测定血浆和淋巴细胞胞内环孢素A结合蛋白的ELISA的建立

测定血浆和淋巴细胞内环孢素A结合蛋白的含量。用鼠源单抗H5 作包被抗体, 并以酶标记兔抗环孢素A结合蛋白(CyP) , 建立了检测CyP的双抗体夹心ELISA, 检测了25 例健康献血员和36 例全身性红斑狼疮(SLE) 患者血浆和淋巴细胞内CyP水平。结果显示, 检测下限为50μg/L, 批内和批间变异系数分别为5-4% 和9-2% , 回收率为95-3% 。献血员血浆CyP水平为(165±80 )μg/L, 淋巴细胞内为(2290 ±380)μg/g 蛋白。血浆和淋巴细胞CyP水平无相关(r= - 0-12) 。SLE患者血浆CyP为(325±420)μg/L, 淋巴细胞内为(2640±650)μg/g 蛋白, 均高于正常对照( P< 0-05) 。活动期SLE 病人血浆和淋巴细胞CyP水平高于非活动期病人(P< 0-05) 。该方法简便、灵敏、特异, 血浆和淋巴细胞内CyP水平与SLE的活动性有一定的联系     

抗人血浆纤维结合蛋白单克隆抗体的初步研究

本文应用人血浆纤维结合蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出一组（５株）人血浆纤维结合蛋白的单克隆抗体。经免疫酶标和免疫组化检测，这组单抗仅特异地与人血浆纤维结合蛋白结合，而与血浆中的其它大分子糖蛋白如纤维蛋白原、凝血酶敏感蛋白和胶原等均无明显的交叉反应。与多种器官，组织的间质可发生性异性反应，而与组织中的细胞则无反应，间接免疫荧光测定，这组抗体与正常人的造血细胞及某些造血细胞系和部分白血病病     

抗人血浆纤维结合蛋白单克隆抗体的初步研究

本文应用人血浆纤维结合蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合制备出一组(5株)人血浆纤维结合蛋白的单克隆抗体(HIFn1-5)。经免疫酶标和免疫组化检测,这组单抗仅特异地与人血浆纤维结合蛋白结合,而与血浆中的其它大分子糖蛋白如纤维蛋白原、凝血酶敏感蛋白和胶原等均无明显的交叉反应。与多种器官、组织的间质可发生特异性反应,而与组织中的细胞则无反应。间接免疫荧光测定,这组抗体与正常人的造血细胞及某些造血细胞系和部分白血病病人的细胞均无交叉反应。竞争试验的结果表明,这组抗体(除HITn5外)识别的抗原位点十分相近。通过双抗体夹心ELISA方法,测定了17例正常人血浆纤维结合蛋白,其平均含量为557±154mg/L。     

SLE患者血浆与淋巴细胞内环孢素A结合蛋白A测定的临床意义

CyP(Cyclophilin)是一类结构高度保守的蛋白质。它分布广泛，存在于从细菌到人的各种组织细胞和细胞的多种亚结构内。CyP A，即M，18000 CyP，主要存在于细胞质中，是CyP中含量最多的一种，约占细胞总蛋白的0．1％。本研究用ELISA双抗体夹心法检测了系统性红斑狼疮(SLE)病人血浆和淋巴细胞内CyP A含量，并分析了其与疾病活动性的关系。     

测定IGF-1及其结合蛋白诊断生长激素缺乏症的价值

目的：探讨胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）诊断生长激素缺乏症的价值。方法：采用免疫放射分析（IRMA）分别检测32例生长激素缺乏症（GHD）、35例特发性矮小症（Idiopathic short-small syndrome,ISS）、30例健康儿童血清IGF-1和IGFBP-3水平,同时比较IGF-1和IGFBP-3诊断GHD敏感性、特异性和实验有效率。结果：GHD组、ISS组、正常对照组血清IGF-1和IGFBP-3水平,两两比较均有显著性差异（P〈0．01,P〈0．05）;IGF-1、IGFBP-3水平与GH激发试验中的GH峰值呈正相关（r=0.312、0.354,P〈0．05）;诊断GHD,IGF-1的特异性为82,9％,敏感性为68．8％;IGFBP-3的特异性为91．4％,敏感性为75．0％,两者比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：IGF-1和IGFBP-3的检测可能可作为筛查和诊断GHD有价值的指标,血清IGF-1、IGFBP-3水平的检测可能可替代GH激发试验。     

