脂多糖诱导对内皮细胞释放内皮细胞微粒的影响

目的探讨脂多糖刺激对内皮细胞释放内皮细胞微粒(EMP)的影响。方法取人脐静脉内皮细胞培养,分为正常对照组(无脂多糖诱导)和不同浓度脂多糖(浓度分别为0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L)组,脂多糖诱导24 h后收集细胞培养液并消化内皮细胞制成细胞悬液。离心法提取细胞培养液内的EMP,加入特异性荧光抗体(anti-CD31-CFS、anti-CD51-PE、anti-CD54-FITC、antiCD144-PE、anti-CD62E-APC)。采用流式细胞仪检测脂多糖诱导内皮细胞释放荧光标记EMP的变化以及内皮细胞的凋亡率。对数据行方差分析、t检验、Dunnett-t检验。结果对照组和0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD31~+EMP数量水平分别为(1.23±0.43)×10~6、(1.92±0.64)×10~6、(2.55±0.78)×10~6、(3.96±0.78)×10~6、(6.96±1.80)×10~6,组间比较差异有统计学意义(F=5.83,P0.05),CD31~+EMP占总体EMP的比值分别为(4.57±1.33)%、(5.92±1.24)%、(6.93±1.61)%、(7.44±1.09)%、(13.44±3.39)%,组间比较差异有统计学意义(F=3.43,P0.05)。与对照组比较,10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD31~+EMP数量水平明显升高,差异均有统计学意义(t=-3.06、-3.61,P值均小于0.05);20.0μg/m L脂多糖组CD31~+EMP数量水平高于0.1、1.0μg/m L脂多糖组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。CD31~+EMP占总体EMP的比值20.0μg/m L脂多糖组高于对照组和0.1μg/m L脂多糖组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。对照组和0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD54+EMP数量水平分别为(4.70±1.01)×10~6、(9.20±3.34)×10~6、(8.83±1.70)×10~6、(17.18±3.78)×10~6、(17.73±4.98)×10~6,组间比较差异有统计学意义(F=3.35,P0.05)。与对照组比较,10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD54+EMP数量水平明显升高,差异均有统计学意义(t=-3.19、-3.00,P值均小于0.05)。对照组和0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD144~+EMP数量水平分别为(3.93±1.22)×10~6、(6.80±1.36)×10~6、(8.03±2.53)×10~6、(17.22±4.52)×10~6、(11.05±5.80)×10~6,组间比较差异有统计学意义(F=3.17,P0.05)。10.0μg/m L脂多糖组CD144~+EMP数量水平高于对照组及0.1、1.0μg/m L脂多糖组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。20.0μg/m L脂多糖组CD62E+EMP数量水平为(2.95±0.26)×10~6,明显高于对照组(1.26±0.26)×10~6,差异有统计学意义(t=-4.45,P0.05)。各组内皮细胞凋亡率比较差异无统计学意义(F=0.17,P0.05)。结论脂多糖损伤内皮细胞可表现为表达特异性标记的EMP的大量释放,可能是脓毒症内皮细胞损伤机制之一。     

胰岛素对牛胸主动脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的:评价胰岛素对培养的牛胸主动脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响。方法: 取新生的小牛胸主动脉,做血管内皮细胞原代及传代培养,取4-6代培养细胞分组,应用不同浓度的胰岛素(30 mU/L、300 mU/L、3 000 mU/L)干预培养过程,48 h后应用免疫组化法测定内皮细胞VEGF及其受体(flt-1、flk-1/KDR)的表达水平。结果: 低浓度胰岛素组(30 mU/L、300 mU/L)内皮细胞VEGF表达明显高于不用胰岛素组(P<0.01);高浓度组(3 000 mU/L)内皮细胞VEGF表达明显低于不用胰岛素组(P＜0.05);各组内皮细胞VEGF受体(flt-1及flk-1/KDR)的表达无明显差异(P＞0.05)。结论: 低浓度胰岛素促进小牛主动脉血管内皮细胞VEGF表达;高浓度胰岛素可抑制血管内皮细胞VEGF表达;胰岛素对小牛主动脉血管内皮细胞VEGF受体(flt-1、flk-1/KDR)的表达无直接影响。     

