HIV抗体快速诊断室内质控品的制备及应用

目的研制艾滋病病毒(HIV)抗体快速诊断的室内质控品。通过室内质控品的使用,保证HIV抗体快速诊断的检测质量。方法用HIV抗体阴性血浆倍比稀释HIV抗体阳性血浆,寻找弱阳性的稀释倍数,制备室内质控品,评价质控品的稳定性、均一性。在检测过程中加入自制的HIV抗体快速诊断室内质控品,并建立LeveyJennings(L-J)质控图进行分析。结果 HIV抗体阳性样本按照1∶256的稀释度制备本实验室室内质控品,其均一性、稳定性均符合要求。建立质控图均值的GOD值为2.06,标准差为0.39。样本加样量、检测温度、检测时间及更换试剂盒等发生变化时,在质控图中均发生告警或失控状态,能及时发现实验室存在的误差并对失控进行处理。结论自制的HIV抗体弱阳性室内质控品,用于本实验室HIV抗体快速诊断的质量控制是经济可行的,可以满足实验室常规检测的需求。     

HIV-1 DNA定量检测干血斑室内质控品的制备及应用

目的研制用于艾滋病病毒(HIV)脱氧核糖核酸(DNA)(HIV-1 DNA)定量检测的室内质控品,通过室内质控品的使用,保证HIV-1 DNA定量检测的实验室质量。方法用HIV阴性全血倍比稀释8E5细胞,滴加到滤纸片上,制备成干血斑(DBS)。评价其均一性与稳定性。在日常HIV-1 DNA定量检测过程中,同时检测DBS室内质控品,并建立Levey-Jennings(L-J)质控图进行分析。结果 1×10~6个/mL的8E5细胞经过1 000倍稀释后制备成本实验室HIV-1 DNA定量检测的DBS室内质控品,其均一性与稳定性均符合要求。建立的L-J质控图,HIV-1 DNA log的均值为2.99,标准差为0.13,精密度为4.24%。当样本的加样量、检测人员等发生变化时,均发生失控状态。结论自制的DBS室内质控品用于本实验室HIV-1 DNA检测的质量控制是可行的,可以满足实验室常规检测内部质控需求。     

输血相容性检测试验室内质控品的制备与可行性分析

目的:探讨利用基层输血科现有资源配制输血相容性检测试验室内质控品,建立符合本实验室的质控方法。方法:回顾性分析2015-06-2016-06配制的输血相容性检测室内质控品(ABO血型鉴定、RhD血型鉴定、不规则抗体筛查、交叉配血)的稳定性和均一性,并与商品化室内质控品结果比较,评价自制室内质控品的临床可行性。结果:自制输血相容性检测室内质控品与商品化质控品在批内稳定性及重复性检测、批间检测差异均无统计学意义(P0.05)。结论:自制输血相容性检测室内质控品批间差小,抗原抗体反应稳定性好,可以满足输血相容性检测室内质量控制的基本要求。     

尿液HIV-1抗体检测实验室能力验证质控品的制备及应用

目的研发制备尿液1型艾滋病病毒(HIV-1)抗体检测实验室能力验证质控品,并应用于艾滋病检测实验室的尿液HIV-1抗体检测能力的验证工作,提高艾滋病检测实验室对尿液HIV-1抗体的检测水平。方法对20份HIV-1抗体阳性和8份HIV-1抗体阴性的尿液样本,用酶联免疫吸附试验筛选后,选择3份阳性样本和2份阴性样本,制备能力验证质控品,并对能力验证质控品进行稳定性、均一性评价。将能力验证质控品分发给参加尿液HIV-1抗体检测的实验室,对其检测结果进行分析,评价各实验室的尿液HIV-1抗体检测能力。结果能力验证质控品均一性试验中,5份样本的变异系数(CV)分别为5.40%、27.96%、12.04%、20.24%、5.77%。能力验证质控品稳定性试验中,尿液质控品在37℃放置时,5份样本的CV值分别为5.62%、9.19%、7.98%、57.81%、7.43%;在20℃放置时,5份样本的CV值分别为18.57%、3.41%、5.21%、43.93%、5.58%;在4℃放置时,5份样本的CV值分别为7.67%、14.35%、9.61%、6.35%、9.43%;在-20℃放置时,5份样本的CV值分别为25.83%、17.29%、35.97%、20.73%、22.22%。共12家艾滋病检测实验室参加本次尿液HIV-1抗体检测能力验证,得分情况:11家实验室得分为100分,1家实验室对两份样本检测错误,得分为60分;检测数值(S/CO)偏离情况:4家实验室对阳性质控检测结果有偏离,3家实验室分别对3份阳性样本(164 101、164 103和164 105)检测结果有偏离。结论尿液HIV-1抗体能力验证质控品具有较好的稳定性、均一性,可以用于实验室能力验证。参加此次尿液HIV-1抗体能力验证的实验室结果判定大都正确,但是个别实验室在检测数值(S/CO)方面存在偏离。     

