肉鸡白念珠菌病常用实验诊断方法比较研究

目的 探究肉鸡白色念珠菌病简便快速诊断方法。方法 对50例来自不同鸡场的临床疑似样本分别采用KOH镜检法、改良KOH镜检法、分离纯化与形态观察法、TTC显色培养法、组织切片法和巢式PCR法进行试验。结果 上述方法的样本检测阳性率分别为62.0%(31/50)、78.0%(39/50)、82.0%(41/50)、82.0%(41/50)、86%(43/50)和88.0%(44/50),耗时分别为1~2 h、1~2 h、7~8 d、6~7 d、8~10 d和7~8 h。结论 通过比较各种常用方法的优缺点,建议采用巢式PCR法与改良KOH镜检法相结合作为肉鸡白念珠菌病简便快速诊断的优选方案,其特异性强,敏感度高,耗时少,并兼顾病原侵染状态的直观性。     

2014—2020年四川省疟疾诊断参比实验室 病例复核结果分析

目的　对2014—2020年四川省疟疾报告病例检测结果进行复核,评价四川省疟疾诊断参比实验室疟疾诊断能力。方法　对2014—2020年四川省疟疾诊断参比实验室收集的疟疾报告病例血液和血涂片样本采用镜检和巢式PCR法进行复核,对复核结果进行比较分析。结果　2014—2020年四川省疟疾诊断参比实验室累计复核1 710例疟疾报告病例样本,其中阳性样本复核1 634例,阳性符合率为95.56%（1 634/1 710）;疟原虫虫种完全一致1 508例,虫种一致率为92.29%（1 508/1 634）;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫检测符合率分别为99.48%（961/966）、97.07%（430/443）、83.05%（98/118）和67.86%（19/28）;镜检法与巢式PCR检测方法一致率为91.81%（1 513/1 648）。结论　四川省基层医疗机构镜检人员的疟原虫镜检能力仍有不足;今后应继续加强镜检人员培训工作,以提高消除后疟疾再传播监测工作能力。     

FTA-巢式PCR方法鉴定溶组织内阿米巴原虫的初步研究

目的建立一种简便,快速的FTA-巢式PCR方法用于鉴定粪便中溶组织内阿米巴原虫(Entamoeba histolytica, E.h).方法 收集门诊腹泻病人新鲜粪便,用光学显微镜进行初步检查.用FTA卡抽提镜检结果为阳性的粪便DNA,根据溶组织内阿米巴原虫的SSU -rRNA序列设计引物,进行巢式PCR扩增,对PCR产物进行琼脂糖凝胶分析,并对阳性产物进行测序和序列比对分析.结果 根据光学显微镜检测结果,挑选了44例镜检结果为阿米巴原虫阳性的腹泻病人粪便.经FTA-巢式PCR扩增,其中20例样本可扩增出427 bp左右的目的条带,目的条带的测序和序列分析结果表明为溶组织内阿米巴原虫.镜检方法与巢式PCR方法的阳性符合率为45.45%(20/44),将E.h与形态学相似的其他内阿米巴原虫进行了鉴定和区分.结论 本研究建立的FTA-巢式PCR方法具有简单,快速,准确等优点,为临床检验和流行病学调查中E.h的鉴别诊断提供了新的技术方法.     

检测肺孢子菌巢式PCR方法的建立及其敏感性和特异性研究

目的建立检测肺孢子菌基因的特异性mtLSU巢式PCR方法,研究其在实验动物肺孢子菌感染模型的检测效果及其敏感性和特异性,以期为临床提供检测肺孢子菌定植或感染的新方法。方法依据肺孢子菌线粒体大亚基保守序列设计巢式PCR内、外引物,建立并优化检测肺孢子菌基因的巢式PCR体系。以免疫抑制诱导肺孢子菌感染大鼠模型为检测对象,比较mtLSU巢式PCR与六亚甲基四胺银（GMS）染色法检测肺孢子菌的阳性率及符合率。对阳性标本进行DNA纯化,构建分子克隆,采用倍比稀释法检测mtLSU巢式PCR的敏感性;以呼吸道感染常见的8种病原体（光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、白色念珠菌、克柔假丝酵母菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、支原体）为对照,检测方法的特异性。结果肺印片GMS染色镜检实验组大鼠,14只查到肺孢子菌包囊,检出率为70.0%（14/20）,对照组检出率为0（0/20）。用mtLSU巢式PCR均能检测实验组大鼠肺孢子菌基因,阳性率为100%（20/20）,对照组均为阴性。mtLSU巢式PCR法阳性率与GMS染色法比较差异有统计学意义（P〈0.05）。敏感性检验结果表明,mtLSU巢式PCR检测最小量为366fg的肺孢子菌基因。特异性检测显示,其他8种呼吸道常见病原体的mtLSU巢式PCR的扩增结果均为阴性。结论成功建立了检测肺孢子菌基因的mtLSU巢式PCR方法,动物模型检测结果表明该方法的敏感性高、特异性强,有望应用于临床患者标本中肺孢子菌的基因检测。     