氨氯地平和贝那普利对牛主动脉内皮细胞内皮素-1 mRNA表达的影响

目的本研究利用牛主动脉血管内皮细胞的实验模型,观察氨氯地平和贝那普利对内皮素-1(ET-1)mRNA表达的影响.方法制备5～10代牛主动脉血管内皮的细胞悬液.取生长融合、成片的细胞随机分成3组.分别为空白对照组、氨氯地平(10-5mol/L)、贝那普利组(10-5mol/L).CO2培养箱中孵化2小时,收获细胞提取总RNA.用RT-PCR法扩增ET-1 cDNA的特异片段,PCR产物上样于6%聚丙烯凝胶行电泳,剥胶按改良的Brandt法进行银染,进行辉度扫描,对ET-1的量进行定量分析.结果经区带密度扫描分析,与空白对照相比较,氨氯地平组和贝那普利组信号强度减弱(0.46±0.11 vs 0.26±0.05和0.46±0.11 vs 0.23±0.05;p<0.001).而在两个处理组间无差异.结论氨氯地平和贝那普利可抑制培养牛主动脉内皮细胞的ET-1 mRNA表达.     

氨氯地平和贝那普利对牛主动脉内皮细胞内皮素-1mRNA表达的影响

目的　本研究利用牛主动脉血管内皮细胞的实验模型 ,观察氨氯地平和贝那普利对内皮素 - 1(ET - 1)mRNA表达的影响 .方法　制备 5～ 10代牛主动脉血管内皮的细胞悬液 .取生长融合、成片的细胞随机分成 3组 .分别为空白对照组、氨氯地平 ( 10 -5mol/L)、贝那普利组 ( 10 -5mol/L) .CO2 培养箱中孵化 2小时 ,收获细胞提取总RNA .用RT -PCR法扩增ET - 1cDNA的特异片段 ,PCR产物上样于 6 %聚丙烯凝胶行电泳 ,剥胶按改良的Brandt法进行银染 ,进行辉度扫描 ,对ET - 1的量进行定量分析 .结果　经区带密度扫描分析 ,与空白对照相比较 ,氨氯地平组和贝那普利组信号强度减弱 ( 0 .4 6± 0 .11vs 0 .2 6± 0 .0 5和 0 .4 6± 0 .11vs0 .2 3± 0 .0 5 ;p<0 .0 0 1) .而在两个处理组间无差异 .结论　氨氯地平和贝那普利可抑制培养牛主动脉内皮细胞的ET - 1mRNA表达     

内毒素刺激血管内皮细胞生成PGI_2有赖于血清的存在

在生物体内和体外,革兰阴性菌内毒素(endoto-xin,ET)的作用极其广泛。血管内皮细胞(VEC)是感染性休克时ET作用的主要靶细胞。VEC损伤又是动脉粥样硬化形成的起始步骤。几个报道显示ET对VEC的直接作用。关于ET对VEC生成前列环     

高脂血症对大鼠主动脉内皮细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高脂血症SD大鼠主动脉内皮细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化及其诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法:清洁级大鼠17只,随机分为高脂血症模型组(8只)和对照组(9只),分别以高脂饲料和普通饲料喂养16周后,检测血脂水平,采用免疫组织化学方法检测两组大鼠主动脉内皮细胞Bax、Bcl-2的表达,同时用HE染色和电镜观察主动脉组织形态学改变。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平升高(P<0.01),主动脉内皮细胞Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01);模型组主动脉内膜增厚和平滑肌细胞增殖,内皮组织部分脱落,内皮细胞胞膜破裂,胞质脱失,核膜不完整。结论:高脂血症可引起大鼠血管内皮细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2水平及比值改变,加重血管内皮损伤,促进细胞凋亡,加速动脉粥样硬化进程。     

