大豆黄酮对人肝癌SMMC7721细胞己糖激酶活性和癌干细胞CD133蛋白水平的影响

目的探讨大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞糖代谢和癌干细胞CD133基因表达的影响。方法培养人肝癌SMMC7721细胞并用大豆黄酮处理。MTT法测定细胞的成活率,用试剂盒法测定人肝癌SMMC7721细胞中的己糖激酶活性,并用WesternBlot方法测定癌干细胞CD133蛋白的水平。结果大豆黄酮对人肝癌SMMC7721细胞增殖具有抑制作用,同时,可降低人肝癌SMMC7721细胞中己糖激酶活性和癌干细胞CD133蛋白的水平。结论大豆黄酮能抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖,降低人肝癌SMMC7721细胞中己糖激酶活性和癌干细胞CD133蛋白的水平。     

染料木黄酮通过抑制EGFR/ERK通路抗肝癌SMMC7721细胞增殖

目的探讨染料木黄酮对肝癌细胞SMMC7721增殖的抑制作用及其作用机制。方法以染料木黄酮干预肝癌细胞SMMC7721。MTT法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测染料木黄酮对ERK及EGFR活化的影响;免疫共沉淀法检测染料木黄酮对SMMC7721细胞ERK及EGFR间相互作用的影响。结果染料木黄酮能显著抑制肝癌细胞增殖,其抗增殖活性具有浓度依赖性;染料木黄酮还可抑制ERK与EGFR的活化,并抑制ERK及EGFR间的相互作用。结论染料木黄酮可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与其抑制EGFR/ERK通路活化有关。     

干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法:常规培养的人肝癌SMMC7721细胞,加入干扰素-α孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化,通过Annexin V-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果:干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡,导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论:干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁移并诱导细胞凋亡。     

灵芝对肝癌干细胞糖代谢和标志物蛋白的影响

目的:探讨灵芝对人肝癌干细胞糖代谢及标志物CD133蛋白的影响。方法:培养人肝癌SMMC7721细胞并用灵芝L08处理,用MTT法测定细胞的成活率,用试剂盒法测定己糖激酶活性,用Western Blot法测定CD133蛋白的水平。结果:灵芝L08处理人肝癌SMMC7721细胞后,细胞的成活率及己糖激酶活性都有所降低。同时,肝癌干细胞的CD133蛋白水平也降低。结论:灵芝L08能抑制人肝癌细胞的增殖、细胞中己糖激酶的活性和CD133蛋白水平。     

低浓度亚砷酸钠抑制Oct4、Sox2基因表达诱导肝癌干细胞分化

目的观察Hep G2、Hep3B、Hu H7和SMCC-7721细胞对亚砷酸钠的反应,CD133及CD13分子的表达和肿瘤球形成的差异,分析低浓度亚砷酸钠处理前后Hu H7和原代HCC细胞Oct4、Sox2因子的表达变化,探讨低浓度亚砷酸钠对HCC细胞生长的抑制机制。方法 CCK-8法检测0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/m L不同浓度亚砷酸钠处理48、72、96 h对Hep G2、Hep3B、Hu H7和SMCC-7721细胞生长的抑制作用;分析Hep G2、Hep3B、Hu H7、SMCC-7721和原代HCC细胞CD13、CD133表达及肿瘤球形成能力,确定是否含肝癌干细胞(LCSCs);观察0.5μg/m L亚砷酸钠处理Hu H7和原代HCC细胞前后Oct4和Sox2基因和蛋白表达的变化,分析低浓度亚砷酸钠对LCSCs有何作用。结果亚砷酸钠处理HCC细胞48、72、96 h,亚砷酸钠明显抑制Hep G2、Hep3B、Hu H7和SMCC-7721细胞生长,对HCC细胞增殖抑制作用与浓度和作用时间有关。亚砷酸钠处理HCC细胞96 h,0.2、0.4μg/m L亚砷酸钠已经明显抑制SMCC-7721细胞生长(P<0.05,P<0.01)。0.4μg/m L亚砷酸钠明显抑制Hep G2(P<0.01)和Hep3B(P<0.01)细胞增殖。0.1、0.2、0.4、0.6μg/m L亚砷酸钠刺激Hu H7细胞增殖,但差异无统计学意义(P>0.05),0.8μg/m L亚砷酸钠非常明显抑制Hu H7细胞增殖(P<0.01)。亚砷酸钠对Hu H7细胞存在低浓度刺激Hu H7细胞增殖和较高浓度抑制Hu H7细胞增殖的双向作用,随着作用时间延长,相同浓度下抑制作用增强。低浓度亚砷酸钠对SMCC-7721、Hep G2和Hep3B细胞几乎无刺激增殖作用。Hep G2、Hep3B和SMCC-7721既不表达CD133,也不形成肿瘤球。Hu H7和原代HCC细胞同时表达CD133、CD13标志,也具有形成肿瘤球能力,Hu H7和原代HCC细胞含有CD133+CD13+LCSCs。Hu H7和原代HCC细胞表达Oct4和Sox2基因和蛋白,0.5μg/m L亚砷酸钠可以下调Hu H7和原代HCC细胞Oct4和Sox2基因和蛋白表达。结论低浓度亚砷酸钠下调或抑制含CD133+CD13+LCSCs的Hu H7和原代HCC细胞Oct4和Sox2基因和蛋白表达,推测低浓度亚砷酸钠可能诱导LCSCs分化。     