2017-2019年湖北省疟疾诊断参比实验室病例复核结果分析

目的　分析湖北省疟疾诊断参比实验室对网络报告疟疾病例的复核结果,为进一步提高全省疟疾防控水平提供科学依据。 方法　由湖北省疟疾诊断参比实验室对全省2017—2019年网络报告疟疾病例样本采用镜检和巢式PCR法进行复核,并分析病例和虫种等符合情况。 结果　2017—2019年,湖北省共有网络报告疟疾病例410例;湖北省疟疾诊断参比实验室共复核407例样本,确诊疟疾病例374例,总体疟疾诊断阳性符合率为91.89%（374/407）、虫种符合率为89.04%（333/374）;不同市（州）报告疟疾病例复核阳性符合率为50.00%～100.00%、虫种符合率为66.67%～100.00%,差异均有统计学意义（χ2 = 40.46、42.30,P均 < 0.01）;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫复核虫种符合率分别为95.80%、100.00%、58.33%和51.92%,差异有统计学意义（χ2 = 76.66,P < 0.01）;镜检法与巢式PCR法检测结果一致率为89.83%（362/403）。结论　湖北省各级医疗卫生机构疟疾诊断质量总体较高,但部分地区诊断能力仍有待提高。     

荧光定量PCR在疟疾实验室诊断中的应用

分别采用镜检、巢式PCR和荧光定量PCR等3种检测方法对收集到的79份疟疾血样进行检测,并对检测结果进行比较分析。结合患者临床症状和3种检测结果, 79份血样最终确诊74份为疟原虫阳性,阳性率为93.7%(74/79),其中镜检阳性检出率为82.3%(65/79),巢式PCR阳性检出率为82.3%(65/79),荧光定量PCR阳性检出率为93.7%(74/79),荧光定量PCR阳性检出率高于其他两种方法(P 0.05)。镜检和巢式PCR的一致率为78.4%(58/74),镜检和荧光定量PCR的一致率为63.5%(47/74),巢式PCR和荧光定量PCR的一致率为83.8%(62/74)。相比镜检和巢式PCR,荧光定量PCR敏感性和检出率更高,且用时更短。     

河南省输入性卵形疟的实验室检测分析

目的对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果。方法采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率。结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1%;wallikeri亚种感染67例,占60.9%。5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100%,镜检法为94.5%,RDT-Wondfo法为51.8%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9%,RDT-CareStart法为25.5%,差异有统计学意义(χ2=205.940,P0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7%,镜检法为90.7%,RDT-Wondfo法为46.5%,RDT-CareStart法为18.6%,差异有统计学意义(χ2=109.700,P0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100%,镜检法为97.0%,RDT-Wondfo法为55.2%,RDT-CareStart法为29.9%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5%,差异有统计学意义(χ2=190.292,P0.05)。结论巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同。     

巢式PCR技术在输入性疟疾监测中的应用

目的评价巢式PCR技术在高疟区回国人员疟疾监测中的应用价值。方法收集2007-2009年自非洲、东南亚等疟疾流行区回国人员中疟疾现症患者及其他无症状高危人群的滤纸血,采用巢式PCR技术检测疟原虫ssRNA基因,并与血片镜检结果进行比对。结果巢式PCR检测53例血检确诊的疟疾现症患者均为阳性,两法的阳性符合率为100%,其中PCR检出恶性疟、间日疟混合感染6例,高于镜检检出的3例。检测疟疾流行区返回的高危人群157人,镜检阳性3例,阳性率1.91%;巢式PCR阳性5例,阳性率为3.18%;其中,镜检阳性、巢式PCR阴性的1例,镜检阴性、巢式PCR阳性的3例,两种方法的阳性符合率为66.7%,阴性符合率为98.1%,两法检测结果一致的血样占检测血样的97.5%。结论巢式PCR技术对输入性疟疾的监测具有实用价值。     

