丹参总酚酸在大鼠血浆中的药动学研究

目的:考察丹参总酚酸中主要成分紫草酸、丹酚酸B在大鼠体内的药代动力学过程.方法:采用血药浓度法,HPLC法测定大鼠ig(1.0 g·kg-1)丹参总酚酸后不同时间点的血药浓度,DAS3.0软件计算药动学参数.结果:紫草酸在1.0～20.0 mg·L-1线性关系良好(R2=0.993 1);回收率在97.15％ ～ 100.21％,日内、日间RSD＜ 10.23％;丹酚酸B在2.0～ 20.0mg·L-1线性关系良好(R2 =0.992 5);回收率在94.80％ ～ 99.96％,日内、日间RSD＜ 10.06％.紫草酸的t1/2为19.4 min,Cmax为14.9 mg·L-1,AUC为418.0.μg·L-1·min-1.丹酚酸B的t1/2为27.2 min,Cmax为17.1 mg· L-1,AUC为831.3 μg·L-1·min-1.结论:HPLC选择性好,灵敏度高,适用于血浆样品成分含量的测定,为进一步的复方药代动力学的研究奠定了基础.     

丹参红花混煎液中丹参素、羟基红花黄色素A、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B的HPLC测定方法

目的:建立同时测定丹参红花混煎液中丹参素、羟基红花黄色素A、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B含量的HPLC法.方法:采用梯度洗脱高效液相色谱法,色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×100 mm,1.8μm);以甲酸-500 mmol·L-1甲酸铵-水(0.5:10:90)为流动相A,0.5％甲酸-乙腈为流动相B;检测波长280 nm(丹参素、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B)和380 nm(羟基红花黄色素A);流速0.5 mL·min-1;柱温30℃.结果:建立了同时测定丹参红花混煎液中5种成分含量的方法.丹参素、羟基红花黄色素A、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B质量浓度分别在3.51 ～ 84.2,3.48～83.5,1.90～ 45.6,2.47 ～59.3,37.9～909.6 mg·L-1与峰面积积分值线性关系良好(R2＞ 0.999 3),加样回收率分别为99.1％,102％,102％,98.5％,101％.建立的HPLC具有良好的精密度、重复性和稳定性.结论:该方法操作简便,精密度好,结果准确可靠.     

芪苈强心胶囊中酚酸类成分在大鼠体内药动学研究

[目的]建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法,考察大鼠灌胃给药后,芪苈强心胶囊中酚酸类成分(丹酚酸A、丹酚酸B、丹参素、紫草酸、迷迭香酸、原儿茶酸)的药动学特征。[方法]采用Agilent ZOBRAX XDBC18色谱柱(4.6 mm×50 mm,3.5μm),柱温40℃,流动相[0.1%甲酸水溶液(A)]-[含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)]梯度洗脱,流速0.45 mL/min,进样量10μL;采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)负离子模式下测定血药浓度。[结果]方法学结果符合要求。大鼠灌胃芪苈强心胶囊后,血浆中6种酚酸类活性成分的达峰时间(T_(max))在10~40 min内,半衰期(t_(1/2))在3.34~8.38 h间;血药达峰浓度(C_(max))和血药浓度-时间曲线下面积(AUC_(0-∞))从大到小排序依次为丹酚酸B丹参素紫草酸迷迭香酸原儿茶酸丹酚酸A。[结论]该检测方法专属性强,重复性好,可用于芪苈强心胶囊中酚酸类成分的药动学研究。     

滇丹参中酚酸类化学成分研究

目的：研究滇丹参Salvia yunnansis根中的化学成分。方法：采用水提取,经Diaion HP20大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶、ODS等柱色谱,对滇丹参中的酚酸类成分进行分离纯化,运用现代波谱技术鉴定化合物的结构。结果：从滇丹参中分离并鉴定了12个酚酸类化合物,分别为原儿茶醛(1),咖啡酸(2),阿魏酸(3),迷迭香酸(4),丹酚酸A(5),丹酚酸C(6),紫草酸(7),紫草酸B(8),9′-紫草酸B甲酯(9),9-紫草酸B甲酯(10),9′,9-紫草酸B二甲酯(11),9′-紫草酸B乙酯(12)。结论：化合物1,2,3,5,6,9,10,11,12为首次从该植物中分离。     

HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量

目的:建立用HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B4个水溶性成分的方法,并对6批丹参多酚酸进行测定.方法:采用Venusil XBP C18柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相0.02％磷酸水-0.02％磷酸80％乙腈水梯度洗脱;流速1 mL· min-1;检测波长280 nm;柱温30℃.结果:丹酚酸D线性回归方程为A=13 979C-1 739.2,R2=0.999 6,线性范围2.11 ～21.10 mg·L-1,平均回收率100.12％ (RSD 1.52％),迷迭香酸线性回归方程为A=42 007C-448.58R2=0.999 7,线性范围3.94 ～39.40 mg·L-1,平均回收率100.60％(RSD 1.83％);紫草酸线性回归方程A=23 061C-6 319.2,R2=0.999 6,线性范围4.14～41.40 mg·L-1,平均回收率102.47％(RSD 1.53％);丹酚酸B线性回归方程A=22 186C-21 435,R2=0.999 8,线性范围为53.90 ～ 539.00 mg·L-1,平均回收率104.53％(RSD 2.00％).结论:方法操作简单,且重复性好,可用于丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量测定.     

复方丹酚滴丸中冰片对丹酚酸大鼠在体肠吸收特性的影响

目的:研究复方丹酚滴丸中不同质量浓度冰片配伍丹酚酸后对丹酚酸B,紫草酸,迷迭香酸3个成分在小肠的吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(P_(app))的影响。方法:采用大鼠在体单向肠灌注试验考察吸收过程,以HPLC测定丹酚酸B,紫草酸和迷迭香酸的含量,流动相1%冰乙酸水溶液(A)~(~(-1))%冰乙酸甲醇溶液(B)梯度洗脱(0~10 min,10%~20%B;10~40min,20%~47%B;40~50 min,47%~70%B),检测波长286 nm,流速0.8 m L·min~(~(-1))。结果:高、中、低质量浓度冰片配伍丹酚酸后,Ka和Papp大多有所增加,其中以100 mg·L~(~(-1))冰片组的促吸收效果最优,该组丹酚酸B,紫草酸,迷迭香酸的全肠段Ka分别为不加冰片的2.31,2.33,3.38倍。结论:不同浓度冰片配伍丹酚酸后,对丹酚酸B,紫草酸和迷迭香酸在大鼠各肠段的吸收具有一定促进作用,浓度对促吸收效果有一定影响;增加冰片的浓度,促吸收作用有所提高,但当冰片到一定浓度后,促吸收作用有所减弱。     

丹参多酚酸对照提取物的质量控制

目的:建立丹参多酚酸对照提取物多指标含量测定及指纹图谱的质量控制方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%甲酸-水溶液为流动相A,0.1%甲酸-乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱(0~30 min,20%~21.5%B;30~35 min,21.5%~25%B;35~45 min,25%~40%B;45~50 min,40%~95%B),柱温30℃,流速1 mL·min^-1,检测波长288 nm;采用浓度法测定咖啡酸,丹酚酸E,迷迭香酸,紫草酸,丹酚酸B,丹酚酸Y的相对校正因子,并测定丹参多酚酸对照提取物各指标成分含量,与单体对照品外标法测定结果进行比较;同时建立指纹图谱方法,并对10批次提取物进行相似度评价。结果:咖啡酸,丹酚酸E,迷迭香酸,紫草酸,丹酚酸B,丹酚酸Y在各自的检测质量浓度范围内线性关系良好(r>0.9999),进样精密度RSD在0.1%~1.2%,重复性RSD在1.2%~1.6%,6种成分的加样回收率在82.03%~98.68%,样品溶液在36 h内各成分稳定性良好。经测定各指标成分的相对校正因子分别为咖啡酸(2.92),丹酚酸E(1.10),迷迭香酸(1.61),紫草酸(1.07),丹酚酸B(1.00),丹酚酸Y(0.83)。考察不同方法、浓度、仪器、色谱柱、波长等因素的影响,发现测得的相对校正因子适用性较好。校正因子法测定结果和单体对照品外标法测定结果差异较小。建立了丹参多酚酸对照提取物的HPLC特征指纹图谱,确定了5个共有特征峰,并根据对照品对色谱峰进行确认,10批次提取物指纹图谱相似度较高,质量差异较小。结论:该研究建立的多指标含量测定方法和指纹图谱方法简便、快速、准确性高、重复性好,可用于丹参多酚酸对照提取物的质量控制。     