764-3对老龄大鼠PMNs功能变化的调节作用

７６４－３是从丹参中提取的有效单体,我们的工作曾表明,它具有抗炎症,抗纤维化等作用。本文观察７６４－３对老龄鼠ＰＭＮｓ功能（可能处于脆化状态）的影响,有助于为寻找抗衰老药物提供实验资料。实验用Ｗｉｓｔａｒ大鼠,雄性,鼠龄２２～２４个月,体重（５５０±４０）ｇ,随机分为老龄对照组和７６４－３治疗组（每日腹腔注射７６４－３两次,每次剂量为４０ｍｇｋｇ体重）。按以前报道的方法,经腹腔注入糖原,收集ＰＭＮｓ,制备成１×１０７ｍＬ,备用。ＰＭＮｓ与调理的酵母多糖作用,产生的活性氧自由基及溶酶体酶β－ｇ…     

抗磷脂抗体对内皮细胞释放前列环素的影响

用狼疮凝集抑制物（ＬＣＩ）阳性的病人血清、亲和分离的ＩｇＧ和脂质体亲和纯化的抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）作用于人内皮细胞（ＥＣ），测定ＥＣ释放的前列环素（ＰＧＩ＿２）。结果表明，对照组ＰＧＩ＿２的平均释放量为１３０５±２４０ｐｇ／ｍｌ，实验组为１２４６±２８７ｐｇ／ｍｌ，差别为４．５％（Ｐ＞０．０５）。经人α－凝血酶（１Ｕ／ｍｌ）刺激后，对照组ＥＣ释放ＰＧＩ＿２的量平均增加２．１倍，实验组为１．３６倍，差别为３５．２％（Ｐ（０．０５）。上述三种成份均能明显抑制低浓度凝血酶（１Ｕ／ｍｌ）介导ＥＣ释放ＰＧＩ＿２，但并不抑制高浓度凝血酶（１０Ｕ／ｍｌ）和花生四烯酸（２０μｍｏｌ／ｍｌ）介导ＥＣ释放ＰＧＩ＿２（Ｐ＞０．０５）。因此，具有ＬＣＩ活性的ＡＣＡ对凝血酶介导的ＥＣ释放ＰＧＩ＿２的抑制是引发血栓形成的机制之一；也是现所知的直接沟通免疫和凝血两大系统的唯一抗体。     

香烟烟雾抽提物对肺动脉内皮细胞环氧合酶，血栓素合成酶mRNA水平及PGI_2，TXA_2生成的影响

本实验应用放免测定及分子杂交技术观察了香烟烟雾抽提物（ＣＳＥ）对培养的猪肺动脉内皮细胞环氧合酶，血栓素合成酶基因表达和ＰＧＩ＿２，ＴＸＡ＿２生成的影响，进一步从分子水平探讨由内皮细胞产生的前列腺素在ＣＳＥ影响肺血管张力和ＨＰＶ中的作用。结果发现：在常氧或缺氧下，ＣＳＥ可促使内皮细胞环氧合酶—１ｍＲＮＡ水平升高于对照组的１．５倍，而环氧合酶—２ｍＲＮＡ则分别比对照组高２倍和１倍。同时在常氧或缺氧时，ＣＳＥ使内皮细胞条件培养基中６—ｋｅｔｏ—ｐＧＦｌａ．明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。然而，不论常氧或缺氧时，ＣＳＥ不影响血栓素合成酶基因表达和ＴＸＡ２的生成。提示在常氧和缺氧时，ＣＳＥ所致的环氧合酶ｍＲＮＡ水平升高及ＰＧＩ２增加介导了猪吸烟时肺血管张力和ＨＰＶ的降低。     

