山莴苣素对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨山莴苣素对MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和迁移的作用。方法 实验分为对照组和低、中、高剂量山莴苣素实验组。对照组细胞给予常规培养,低、中、高剂量山莴苣素实验组分别用10、20和30μmol·L^-1山莴苣素处理MDA-MB-453乳腺癌细胞24 h。以划痕愈合实验评估细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法检测细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白表达水平。结果 对照组和低、中、高剂量山莴苣素组的迁移率分别为(29.35±2.99)%、(21.44±1.14)%、(18.83±0.49)%和(10.73±0.43)%;Akt蛋白的相对表达水平分别为1.00±0.04、0.94±0.05、0.92±0.05和1.09±0.03;p-Akt蛋白的相对表达水平分别为1.00±0.01、0.43±0.04、0.30±0.03和0.31±0.03;PI3K蛋白相对表达水平分别为1.00±0.04、1.03±0.19、1.14±0.12和1.09±0.08;p-PI3K蛋白相对表达水平分别为1.00±0.02、1.06±0.15、1.12...     

紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及对PI3K/AKT/p53信号通路的影响北大核心CSCD

目的研究紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及对PI3K/AKT/p53信号通路的干预。方法将CNE2细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞以等量生理盐水处理,低、中、高剂量实验组CNE2细胞以5,10,20 mol·L^(-1)紫杉醇处理。以溴化四唑蓝比色(MTT)法检测CNE2细胞增殖,以免疫荧光法检测CNE2细胞中FoxO3a蛋白表达,以蛋白免疫印迹法检测CNE2细胞中PI3K/AKT/p53信号通路相关蛋白表达情况。结果干预24 h,低、中、高剂量实验组CNE2细胞增殖抑制率(PIR)分别为(22.93±0.08)%,(43.76±0.09)%,(47.51±0.09)%;48 h增殖抑制率分别为(45.33±0.09)%,(52.02±0.10)%,(65.66±0.12)%;72 h增殖抑制率分别为(46.59±0.10)%,(64.16±0.12)%,(69.85±0.14)%。实验组CNE2细胞增殖抑制率随紫杉醇浓度的增加及作用时间的延长呈逐渐升高趋势。免疫荧光检测可见,高剂量实验组细胞核中FoxO3a蛋白表达量为29.61±1.23,明显高于对照组的20.13±0.59(P<0.01)。蛋白免疫印迹法检测可见,与对照组比较,低、中、高剂量实验组FoxO3a蛋白表达量升高(P<0.05或P<0.01),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、p53、p21蛋白表达量降低(P<0.01)。结论紫杉醇可有效抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,与显著调节PI3K/AKT/p53信号通路中蛋白表达相关。     

单酰基甘油脂肪酶抑制药通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶信号通路对胃癌细胞生物学活性的影响北大核心CSCD

目的 探究单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制药对胃癌细胞侵袭、迁移及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法 体外培养人胃癌细胞系MKN-45,分为空白组和低、中、高剂量实验组。空白组给予正常DMEM培养基培养,不作任何处理;低、中、高剂量实验组分别用含1,10和20μmol·L^(-1) MAGL抑制药的DMEM培养基进行培养。用噻唑蓝法、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力,用蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号通路蛋白的表达情况。结果 中、高剂量实验组和空白组的细胞抑制率分别为(9.12±0.48)%,(23.78±0.65)%和0.00%,侵袭细胞数分别为(221.64±28.66),(118.58±18.75)和(308.21±36.36)个,划痕愈合率分别为(18.36±2.88)%,(11.03±1.72)%和(27.05±4.10)%,PI3K蛋白相对表达水平分别为0.64±0.05,0.48±0.07和1.18±0.08,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.74±0.06,0.45±0.09和0.97±0.07。中、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MAGL抑制药可能通过调控PI3K/AKT信号通路,抑制胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭及转移。     