尿液HIV-1抗体快速检测(胶体金法)实验室能力验证质控品的制备与应用

目的研究制备尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)实验室能力验证质控品,并应用于艾滋病检测实验室的能力验证工作,以评估实验室尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)的能力,为进一步推广尿液HIV-1抗体自我检测提供依据。方法对10份HIV-1抗体阳性和5份HIV-1抗体阴性尿液样本用酶联免疫法和胶体金免疫层析试验筛选后,选择3份阳性和2份阴性样本,制备能力验证质控品5个批号;每批号质控品随机抽取10管(0.5mL/管)进行均一性评价;质控品在37℃下放置1～7天,进行稳定性评价;将能力验证质控品应用于20家实验室的能力验证中,收集分析检测结果,评价各实验室的尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)的能力。结果质控品(编号194106-194110)均一性评价结果表明,酶联免疫法(OD值)与胶体金法(GOD值)CV%值分别为26.9%、4.3%、4.4%、19.8%、5.0%和0、11.2%、9.0%、0、9.5%,单因素方差分析检测值均无差异(P0.05);质控品(编号194106-194110)37℃放置1～7天后的稳定性评价结果表明,酶联免疫法和胶体金法的定性检测结果均与预期结果一致,酶联免疫法(OD值)与胶体金法(GOD值)CV%值分别为40.2%、3.4%、2.3%、26.3%、2.2%和0、16.7%、9.3%、0、5.8%,OD值与GOD值的t检验分析中,3支样本无差异(P 0.05),2支样本有差异(P 0.05);参加能力验证的20家实验室对5支HIV-1抗体质控品的快速检测(金标法)结果均与预期结果一致,得分均为100分。结论尿液HIV-1抗体(金标法)能力验证质控品具有良好的均一性和稳定性,且参加本次尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)能力验证的实验室均具备准确检测能力。     

基层实验室HCV抗体检测能力验证评估

目的为了了解县级以上检测实验室HCV抗体检测能力,研发制备HCV抗体能力验证质控品,开展基层实验室HCV抗体检测能力的室间比对与评估工作。方法研发制备均一稳定的HCV抗体检测质控样品,组织全国县级以上75家HCV抗体检测实验室开展能力验证,各实验室按照要求在规定时间内完成质控品检测并按时回报结果,以全部回馈结果确定质控品预期结果,以检测水平评价标准差系数(SDI)评估各实验室检测能力。结果质控品190906～190910均一性与稳定性检验均符合要求;完成能力验证结果回报的70家实验室中,30家(42.86%)得分100分,39家(55.71%)得分80分,1家(1.43%)得分20分;使用间接ELISA法和化学发光法检测质控品的结果在不同实验室间差异较大[变异系数(CV)分别为33.92%、117.65%、125.77%、125.00%、32.09%和67.56%、129.15%、35.53%、133.72%、73.80%];间接ELISA法、化学发光法和胶体金法对弱阳性190908的检测准确性偏低(分别为47.50%、50.00%、27.27%);SDI值显示部分实验室可能存在系统误差和随机误差。结论本研究制备的HCV抗体能力验证质控品能够在能力验证工作中稳定有效地发挥作用,参加此次能力验证的实验室普遍具有HCV抗体检测能力,部分实验室可能存在系统误差和随机误差问题。     