应用巢式PCR评价低流行区疟疾诊断结果

目的初步评价大连市疾控人员对疟疾的诊断能力,为低流行区疟疾诊断方法的选择提供理论依据。方法收集2010--2012年大连市上报的27例疟疾阳性病例的血液样本．应用巢式PCR（nest—PCR）方法对诊断结果进行复核：以复核结果为标准,比较镜检和快速诊断试剂盒（rapid diagnosistest．RDT）方法的检测敏感性及对虫种鉴定的正确率。结果27份样本的巢式PCR结果为恶性疟23份,间日疟2份,卵形疟l份,阴性1份,无混合感染。镜检对阳性样本的敏感度为76．9％（20／26）,远低于RDT方法的96．2％（25／26）;镜检和RDT联合使用,敏感度可达100％。对虫种的鉴别,镜检对阳性样本的正确检测率为50％（13／26）：RDT方法仅能鉴别恶性疟和非恶性疟．对恶性疟阳性样本的正确检测率为100％（23／23）。结论采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性。建议在有条件的疾控单位建立人体疟原虫的分子检测体系．更有效地防止对疟疾病例的漏诊和误诊。     

河南省输入性卵形疟的实验室检测分析北大核心CSCD

目的对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果。方法采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率。结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1%;wallikeri亚种感染67例,占60.9%。5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100%,镜检法为94.5%,RDT-Wondfo法为51.8%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9%,RDT-CareStart法为25.5%,差异有统计学意义(χ2=205.940,P<0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7%,镜检法为90.7%,RDT-Wondfo法为46.5%,RDT-CareStart法为18.6%,差异有统计学意义(χ2=109.700,P<0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100%,镜检法为97.0%,RDT-Wondfo法为55.2%,RDT-CareStart法为29.9%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5%,差异有统计学意义(χ2=190.292,P<0.05)。结论巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同。     

改良加藤厚涂片法和PCR法检测华支睾吸虫感染的 效果比较

目的　比较改良加藤厚涂片法（Kato?Katz法）和PCR法对现场人群粪便样本中华支睾吸虫感染的检出率,为华支睾吸虫感染检测方法的选择提供依据。方法　在2016年广西壮族自治区藤县人体华支睾吸虫感染流行病学调查的基础上,随机抽取133份粪便样本,-20 ℃保存。分别采用Kato?Katz法（1粪3检）和PCR法检测华支睾吸虫感染,比较两种方法对华支睾吸虫感染的检出率,采用Kappa分析评价两种检测方法结果的一致性。结果　133份人群粪便样本中,华支睾吸虫感染总检出率为77.44%（103/133）,其中Kato?Katz法检出率为57.14%（76/133）,PCR法检出率为70.68%（93/133）, PCR法检出率显著高于Kato?Katz法（[χ2] = 26.15,P <0.01）。76份Kato?Katz法阳性粪便样本中,88.16%（67/76）的样本PCR法扩增阳性;57份Kato?Katz法阴性样本中,47.37%（27/57）的样本PCR法扩增阳性。PCR法对每g粪便虫卵数（EPG）> 1 000的粪便样本中华支睾吸虫感染的检出率（94.7%,18/19）高于EPG < 1 000的样本（85.96%,49/57）,但差异无统计学意义([χ2] = 1.05,P = 0.436)。两种方法检出率一致性检验结果一般（Kappa = 0.73）。结论　PCR法对人群华支睾吸虫感染的检出率显著高于Kato?Katz法。建议在华支睾吸虫感染度较轻的地区,采用Kato?Katz法结合PCR法进行检测,以提高检出率。     

我国广西食蟹猴养殖场2种血液寄生原虫感染调查

目的 目的 调查我国广西壮族自治区某食蟹猴养殖场血液寄生原虫感染状况, 为人体血液寄生原虫的防控提供科 学依据。方法 方法 采集广西壮族自治区南宁市某食蟹猴养殖场猴血液样本993份, 全部制作FTA卡样本, 涂制薄血膜550 份。将样本混合, 以巢式PCR及普通PCR方法分别检测FTA卡保存的猴血样本中巴贝虫以及疟原虫。检测阳性组再分 别进行单个样本检测, 阳性样本对应的薄血膜进行姬姆萨染色后再镜检。 结果 结果 经巢式PCR检测, 田鼠巴贝虫检出阳 性率为6.95% （69/993）; 仅1例经PCR检出猪尾猴疟原虫阳性。22份PCR检测巴贝虫阳性的血液样本经染色镜检, 共16 份检出巴贝虫, 其显微镜下观察到红细胞内有环状体, 无疟色素。结论 结论 我国广西地区食蟹猴的田鼠巴贝虫感染率较 高, 其可能在传播中起保虫宿主的作用; 在筛查田鼠巴贝虫低密度感染时, 巢式PCR方法敏感性较高。     