人参皂苷Rg3抑制肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的 探讨人参皂苷Rg3通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制。方法 体外培养人肺癌细胞(A549),分为对照组(正常培养),低剂量实验组(30μmol·L^-1人参皂苷Rg3),高剂量实验组(60μmol·L^-1人参皂苷Rg3)。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估人参皂苷Rg3对肺癌细胞存活率的影响,用流式细胞术检测肺癌细胞经处理之后的凋亡率,用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测重要凋亡基因的表达,用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,同时检测细胞内的氧化应激状况,用蛋白质印迹法检测PI3K和Akt磷酸化的水平。结果 对照组和低、高剂量实验组细胞活力分别为(98.67±0.88)%、(82.67±2.40)%和(74.77±3.09)%,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA相对表达水平分别为0.96±0.04、0.87±0.02和0.71±0.01,caspase-3 mRNA相对表达水平分别为0.96±0.04、1.22±0.07和1.36±0.04,活性氧(...     

香菇多糖对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究香菇多糖(LNT)通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 将甲状腺癌TPC-1细胞分为空白组(常规培养)和低、中、高剂量实验组(20、40、60μmol·L^-1 LNT);另用不同剂量PI3K抑制剂LY294002(0、5 mg·L^-1)处理甲状腺癌TPC-1细胞，根据浓度分为对照组和LY294002组。以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力，以Transwell实验检测细胞迁移及侵袭情况，以流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期，以蛋白质印迹法检测PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 香菇多糖可呈时间及浓度依赖性抑制甲状腺癌TPC-1细胞增殖率(P<0.05)。空白组和低、中、高剂量实验组细胞迁移数分别为(127.67±8.09)、(98.00±5.76)、(77.67±6.25)、(38.33±5.13)个；细胞侵袭数分别为(144.50±12.50)、(109.67±6.02)、(83.00±8.07)、(50....     

菊苣酸通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制口腔癌KB细胞增殖、侵袭与黏附的研究

目的 探讨菊苣酸对口腔癌KB细胞增殖、侵袭与黏附的影响及机制。方法 将KB细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组,分别用0,5,10和20μmol·L^-1菊苣酸干预24 h。比较4组细胞的穿膜细胞数、细胞黏附率,以及磷脂酰肌醇3激酶p85亚单位（PI3Kp85）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达情况。结果 低、高剂量实验组和对照组的穿膜细胞数百分比分别为（79.37±8.04）%,（64.66±7.61）%和（100.00±0）%,细胞黏附率分别为（84.06±3.27）%,（64.64±7.22）%和（100.00±0）%,PI3Kp85相对表达量分别为0.70±0.10,0.08±0.02和0.78±0.05,p-Akt相对表达量分别为0.50±0.06,0.27±0.05和0.81±0.07,低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 菊苣酸能够抑制口腔癌KB细胞的增殖、侵袭与黏附,该作用与抑制PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

冬凌草甲素对肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖和凋亡的作用研究北大核心CSCD

目的探究冬凌草甲素对肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖和凋亡的影响。方法选取HuCCT1细胞随机分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞正常培养,不做任何处理,低、中和高剂量实验组分别以3.75、7.50和15.00μmol·L-1冬凌草甲素处理24 h。用细胞计数实验(CCK-8)检测细胞增殖活性;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;用蛋白质印迹法检测增殖和凋亡蛋白水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组G2期细胞数量百分比分别为(9.54±0.64)%、(25.39±1.29)%、(30.97±1.03)%和(35.06±4.06)%,凋亡率分别为(15.94±0.21)%、(16.96±0.88)%、(18.57±0.65)%和(30.61±0.98)%,磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达水平分别为0.60±0.02、0.41±0.04、0.30±0.05和0.26±0.02,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平分别为0.28±0.01、0.26±0.01、0.13±0.02和0.12±0.01,磷酸化S6核糖体蛋白(p-RPS6)分别为0.32±0.02、0.28±0.01、0.17±0.01和0.10±0.01。低、中和高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论冬凌草甲素具有抑制HuCCT1细胞增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与冬凌草甲素调控AKT/mTOR信号通路有关。     

