天然来源枯草芽孢杆菌的抑菌活性研究

目的:研究一种天然来源抑菌剂对常见致病性细菌(金黄色葡萄球菌,蜡状芽孢杆菌,铜绿假单胞菌,大肠杆菌)以及石斛病原真菌(烟草疫霉菌)的抑制作用。方法:从东海沙滩泥土中分离纯化菌株,通过牛津杯法及对峙法筛选对四株致病性细菌和一株石斛病原真菌具有抑制作用的活性菌株;通过观察菌体形态,16S rRNA测序、Gen Bank比对,对最优活性菌株进行鉴定;通过优化菌株培养条件,获得活性物质产生最佳发酵条件。结果:从样品中共分离52株菌,6株菌发酵液提取物对病原细菌具有抑制作用,2株对烟草疫霉菌具有拮抗活性。选取活性最佳的菌株,通过鉴定,确定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);其发酵液乙酸乙酯提取物对所述5株指示菌具有生长抑制活性;通过优化,确定该菌最佳培养条件为37℃,ISP2培养基,发酵培养96 h。结论:从东海中所分离获得的枯草芽孢杆菌对常见致病细菌具有较强的抑制作用,且对烟草疫霉菌具有抑制作用,可用于筛选石斛病原菌天然抑制剂的研究。     

人参内生ge15菌株抑菌活性物质的初步研究

目的:探究人参内生细菌ge15菌株对人参病原菌的作用机理,明确ge15菌株胞外分泌液中抑菌活性成分的提取方法、活性组分及抑菌活性物质的稳定性。方法:通过硫酸铵沉淀、浓盐酸沉淀及饱及正丁醇萃取等方法获得菌株发酵液中抑菌活性成分;牛津杯法测定提取成分的抑菌活性。结果:从ge15菌株发酵液得到的提取液均有抑菌活性;对发酵上清液经高温和蛋白酶K处理,抑菌活性未见明显变化。结论:ge15菌株能产生多种抑菌活性成分;抑菌成分对高温和蛋白酶K稳定。     

三株甲基营养型芽孢杆菌抑菌活性物质初探

目的:研究甲基营养型芽孢杆菌QM、BM2和HZ3不同抑菌活性部位。方法:采用对峙培养法及牛津杯验证提取物抑菌活性;菌丝形态用扫描电镜观察;菌株发酵上清液通过低温离心及微孔滤膜过滤制备;脂肽粗提物通过酸沉淀方法获得;有机溶剂萃取物分别用等量石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取发酵上清液获得;蛋白粗提物通过硫酸铵沉淀结合透析法获得。结果:与三株甲基营养型芽孢杆菌对峙培养的人参致病菌菌丝生长均呈现畸形,甚至死亡;菌株发酵液和发酵上清液也有明显的抑菌活性,上清液中的脂肽粗提物、蛋白粗提物及水饱和正丁醇萃取物均对人参致病菌有不同程度的抑菌效果。结论:三株芽孢杆菌发酵液中含有多种抑菌活性物质,推测其可能单独或协同发挥抑菌作用。     

枯草芽孢杆菌对50种中药的发酵及抗菌活性检测

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)对50种中药进行发酵,检测发酵产物与原料对结核分支杆菌(Myco-bacterium tuberculosis)和榛色青霉(Penicillium avellaneum)的抗菌活性。结果表明:部分中药的发酵产物抗菌活性增加,而部分中药的发酵产物抗菌活性降低,部分中药的活性不变。说明微生物发酵中药的过程中,两者发生相互作用导致发酵前后中药成分发生变化,从而抗菌活性发生变化。     

枯草芽孢杆菌的基因组重排初步研究

目的:获得产高活性豆豉溶栓酶的枯草芽孢杆菌突变株.方法:用紫外诱变得到突变株,观察诱变效应,筛选透明圈直径与菌落直径比值大(HC值)的突变株,进行原生质体融合,筛选酶活高的菌株.结果:紫外诱变得到2株HC比值大的菌落;当溶菌酶为100 mg·L~(-1),处理时间为45 min进行原生质体融合时,效果最好;当PEG为40%时,原生质体融合率最大;最后筛选出酶活可达2 013 U·mL~(-1)的突变株.结论:通过紫外诱变和原生质体融合,得到高活力的菌株.     