HIV初筛检测的室内质控结果分析

目的对联合应用＂即刻法＂和Levery-Jenning（L-J）质控图进行HIV初筛检测室内质控及其影响因素研究。方法利用检测数据做＂即刻法＂和L-J质控图,对质控结果进行分析。结果通过应用＂即刻法＂和L-J质控图质控方式,发现检测失控;仪器设备、检测试剂、实验室操作、环境温湿度、质控品等各种因素,均可引起HIV初筛检测失控。将这些影响因素控制在正常范围内,则检测结果在控制范围内。结论联合应用＂即刻法＂和L-J质控图,是一种较好的HIV初筛检测室内质控方法。     

抗-A、抗-B效价质控品的制备及初步应用

目的:制备抗-A、抗-B效价检测质控品并进行初步应用。方法:倍比稀释抗-D单克隆抗体,确定抗体最佳稀释度,实验组取质控品1.56μL加入200μL血清中,对照组取1.56μL NS加入200μL血清中,根据凝集强度判断实验是否在控,并比较2组抗体效价差异。取不同时间点冷藏保存的质控品,检测其IgM、IgG抗-D抗体效价,评估质控品性质是否稳定。结果:质控品IgM抗体效价为1∶512,最佳稀释度为1∶256,实验组、对照组抗-A、抗-B效价差异无统计学意义,不同时间点保存的质控品抗体效价差异无统计学意义。结论:自制抗体效价质控品具有良好稳定性与可靠性,可有效发现IgM抗体破坏不完全、稀释度误差、凝集度判断标准不同造成的效价检测失控问题。     

HIV-1新发感染实验室检测能力的评估

目的评估各实验室利用限制性抗原亲和力酶联免疫试验(LAg-Avidity EIA)检测1型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染的能力,提高我国HIV-1新发感染实验室检测的准确性。方法按照GB/T 27043-2012、CNASGL02:2014、CNAS-GL03:2015文件,选择8份临床样本,制备能力验证质控品并进行均一性和稳定性检验,分发给各实验室,组织实验室能力验证和进行结果分析。结果能力验证质控品均一性分析表明,各组质控品的CV值15%,单因素方差分析质控品无统计学差异;稳定性检验结果,各组质控品室温放置一周后,检测结果与均一性结果经t检验无差异。此次制备的能力验证样本均一性和稳定性良好,满足能力验证要求。参加能力验证的35家实验室,均按期回报结果,34家试剂盒内控有效,检测结果有效率97.14%;31家能够正确判定8支能力验证样品的感染状态,满意率88.57%,4家实验室误判1例样本;在正确判定能力验证样本的实验室中,有4家实验室各存在1例离群的ODn值。结论参加能力验证的多数实验室可以准确完成新发感染检测,但检测中仍存在一些问题,应加强对相关实验室的培训,提高各实验室HIV-1新发感染检测能力。     

日本血吸虫病免疫检测试剂IgG抗体冻干质量控制品的制备

目的 制备日本血吸虫病免疫检测试剂IgG抗体质量控制品。 方法 收集湖北省血吸虫病流行区粪检筛查血吸虫感染病人血清和无疫水接触史、无血吸虫感染史且粪检阴性人群血清,用取得中华人民共和国医疗器械注册证的检测试剂进行检测,制成冻干质量控制品。 结果 共筛选出12份阳性质控品、1份灵敏度质控品、1份精密度质控品和10份阴性质控品;阳性质控品根据ELISA法检测血清效价不同,分为强、中、弱阳性质控品。经12个月实际储存条件及破坏稳定性实验,该质控品稳定性可达1年。 结论 所制备的冻干质控品使用方便,结果稳定,可以满足日本血吸虫病诊断试剂实验室质量控制需求。     