鸢尾素对局灶性脑缺血再灌注大鼠磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路及Th1/Th2失衡的影响北大核心CSCD

目的探究鸢尾素对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用。方法用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠,并随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组15只;另取15只正常大鼠仅分离右颈总动脉不进行其他操作作为假手术组。于造模结束第2天,低、中、高剂量实验组分别按50,100和200 mg·kg^(-1)的剂量灌胃给予50 mg·mL^(-1)鸢尾素溶液;对照组按200 mg·kg^(-1)的剂量灌胃给予50 mg·mL^(-1)葛根素;假手术组和模型组均灌胃给予等体积0.9%NaCl。6组每天给药1次,连续给药4周。用流式细胞术检测Th1和Th2细胞数量,用蛋白质印迹法检测脑组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路蛋白表达。结果低、高剂量实验组和对照组、模型组、假手术组的PI3K蛋白磷酸化分别为0.21±0.04,0.46±0.05,0.49±0.07,0.12±0.03和0.64±0.05,AKT蛋白磷酸化分别为0.89±0.06,1.37±0.08,1.41±0.12,0.68±0.04和1.74±0.26,Th1细胞比例分别为(30.46±3.37)%,(23.43±3.37)%,(22.73±1.28)%,(36.85±3.45)%和(20.28±3.93)%,Th2细胞比例分别为(3.60±0.38)%,(4.16±0.45)%,(4.23±0.37)%,(2.91±0.43)%和(5.15±0.39)%。低、高剂量实验组和对照组、假手术组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论鸢尾素可能通过激活PI3K/AKT通路从而降低Th1细胞比例、升高Th2细胞比例,进而实现对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织的缓解。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨归芪益元膏联合顺铂治疗Lewis肺癌的作用

目的 观察归芪益元膏对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用,探讨归芪益元膏联合顺铂通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路抗肿瘤的分子机制。方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只,除空白组(0.9%NaCl)外,其余均建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组(0.9%NaCl)、对照组(0.9%NaCl,顺铂5 mg·kg^-1)和低、中、高剂量实验组(归芪益元膏1.6、3.3、6.6 g·kg^-1,顺铂5 mg·kg^-1)。以流式细胞术检测小鼠骨髓髓源性抑制细胞(MDSCs)水平;以蛋白质印迹法检测肿瘤组织中相关蛋白的表达。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的抑瘤率分别为(39.87±4.45)%、(45.74±14.97)%、(57.78±4.70)%和(69.82±11.05)%。空白组、模型组、对照组及低、中、高剂量实验组的骨髓中MDSCs占比分别为(36.13±1.08)%、(68.63±2.94)%、(58.93±2.02...     

纳洛酮对七氟醚诱导的胎鼠神经干细胞凋亡的影响

目的 探讨纳洛酮对七氟醚诱导的胎鼠神经干细胞（NSCs）凋亡的影响。方法 将NSCs分为空白组、对照组和低、中、高剂量实验组。空白组给予正常培养;对照组通入含3%七氟醚的混合气体培养48 h;低、中、高剂量实验组均通入含3%七氟醚的混合气体,并分别加入含0.1,1.0和10.0μmol·L^-1纳洛酮溶液的DMEM-12F培养基共培养48 h。用流式细胞仪检测NSCs的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测沉默信息调节因子1（SIRT1）、磷脂肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和哺乳动物西罗莫司靶蛋白（mTOR）蛋白的表达水平。结果 低、高剂量实验组和对照组、空白组的NSCs凋亡率分别为（32.25±4.83）%,（16.77±2.52）%,（43.59±6.53）%和（8.66±1.29）%;SIRT1蛋白表达水平分别为0.50±0.08,0.99±0.15,0.20±0.03和1.27±0.19;p-PI3K/PI3K蛋白相对表达水平分别为0.85±0.13,0.47±0.04,1.06±0.16和0.25±0.03;p-AKT/AKT蛋白相对表达水平分别为0...     