银杏叶提取物对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 采用体外培养的小牛主动脉平滑肌细胞（SMC）为模型,在氧化修饰型低密度脂蛋白（oxldl)造成SMC增殖条件下,观察银杏叶提取物（EGB）对其诱导SMC增殖的影响作用。还观察EGB直接对SMC增殖的影响。方法 1） 分为对照组oxldl(0.1mg/ml)组,在oxldl组中加入6个浓度EGB,培养24h后用MTT和^3H-TdR掺和法测定细胞含量及其培养液中SOD、LPO、TXB2、PGI2。2）分为对照组和EGB组。结果 oxldl可使SMC增殖,加用EGB后可使SMC增殖受到抑制。EGB还直接抑制SMC殖作用。EGB组与oxldl组相比,SOD、PGI2升高,LPO、TXB2降低。结论 EBG抑制olxdl诱导SMC增殖,并呈剂量依赖型。EBG可直接抑制SMC增殖,并呈剂量依赖型。其作用可能通过降低LPO、TXB2,PGI2含量增多,SOD活性增高有关。     

红细胞生成素3'-增强子片段对内皮细胞缺氧时环加氧酶-2基因表达的影响

目的和方法：体外合成红细胞生成素（Ｅｐｏ）３′－增强子野生型及突变型片段，借助脂质体，转入内皮细胞，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法测定分离细胞在常氧或缺氧条件下培养４ｈ的环加氧酶２（ＣＯＸ－２）ｍＲＮＡ。结果：（１）大鼠主动脉内皮细胞、肺微血管内皮细胞在常氧下培养，有ＣＯＸ－２基因表达；（２）缺氧能诱导这两种细胞ＣＯＸ－２基因表达增加；（３）野生型Ｅｐｏ３′－增强子片段能阻断缺氧对内皮细胞ＣＯＸ－２基因表达的诱导作用，而突变片段则无此作用。结论：在ＣＯＸ－２基因序列中，可能存在Ｅｐｏ３′－端增强子片段，它参与了内皮细胞的缺氧反应     

764-3对低氧性肺动脉高压大鼠肺血管羟脯氨酸含量变化的影响

动态检测了慢性低氧性肺动脉高压形成过程中肺动脉压(PAP)、右心室重(RV/LV+S、RV/100gBW)、肺动脉干重及肺动脉中羟脯氨酸(HP)含量的变化。实验用Wistar雄性大鼠200～300克,随机分为对照组、单纯低氧组(常压低氧10%O_2-90%N_2、6小时/天、6天/周)、764-3(50mg/kgBW,每日于置低氧舱前皮下注入)处理低氧组。结果发现低氧3天各组(每组均为n=10)上述指标无明显变化。低氧7天对照组、单     

缺氧对肺微血管内皮细胞释放ET-1的影响

缺氧对肺微血管内皮细胞释放ＥＴ－１的影响第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所（重庆６３００３７）谢崧钱桂生杨晓静目的：本文研究了肺微血管内皮细胞缺氧条件下对ＥＴ－１的影响。方法：取第三代汇合成细胞单层的大鼠肺微血管内皮细胞（ＲＰＭＥＣｓ）随机分为常氧组...     

丹参单体IH764-3通过抑制白细胞激活产物减轻人脑微血管内皮细胞的缺氧-复氧损伤

目的探讨丹参单体IH764-3在白细胞介导的脑内皮细胞缺氧-复氧损伤中的作用及机制。方法通过MTT法检测人脑微血管内皮细胞(HBMVEC)的存活;明胶酶谱法检测白细胞MMP-9的释放;荧光定量法检测白细胞内活性氧水平;ELISA法检测白细胞释放细胞因子的水平。结果缺氧-复氧使HBMVEC存活下降,当复氧时加入白细胞激活产物使损伤加重,同时加入IH764-3则具有保护作用。缺氧-复氧使白细胞释放MMP-9增加;细胞内活性氧水平升高;释放的TNF-α、IL-1α、IL-2、IFN-γ增加。IH764-3可呈剂量依赖性减少由缺氧-复氧所致的白细胞分泌MMP-9、ROS和细胞因子增加。结论IH764-3能够减轻白细胞介导的HBMVEC的缺氧-复氧损伤,在脑缺血前及缺血后干预中具有潜在应用价值。     

