特发性高草酸尿症大鼠肝脏差异蛋白质的筛选

目的 寻找特发性高草酸尿症大鼠肝脏组织差异表达的蛋白质.方法 取3只雄性特发性高革酸尿症大鼠和3只正常对照雄性大鼠,分别取其肝脏组织约300 mg后提取其中的总蛋白.以荧光差异显示凝胶电泳(DIGE)技术分离肝脏中的全部蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)和DeCyderTM v6.5软件进行蛋白质的分析和鉴定.结果 总共筛选出21个差异表达蛋白质点,其中11个蛋白质点在特发性高草酸尿症组表达上调,10个蛋白质点下调.最终有18个差异蛋白质点被鉴定确认.结论 筛选出的这些差异蛋白质可能与特发性高草酸尿症有关.     

基于MDLC-MS/MS技术的股骨头缺血性坏死的组织蛋白质组分析

目的:应用组织蛋白质组学方法探寻与成人非创伤性股骨头缺血性坏死(ONFH)相关的蛋白质。方法:自2008年7月至2009年2月,从非创伤性ONFH(男7例,女3例)和新鲜股骨颈骨折(男、女各5例)而行人工髋关节置换术的患者中随机选取10例,平均年龄分别为52岁和63岁。术中取ONFH患者股骨头中坏死骨组织为试验组,取股骨颈骨折患者股骨头中的正常骨组织样品为对照组。用四步溶剂法提取骨组织总蛋白,经SDS-PAGE分离和酶解,应用多维液相色谱与串联质谱联用技术分离鉴定组织蛋白,以TPP软件检测两组蛋白质的差异表达水平,并用Turbo SEQUEST软件鉴定差异表达蛋白质。同时Western免疫印迹验证质谱检测的准确性。结果:试验组和对照组样品中分别鉴定二肽段以上的高可信度蛋白质数量1233个和999个,假阳性率0.8%。试验组中共鉴定差异表达蛋白质192个,其中表达量上调3倍以上的蛋白点107个,下调3倍以上53个,其中34种蛋白质与ONFH密切相关。Western免疫印迹证实试验组样品中GPCR26和CHST2表达量下调,与质谱结果一致。结论:非创伤性ONFH存在复杂的病理生理学过程,本研究发现的差异表达蛋白极有可能成为ONFH早期临床诊断的候选生物学标志物。     

利用二维胶内差示凝胶电泳技术检测胃癌的血清学肿瘤标记物

目的 分离胃癌、胃溃疡、正常人之间的差异蛋白质,检测胃癌的血清学肿瘤标记物.方法 从定量比较蛋白质组分析入手,利用二维胶内差示凝胶电泳技术(2D-DIGE)分离包括胃癌、胃溃疡和正常人共27例血清样本,以基质辅助激光解吸附电离串联质谱对差异蛋白点进行检测,检索Mascot数据库.结果 共检测出14个差异表达蛋白.正常人和胃溃疡比较有3种差异蛋白质,2种被鉴定出;胃溃疡和胃癌比较发现1个下调的蛋白质;胃癌与正常人中发现10个差异表达蛋白质,6个点在胃癌患者血清中上调.结论 2D-DIGE技术是一项有效的筛选胃癌患者血清中差异蛋白的技术手段,检测出的蛋白质有可能成为胃癌诊断的分子标记物.     