二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究

目的 探讨中药单体二苯乙烯苷（TSG）对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法 将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^-1TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^-1TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果 空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为（48.00±5.87）%,（19.30±1.34）%和（17.16±1.50）%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为（11.10±0.70）%,（23.17±1.03）%和（36.10±1.32）%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.1...     

二苯乙烯苷对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的作用机制研究

目的 探讨中药单体二苯乙烯苷（TSG）对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移及凋亡的影响及其分子机制。方法 将SCC-9细胞分为3组:空白对照组(0μmol·L^-1TSG)和低、高2个浓度实验组(14,28μmol·L^-1TSG)。用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移水平,用流式细胞仪测定凋亡率,用实时荧光定量-PCR法检测抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）基因表达水平,用蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果 空白对照组和低、高2个浓度实验组于24 h的平均水平迁移率分别为（48.00±5.87）%,（19.30±1.34）%和（17.16±1.50）%;这3组的垂直迁移细胞数分别为73.00±9.17,32.67±3.21和24.33±4.04;这3组的细胞凋亡率分别为（11.10±0.70）%,（23.17±1.03）%和（36.10±1.32）%;这3组的bcl-2基因的相对表达水平分别为1.03±0.02,0.39±0.09和0.1...     

转录延伸因子A样3因子对食管鳞癌TE-1和KYSE-30细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探索转录延伸因子A样3因子(TCEAL3)对食管鳞癌TE-1和KYSE-30细胞系增殖、迁移、凋亡的影响。方法将食管鳞癌细胞TE-1和KYSE-30细胞株分成TE-1对照组和KYSE-30对照组(均转染空载慢病毒)、TE-1实验组和KYSE-30实验组(均转染TCEAL3过表达慢病毒)。以蛋白质印迹法检测TCEAL3、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达水平;以CCK8实验检测细胞的增殖情况;以Transwell迁移实验检测细胞迁移情况;以流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果TE-1对照组和TE-1实验组、KYSE-30对照组和KYSE-30实验组的TCEAL3蛋白相对表达水平分别为0.31±0.02和0.56±0.02,0.25±0.02和0.49±0.05;细胞增殖率分别为(1721.01±21.16)%和(1229.69±59.17)%,(1715.27±89.70)%和(781.05±136.75)%;凋亡率分别为(3.99±1.60)%和(32.20±2.96)%,(5.15±0.20)%和(32.20±0.53)%;迁移细胞数分别为(189.00±6.67)和(120.00±28.40)个,(189.00±30.20)和(111.00±27.60)个;HMGA1蛋白表达水平分别为0.79±0.11和0.37±0.06,0.67±0.03和0.33±0.03;MMP2蛋白表达水平分别为0.55±0.02和0.32±0.04,0.61±0.02和0.37±0.01。上述指标,TE-1实验组与TE-1对照组比较,KYSE-30实验组与KYSE-30对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TCEAL3可能通过抑制HMGA1的表达,从而下调MMP2的表达来抑制食管鳞癌细胞的增殖能力和迁移运动能力,并促进凋亡。     

