微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-654-3p下调NEK2表达对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-654-3p对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制。方法设置胶质瘤细胞U251组、U373组,正常人星形胶质细胞NHA组;miR-NC组(转染miR-NC)、miR-654-3p组(转染miR-654-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-654-3p组)、si-NC组(转染si-NC)、si-NEK2组(转染si-NEK2)、miR-654-3p+pcDNA3.1组(共转染miR-654-3p和pcDNA3.1)、miR-654-3p+pcDNA3.1-NEK2组(共转染miR-654-3p和pcDNA3.1-NEK2)用脂质体法转染至胶质瘤细胞中。qRT-PCR检测miR-654-3p和NEK2 mRNA的表达水平;采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测NEK2蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果胶质瘤U251、U373细胞与正常胶质NHA细胞相比,miR-654-3p的表达水平显著下降(P<0.05)。过表达miR-654-3p后miR-654-3p的表达水平显著...     

微小RNA-326对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响北大核心CSCD

目的探究Notch受体2(Notch receptor 2,Notch2)在乳腺癌细胞中的作用及机制。方法取MCF-7细胞系培养,分别转染pc-NC、pc-Notch2、NC mimic和miR-326 mimic。以细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖情况,以Transwell实验检测细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测Notch2蛋白表达。结果72 h时,pc-NC组和pc-Notch2组的细胞增殖水平分别为0.61±0.06和0.77±0.07;侵袭细胞数分别为(57.33±4.92)和(75.33±6.24)个,差异有统计学意义(P<0.05)。NC mimic组以及miR-326 mimic中Notch2蛋白表达量分别为1.01±0.10和0.69±0.06,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Notch2可显著促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭,miR-326可显著抑制Notch2的表达。     

微小RNA-431-5 p对卵巢癌细胞增殖与迁移和侵袭的影响

目的 研究miR-431-5p在卵巢癌中的表达、功能及调节机制.方法 常规培养人卵巢癌细胞株(SKOV3).将实验分为对照组(miR-431 NC)和实验组(miR-431 mimics).用实时荧光定量-PCR法检测卵巢癌患者组织和细胞系中miR-431-5p以及KIF11 mRNA的表达水平,用Western bl...     

miR-493-5p下调METTL3表达影响鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-493-5p对鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因.方法 实验分为miR-NC组(转染miR-493-5p模拟物阴性对照)、miR-493-5p组(转染miR-493-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-493-5p抑制剂阴性对照)、anti-miR-493-5p组(转染...     

微小RNA-455-3p 下调TRIM27 对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人鼻咽癌细胞5-8F、CNE-1和鼻咽上皮细胞NP69中miR-455-3p的表达;将miR-NC、miR-455-3p mimics、pcDNA3.1、pcDNA3.1- TRIM27、si-NC、si- TRIM27 组、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1-TRIM27通过脂质体试剂转染到5-8F;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞的增殖、凋亡和TRIM27蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-455-3p与TRIM27的靶向关系。结果与鼻咽上皮细胞NP69(1.37±0.06)相比,人鼻咽癌细胞5-8F(0.42±0.02)、CNE-1(0.96±0.05)中miR-455-3p的表达显著降低(F =314.35,P =0.001)。过表达miR-455-3p 可明显抑制5-8F、CNE-1 细胞的增殖,促进其凋亡;miR-455-3p 可抑制野生型TRIM27细胞的荧光活性,且与TRIM27的表达呈负相关;抑制TRIM27可抑制抑制5-8F细胞的增殖,促进凋亡,过表达TRIM27能够逆转miR-455-3p对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的作用。结论miR-455-3p能够调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡的作用机制与其靶向TRIM27相关,将可为鼻咽癌的治疗提供新靶点。     

微小RNA-101-3p对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-101-3p(miR-101-3p)调控Notch同源物1(Notch1)对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法将A2780/Taxol细胞分为紫杉醇组(用1.8μmol·L^(-1)紫杉醇处理),第1转染组(转染miR-101-3p mimics,用1.8μmol·L^(-1)紫杉醇处理),第2转染组(转染pcDNA3.1-Notch1,用1.8μmol·L^(-1)紫杉醇处理),第3转染组(同时转染pcDNA3.1-Notch1和miR-101-3p mimics,用1.8μmol·L^(-1)紫杉醇处理)。用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-101-3p在A2780和A2780/Taxol细胞中的表达水平。48 h后,用CCK-8检测细胞增殖活性。用流式细胞术检测细胞周期,用蛋白质印迹(Western blot)法检测Notch1的表达水平。结果miR-101-3p在A2780和A2780/Taxol细胞中的表达水平分别为1.00±0.04,0.35±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。紫杉醇组、第1转染组、第2转染组、第3转染组的细胞48 h增殖率分别为(141.82±5.45)%,(106.06±7.35)%,(184.24±8.20)%,(146.06±7.57)%;G0/G1期细胞百分比分别为(40.17±2.93)%,(53.38±2.56)%,(19.97±3.22)%,(35.49±4.51)%;S期细胞百分比分别为(36.74±4.07)%,(33.05±3.13)%,(40.12±3.29)%,(37.05±2.39)%;G2/M期细胞百分比分别为(23.09±1.42)%,(13.57±0.58)%,(39.92±2.68)%,(27.46±4.59)%;Notch1的相对表达水平分别为1.03±0.09,0.53±0.04,1.89±0.21,1.26±0.11。第1转染组、第2转染组分别与紫杉醇组比较,第3转染组与第2转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-101-3p在紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol中低表达,过表达miR-101-3p可通过靶向下调Notch1的表达增强A2780/Taxol细胞紫杉醇敏感性。     