羟考酮对 HepG2 和 SMMC-7721 人肝癌细胞生长影响的 体外研究

目的 探讨羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖抑制的可能机制。方法 体外培养 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞,用 CCK–8 法检测不同浓度羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖的影响 并计算药物 IC50。细胞划痕实验检测不同浓度羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞迁移的影响。Transwell 实验检测不同浓度羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞侵袭的影响。结果 CCK–8 实验提示羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖有抑制作用,其中羟考酮抑制 HepG2 人肝癌细胞的 IC50 为 1.236mg/ml, 抑制 SMMC–7721 人肝癌细胞的 IC50 为 1.461mg/ml,对两种肝癌细胞系的增殖抑制随着剂量增大而增强。细胞 划痕实验和 Transwell 实验显示随着浓度的升高,羟考酮对 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞的迁移和侵袭有显 著抑制作用,形态观察和细胞计数显示羟考酮可减少肝癌细胞的密度和数量,显著抑制肝癌细胞的集落形成并促 进肝癌细胞凋亡。结论 羟考酮具有抑制 HepG2 和 SMMC–7721 人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。     

苯乙酸对肝癌细胞的抑制作用及其机制

目的：阐明苯乙酸(PA)对肝癌细胞系SSMC-7721细胞增殖的抑制作用及部分作用机制,探讨PA用于肝癌治疗的可行性。方法：以0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol·L^-1浓度的PA作用于对数生长期的肝癌细胞系SSMC-7721细胞,检测上述各浓度时PA在24、48和72 h对SSMC-7721细胞的抑制率。应用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol·L^-1的PA作用于SSMC-7721细胞,分别于24、48、72 h 对细胞增殖抑制率进行检测;流式细胞术检测2.00 mmol·L^-1PA作用36 h后的SSMC-7721细胞周期各时相的变化;使用透射电镜观察经2.00 mmol·L-1PA作用36 h后的SSMC-7721细胞超微结构的改变;用Caspase-3活性检测试剂盒检测经过和不经过PA作用的SSMC-7721细胞中Caspase-3活性的差异。结果：0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol·L^-1的PA均可以抑制SSMC-7721细胞生长,随着浓度递增24 h 细胞增殖抑制率为7.2%～73.1%,48 h 为9.1%～87.5%,72 h 为15.8%～91.9%,随PA浓度增加和作用时间延长,抑制率逐渐增加,2.00 mmol·L-1 PA 为最佳实验浓度;PA可使SSMC-7721细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例增加;PA可通过Caspase-3途径诱发SSMC-7721细胞凋亡,电镜下可观察到凋亡的特征性变化。结论：PA可有效抑制肝癌SSMC-7721 细胞的增殖,诱发细胞凋亡,Caspase-3活化是参与机制之一。     

槲寄生碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用的研究

目的:研究槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用.方法:取对数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞接种96孔板,待细胞生长良好后加入含不同浓度槲寄生碱培养液,取3个时间点(作用24h、48h、72h)采用MTT比色法观察槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用,抑制率(%)=(1-实验组A值/对照孔A值)×100%.结果:0.1mg/mL和0.2mg/mL浓度组在24h、48h、72h均表现出抑制SMMC-7721细胞生长作用,且作用强于5-Fu.0.05mg/mL组在3个时间点也表现出抑制SMMC-7721细胞生长作用,但作用弱于5-Fu.0.025mg/mL组在作用48h后才表现出对SMMC-7721细胞生长抑制作用.结论:槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖方式.     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞株SMMC7721生长及XAF1基因启动子异常甲基化的影响