HIV-1核糖核酸病毒载量检测室内质量控制方法的建立和应用

目的通过自制1型艾滋病病毒(HIV-1)核糖核酸(RNA)质控品绘制Levey-Jennings(L-J)质控图,建立HIV-1RNA病毒载量检测室内质量控制方法,力求保证检测结果的准确性和有效性。方法用检测值为检测限以下和50 000拷贝/mL的血浆样品配制质控品。共配制三批次,运用单因素ANOVA分析三批次质控品间的差异。以第一批次10支质控品的检测值和Lg值为基线数据建立两个质控图,剩余质控品每次测定血浆样品时自带一支,最后将检测值绘制到质控图中,观察它们在质控图中的波动范围、计算可控率和变异系数,然后比较分析两个质控图的可行性。结果三批次自制质控品间无差异性,两两比较P均0.05。在以测定值建立的质控图中,20支质控品17支在控,3支失控,可控率为85.0%,变异系数(CV)为11.5%。以Lg值建立的质控图中18支在控,2支失控,可控率为90.0%,CV值为1.4%。结论通过自制质控品的Lg值绘制质控图,建立的HIV-1RNA病毒载量检测的室内质量控制方法可信、可行,能够及时发现检测中的无效值,保证检测结果准确、可靠。     

山东省卫生防疫系统HIV初筛检测实验室质量评估及培训情况调查

做好HIV初筛,是对HIV检测实验室的基本要求。为了搞好全省各级卫生防疫站HIV初筛工作,1997年我站组织全省地市级卫生防疫站的18个HIV初筛实验室进行了质量评估及技术培训,现报告如下。l方法1．l质控评估标准质控样品由山东省卫生防疫站艾滋病监测中心制备,每组标本中有10份血清,其中阳性4份;弱阳性3份（由阳性血清稀释）;阴性3份。统一分发各地市,l个月内将检测结果寄回本中心。检测评比总分35分。1．2试验方法选用目前HIV实验检测WV抗体常用的ELISA、PA、RWB3种方法进行质量评估。1．3实验操作技能测试对本省18个HIV初…     

定值核酸质控品用于血液核酸筛查分析灵敏度验证结果分析

目的:通过采用定值核酸质控品进行相应稀释形成低、中、高3种浓度规格的样本进行核酸混样检测,以验证核酸筛查系统分析灵敏度是否符合要求。方法:通过对购置的商品化定值核酸室内质控品进行适当稀释制备成相应核酸检测系统检测下限(LOD)0.5倍LOD、1倍LOD、4倍LOD 3种低、中、高浓度规格,进行和献血者检测模式相同的混样检测,统计3种规格下HBV-DNA、HCV-RNA、HIV 1-RNA阳性检出率,阳性结果 Ct值平均值、标准差、变异系数以评价验证选用核酸检测系统的分析灵敏度。结果:0.5LOD范围的样本HBVDNA、HCV-RNA、HIV 1-RNA阳性检出率分别达50%、100%、95%,1LOD和4LOD范围的样本HBV-DNA、HCV-RNA、HIV 1-RNA检出率均达到100%。阳性样本的Ct值统计变异系数均小于5%。结论:采用定值核酸质控品进行核酸筛查系统分析灵敏度验证结果是可行的,对保证血液核酸筛查的质量是有意义的。     

HIV 1/2抗体快速诊断试剂分析灵敏度评价

目的对艾滋病病毒(HIV)抗体快速检测试剂盒进行分析灵敏度的评估,为今后试剂的质量提高及用户选择提供参考。方法用构建的性能血清盘和稀释系列血清盘来评价8种快速检测试剂,通过免疫层析判读仪进行结果的读值,然后对结果进行统计分析。结果 A、B、C、D、E、F、G、H 8种试剂检测性能血清盘结果显示:C、D、E、F、G、H 6种试剂的阳性检出率均达到20/20,且GOD值均较高(反应强度较高);2种试剂存在漏检的现象,GOD值均较低(反应强度较弱)。检测稀释系列血清盘结果显示,4种试剂对稀释后的弱阳性样本分析灵敏度较高,其他4种试剂分析灵敏度较低。随着样本稀释倍数的增加,抗体浓度的降低,检测出的GOD值也逐渐下降。当抗体浓度相同时,各个试剂之间的GOD值呈现差异;GOD值较高的试剂检测弱阳性样本的灵敏度更高。结论不同HIV抗体快速检测试剂盒在分析灵敏度方面存在差异。试剂在使用前,使用者应加强对试剂性能的验证,选择分析灵敏度较高的HIV抗体快速诊断试剂,提高实验室阳性检出率,及早发现HIV感染者。     