枯草芽孢杆菌固态发酵黄精工艺优化及其质量、药理活性

目的 优化枯草芽孢杆菌固态发酵黄精工艺,并考察其质量及抗疲劳、抗氧化作用.方法 在单因素试验基础上,以发酵时间、用菌量、药材含水量为影响因素,多糖、浸出物含量为评价指标,响应面试验优化发酵工艺.观察发酵前后黄精性状,测定总多糖、总浸出物、总皂苷含量.60只小鼠随机分为空白组(生理盐水)、阳性组(人参)、生黄精提取液组及...     

枯草芽孢杆菌对凤仙花离体快繁的影响

目的 研究生物因子(枯草芽孢杆菌)对凤仙花离体繁殖的影响.方法 采用不同浓度枯草芽孢杆菌(0,5×10~4、5×10~5、5×10~6、5×10~7、5×10~8个/mL)处理凤仙花后,以其叶和茎为外植体,接种于MS+0.5 mg/LNAA+0.5 mg/L 6-BA培养基上进行愈伤组织诱导和植株再生.结果 无论是叶还是茎作外植体,经5×10~5个/mL浓度的菌液处理后愈伤组织诱导率最高(叶:95.3%,茎:13.3%),与对照差异极显著.经5×10~5个/mL浓度的菌液处理后的幼苗生长速度也最快,50 d便达到了移栽要求.结论 适当浓度的枯草芽孢杆菌处理有利于凤仙花的离体繁殖.     

甘肃乌拉尔甘草有效菌株内生细菌活性物质初步研究

目的：考察甘肃乌拉尔甘草具有抑菌作用的内生细菌的活性物质。方法：利用HPLC检测,以甘草苷、甘草酸单铵盐标准品为参照,对甘草有效菌株内生细菌JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001发酵液抑菌活性成分进行分析。结果：三菌株代谢产物出峰时间分别为（RT=21．071分钟）、（RT=21．041）、（RT=21．067）,与甘草酸单铵盐标准品的出峰时间（RT=21．031分钟）相近,采用面积法对其定量,产量分别约为0．033、0．005,0．013mg／mL。结论：甘肃乌拉尔甘草野生与栽培品有效菌株内生细菌JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001三菌株分别含有与宿主相同药理活性的甘草酸类物质。     

枯草芽孢杆菌等益生菌对白术白绢病的防治研究

前期工作中发现蚕沙发酵肥能有效缓解白术的连作障碍,并从发酵肥中筛选到4株可能缓解白术连作障碍的益生菌。为进一步探讨蚕沙有机肥缓解杭白术连作障碍的微生物作用机制,从致病白术根际分离并培养白绢病致病菌齐整小核菌(Sclerotium rolfsii),利用平板对峙实验将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、荧光性假单胞菌(Psdeuomnoda fluoerncnet)、类芽孢杆菌(Paenibacillus Ash)和黄杆菌(Flavobacterium mizutaii)4种菌与齐整小核菌进行拮抗,并通过盆栽实验验证。对峙实验结果表明,黄杆菌对齐整小核菌的抑菌率为43.6%;枯草芽孢杆菌的抑菌率为67.6%;荧光性假单胞菌的抑菌率为52.5%,而类芽孢杆菌的抑菌率为12.4%其中枯草芽孢杆菌的抑菌效果最为显著,说明黄杆菌、枯草芽孢杆菌和荧光性假单胞菌能够有效拮抗白绢病病菌,而类芽孢杆菌效果不佳。在致病白术土壤中添加这3种有效益生菌,也能够有效提高白术存活率,而且存活率随着益生菌浓度增加而增加,高浓度(2×108CFU/m L)枯草芽孢杆菌效果最明显,达到100%,另外2种益生菌均为80%。结论:从蚕沙发酵肥中筛选出的3种益生菌均能抑制白绢病病原菌的生长,且枯草芽孢杆菌的防治效果最好,可提高病株的存活率及改善病株生长,提示可以用于生物菌肥的开发。     