中国内江猪头孢唑啉血药浓度及蛋白结合率的研究

目的 :研究中国内江猪肾脏排泄的药代动力学特点及头孢唑啉 (CEZ)血浆蛋白结合率。方法 :选择主要经肾脏排泄的CEZ为模型药 ,采用高效毛细管电泳法测定其血药浓度 ,并计算药代动力学参数 ;采用平衡透析法测定其血浆蛋白结合率。结果 :中国内江猪静注CEZ后 ,其代谢符合二室开放模型。血浆清除率 (Cls)为 8 3 5ml/kg·min 1,消除半衰期 (t1/ 2 β)为 2 7 3 5min。中国内江猪血浆白蛋白浓度为 45 5 4± 1 7 44μmol·L 1,CEZ蛋白结合率为 80 5 9%～ 5 8 2 2 % ,解离常数为 1 6 1 0± 2 67μmol·L 1。结论 :与正常人实验药动学参考值相比较 ,内江猪对CEZ的消除与人具有相似的规律 ,但清除率明显大于人。侧面提示肾脏排泄功能可能较人强。内江猪血浆白蛋白浓度、CEZ蛋白结合率较人低 ,而解离常数较人高 ,表明CEZ与中国内江猪血浆蛋白结合的动态平衡中 ,结合物稳定性差 ,处于游离状态的CEZ较多 ,更易于消除     

类风关患者血浆和关节积液中纤维结合蛋白含量测定

本文运用ＥＬＩＳＡ法分别测定了９名正常献血员、１５例类风关患者血浆及其中３例患者关节积液中的纤维结合蛋白总含量（ＦＮＴ）、细胞型纤维结合蛋白（ＦＮＡ＋）的含量。结果显示类风关患者血浆中ＦＮＡ＋的含量高于对照组（Ｐ＞０．０５）。５３％患者（８例）血浆中ＦＡＡ＋含量高于正常值，而合并有血管炎或干燥综合征的患者ＦＮＡ＋含量明显高于无合并症者（Ｐ＜０．０１）。关节积．液中ＦＮＡ＋与ＦＮＴ的比值明显高于血浆中ＦＮＡ＋与ＦＮＴ比值，结果提示，在类风关的病变过程中，关节局部有ＦＮＡ＋生物合成的加快，部分ＦＮＡ＋进而进入血液循环，导致血浆中这一型纤维结合蛋白含量的增高。     

应用蛋白组方法筛选血浆中乙肝病毒PreS1结合蛋白

目的 筛选血浆中乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白.方法 表达纯化了PreS1-谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合蛋白,利用该蛋白与血浆进行Pull-down实验,并设立GST与血浆Pull-down,GST、PreS1-GST与PBS Pull-down对照,Pull-down 产物进行双向电泳分离(2-DE),差异蛋白点通过质谱鉴定.结果 成功表达纯化出PreS1-GST融合蛋白,通过双向电泳分析发现一个PreS1特异结合蛋白,经质谱鉴定为含锚蛋白重复序列的蛋白57(ANKRD57).结论 锚蛋白重复序列的主要功能是介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用,ANKRD57与PreS1特异结合后的生理功能值得深入研究.     

肝硬化患者血浆纤维结合蛋白和纤维蛋白原检测的临床意义

据文献报道,肝病患者血浆中纤维结合蛋白(FN)和纤维蛋白原(Fib)均有不同程度的改变。而有关肝硬化患者血浆中FN、Fib含量的变化报道不多。为此,我们进行了探讨,现将结果报告如下。     

脂肪酸结合蛋白的研究

脂肪酸结合蛋白(FABP)是一族多源性的小分子胞内蛋白质,广泛存在于哺乳动物体内的多种细胞。它在长链脂肪酸的转运、代谢调节中扮演着一个重要角色。脂肪酸结合蛋白的异常还可能与心肌肥大、心肌缺血、冠心病、急性和慢性酒精中毒、糖尿病以及癌症等有关。     