用于HIV-1 DNA检测的滤纸片干血斑能力验证质控品的制备及应用

目的制备用于艾滋病病毒1型(HIV-1)DNA检测的干血斑能力验证质控品,并对其均一性和稳定性进行评估。方法培养仅含单拷贝的缺陷型HIV-1基因的8E5细胞,使用HIV-1阴性全血进行倍比稀释后,滴加到滤纸片上,制备成含有不同拷贝数8E5细胞的滤纸片干血斑。在不同温度条件下放置不同时间,然后使用雅培Real-time HIV-1定性检测试剂盒对其进行检测、整理并分析检测结果,评价滤纸片干血斑能力验证质控品的均一性和稳定性。结果滤纸片干血斑随机抽样平行检测结果完全一致;-20℃或4℃放置1年,室温放置3个月或在37℃放置4天,检测结果均一致。在应用性评价中,参加能力验证项目的15家实验室检测结果全部正确,制备的滤纸片干血斑作为质控品效果良好。结论使用8E5细胞制备的HIV-1DNA定性检测能力验证质控品的均一性、稳定性良好,是一种可用于目前中国HIV-1DNA定性检测能力验证质控品制备方法。     

干血斑用于HIV抗体确证（重组免疫印迹法）方法建立与初步应用

目的研究建立干血斑(DBS)样本用于艾滋病病毒(HIV)抗体确证(重组免疫印迹法)的方法,为确证试验提供更加广泛的适用样本。方法制备系列稀释20～210 DBS与配对血浆样本,利用实验室优化的DBS洗脱条件(300μL含0.5‰Tween 20的PBS室温洗脱6小时),研究来自两个公司的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体检测试剂盒(免疫印迹法/重组免疫印迹法)的检测限,选择其中等效性更好且价格低廉的国产(重组免疫印迹法)试剂进一步研究。结果通过310份(110份HIV抗体阳性和200份HIV抗体阴性)已知DBS与血浆配对样本和1 304份临床DBS样本进行该方法验证与应用,两种不同试剂对于血浆样本的检测限均为20～27,但对于来自相同个体的对应DBS样本检测限不同(分别为20～25和20～26);应用与血浆样本等效的国产(重组免疫印迹法)试剂进行方法验证结果表明,阳性样本一致率为100.0%(110/110),阴性样本一致率为98.5%(197/200),总一致率99.0%(307/310),Kappa值0.98(P0.001);敏感性100.0%(110/110),特异性98.5%(197/200);应用国产(重组免疫印迹法)试剂对1 304份临床DBS样本中HIV抗体初筛阳性132份DBS样本同时进行实验室DBS确证与临床随访确证,实验室DBS确证结果与临床随访确证结果完全一致,确证阳性130份,排除初筛假阳性样本2份。结论 DBS样本用于HIV抗体确证(重组免疫印迹法)与血浆样本等效,具有良好敏感性与特异性,可有效排除初筛假阳性样本。     

HIV口腔黏膜渗出液快速检测试剂的方法学评价北大核心CSCD

目的构建艾滋病病毒（HIV）口腔黏膜渗出液（OMT）快速检测试剂（RDTs）评价盘,评价HIV OMT RDTs的质量。方法采集健康志愿者的口腔黏膜渗出液,用稀释液稀释HIV抗体阳性和阴性的血浆样本,分别构建实验室基础盘、实验室干扰盘、实验室线性稀释系列盘和实验室精密度盘。用6家HIV OMT RDTs（编号：试剂AF）分别检测构建的评价盘和HIV抗体口腔黏膜渗出液快速试剂的国家参考品,肉眼判读检测结果并测定GOD值。结果根据肉眼判读,试剂AF的敏感性、特异性、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率均为100%,分析特异性≥95.12%（39/41）,分析灵敏度≥3/5;试剂D的批内精密度高于其他试剂,试剂F的线性范围为28214。根据GOD值,试剂AE的特异性,阴性参考品符合率均为100%,分析特异性≥95.12%（39/41）,敏感性≥92.50%（37/40）,阳性参考品符合率≥95.00%（19/20）,分析灵敏度≥3/5,线性范围分别为28216、27217、26216、26215、25212,批内精密度介于4.91%34.28%之间。结论试剂AF的敏感性、特异性、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、分析灵敏度、分析特异性较好,试剂BD的线性范围较宽,但饮食因素可能造成试剂D、E出现假反应性,试剂的批内精密度差别较大。     