人参病害生防微生物菌剂的抑菌活性评价

目的:明确12种市售微生物菌剂产品中分离菌株对人参黑斑病菌和人参灰霉菌的抑菌效果,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株;对峙培养法评价分离菌株的抑菌活性;十字交叉法测量菌落直径。结果:5种木霉菌剂产品中仅有1种分离到活体菌株,尽管该菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性较高(抑菌率分别为65. 18%和76. 82%),但菌剂中活菌的分离数偏低。7种芽孢杆菌菌剂中均能分离到活体菌株,除微囊粒剂和水剂外,其他菌剂产品中活体菌株分离数均较高;上述分离菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性低于木霉菌,抑菌率分别为27. 21%～33. 04%和10. 74%～29. 40%。结论:芽孢杆菌和木霉杀菌剂均具有防治人参病害的生防潜力,考虑菌剂产品的稳定性和环境耐受力,芽孢杆菌类微生物菌剂更适合人参病害的田间防控。     

人参内生细菌的分离及拮抗菌株的筛选

本研究用平板培养法从人参Panax ginseng根中分离内生细菌,共分离到40种内生细菌,Bacillus spp.和Pseud-omonas spp.为优势内生菌。通过对峙培养,筛选出对人参菌核菌、人参锈腐菌和人参黑斑菌均有明显抑制作用的内生细菌ge15 Stenotrophomonas maltophilia和ge25 Bacillus sp.,其中ge15对人参菌核菌、人参锈腐菌和人参黑斑菌的抑菌带宽度分别达5.5,22.0,14.8 mm;ge25对3种致病菌的抑菌带宽度分别达12.7,16.5,9.0 mm。研究结果表明,内生细菌具有防控人参致病菌的生防潜力,可作为生防因子用于人参土传病害的防治。     

基于ITS2条形码SNPs的人参和西洋参PCR-SSCP分子鉴别研究

目的:依据人参和西洋参ITS2条形码的专属性SNP鉴别位点,建立利用PCR-SSCP技术鉴别人参和西洋参的方法.方法:查找GenBank上已收录的人参和西洋参ITS2序列,进行比对分析,筛选人参和西洋参ITS2序列的专属性SNP鉴别位点,据此设计引物,采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对11个人参样品和10个西洋参样品进行分析,对PCR产物进行测序验证.结果:人参和西洋参样品的PCR-SSCP谱带与各自的对照药材谱带一致,人参和西洋参的PCR-SSCP谱带有显著差异;PCR-SSCP鉴别结果和经测序鉴别结果一致.结论:和测序法相比,PCR-SSCP方法快速、准确,可用于人参和西洋参药材的鉴定.     

ge15菌株的鉴定及其对人参病害的防治效果

根据以前的16S rDNA序列同源性分析结果, 以及研究开展的生理生化指标测定及形态学观察结果, 将从人参根中分离到细菌ge15菌株鉴定为嗜根寡养单胞菌Stenotrophomonas rhizophila。对峙培养发现, ge15菌株对人参黑斑病菌Alternaria panax、人参疫病菌Phytophthora cactorum和人参锈腐病菌Cylindrocapon destructans的抑菌效果明显, 抑菌带宽分别为13.3, 24.0, 12.0 mm。试验结果表明, 经ge15菌株处理的人参出苗率和存苗率与多菌灵相当, 均显著高于对照。考虑到生防菌田间施用时无毒、无污染等优点, 该菌株在人参病害防治过程中具有良好的应用潜力。     

人参自毒物质降解细菌的筛选及其降解特性研究

文章采用传统的平板培养方法筛选能够高效降解人参自毒物质的微生物菌株,并通过16S核糖体DNA序列同源性分析结合显微形态特征鉴定降解菌株;通过液体培养结合GC-MS测定菌株生长情况及对自毒物质的降解效率,以明确其对自毒物质的降解特性.最终成功从六年生人参根围土中筛选出5株人参自毒物质高效降解细菌,液体培养状态下均能以人工添加的自毒物质为碳源生长繁殖.该研究结果表明,从人参根围土中筛选自毒物质降解细菌具有可行性,筛选的降解菌株可用于老参地中自毒物质的消除.     

