各自均有放射增敏作用,两药联合应用可以进一步提高放射增敏效应.其机制涉及到使细胞周期中对射线不敏感的S期细胞减少到最低,并进一步增强了射线诱导的凋亡.     

西妥昔单抗联合放疗对CNE-2裸鼠移植瘤Ku80和ATM表达的影响

目的 探讨西妥昔单抗(C225)联合放疗对CNE-2裸鼠移植瘤Ku80和ATM的影响。方法 建立CNE-2裸鼠移植瘤模型,将48只裸鼠按随机数字表法分为对照组、常规放疗组(CRT)、模拟调强组(sIMRT)、C225组、CRT+C225组、sIMRT+C225组,每组8只。各放疗组给予照射剂量20 Gy,含C225组按1 mg/只给予腹腔内给药。采用RT-PCR方法检测各组肿瘤组织中Ku80和ATM的转录水平,Western blot 检测Ku80和ATM蛋白的表达。结果 与对照组相比,CRT组、sIMRT组、CRT+C225组、sIMRT+C225组的Ku80和ATM的转录水平和蛋白表达均显著下调(P<0.05)。与CRT组相比,sIMRT组ATM下调减弱(P<0.05),但是放疗联合C225后,CRT+C225组与CRT组比较和sIMRT+C225组与sIMRT组比较,ATM下调进一步增强(P<0.05),sIMRT+C225组与CRT组的ATM转录水平和蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 单用C225可使ATM的转录水平和蛋白表达下调,大剂量的照射可使Ku80、ATM的转录水平和蛋白表达均下调;模拟IMRT放疗单次照射时间延长可能引起ATM下调减弱,联合C225后ATM下调增强。     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用

目的 探讨青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用。方法 应用⁶⁰Co γ射线照射细胞,吸收剂量率为0.635 Gy/min,照射剂量为0、1、2、4和6 Gy。采用MTT法检测青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用,确定青蒿琥酯的最适实验作用浓度。克隆形成法检测青蒿琥酯对HeLa细胞放射敏感性的影响;采用"多靶单击数学模型"拟合HeLa细胞的剂量-存活曲线,得出平均致死剂量、准阈剂量及放射增敏比,评价其增敏效果。用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,进一步检测青蒿琥酯对HeLa细胞的放射增敏性。结果 青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增加,单纯照射1、2、4和6 Gy细胞的克隆形成率分别为91.67%、82.02%、58.60%和25.01%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下克隆形成率分别降低为74.93%、60.53%、22.38%和5.05%;单纯照射组与药物+照射组的平均致死剂量(D₀)分别为2.95和2.07 Gy,准阈剂量(D_q)分别为2.01和1.24 Gy,放射增敏比(SER)为1.43。单纯2和6 Gy照射组细胞凋亡率分别是12.26%和40.08%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下细胞凋亡率分别上升至22.71%和59.92%。结论 青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用成药物浓度依赖性;青蒿琥酯对HeLa细胞具有一定的放射增敏作用。     

外源表达miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响

目的 研究miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响.方法 采用pre-miR-34a瞬时转染H1299细胞,接受不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性.流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,real-time PCR检测miR-34a靶基因bcl-2、bax、CDK4、CDK6及cyclinD1的表达水平.结果 不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组各剂量点细胞活力明显降低(t=-2.39、-3.12、-4.98、-4.03、-3.06,P＜0.05),并与阴性对照转染组的差值呈剂量依赖性的增加.6 Gyγ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组细胞凋亡率明显增加(t=7.06,P＜0.05),细胞G0/G1期阻滞(t =3.94,P＜0.05),S期细胞减少(t=6.23,P＜0.05),bcl-2、CDK4及CDK6明显下调(t=3.39、12.88、6.21,P＜0.05),cyclinD1有下降趋势,但差异无统计学意义,而bax明显上调(t=-4.35,P＜0.05),是阴性对照转染组的1.94倍,bcl-2/bax比值下降.结论 miR-34促进H1299细胞凋亡,诱导细胞G0/G1期阻滞,抑制细胞活性,进而提高H1299细胞的辐射敏感性.     