视神经损伤后猴视网膜神经元钙结合蛋白免疫活性的变化

用免疫组织学方法观察了成年猴视网膜神经元在视神经切断后钙结合蛋白活性的变化。结果显示视网膜神经元变性和死亡主要发生在损伤后１个月内，表现为节细胞层、神经层及内核层阳性产物丢失。     

CAAT／增强子结合蛋白在IL—6调节血管紧张素原基因表达中的作用

目的血管紧张素原是血管活性多肽－血管紧张素Ⅱ的唯一前体，又是急期蛋白之一。因此，研究ＩＬ－６调节血管紧张素原基因表达对阐明人体感染时血浆血管紧张素Ⅱ水平增加致高血压有重要意义。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术检测了ＩＬ－６刺激的肝癌细胞Ｈｅｐ３Ｂ中血管紧张素原ｍＲＮＡ，并且进一步通过ＤＮＡ－蛋白质电泳泳动漂移、ＤＮＡ重组和瞬时转染技术分析了人血管紧张素原基因５′端侧翼序列－５６８位置的一个ＩＬ－６反应元件同源序列（ＨＡＧＩＬ－６ＲＥ）。结果ＩＬ－６使血管紧张素原ｍＲＮＡ明显提高，位于血管紧张素原基因启动子中的ＨＡＧＩＬ－６ＲＥ结合于转录因子ＣＡＡＴ／增强子结合蛋白（Ｃ／ＥＢＰ）；将多拷贝的ＨＡＧＩＬ－６同ＴＫ核心启动子连接，再与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）基因融合，构成异源表达载体，转染ＨｅｐＧ２细胞，发现ＩＬ－６增强Ｃ／ＥＢＰα的作用活性。结论Ｃ／ＥＢＰ在ＩＬ－６诱导血管紧张素原基因表达中具有调节作用。     

应用Southwestern印迹技术和原位杂交技术对大鼠DNA结合蛋白的研究

用Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术和原位杂交技术，对大鼠肝细胞ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）的组成成分，大鼠周围血白细胞、腹腔肥大细胞和肝细胞的ＤＢＰ形态学定位进行了研究。结果表明，以λＤＮＡ探针检测的肝细胞核和胞质的ＤＢＰ均比鼠ＤＮＡ探针检测的信号强，提示λＤＮＡ较鼠ＤＮＡ具有较多的ＤＢＰ结合位点。这两种探针所检测的ＤＢＰ，除分子量较高和较低的ＤＢＰ仅位于胞核以外，胞核和胞质中所含的ＤＢＰ分子量相似。     

慢性肝脏疾病中CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT细胞亚群的变化研究

目的探讨CD3^-CD161^＋NK、CD3^＋CD161^＋NKT细胞在慢性肝炎／肝硬化及肝细胞癌患者肝脏组织及外周血中表达及意义。方法利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎／肝硬化患者肝脏组织及外周血、15例正常肝脏组织、48例正常人外周血中的CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT进行定量分析。结果慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（13．4±1．3）％]和肝细胞癌癌周组CD3^-CD161^＋NK细胞[（16．7±4．8）％]及远离肝癌组的肝脏组织CD3^-CD161^＋NK细胞[（22．0±4．4）％]与正常肝脏组织CD3^＋CD161^＋NK细胞[（35．1±7．2）％]相比,肝细胞癌癌周肝脏组织内含量最低（t值分别为2．301、2．137、2．034,P〈0．05）;外周血中肝细胞癌组CD3^-CD161^＋NK细胞f（11．6±6．3％）]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（14．7±6．2）％]与慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（10．8±1．7）％]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（12．5±0．8）％]、正常对照组CD3^＋CD161^＋NK细胞[（7．5±0．8）％]、CD3^-CD161^＋NKT细胞[（13．8±1．7）％]相比肝癌组CD3^-CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．134,2．099,P〈0．05）,肝癌组CD3^＋CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．125,2．154,P〈0．05）。结论由于NK细胞及NKT细胞数量减少或／和活性降低,使肿瘤细胞逃逸了免疫监视,可能促进了肿瘤的发生、发展及转移。     