川楝素对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究川楝素对体外卵巢癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为低、中、高剂量实验组和对照组,分别以50,60,70μmol·L^-1川楝素与等量生理盐水干预,分别干预24,48和72 h。用活细胞计数(CCK-8)法检测人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制情况;用细胞划痕实验检测人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力;用Transwell小室实验检测人卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力;用蛋白质印迹(Wb)法检测人卵巢癌SKOV3细胞LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白的表达水平。结果干预72 h时,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率分别为(56.41±2.69)%,(68.37±3.56)%和(79.51±4.64)%;干预72 h时,对照组和低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞的迁移率分别为(92.43±3.51)%,(47.32±4.11)%,(36.25±3.42)%和(18.62±2.69)%;侵袭率分别为(91.48±3.73)%,(76.56±4.12)%和(34.51±3.22)%,(10.36±2.91)%;LIMK-1蛋白相对表达量分别为0.86±0.11,0.59±0.14,0.53±0.12和0.28±0.09;cofilin蛋白相对表达量分别为0.79±0.08,0.82±0.12,0.80±0.10和0.81±0.11;p-cofilin蛋白相对表达量分别为0.90±0.10,0.82±0.12,0.55±0.08和0.24±0.07。随川楝素作用浓度增大,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率逐渐升高;与对照组比较,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞迁移率、侵袭率及LIMK-1和p-cofilin蛋白相对表达量均显著降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论川楝素具有体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与抑制人卵巢癌SKOV3细胞LIMK-1/cofilin信号通路有关。     

牡荆素通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制人骨肉瘤细胞生长的研究

目的 研究牡荆素如何影响骨肉瘤细胞的生长以及所涉及的机制。方法 将143B细胞分为空白组(不给予任何处理，正常培养细胞)、对照组(0.1%二甲基亚砜)和低、中、高剂量实验组(20,40和60μmol·L^-1牡荆素)。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况，用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果 干预24 h后，中、高剂量实验组和对照组、空白组的细胞增殖率分别为(51.34±4.69)%、(33.16±3.67)%、(99.32±2.66)%和(100.00±3.26)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.34±0.03、0.27±0.03、0.87±0.05和0.87±0.03,p-Akt(ser473)蛋白相对表达水平分别为0.35±0.03、0.22±0.04、1.02±0.07和0.97±0.06,p-Akt(thr308)蛋白相对表达水平分别为0.33±0.02、0.31±0.03、0.93±0.04和0.93±0.02。中、高剂量实验组的上述指标与对照组和空白组比较，差异均有统计学意义(均...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨姜黄素诱导A549细胞凋亡的机制

目的 观察并探讨姜黄素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及其机制。方法 将A549细胞分为空白组(正常培养)和低、高剂量实验组(分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)及激动药+低、高剂量实验组(先用50μmol·L^-1 Recilisib Sodium干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)、抑制药+低、高剂量实验组(先用25μmol·L^-1 PI3K-IN-1干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)。用MTT法测定细胞增值率；用流式细胞术测定细胞凋亡情况；用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)mRNA的相对表达水平；用蛋白质印迹法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果 空白组、低剂量实验组、高剂量实验组、激动药+低剂量实验组、抑制药+低剂量实验组、激动药+高剂量实验组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100...     

2型糖尿病大鼠心肌PI3K/Akt/mTOR信号通路的改变及Sirt1的调控机制研究

目的检测Sirt1及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白在糖尿病大鼠心肌及高糖培养的H9C2细胞中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为糖尿病2周、4周、8周模型组和对照组,超声心动图检测大鼠心功能变化,Western blot检测大鼠心肌Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1蛋白表达变化。将H9C2细胞分为正常对照组、DMSO组(78.12 mmol·L~(-1))、高糖(HG)组(33 mmol·L~(-1))、白藜芦醇(Res)组(20μmol·L~(-1))、尼克酰胺(Nam)组(40 mmol·L~(-1)),Western blot及qRT-PCR研究心肌细胞Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1相关蛋白基因转录及表达,研究Sirt1对该信号通路的调控机制。结果在动物实验中,与2周DM大鼠比较,8周DM大鼠心肌Sirt1蛋白表达明显增加。2周模型组大鼠相对于正常对照组心肌PI3K、Akt、mTOR、S6K1表达明显增加,且S6K1表达4周模型组比2周模型组增加更明显,但8周表达降低。在高糖培养的H9C2细胞中,与对照组相比,高糖组Sirt1,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达明显增高。Nam处理组Sirt1表达明显降低,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达增高。Res处理组Sirt1表达明显增高,而PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达降低。结论 Sirt1通过负调控PI3K/Akt/mTOR信号通路参与糖尿病心肌损伤,参与早期糖尿病心肌病的发生发展。     