宫颈癌细胞株和正常间质细胞株受X线照射后的辐射效应

目的用宫颈癌、正常血管内皮和正常成纤维细胞株体外模拟宫颈癌实质和间质组织,研究其受到不同剂量放射线照射后的辐射效应。方法采用宫颈腺癌细胞株HeLa,宫颈鳞癌细胞株SiHa、C33A、Caski,人脐静脉内皮细胞株ECV304,及小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,分别用6MV的X线（300cGy/min）照射6和10Gy,24和48h后收集细胞,行PI染色,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化。结果细胞株受到照射后,C33A凋亡率最高,而SiHa凋亡率最低,其余细胞株（包括ECV304与NIH/3T3细胞）均介于两者之间;各宫颈癌细胞株及NIH/3T3照射10Gy后48h的凋亡率较6Gy稍高（P〉0.05）,而ECV304照射10Gy后48h的凋亡率（13.04%±1.08%）比照射6Gy（6.51%±0.61%）明显升高（P=0.001）;各细胞株受到不同剂量照射后,均表现出明显的G2/M期阻滞,且阻滞细胞百分比随照射剂量增加而增加;受到照射后一般在24-48hG2/M期阻滞细胞百分比最高。结论高剂量照射可以提高血管内皮细胞的凋亡率,并导致剂量依赖性的G2/M期阻滞,为预测宫颈癌的高剂量放疗提供理论依据。     

紫外线B辐射敏感的miR-365在皮肤鳞癌发生中的作用研究

目的 探讨紫外线(UVB)辐射敏感miR-365在皮肤鳞状细胞癌发生中的作用.方法 取对数生长期正常人皮肤角质细胞HaCaT分为对照组和照射组,照射组给予50 J/m²的UVB照射.照射后培养不同时间,分析miRNA的表达谱.实时荧光定量PCR分析HaCaT细胞和皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达.平板克隆形成实验和Transwell小室细胞运动实验分别检测细胞的克隆形成能力和体外运动能力.构建miR-365高表达的HaCaT细胞系HaCaT^{pre-miR-365-2}.裸鼠皮下注射HaCaT^{pre-miR-365-2}观察其成瘤能力.结果 UVB照射后,HaCaT差异表达的miRNAs共30个,其中miR-365最敏感,且照后6 h升高最明显,为对照的6.7倍;皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达均高于HaCaT细胞(P<0.05),其中,A431增加最多,为(15.67±1.12)倍,Tca8113最少,为(4.72±0.85)倍;抑制皮肤鳞癌细胞系miR-365的表达可以显著抑制其克隆形成能力(t=13.68,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=19.98,P<0.05),而提高HaCaT的miR-365的表达则可以显著提高其克隆形成能力(t=7.11,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=22.03,P<0.05),且能够在裸鼠皮下成功地成瘤.结论 miR-365是一种皮肤鳞状细胞癌的促癌基因.     

12C重离子束对人淋巴细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨¹²C重离子束对人淋巴细胞增殖以及周期、凋亡的影响.方法 ¹²C重离子束照射人淋巴细胞Peng-EBV,吸收剂量分别为0(对照组)、0.5、2.0 Gy.照射后用MTS法检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 与对照组相比,0.5 Gy照射可以增加细胞增殖活力(t=2.66~14.45, P<0.05),而2.0 Gy照射降低了细胞活力(t=7.65~64.45, P<0.05).受照射细胞的活力存在一个恢复和下降过程,受照后48 h内,细胞数量呈增加趋势,但72 h时细胞数量下降.照射后48 h,两组细胞G₂/M期呈明显上升趋势,高于对照组(t=2.01~99.80,P<0.05),且2.0 Gy组的周期阻滞较0.5 Gy组严重;照射后30 d,细胞周期阻滞恢复到正常水平.照射后12、24、48 h,两照射组与对照组相比,细胞凋亡率差异有统计学意义(t=-3.05~-1.05,P<0.05),在照后24 h最高,48 h明显下降,30 d恢复到对照水平.结论 ¹²C离子束辐射影响人淋巴细胞增殖,诱导人淋巴细胞发生明显的G₂/M期阻滞,并且明显地促进细胞凋亡.     