目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响以及对具有促凋亡作用的X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子1(XAF1)的基因表达和甲基化的影响.方法 用不同浓度的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞后,RT-PCR法检测XAF1 mRNA的变化,MSP检测XAF1基因甲基化的变化,用MTT法检测5-Aza-CdR对SMMC7721细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测其对SMMC7721细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率的影响.结果 经过5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理后,RT-PCR检测显示,SMMC7721中XAF1mRNA表达比对照组增加,差异有统计学意义(分别是P=0.034,P=0.002).MSP检测结果XAF1的甲基化得到了逆转.用1、5、10μmol/L的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞24、48、72 h后,MTT检测到细胞的生长受到抑制,且呈时间和剂量依赖性.流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率均明显增加,5、10μmol/L组细胞凋亡率分别为(7.23±0.92)%、(12.62±1.30)%,与对照组(3.53±0.40)%相比差异有统计学意义(分别是P=0.013,P=0.001).其细胞周期阻滞于S期.结论 5-Aza-CdR抑制SMMC7721细胞的生长,使XAF1基因异常甲基化状态得到逆转,XAF1基因转录水平上调,为其应用于肝癌治疗提供了实验依据.     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

肝癌干细胞表达与血管生成拟态形成的研究

目的研究肝癌血管生成拟态(VM)形成与肝癌干细胞的关系。方法在体外分别建立肝癌细胞株HCC97H、SMMC7721以及正常肝细胞L02三维培养,观察它们各自形成VM的能力。利用激光捕获显微切割技术分离出形成VM的肝癌细胞,RT-PCR和Western blot分别检测内皮相关分子VE-cadherin、CD31及肝癌干细胞标志物CD133和CD34表达水平。结果①HCC97H细胞在三维培养下形成VM;SMMC7721和正常肝细胞L02不形成VM;②激光捕获显微切割成功捕获目的细胞;③各组中VE-cadherin mRNA和蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.05)。CD31在肝癌细胞中不表达。CD133 mRNA和CD34 mRNA在各组中表达差异有统计学意义(P<0.05);CD133和CD34蛋白在各组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌干细胞表达与肝癌细胞VM的形成有关。     

胃癌单克隆细胞球和CD44~+及CD133~+亚群成瘤能力的比较

目的研究胃癌干细胞亚群的筛选方法,探讨建立胃癌干细胞稳定亚群的可行性。方法利用流式细胞仪从MKN45、MKN25、SGC7901细胞株和人胃癌组织中分选出不同CD44和CD133表型的亚群,比较不同亚群和无血清培养基培养的单克隆细胞球细胞在裸鼠移植瘤模型中的成瘤能力。结果不同细胞的CD44+和CD133+亚群在低数量级时几乎不具有裸鼠皮下成瘤能力,在高数量级接种时成瘤能力与母系细胞差异无统计学意义;单克隆细胞球细胞在各数量级下的成瘤能力、瘤体积和生瘤速度均显著高于母系细胞。结论与CD44和CD133等细胞表面标志物筛选法相比,单克隆细胞球细胞可更好的作为胃癌干细胞研究的细胞学基础。     

活化的巨噬细胞对肝癌细胞株的凋谢作用

目的：观察巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭΦ）对肝癌细胞株的凋谢作用。方法：从肝癌患者腹水中分离ＭΦ，以细菌脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）进行激活，人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１为靶细胞，光镜观察靶细胞形态学改变。结果：ＬＰＳ活化的ＭΦ与靶细胞共同培养１ｈ可见紧密接触，２４ｈ靶细胞呈现核碎裂，胞浆嗜酸性增强，凋谢小体形成等变化；未活化的ＭΦ仅有与靶细胞接触但未见其破坏现象。结论：活化的ＭΦ通过凋谢的方式引起肝癌细胞株死亡。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