基于免疫磁分离技术的尿液HIV抗体高敏感性检测方法建立

目的研究建立基于HIV免疫磁分离前处理技术的尿液HIV抗体高敏感性检测方法。方法采用羧基磁珠和HIV特异性抗原通过碳二亚胺缩合反应,优化制备HIV免疫磁珠;采用BCA法对磁珠偶联前后的HIV抗原浓度进行测定,采用ELISA法对HIV免疫磁珠捕获前后的样本中HIV抗体吸光度(OD)值进行检测,采用HRP标记抗原对免疫磁珠捕获后的HIV抗体进行OD值检测,以抗原偶联率与HIV免疫磁珠的抗体捕获效率为指标,建立HIV免疫磁珠在尿液样本中的前处理体系与检测方法;使用100份阴性尿液样本进行Cut-off值设定;使用3套血液确证HIV抗体阳性尿液21～210系列稀释样本进行方法敏感性验证;使用100份血液确证HIV抗体阳性尿液与100份健康人群尿液进行方法初步应用。结果 300 nm羧基磁珠在100∶4的投料比下制备的HIV免疫磁珠的抗原偶联率为79.0%;10μg/mL HIV免疫磁珠在1 mL和5 mL尿液样本中室温捕获15～30 min后的抗体捕获效率为80.42%～93.99%;基于HIV免疫磁珠前处理技术的高敏感性检测方法 Cut-off值为0.56;对3套21～210系列稀释HIV抗体尿液样本的检测敏感性较常规ELISA提高16～512倍;该方法对100份血液确证HIV抗体阳性的尿液检出数(81)高于常规ELISA检出数(52);全部验证与应用实验中均未发现阴性样本的假阳性现象。结论本研究建立的HIV免疫磁珠制备体系与HIV免疫磁珠尿液样本前处理技术,均具有良好的应用稳定性与检测有效性,基于HIV免疫磁分离技术的尿液HIV抗体检测方法敏感性高于目前ELISA检测方法。     

MPAIA日本血吸虫抗体检测中室内质量控制方法探讨

目的探讨科学有效的室内质量控制方法,使磁微粒分离酶联免疫法(Magnetic Particle Antibody Immunoassay,MPAIA)用于血吸虫抗体检测的结果真实可靠。方法把即刻法、Z分数图及Westgard多规则质控方法相结合,开展MPAIA血吸虫抗体检测室内质量控制工作,所得数据建立数据库,并进行统计分析。结果即刻法从第3次试验开始就进入质控状态,20次试验后转入Z分数常规质控,Westgard多规则质控方法能帮助分析误差的类型。在第3-40批次试验中,共完成186份患者样本检测,有2个批次9份患者样本试验结果因质控品失控,需重新进行试验分析。其他在控批次有177份患者样本结果均可接受。结论试验中应用即刻法、Z分数图、Westgard多规则质控方法进行质控分析能较好地完成MPAIA血吸虫抗体检测常规质量控制工作。     

ELISA法检测HIV抗体的室内质控分析及处理

目的:分析ELISA法检测HIV抗体的室内质控,总结失控原因,加强实验室管理,保证检验结果准确可靠。方法:运用L-J质控图,结合Westgard多规则质控法,进行室内质控及分析。结果:2013-01-2014-10共检测2 033批次,其中警告57次,失控29次,分别占质控总数的2.80%和1.42%。其中随机误差10次,系统误差19次,分别占质控总数的0.49%和0.93%。22个RCV处于9.72%~22.85%,其中21个均处于20.00%以内,1次是22.85%。结论:ELISA法影响因素较多,要严格按照操作规程,加强室内质控,以保证检验结果的准确性。