沉默EZH2诱导舌癌Tca-8113细胞凋亡及其对放射敏感性的影响

目的 探讨zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）对舌鳞癌细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法 以舌鳞癌Tca-8113细胞为研究对象,细胞转染EZH2小干扰RNA（EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2）及小干扰RNA阴性对照（siRNA-NC）,RT-PCR和Western blot检测EZH2表达水平,筛选干扰效果较好的EZH2 siRNA2继续研究。将转染EZH2 siRNA2后的Tca-8113记为EZH2 siRNA2组,同时以不做处理的细胞为对照组,用8 Gy剂量照射转染siRNA对照组和EZH2 siRNA2细胞,并依次命名为照射组和联合组,四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导与转录因子3（STAT3）、磷酸化的STAT3（p-STAT3）、活性Caspase-3（Cleaved Caspase-3）表达。siRNA-NC组和EZH2 siRNA2组细胞用0、2、4、6、8 Gy剂量照射处理后,细胞克隆实验检测放射敏感性。结果 EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2均能够干扰舌鳞癌细胞中EZH2的表达,且EZH2 siRNA2干扰效果最好（t_mRNA=8.660,P_mRNA<0.01;t_蛋白=2.883,P_蛋白<0.05）。下调EZH2 siRNA2组细胞凋亡率为（29.90±1.64）%,联合组凋亡率为（38.17±1.59）%,二者比较,差异有统计学意义（t=4.742,P<0.05）,同时下调EZH2还可以降低p-STAT3水平,促进Cleaved Caspase-3蛋白表达。干扰EZH2表达后Tca-8113细胞辐射增敏比为1.668。结论 干扰EZH2表达能够协同放疗促进舌鳞癌细胞凋亡,抑制舌鳞癌细胞增殖,增加舌鳞癌细胞放射敏感性。     

硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤保护作用的初步研究

目的 探讨硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤的保护作用。方法 取新生大鼠神经干细胞进行培养,用免疫荧光法进行神经干细胞的鉴定后,用含有不同浓度硫酸镁的培养基培养神经干细胞,选择出硫酸镁的合适浓度为1.25 mg/ml。将神经干细胞分为空白对照组、单纯照射组及照射+硫酸镁组,照射+硫酸镁组神经干细胞加入1.25 mg/ml的硫酸镁培养24 h后,分别用2和4 Gy ⁶⁰Co γ射线对单纯照射组及照射+硫酸镁组进行照射,分别于照射后24、48和72 h用CCK-8对各组进行神经干细胞增殖情况的检测,同时用流式细胞仪对各组神经干细胞凋亡率进行检测。结果 与空白对照组比较,单纯照射组各时间点反映神经干细胞增殖情况的吸光度值明显降低(t=5.33～8.44,P<0.05),神经干细胞的凋亡率明显升高(t=30.60～71.22,P<0.05)。与单纯照射组比较,照射+硫酸镁组除24 h时间点外余各时间反映神经干细胞增殖的吸光度值有所上升(t=2.45～4.71,P<0.05),各时间点神经干细胞的凋亡率明显降低(t=6.73～41.12,P<0.05)。结论 硫酸镁具有减轻电离辐射后神经干细胞增殖损伤,降低电离辐射所致的细胞凋亡率。     