LncRNA XIST靶向miR-511-3p调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨LncRNA XIST通过靶向miR-511-3p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 体外培养食管癌细胞Eca109,将细胞分组,分别为:si-NC组(转染si-NC)、si-XIST组(转染si-NC)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-511-3p组(转染miR-511-3p)、si-XI...     

微小RNA-3682-3p通过下调GAS8基因促进肝癌细胞迁移、侵袭的研究

目的探讨肝细胞癌中miR-3682-3p的表达情况、临床意义和作用机制。方法待实验所需肝癌细胞、正常肝细胞(L02)培养与转染后,采用实时定量PCR(qPCR)检测miR-3682-3p在肝癌组织、癌旁组织、L02细胞和肝癌细胞系中的表达情况,利用TCGA数据库分析正常肝组织、肝癌组织中miR-3682-3p的表达差异,分析miR-3682-3p的表达与肝癌患者临床病理特征、预后的关系;通过Transwell实验评价细胞侵袭、迁移能力;通过TargetScan数据库预测获得下游靶基因,采用qPCR、Western blotting法分析miR-3682-3p对生长抑制特异性基因8(GAS8)的表达的调控作用,并利用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果与癌旁组织和正常肝细胞比较,miR-3682-3p在肝癌组织、细胞系中均高表达(P0.05),并与门静脉侵犯、Edmondson分级、TNM分期有关;基于TCGA数据库数据的生存分析显示,miR-3682-3p高表达与不良预后相关;在MHCC97-H细胞中敲减miR-3682-3p显著抑制细胞的侵袭、迁移(P0.05);通过生物信息学预测加以实验验证证实GAS8是miR-3682-3p的直接靶基因,并通过回复实验证实GAS8介导了miR-3682-3p对肝癌细胞侵袭及迁移能力的促进作用。结论 miR-3682-3p在肝癌中通过靶向抑制抑癌基因GAS8从而促进肝癌细胞侵袭、迁移。     

miR-130a-3p下调STAT3对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-130a-3p对黑素瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测黑色素瘤细胞A2058、WM239和正常人黑色素细胞HEMn中miR-130a-3p和STAT3 mRNA的表达水平;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-130a-3p组(转染miR-130a-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-130a-3p组(转染anti-miR-130a-3p)、miR-130a-3p+pcDNA3.1组(共转染miR-130a-3p和pcDNA3.1)、miR-130a-3p+pcDNA3.1-STAT3组(共转染miR-130a-3p和pcDNA3.1-STAT3)、miR-NC+WT-STAT3组(共转染miR-NC和WT-STAT3)、miR-NC+MUT-STAT3组(共转染miR-NC和MUT-STAT3)、miR-130a-3p+WT-STAT3组(共转染miR-130a-3p和WT-STAT3)、miR-130a-3p+MUT-STAT...     

lncRNA LINC00858靶向微小 RNA-363-3p促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨LINC00858通过靶向miR-363-3p对肝癌HCCLM3细胞生物学行为的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月青海省第五人民医院收治的肝癌病人30例,获取其肝癌组织及其癌旁组织.设置si-NC组、si-LINC00858组、si-LINC00858+anti-miR-NC组和si-LINC00858+anti-miR-363-3p组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测LINC00858和miR-363-3p表达水平;双荧光素酶报告实验验证LINC00858和miR-363-3p的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测相关蛋白表达.结果 肝癌组织中LINC00858高表达(2.85±0.27),miR-363-3p低表达(0.58±0.05).LINC00858靶向调控miR-363-3p;抑制LINC00858能够上调p21表达,下调细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,降低细胞活力、迁移数、侵袭数(P<0.05).干扰miR-363-3p表达逆转了抑制LINC00858表达对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 抑制LINC00858通过靶向上调miR-363-3p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

miR-619-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响北大核心CSCD

目的探究miR-619-5p在人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖、迁移和侵袭中的作用及机制。方法乳腺癌和正常乳腺组织及细胞中miR-619-5p的表达利用生物信息学分析或经qRT-PCR法检测;分别转染miR-619-5p模拟物或抑制剂后,qRT-PCR法测定miR-619-5p、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA的表达;CCK-8法用于检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell TM实验观察细胞迁移和侵袭能力转变;EMT相关分子的蛋白表达由Western blot检测。生物信息学预测miR-619-5p靶基因,并对潜在靶基因CREB1作初步分析。结果miR-619-5p在乳腺癌中低表达。与对照组相比,过表达miR-619-5p后,miR-619-5p表达水平上调,EMT上皮标志物表达上调,促EMT分子及间质标志物表达下调,细胞的增殖、迁移与侵袭能力削弱,CREB1表达下调;低表达miR-619-5p组结果与上述结果相反。结论乳腺癌组织及细胞中miR-619-5p表达更低,miR-619-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,其效应可能通过靶向CREB1实现。     