高温高压下丹酚酸B,紫草酸水溶液 化学变化的研究

目的:考察中药丹参中主要活性成分丹酚酸B,紫草酸在高温高压处理过程中的化学成分变化,探索其变化机理.方法:采用高温高压(120℃,0.2 MPa)条件对丹参提取物、丹酚酸B及紫草酸进行处理,研究成分的变化情况及稳定性.结果:丹酚酸B与紫草酸经高温高压处理后的主要产物为丹酚酸A;紫草酸是丹酚酸B反应的中间产物,在相同条件下比丹酚酸B更容易转化为丹酚酸A;丹酚酸A在高温高压条件下不稳定,能够继续分解为其他小分子化合物.结论:该实验为丹酚酸A的获取提供了新的制备方法.     

丹参沼泽红假单胞菌转化液中5个酚酸类成分含量的同时测定

目的:建立HPLC法同时测定丹参沼泽红假单胞菌转化液中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A 5种成分的含量,并和丹参对照液进行比较。方法:采用HPLC法,色谱柱为岛津Inert Sustain C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱;检测波长为287 nm,流速为0.8 m L·min-1,柱温为26℃,进样量为25μL。结果:丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A分别在20~1000μg·m L-1,5~200μg·m L-1,5~200μg·m L-1,5~1000μg·m L-1,10~200μg·m L-1范围内呈良好的线性关系(r0.9997)。加样回收率分别为101.31%,101.13%,98.81%,103.47%,99.06%。结论:该方法准确可靠,具有良好的精密度、重复性、稳定性和回收率,可以用于丹参沼泽红假单胞菌转化液中5个酚酸类成分含量的同时测定,为丹参沼泽红假单胞菌转化液的进一步研究奠定基础。     

注射用丹参多酚酸大鼠体内药物代谢动力学研究

目的研究不同给药剂量注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、丹酚酸B在大鼠体内的药代动力学特征。方法注射用丹参多酚酸以低(10 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(60 mg/kg)剂量以及累积剂量(25 mg/kg,连续给药7天)对大鼠进行静脉注射给药,以氯霉素作为内标物,采用UPLC-DAD-MS/MS分析手段检测血浆中迷迭香酸、丹酚酸B的浓度,绘制药物浓度-时间曲线并计算药代动力学参数。结果不同剂量注射用丹参多酚酸给药后,迷迭香酸和丹酚酸B的药代动力学行为均符合开放性二室模型一级动力学过程。结论该方法准确度高,专属性强,分析速度快,适用于注射用丹参总酚酸中迷迭香酸、丹酚酸B在大鼠血浆中的药代动力学分析。研究结果可为注射用丹参多酚酸的体内过程研究及其临床合理使用提供参考。     

LC-MS/MS法同时测定犬血浆中四氢巴马汀、脱氢紫堇碱、小檗碱和巴马汀及其在元胡提取物的药代动力学研究应用

目的:建立同时检测Beagle犬血浆中四氢巴马汀、脱氢紫堇碱、小檗碱和巴马汀的分析方法,并应用有机溶剂沉淀法提取含药血浆中的成分。方法:采用C18反相柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。结果:定量分析的离子对(m/z)为:366.2/350.2(四氢巴马汀)、356.2/191.2(脱氢紫堇碱)、336.2/320.2(小檗碱)和352.2/336.2(巴马汀)。测定血浆中四氢巴马汀、脱氢紫堇碱和小檗碱的线性范围均为0.0488～50μg.L-1,巴马汀为0.0488～100μg.L-1,这4种成分的定量下限均为0.0488μg.L-1,该方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求。结论:该法选择性强、灵敏度高、操作简便,可用于血浆中这4种生物碱的药代动力学研究。     