解耦联蛋白2对Siha细胞辐射敏感性的影响

目的探究沉默解耦联蛋白2(UCP2)联合辐照对Siha细胞辐射敏感性的影响,为宫颈癌放疗增敏提供新的靶点。方法将UCP2 siRNA转染入Siha细胞后进行X射线照射,通过集落形成、CCK-8、流式细胞实验来验证UCP2对Siha细胞辐射敏感性作用,检测线粒体膜电位和活性氧(ROS)的产生来进一步探讨相关机制。结果RT-PCR和Western blot表明Siha细胞经辐照后UCP2表达增加。成功构建UCP2沉默模型,沉默组(siUCP2)D0、Dq、N、SF2分别为1.54、1.31、2.31 Gy和0.52,空白对照组(mock)分别为2.50、3.64、4.30 Gy和0.83,阴性对照组(siNC)分别为3.34、2.16、1.91 Gy和0.69,沉默组较空白对照组和阴性对照组放射增敏比分别为0.62和0.46,并且沉默组细胞增殖活性较对照组明显降低(t=13.2,P<0.05);辐照后沉默组细胞凋亡水平显著高于对照组(t=3.14,P<0.05);照射后12 h,沉默组的ROS产量明显高于对照组(t=19.10,P<0.05);照射后24 h,沉默组的Siha细胞线粒体膜电位较对照组显著降低(t=8.87,P<0.05)。结论UCP2沉默后的Siha细胞辐射敏感性增强,并且可能会成为宫颈癌细胞辐射增敏的新靶点。     

西妥昔单抗增加结直肠癌细胞对125I粒子持续低剂量率照射的敏感性

目的 探讨在¹²⁵I 放射性粒子持续低剂量率照射下,西妥昔单抗对结直肠癌细胞CL187放射敏感性的影响及可能的机制。方法 实验将直肠癌细胞CL187分为空白对照组、单纯100 nmol/L C225处理组、单纯¹²⁵I -CLDR照射组和C225联合¹²⁵I -CLDR组。克隆形成实验检测C225是否影响人结直肠癌CL187细胞对¹²⁵I 放射性粒子持续低剂量率照射的放射敏感性。流式细胞仪检测C225对¹²⁵I -CLDR照射诱导的细胞凋亡的影响。细胞周期检测C225对细胞周期的调节。瑞氏姬姆萨染色检测有丝分裂指数。Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2的水平。结果 100 nmol/L C225的放射增敏比为1.4,并能够增加¹²⁵I -CLDR照射诱导的细胞凋亡（t=6.6,P<0.05）,增加Bax/Bcl-2比值。与空白对照组相比,单独C225处理可使CL187细胞G₁期阻滞（t=3.0,P<0.05）,单纯¹²⁵I -CLDR照射组细胞也存在G₁期阻滞（t=8.5,P<0.01）,两者联合时的G₁期阻滞效应与¹²⁵I -CLDR单独处理时相比,差异无统计学意义（t=0.8,P>0.05）。有丝分裂指数检测结果显示,各实验组与对照组相比差异无统计学意义。结论 C225可增加结直肠癌细胞CL187对¹²⁵I -CLDR照射的放射敏感性,机制可能是C225增加细胞内Bax/Bcl-2比值,增加¹²⁵I-CLDR诱导的细胞凋亡,与细胞周期阻滞和细胞周期检查点功能无关。     

Musashi1基因表达对人结肠癌HCT116细胞的放射增敏作用及其机制

目的 研究沉默Musashi1对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性的影响,为放射治疗提供新的增敏靶点。方法 用慢病毒载体建立Musashil（Msi1）低表达的稳转细胞株及阴性对照细胞株,将细胞分为沉默组、空白对照组和阴性对照组,通过克隆实验、流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期,证实其放射敏感性。结果 成功构建了沉默Musashi1的HCT116细胞。沉默组的D₀、D_q、N、SF₂分别为1.55、0.88、1.76 Gy和0.43,空白对照组分别为2.17、1.51、2.01 Gy和0.64,阴性对照组分别为1.99、1.45、2.07 Gy和0.62。沉默组相对于空白对照组的放射增敏比为1.40,相对于阴性对照组的放射增敏比为1.28。8 Gy照射后24、48、72 h,沉默组凋亡比例始终高于阴性对照组和空白对照组（F=65.16,P<0.05）,而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。12 Gy照射后48 h,沉默组细胞周期中G₂/M期比例较空白对照组和阴性对照组显著下降（F=65.398,P<0.05）。结论 降低Musashi1的表达对人结肠癌HCT116细胞有放射增敏作用,可能通过促进其凋亡,解除G₂/M期阻滞而发挥放射增敏作用,有望成为新的增敏靶点。