阿利吉仑对高血压肾病小鼠肾的保护作用及其作用机制

目的探究阿利吉仑对高血压肾病小鼠的保护作用及其对磷脂酰肌醇激/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法用微渗泵灌注血管紧张素Ⅱ制备高血压小鼠肾病模型。按照体重将小鼠随机分为6组:假手术组、模型组和低、中、高3个剂量实验组(灌胃阿利吉仑12. 5,25. 0,50. 0 mg·kg^-1)与对照组(卡托普利30 mg·kg^-1),每组15只;造模后给药,每日1次,连续灌胃2周。以实时定量PCR法测定肾组织中胰岛素受体底物2(Irs2)、磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)、蛋白激酶B(Akt) mRNA表达;以免疫印迹法测定Irs2、PI3K、Akt与Caspase-3蛋白表达情况。结果给药4周,假手术组、模型组、对照组和高剂量实验组的PI3K mRNA表达分别为1. 14±0. 21,0. 34±0. 08,1. 07±0. 23和0. 96±0. 22;这4组的Akt mRNA表达分别为1. 23±0. 27,0. 45±0. 13,1. 05±0. 16和0. 91±0. 15,模型组与假手术组比较或高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。这4组的小鼠肾组织Caspase-3蛋白表达水平分别为0. 29±0. 06,1. 06±0. 13,0. 31±0. 06和0. 37±0. 08,模型组与假手术组比较或高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论阿利吉仑对高血压小鼠肾具有一定的保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制Caspase-3表达有关。     

罗哌卡因对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用探究

目的 基于腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)通路探究罗哌卡因对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的保护作用。方法 对软骨细胞进行培养,将软骨细胞随机分为对照组、模型组和低、中、高剂量实验组。对照组常规培养,模型组用含10 ng·mL^-1IL-1β的培养基刺激细胞24 h,低、中、高剂量实验组在模型组的基础上,用25,50,100 mg·L^-1的罗哌卡因进行处理。用细胞计数法-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白、细胞外基质降解相关蛋白及细胞中磷酸化AMPK(p-AMPK)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,模型组24,48,72 h OD值降低;与模型组相比,中、高剂量实验组24,48,72 h OD值均明显升高(均P<0.05)。对照组、模型组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率分别为(4.24±0.64)%,(18.13±1.53)%,(14.93±0.52)%...     

补骨脂素对绝经后大鼠骨质疏松及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究补骨脂素对绝经后大鼠骨质疏松及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:将60只健康雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(0.09 mg/kg雌二醇)和补骨脂素低、中、高剂量组(22、44、88 mg/kg),每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均采用卵巢摘除去势法建立绝经后骨质疏松模型。术后正常饲养2个月,正常组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,各药物组大鼠灌胃相应药液;灌胃体积均为0.005 mL/g,每天1次,连续98天。末次给药24 h后,测定大鼠右侧下肢股骨和椎骨的骨密度,血清中钙离子、骨钙素、Ⅰ型前胶原N端前肽(P1NP)含量和骨形态发生蛋白2(BMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,以及股骨组织中PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠股骨和椎骨的骨密度以及血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量和BMP2、VEGF水平均显著降低,PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,补骨脂素中、高剂量组和阳性对照组大鼠股骨和椎骨的骨密度以及血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量和BMP2(补骨脂素中剂量组除外)、VEGF(补骨脂素中剂量组除外)水平均显著升高,各药物组PI3K、Akt、m TOR mRNA(补骨脂素低剂量组除外)及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),且高剂量组股骨骨密度和钙离子、BMP2水平以及PI3K蛋白表达水平均显著高于阳性对照组(P<0.05),mTOR mRNA表达水平显著低于阳性对照组(P<0.05)。结论:补骨脂素可改善绝经后大鼠的骨质疏松,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。