来自P53蛋白序列的合成肽与HLA—A201分子的亲和性研究

利用一株人的抗原提呈缺陷株１７４ＣＥＭ－Ｔ２作为抗原提呈细胞，通过检测合成肽体外诱导１７４ＥＣＭ－Ｔ２细胞表面ＨＬＡ－Ａ２０１分子的表达进行亲和性分析。本研究对于指导肝癌及乙肝的治疗性合成肽疫苗的开发具有一定意义。     

~3H—酪氨酸与大鼠几种组织的细胞膜制备物的结合

将大鼠不同组织的细胞膜制备物与~3H-酪氨酸在24℃下孵育5 min,结果在肝脏、肾脏、脾脏、睾丸、黄体、垂体和肾上腺均发现了酪氨酸的高亲合力和低亲合力两类结合位点;在子宫、肌肉和下丘脑仅有低亲合力结合位点。这提示酪氨酸可能在多种组织发挥调节作用。     

14-3-3蛋白各亚型在大鼠黑质和PC12细胞中的分布

本实验采用免疫组织化学、免疫荧光组织化学和免疫印迹技术对14-3-3蛋白各亚型在大鼠黑质(SN)和PC12细胞中的分布情况进行了研究。在大鼠黑质内,免疫组化和免疫荧光结果显示14-3-3蛋白的γ、ε、θ、ζ四个亚型呈阳性反应,而β和η亚型未见明显阳性反应;在PC12细胞中,6个亚型均呈免疫荧光阳性反应;在黑质中,Westernblot结果显示14-3-3各亚型蛋白表达的相对水平为ε>γ>ζ>θ;而在PC12细胞中各亚型的表达水平为γ>ε>β>ζ>η>θ。本实验的结果提示ε、γ、ζ和θ亚型可能在黑质中发挥主要作用。本研究的结果为研究14-3-3蛋白在Parkinson病中的作用提供了形态学依据。     

脑组织修复与3H—TdR掺入之间的关系

目的:研究脑组织修复与~3H-TdR掺入之间的关系。方法:昆明小鼠25只,20只制成脑损伤模型,分别于术后3天,1、2、3周取损伤部位脑组织,进行~3H-TdR(氚标胸腺嘧啶核苷)放射活度测定。5只作对照。结果:术后3天和1周~3H-TdR液闪计数分别为4592±2002和4111±2234,对照组为1576±96。两组间有明显差异(P<0.01;P<0.05)。结论:伤后脑组织摄取~3H-TdR以3天至1周后最多。     

溴氰菊酯对淡色库蚊卵黄蛋白影响的研究

淡色库蚊经亚致死剂量溴氰菊酯（１５ｐｐｍ，０．１μｌ／只）处理后，与正常蚊相比，其卵黄蛋白含量明显降低（Ｐ＜００１）。双扩实验表明：用正常蚊卵黄蛋白免疫家兔产生的血清抗体与正常蚊和药物处理蚊的卵黄蛋白反应后出现两条相同的沉淀线；用正常纹和药物处理蚊的等量卵黄蛋白混合物免疫小鼠，产生的抗血清与两类蛋白反应后则出现一条相同的沉淀线，这表明正常蚊与药物处理蚊的卵黄蛋白的抗原成分是相同的。电泳结果也表明两类卵黄蛋白的成分基本一致。上述结果说明溴氰菊酯仅对淡色库蚊卵黄蛋白的含量影响较大，而对蛋白成分没有明显影响。     

信号转导子与转录激活子3蛋白在金黄地鼠视网膜生后早期发育过程中的表达

目的 观察信号转导子与转录激活子3(STA13)蛋白在金黄地鼠视网膜生后早期发育过程中的表达。方法 STA13蛋白免疫细胞化学染色和Westem免疫印迹方法结果生后发育早期整个视网膜神经层均有STA13阳性产物分布,以视网膜节细胞层(GcL)、内网层(IPL)和成神经细胞层(NBL)的内层更明显,随着发育进程,其阳性产物逐渐局限于视网膜节细胞的胞浆和胞核;蛋白半定量结果显示,生后1周内STA13蛋白表达水平较高,之后逐渐降低,成年后最低。结论 STA13蛋白的表达及变化可能与视网膜生后早期发育密切相关。