两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析

目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012～2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6%、25.4%、0%和63.4%、29.6%、7%,符合率为81.7%;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100%,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8%、43.8%和10.4%,镜检与巢式PCR符合率为72.9%;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种wallikeri和混合感染分别占80.8%、11.5%和7.7%,检出变种wallikeri总数占卵形疟19.2%。结论巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平。     

捕获和连接探针PCR与巢氏PCR检测疟原虫效果的比较

目的了解捕获与连接探针PCR(CLIP-PCR)对疟原虫的确认诊断效果。方法云南省疟疾诊断参比实验室提供的血涂片镜检阴性和阳性者滤纸血样各70份,分别进行盲法CLIP-PCR和巢氏PCR检测,以巢氏PCR为金标准评价CLIP-PCR的检测效果及检测耗时,血样梯度稀释后测定CLIP-PCR最低检出阈值。结果检测140份血样,2种PCR检出假阳性和假阴性各1例,CLIP-PCR检测疟原虫的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度均为98.57%,kappa值为0.97;CLIP-PCR耗时13.91 h,较巢氏PCR耗时23.47 h缩短40.73%;梯度稀释后重复检测8次,≥3.2个虫/μl血检出率100%,0.32个虫/μl血检出率50%。结论 CLIP-PCR检测疟原虫效果与巢氏PCR相同,重复性良好,更适用于大规模人群筛查。     

提取陈旧阳性血膜疟原虫DNA方法的研究

目的建立一种能够提取陈旧阳性血膜疟原虫DNA的方法,为疟原虫基因溯源研究奠定基础。方法应用DNA抽提试剂盒(QIAampDNA Mini Kit)改良后提取41份吉氏染色镜检阳性血膜的疟原虫DNA,并与Chelex-100和Na2HPO4法进行比较。巢式PCR扩增疟原虫SSU r RNA基因片段,鉴定疟原虫虫种。PCR结果进行测序和序列比对,统计分析20世纪80年代与近10年血膜、不同血膜处理方法以及不同质量血膜的PCR阳性检出率差异。结果改良试剂盒法PCR结果总阳性检出率为70.7%(29/41)。80年代和近10年血膜PCR阳性检出率分别为78.6%(11/14)和66.7%(18/27),两组间差异无统计学意义(χ2=0.63,P0.05)。经去油、脱色处理和未经处理组血膜的PCR阳性检出率分别为62.5%(15/24)和82.4%(14/17),两组间差异无统计学意义(χ2=1.89,P0.05)。质量较好和较差血膜的PCR阳性检出率分别为93.3%(28/30)和9.1%(1/11),两组间差异有统计学意义(χ2=27.59,P0.01)。测序结果表明扩增目的片段与预期结果一致。Chelex-100和Na2HPO4法PCR未能扩增出特异性目的条带。结论试剂盒(QIAampDNA Mini Kit)改良法提取80年代血膜疟原虫DNA可获得较高PCR阳性检出率,且染色剂和镜检油渍对血膜疟原虫DNA提取效果无明显影响。     

环介导等温扩增技术检测蚊体内间日疟原虫子孢子的研究

目的建立一种简便、快速和高敏感度的蚊体内间日疟原虫检测的环介导等温扩增方法（LAMP）。方法针对间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因种属特异性保守区域6个位点设计2对引物,以感染性按蚊、阴性按蚊、恶性疟原虫及正常人血DNA为模板评价LAMP的特异性。将间日疟原虫CSP基因质粒DNA梯度稀释,并与阴性按蚊DNA按1.0μl加1.3×10^6、1.3×10^5、1.3×10^4、1.3×10^3、1.3×10^2、1.3×10^1、1.3×10^0拷贝混合后为模板进行LAMP反应,观察其检测敏感性;将感染性按蚊与阴性按蚊DNA作1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256稀释,然后以稀释样本为模板进行LAMP反应,观察批量检测的敏感性。再用此方法与镜检解剖、巢式PCR同时检测同批次人工感染的67只按蚊,评价其应用价值。结果此法检测感染性按蚊阳性,对照组均为阴性;检测不同比例稀释的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA混合物,最低可检测1.3×10^2拷贝的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA的混合物;检测不同比例感染按蚊与阴性按蚊DNA混合样本,最低可检测出在128个按蚊中有1个感染按蚊的混合样本;用此法检测67只同批次人工感染的按蚊,检出率为47.76%,解剖镜检检出率为25.37%（χ^2=7.24,P〈0.01）,巢式PCR检出率为40.30%（χ^2=0.73,P〉0.05）。以镜检解剖作为金标准,LAMP敏感性为100%,巢式PCR敏感性为100%。结论LAMP检测蚊体内间日疟原虫简便、快速、敏感性高,具有广阔的应用前景。     