免疫磁珠法分选人脑胶质瘤干细胞的体外培养及鉴定

目的:旨在从人脑胶质瘤组织和细胞株中分离脑胶质瘤干细胞、进行体外培养并对其干细胞特性加以鉴定,以期对后续个体化敏感药物化疗奠定基础。方法:采用以CD133为标志的免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织和细胞株中分离脑胶质瘤干细胞并进行体外培养,通过免疫荧光技术检测干细胞标志物CD133、Nestin,干细胞特性加以鉴定。结果:新鲜人脑胶质母细胞培养得到悬浮生长的肿瘤干细胞球,其能在体外自我更新、增殖,形成新的克隆性细胞球,保持连续稳定的传代,能表达神经干细胞表面标志物CD133。在含血清培养基中能够分化为与原肿瘤组织相似的贴壁生长的细胞。结论:胶质母瘤细胞株中存在的一小部分CD133+胶质瘤细胞具有干细胞的属性,并能稳定传代增生。     

Expression of TN4 gene and its role in human hepatocarcinogenesis from Qidong, a liver cancer risk area

Background We investigated the expression and role of TN4 in the oncogenesis of human hepatocellular carcinoma (HCC) from Qidong which is a HCC risk area.Methods The expression of TN4 in HCC was observed using immunohistochemical staining (IHC). TN4 levels were manipulated in human liver cancer cell SMMC7721, using pcDNA3.1 eukaryotic expression constructs designed to express the complete TN4 cDNA. The biological changes of the cells were observed before and after transfection of TN4 and the change of gene expression was analysed by atlas cDNA expression array. Results Among 100 pairs of samples of HCC, TN4 down-regulation expression and up-regulation expression positive rate were 81% (81/100), 19% (19/100), respectively (P&lt;0.01). TN4 protein was mainly localized in cytoplasm and membrane. The positive rate of TN4 were 10% (3/30), 100% (70/70) in lymph node metastasis and no lymph node metastasis, respectively (P&lt;0.01).　The growth rates of the derivative SMMC7721-TN4 cell lines were decreased in comparasion with that of normal SMMC7721 cells and pcDNA- SMMC7721. Some gene expression was changed before and after transfection of TN4. At 30 days of post-implantation of SMMC7721-TN4, SMMC7721-pcDNA3, SMMC7721 group produced tumors of (301.9±143.4) mm3, (2418.7±362.8) mm3, (2317.4±587.8) mm3, respectively, (P&lt;0.01). Tumor inhibiting rate was 82.4% in TN4 transfection group. Sections of tumors were observed for their degree of tissue necrosis and there was higher degree of necrosis in tumors of the TN4-SMMC7721 cell group than those of the SMMC7721, SMMC7721-pcDNA groups.Conclusions TN4 may play an important role in the oncogenesis of human HCC, especially in Qidong, the HCC risk area and TN4 could be a candidate tumor suppressor gene for HCC.     

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。     

CD105/CD133筛选鉴定SMMC-7721株干细胞表面标志物的实验研究

目的：观察人肝癌细胞株 SMMC-7721中膜抗原CD133、CD105的表达情况并对不同亚群的生物学性状进行体内外实验研究。方法以含10%胎牛血清的 DMEM 对SMMC-7721株细胞培养;采用流式细胞仪方法分选检测CD133、CD105在SMMC-7721中表达情况并分选出CD133+/CD105+、CD133+/CD105-、CD133-/CD105+、CD133-/CD105-4个亚群;CCK-8和 Transwell侵袭实验分别检测4个亚群和未分选细胞组的增殖及侵袭能力,软琼脂克隆实验检测5组细胞成球能力;裸鼠成瘤实验了解 CD133+/CD105+、CD133-/CD105-亚群和未分选组的成瘤能力。结果流式细胞仪分选的 CD133+/CD105+、 CD133+/CD105-、CD133-/CD105+、CD133-/CD105-4种细胞亚群的比例分别为1．61%、0．01%、97．88%和0．50%。 CD133+亚群的增殖和成球能力较 CD133-亚群及未分选细胞组强,而CD105+亚群侵袭能力较 CD105-亚群及未分选细胞组强。CD133+/CD105+组与CD133-/CD105-组及未分选细胞组相比成瘤所需的时间短、所需细胞数少、成瘤的体积大。结论 CD133在人肝癌细胞株 SMMC-7721中的表达与其增殖成球能力有关,CD105与其侵袭能力有关,CD133+/CD105+具有体内高度的成瘤能力。 CD133+/CD105+亚群在人原发性肝癌细胞株SMMC-7721中具有肿瘤干细胞特性。