体外培养的牛角膜内皮细胞氯离子通道-3分子的检测

目的检测氯离子通道蛋白3(chloride channel 3,ClC-3)在体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cell,BCECs)k中的表达和定位。方法应用免疫荧光法测定ClC-3在体外培养BCECs的所在部位,RT-PCR和Wester印迹法检测ClC-3mRNA和蛋白的表达。结果在体外培养的BCECs,RT-PCR可以扩增出长度为602bp的ClC-3的cDNA产物。Western印迹可见到约85ku的发光条带,细胞膜和部分细胞浆可见到ClC-3的表达。结论体外培养的BCECs在转录和翻译水平均有内源性ClC-3基因表达,表达产物存在定位于细胞膜和内质网部分细胞浆。     

NF-κB调控IL-1刺激人脐静脉内皮细胞合成PGI_2

白细胞介素 １(ＩＬ １)是在炎症反应中起重要作用的细胞因子。它能激活在炎症过程中调控相关基因表达的核因子 κＢ（ＮＦ κＢ）及刺激内皮细胞分泌炎症介质ＰＧＩ２。以往研究表明 ,ＮＦ κＢ可调控ＬＰＳ刺激的Ｊ７７４巨噬细胞分泌ＰＧ２〔１〕,但其是否可调节ＩＬ １诱导内皮细胞分泌ＰＧＩ２ 目前还不清楚。因此 ,我们研究了ＮＦ κＢ活化的抑制剂Ｎ α ｔｏｓｙｌ Ｌ ｌｙｓｉｎｅｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅ（ＴＬＣＫ）对人脐静脉内皮细胞合成ＰＧＩ２ 的影响 ,讨论了ＮＦ κＢ在ＩＬ １刺激内皮细胞合成ＰＧＩ２ 中…     

蒲黄对急性高脂血症家兔TXA_2/PGI_2及血脂的影响

本文用一次静脉注射高脂血清同时短期口服胆固醇的方法,造成家免急慢性高脂血症模型,观察血浆PGI_2、TXA_2和血清各种脂蛋白的动态变化过程及其相互关系,以及蒲黄对它们的影响,并以Vit E作为对照,结果发现:1.急性高脂血症家兔血浆PGI_2含量明显减少,TXA_2/PGI_2比值升高,TXA_2/PGI_2与血清TC/HDL-C,LDL-C/HDL-C之间有显著的正相关关系。2.蒲黄不但可以防止高脂引起的上述变化,而且能直接升高体内PGI_2水平,其作用优于Vit E。3.急性脂质负荷后,血浆PGI_2有轻度升高,继之持续降低。     

人参皂甙Rg1对体外培养牛主动脉内皮细胞作用的适宜浓度范围

目的 :探讨人参皂甙Rg1 对体外培养的牛主动脉内皮细胞(BAEC)作用的适宜浓度范围。方法 :以体外培养的BAEC为模型 ,分别加入不同浓度的Rg1 作用 2 4h ,用台盼蓝染色后在细胞计数板上进行活细胞计数。结果 :①Rg1 浓度为 10 μg～ 40 μg/ml时 ,活细胞百分数为 97%～ 95% ,与对照组 (培养基中不含Rg1 )相比无显著性差异。②Rg1 浓度大于 40 μg/ml时 ,随着Rg1 浓度的升高活细胞百分数进行性减少 ,与对照组比较均有显著差异。结论 :人参皂甙Rg1 对体外培养BAEC作用的适宜浓度范围为 10 μg～ 40 μg/ml。