miR-579-3p过表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-579-3p在宫颈癌HeLa细胞中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,及其潜在机制。方法 将细胞分为H8组[正常培养正常宫颈上皮永生化细胞(H8细胞)]、HeLa组[正常培养宫颈癌细胞(HeLa细胞)]、HeLa+mimic-NC(HeLa细胞转染mimic-NC)和HeLa+mimic-miR-579组(HeLa细胞转染mimic-miR-579-3p)。用细胞计数试剂盒检测各组细胞的增殖情况,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-579-3p和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关基因mRNA的表达水平,用迁移实验和侵袭小室法检测细胞的迁移和侵袭情况。结果 H8组中miR-579-3p mRNA相对表达水平(1.00±0.04)显著高于HeLa组(0.12±0.01),差异有统计学意义(P<0.001)。HeLa+mimic-NC组和HeLa+mimic-miR-579组的miR-579-3p mRNA相对表达水平分别为0.13±0.01和0.83±0.10,第2天的增殖能力分别为165.91±9.46和111.35±9.66,侵袭细胞数分别为(124....     

微小RNA-885-3p在早期急性肺栓塞诊断中的临床意义北大核心CSCD

目的探讨血浆微小RNA(miR)-885-3p水平在急性肺栓塞(APE)的诊断价值及可能的致病机制。方法实验一:健康成人5例为对照1组,APE患者5例为试验1组,用高通量测序技术检测比较两组血清miRNA相对表达水平,筛选出差异性表达miRNA。实验二:健康成人20例为对照2组,APE患者20例为试验2组,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测差异表达的miRNA的表达水平,用受试者工作特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)分析miRNA对APE的诊断价值,并通过生物信息学预测APE可能的发生机制。结果实验一:高通量筛选出37个差异表达的miRNA,APE患者与健康成人比较,miR-885-3p表达差异最为显著,为17.19倍。实验二:qRT-PCR结果显示,APE患者与健康成人的miR-885-3p表达水平分别为1.53±0.08和1.18±0.06,miR-1246表达水平分别为1.62±0.39和1.25±0.10,miR-134表达水平分别为1.68±0.23和1.20±0.23,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-885-3p、miR-1246、miR-134的AUC分别为0.955、0.820、0.894。生物信息学分析结果显示,差异miRNA的靶基因主要富集在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、糖基化终末产物(AGE)/AGE受体(RAGE)等相关分子或通路上。结论miR-885-3p可作为APE新的诊断标志物,并可能通过促进炎症反应、细胞增殖和凋亡等机制影响APE发生发展。     

TAK-242抑制小胶质细胞诱导的胶质瘤细胞迁移和侵袭

目的探讨Toll样受体4(TLR4)-髓样分化因子88(MyD88)通路抑制剂TAK-242能否通过抑制该通路下游基因MMP-2、MMP-9的表达,减少胶质瘤细胞的侵袭和迁移。方法培养小胶质细胞系BV2和胶质瘤细胞系GL261,分别收集上清液,即为BV2细胞空白培养基和GL261细胞空白培养基;然后用加或不加TAK-242的GL261细胞空白培养基培养BV2细胞,收集上清液即获得T条件培养基(加TAK-242)和NT条件培养基(不加TAK-242)。用Transwell细胞迁移和侵袭实验分别检测GL261细胞在经NT条件培养基(G1组)、T条件培养基(G2组)、BV2细胞空白培养基(G3组)孵育后的迁移和侵袭能力;用Western blot法检测BV2细胞在经GL261细胞空白培养基(B1组)、GL261细胞空白培养基+TAK-242(B2组)、BV2细胞普通培养基(B3组)孵育后的MMP-2和MMP-9的蛋白表达情况。结果 Transwell实验表明,G1组细胞迁移和侵袭能力较G3组增加(P<0.01);G2组细胞迁移和侵袭能力较G1组减少(P<0.01)。Western...     

miR-593-5p调控肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制

目的探讨微小RNA-593-5p(miR-593-5p)对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。方法采用qPCR检测正常肝细胞HL7702和肝癌细胞系Hep3B、HepG2、SMMC-7721、Huh7中miR-593-5p和PHF10 mRNA表达。在SMMC-7721细胞中转染miR-593-5p,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。starBase软件结合双荧光素酶报告实验分析miR-593-5p和PHF10靶向关系。miR-593-5p和pcDNA-PHF10共转染,观察PHF10过表达对miR-593-5p过表达诱导的SMMC-7721细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的影响。结果 miR-593-5p在肝癌细胞系Hep3B、HepG2、SMMC-7721、...     

miR-514b-3p靶向MDM2对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨miR-514b-3p在肺癌组织中的表达水平,研究miR-514b-3p对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和分子机制.方法 qRT-PCR检测52例肺癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-514b-3p的表达水平.构过表达miR-514b-3p的A549细胞株,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移...