基于捕获与连接的探针式PCR矩阵拆分混样检测疟原虫的效果评价

采用基于捕获与连接的探针式PCR(capture and ligation probe-PCR,CLIP-PCR)矩阵拆分混样法和镜检两种方法对100份临床样本进行检测,综合评价CLIP-PCR矩阵拆分混样法对疟原虫的检测效果。从云南省疟疾参比实验室标本库选取93份阴性样本和7份阳性样本,随机混合,采用双盲法进行CLIP-PCR矩阵拆分混样检测,并与镜检法的结果对比分析,通过检出率、灵敏度、特异度、检测时间及检测成本等进行综合评价。7份镜检阳性样本被全部检出,检出率为100%。以镜检为金标准,CLIP-PCR矩阵拆分混样检测灵敏度和特异度均为100%。全部样本的检测时间为5.0 h,较镜检的33.3 h缩短85.0%;检测成本为300元,较镜检的1 000元降低了70.0%。     

抗病毒治疗后低病毒血症患者HIV-1基因型耐药特征分析

目的 分析北京佑安医院ART后发生低病毒血症（LLV）的HIV/AIDS患者病毒亚型及耐药特征。方法收集2020年1月至2021年6月期间在北京佑安医院性病艾滋病门诊常规接受ART≥6个月且发生LLV的HIV/AIDS患者随访3个月后的外周静脉血,通过对分离的血浆进行超速离心后提取HIV RNA,利用反转录-巢式荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）技术扩增pol基因区,测序成功后进行基因亚型和耐药突变分析。结果 共筛查了10 693例患者,LLV患者225例,LLV发生率2.1%。纳入研究期间成功留血液样本的患者134例,成功收集73份VL在50～999拷贝/mL的血浆样本。扩增得到51条序列,扩增成功率69.9%。51条序列来自41例患者,CRF01＿AE亚型最常见（43.9%,18/41）,其次为CRF07＿BC亚型（19.5%,8/41）,B亚型（19.5%,8/41）和C亚型（7.3%,3/41）。19例患者发现了耐药突变,整体耐药突变率为46.3%(19/41)。其中,以NNRTIs相关耐药突变为主,占36.6%(15/41),最常见的耐药突变位点为V106I/M和V179D...     

兔须癣毛癣菌感染样本常规诊断与定量PCR诊断的比较研究

目的为探讨须癣毛癣菌快速,敏感,特异的诊断方法.方法 采集患兔临床样本63例,分别进行培养法,镜检法和定量PCR法诊断,比较这些方法的敏感性,特异性,阳性预测值和阴性预测值.结果 显示样本培养法,镜检法和定量PCR法的阳性率分别为65%,73%和86%;与常规方法(培养法和镜检法)相比,定量PCR法敏感性和阴性预测值均为100%,高于培养法(77.35%和45.45%)和镜检法(86.79%和64.17%),而特异性(90.90%对100%~100%)和阳性预测值(90.90%对100%~100%)两种方法无明显差异.结论 培养法特异,但敏感性差,耗时长,有假阴性;镜检快速,但不特异,敏感性低;而定量PCR快速,敏感,又特异,可以替代镜检用于临床样品的诊断,但不能替代培养法.     

荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

目的建立检测肺炎支原体的荧光定量PCR法,并与市售试剂盒和传统巢式PCR法的检测性能进行比较。方法设计针对肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征毒素基因的特异性引物,构建含相应目的片段的质粒作为标准品,采用SYBR Green染料法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线。通过检测其他细菌和170例儿童临床咽拭子样本,比较新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法在临床应用中的差异。结果新建荧光定量PCR法和巢式PCR法能够检出的肺炎支原体标准株DNA最低模板量为10拷贝,市售试剂盒检出最低模板量为102拷贝。在特异性实验中3种方法均可区分肺炎支原体和其他菌种。在检测的170例儿童临床咽试子样本中,新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法的阳性率分别为60.00%、50.00%和53.53%。新建荧光定量PCR法与市售试剂盒的结果具有高度相关性(r=0.953),2种方法的总符合率为86%,Kappa值为0.729。新建荧光定量PCR法与传统巢式PCR法的结果总符合率为90%,Kappa值为0.797。结论新建荧光定量PCR法与市售试剂盒相比灵敏性更高,特异性相同,成本低;与传统巢式PCR法相比操作简单,耗时短且污染少,具有良好的科研和临床应用前景。