丹参多酚酸中己内酰胺和低聚物的残留测定

目的:建立丹参多酚酸中己内酰胺和低聚体残留的检测方法.方法:确定酸水解聚酰胺树脂最佳的水解条件,利用该条件水解丹参多酚酸,用SPE固相萃取小柱富集净化.通过高效液相色谱仪梯度洗脱,色谱柱为AtlantisRRT3(4.6mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水,柱温为30℃,流速为0.5mL· min-1,检测波长为209 nm的条件下检测己内酰胺和低聚物被水解后的氨基己酸.结果:本法在7.012 6～0.004 5 g·L-1线性关系良好,r=0.999 5,氨基己酸的回收率为96.25％,其RSD为1.17％,聚酰胺树脂的回收率为101.27％,其RSD为4.33％.结论:该方法简便、准确性好,可以作为丹参多酚酸中己内酰胺和低聚体残留的测定.     

LC-MS/MS法同时测定犬血浆中7 种人参皂苷类成分及其在人参提取物药代动力学研究中的应用

目的:建立同时检测Beagle犬血浆中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd、Rc、Rb2/3和Rf的分析方法,并应用混合有机溶剂萃取法提取含药血浆中的成分。方法:采用C18反相柱,流动相为甲醇乙腈等比混合液-0.01%甲酸水溶液梯度洗脱,质谱采用多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。结果:定量分析的离子对(m/z)为:1131.8/789.5(G-Rb1)、1101.7/789.7(G-Rb2/3)、1101.7/789.7(G-Rc)、823.6/789.5(G-Rd)、969.7/789.7(G-Re)、823.6/643.6(G-Rg1)和823.6/365.3(G-Rf)。7种皂苷类成分定量分析可以在14.5 min内完成,且没有离子抑制现象,各成分的最低定量限分别为0.03125μg.L-(1G-Re和G-Rg1)、0.0625μg.L-(1G-Rf和G-Rd)和0.125μg.L-(1G-Rb1、G-Rc和G-Rb2/3),该方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求。结论:该法选择性强、灵敏度高、操作简便,可用于血浆中7种人参皂苷了成分的药代动力学研究。     

HPLC测定蚁参蠲痹胶囊中丹酚酸B的含量

目的:建立蚁参蠲痹胶囊中丹酚酸B的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定蚁参蠲痹胶囊中丹酚酸B的含量.色谱法分析条件为Kromasil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液(28∶8∶64),流速1.0 mL·min-,检测波长286 nm.结果:丹酚酸B在0.150 4 ～ 15.04 μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率98.90％,RSD 1.22％.结论:该方法操作简便,结果可靠,为蚁参蠲痹胶囊的质量研究提供有效的方法.     

丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学研究

目的：研究丹参水提液中丹酚酸B的湿热降解动力学。方法：以HPLC测定不同温度不同加热时间丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学相关参数。结果：丹参水提液中丹酚酸B湿热降解符合一级动力学。结论：缩短丹参水提、浓缩、干燥时间，尽快使丹参水提液固体化可减少丹酚酸B损失。     

Protective Effect of Salvianolic Acid A on Brain Endothelial Cells after Treatment with Deprivation and Reperfusion of Oxygen-glucose

Objective Salvianolic acid A(SAA) has a significant protective effect on ischemia/reperfusion injury of brain. However, it is not clear for SAA to exert its cerebral protection by targeting at the microvascular endothelial cells of blood brain barrier(BBB). Our previous study demonstrated that SAA could hardly pass through the BBB. This present study was therefore designed to investigate the protective effect of SAA on brain microvascular endothelial cells(BMECs) induced by deprivation and reperfusion with oxygen-glucose. Methods Rat BMECs were treated with oxygen glucose deprivation(OGD), followed by reperfusion(OGD/R). Cell viability was assessed by MTT and the content of reactive oxygen species(ROS) in cells after OGD/R in the absence or presence of SAA. GC-MS based metabolomic platform was applied to evaluate the regulation of SAA on the cellular metabolic perturbation induced by OGD/R. Results OGD/R significantly increased the production of intracellular reactive oxygen species(ROS), and decreased the activity of cells. SAA significantly reduced ROS and improve the cell viability. Metabolomic study revealed distinct perturbation of metabolic pathways of energy metabolism in the BMEC induced by OGD/R, while SAA significantly regulated the perturbed metabolism involved in energy metabolism pathways, especially for intermediates in TCA cycle. Conclusion SAA shows protective effects on BMECs involved in central nervous system.     

丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学研究△

目的：研究丹参水提液中丹酚酸B的湿热降解动力学。方法：以HPLC测定不同温度不同加热时间丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学相关参数。结果：丹参水提液中丹酚酸B湿热降解符合一级动力学。结论：缩短丹参水提、浓缩、干燥时间，尽快使丹参水提液固体化可减少丹酚酸B损失。     

丹参中丹酚酸成分的ESI-MS(n)行为及LC-MS(n)特征图谱研究

目的：研究丹参中丹酚酸成分的ESI-MS规律,建立其LC-MS（n）特征图谱。方法：以丹酚酸B为代表,初步探讨丹酚酸成分的ESI-MS（n）规律。应用LC-MS（n）,ESI（-）模式,以0.5%甲酸水溶液-乙腈为流动相,检测波长287nm,梯度洗脱绘制丹参中丹酚酸成分的特征图谱。结果：得出丹酚酸成分的ESI-MS（n）可能的裂解途径,得到其LC-MS（n）特征图谱,对特征图谱中7种主要化合物进行了精确归属。结论：丹酚酸类成分具有相似的ESI-MS（n）行为,根据质谱提供的各流份的分子量信息及多级质谱的裂解信息,可用于鉴别丹酚酸类成分。所得到的丹参丹酚酸成分的MS（n）TIC图,可用于丹参药材中丹酚酸类成分的指纹鉴别。     

应用量子点纳米探针研究丹酚酸B与肿瘤细胞间的直接作用

 目的应用量子点纳米荧光探针示踪中药有效成分与细胞之间的直接作用,为该技术成为一种研究平台提供实验依据。方法丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)经1-乙基-3(3-二甲基胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3(3-dimethylamino propyl)-carbodiimide,EDC]活化,以巯基乙胺(mercaptoethylamine,ME)为连接剂,与水溶性量子点(quantum dots,QDs)进行共价连接,将获得的QDs-SAB与肺腺癌细胞(SPCA-1)和肝癌细胞(7721)进行培育,通过QDs荧光直接观察SAB与细胞的结合情况,进而根据细胞形态观察、MTT和DNA电泳结果考察SAB是否对这些细胞有作用。结果QDs可清晰地示踪SAB与SPCA-1和7721细胞之间结合情况,通过常规方法首次证实了SAB对这两种细胞有增殖抑制作用。结论应用量子点纳米荧光探针直观发现中药有效成分与细胞之间的作用是可行的。     

丹酚酸B人工抗原的合成与免疫原性研究

目的制备丹酚酸B（SAB）的人工抗原（SAB-BSA）和包被原（SAB—PLL）并进行鉴定。方法采用碳二亚胺（EDC）法将SAB分别与牛血清白蛋白（BSA）和多聚赖氨酸（PLL）载体偶联合成SAB—BSA和SAB-PLL;采用紫外分光光度（UV）法和薄层色谱（TLC）法对偶联效果进行鉴定,并通过SAB与BSA的吸光值计算出二者的偶联比;利用获得的SAB—BSA免疫小鼠,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠抗血清内多克隆抗体效价并以间接竞争酶联免疫吸附法（ic—ELISA）检测小鼠抗血清内多克隆抗体的灵敏度。结果所合成的SAB—BSA为BSA和SAB的结合物,且SAB-BSA中无游离SAB-SAB与BSA偶联成功,SAB-BSA偶联结合比为18：1;SAB-BSA刺激小鼠产生的针对SAB的多克隆抗体,效价为1：2×10^3,该多克隆抗体IC50为17．7μg／mL。结论SAB—BSA和SAB—PLL合成成功,可用于SAB单克隆抗体的制备以及SAB快速检测试剂盒的研制。