人参栽培土壤中细菌种群ARDRA研究体系的建立

目的:建立适用于开展人参栽培土壤微生物种群结构分析的ARDRA研究体系.方法:从基因组水平研究人参栽培土壤微生物种群多样性结构.结果:对人参栽培土壤样品分析发现,ARDRA体系不仅能高效区分土壤中不同的微生物类群,而且还可根据酶切谱带的差异统计出不同微生物类群在土壤总微生物中所占的比重.结论:建立的ARDRA研究体系能够用于人参栽培土壤微生物种群结构分析.     

HPLC同时测定人参药材中12种人参皂苷的含量

目的:建立HPLC测定人参药材中12种人参皂苷含量的方法.方法:采用lunna NH2色谱柱(4.6 mm×150mm,5 μm);流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温为室温.结果:12种人参皂苷Rh2,Rh1,Rg2,Rg3,Rg1,Rf,Re,Rd,Rc,Rb2,Rb3,Rb1在60min内达基线分离,线性关系良好(Γ≥0.999 5).加样回收率分别为98.1%,95.3%,96.1%,95.6%,97.3%,98.6%,98.0%,96.4%,96.1%,97.6%,96.8%,96.9%(RSD≤3%).结论:该方法简便,快速,可作为人参药材质量控制指标.     

林下参化学成分的研究

目的:研究林下参的化学成分。方法:利用HPLC法对化合物进行分离,通过TLC和NMR等波谱学方法鉴定化合物的结构。结果:从林下参75%乙醇提取液的正丁醇萃取部分分离得到8个化合物,分别鉴定为:20(S)-原人参二醇(1)、人参皂苷Rc(2)、20(S)-人参皂苷Rg2(3)、20(S)-人参皂苷Rg3(4)、20(S)-人参皂苷Rh1(5)、人参皂苷Rb3(6)、20(S)-原人参三醇(7)、人参皂苷Rf(8)。结论:化合物20(S)-原人参二醇、20(S)-原人参三醇和人参皂苷Rf为首次从林下参中分离得到,本研究为综合开发利用林下参资源提供了理论依据。     

HPLC同时测定人参须根中人参炔醇和人参环氧炔醇的含量

目的:建立同时测定人参须根中人参炔醇和人参环氧炔醇含量的方法。方法:采用Elite C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长230 nm,柱温室温。结果:人参炔醇和人参环氧炔醇分别在0.70～3.50μg(r=0.999 5)和0.64～3.20μg(r=0.999 9)呈良好线性关系,平均回收率分别为99.1%(RSD1.7%),99.3%(RSD 1.2%)。结论:该方法快速简便,重复性好,为人参须根的综合开发提供质控依据。     

人参根际拮抗细菌RS-3的鉴定及其对人参常见病原菌的抑制作用

从吉林健康人参根中筛选到一株广谱根际菌RS-3。经形态学特征及16Sr DNA序列同源性分析,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。平板对峙实验及带毒平板法鉴定,该菌株对常见的5种人参病原菌有一定的拮抗作用,对灰霉病菌的抑菌率达54.4%。说明根际细菌RS-3可作为人参常见病害的潜在广谱生防菌进一步开发利用。     

人参AGO1基因的克隆及序列分析

目的: 从人参叶片中克隆Argonaute 1(PgAGO1)的全长基因,并利用生物信息学方法进行分析。 方法: 根据人参EST序列设计特异性引物,采用RACE方法克隆PgAGO1的cDNA全长,并对PgAGO1蛋白的结构进行预测、氨基酸序列多重比对以及构建系统进化树等分析;同时采用实时定量PCR检测PgAGO1基因在人参不同组织根、茎、叶、花和愈伤中表达水平。 结果: 克隆的PgAGO1全长cDNA为3 776 bp,其中包括5'UTR 204 bp,3'UTR 254 bp,基因内部包含完整的开放阅读框,可编码1 105个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量为122.22 kDa,理论等电点pI 9.71;实时定量PCR检测结果表明PgAGO1基因在人参花中的表达量最高,在根中最低。 结论: 从人参叶片中克隆得到PgAGO1的全长cDNA,为进一步研究该基因在人参组织发育中的调节作用打下基础。