大鼠肝移植急性排斥反应的淋巴细胞蛋白质组学研究

目的 利用差异蛋白质学寻找肝移植急性免疫排斥反应相关功能蛋白.方法 选取SD大鼠与Wistar大鼠,建立大鼠同种异体肝移植的动物模型(急性排斥组)和大鼠同基因移植的动物模型(对照组);使用组织化学方法 对移植肝脏进行形态学观察;利用ELISA检测受体血清细胞因子;通过双向凝胶电泳分离急性排斥组和对照组肝移植后受体大鼠脾脏的淋巴细胞蛋白质,通过软件比较两组蛋白质的质纹图谱,进行差异点分析;选取差异点用基质辅助激光解析-飞行时间质谱进行蛋白鉴定;选取部分鉴定蛋白通过Western blot法进行检测,验证蛋白质组学的分析结果 .结果 ELISA检测结果 表明,移植术后3 d同种异体肝移植大鼠血清中IL-2和IFN-γ的表达上调;急性排斥组肝组织HE染色切片证实均有Ⅱ a～Ⅱ b级(Banff标准)排斥反应表现;差异蛋白质组学分析共鉴定出25个淋巴细胞蛋白质在急性排斥反应中的表达量发生了改变,其中13个蛋白点表达上调,12个蛋白点表达下调;Western blot法验证结果 显示,其中的2个相关蛋白(β-actin和碳酸酐酶)在急性排斥反应中的表达量变化与差异蛋白质组学分析结果 一致.结论 本实验筛选出25个大鼠肝移植急性排斥反应的相关功能蛋白,其中的β-actin和碳酸酐酶在排斥反应中有重要功能,为进一步系统研究这一免疫学现象奠定了基础.     

反应停对胆囊癌细胞影响的蛋白质组学研究

目的：筛选反应停作用于胆囊癌细胞后的相关差异蛋白,探讨反应停对胆囊癌细胞的作用机制。
方法：应用蛋白质组学技术分离出胆囊癌细胞的差异蛋白,细胞分为实验组和对照组,对两组差异蛋白进行分析和鉴定。
结果：共发现36个差异在2倍以上的蛋白点（P＜0.05）。实验组中13个表达下调,23个上调。选择其中差异在3倍以上的10个蛋白质斑点作为差异表达的质谱分析,鉴定出7个蛋白质点。
结论：反应停对胆囊癌细胞有一定作用。通过差异蛋白质点进一步探索其对胆囊癌的作用点,可为研究反应停的抗胆囊癌的作用机制提供线索。

     

应用蛋白质组学技术筛选Ⅰ期非小细胞肺癌的差异表达蛋白

目的 筛选和鉴定Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)的血清差异表达蛋白.方法 分别收集经手术、病理证实的6例Ⅰ期NSCLC患者、7例肺部良性疾病患者和15例健康体检者的血清,利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对Ⅰ期NSCLC的差异表达蛋白进行分离、筛选和鉴定.结果 每一标本的3张2-DE图谱半均蛋白质点数约(323±11)个.共挖取51个差异蛋白质点,经MALDI-TOF-MS分析,成功鉴定出5种蛋白质,均为上调蛋白,分别为α1-酸性糖蛋白、C1酯酶抑制物、血管紧张素原、转铁蛋白及转甲状腺素蛋白A链.结论 应用蛋白质组学技术在Ⅰ期NSCLC血清中鉴定出5种差异表达蛋白,为开发NSCLC早期诊断标志物提供了重要的候选蛋白.     

血清CEA阴性结直肠癌患者血清差异蛋白质的初步筛选

目的分析血清CEA阴性结直肠癌患者、血清CEA阳性结直肠癌患者与正常人血清中差异表达蛋白,筛选潜在的与血清CEA阴性结直肠癌患者诊断及预后密切相关的血清蛋白质。方法血清CEA阴性结直肠癌患者、血清CEA阳性结直肠癌患者与正常人空腹血清标本各11例分别等量混合成3组样本,利用双向凝胶电泳（2-DE）及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI_TOF-MS／MS）技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点,并对其部分蛋白进行生物学分析。结果筛选出3组间表达量差异2倍以上差异蛋白点共13个,进行MALDI-TOF-MS／MS分析,鉴定出：①血清CEA阴性结直肠癌患者与正常人血清比较,表达下调的蛋白有纤维胶凝蛋白2前体,纤维胶凝蛋白3,载脂蛋白L1,间a胰蛋白酶抑制剂轻链H4,转甲状腺素蛋白,表达上调的蛋白为免疫球蛋白lambda轻链。②血清CEA阳性结直肠癌患者与正常人血清比较,表达下调的蛋白有纤维胶凝蛋白2前体,纤维胶凝蛋白3,载脂蛋白L1,间a胰蛋白酶抑制剂轻链H4,转甲状腺素蛋白,表达上调的蛋白为：载脂蛋白E,结合珠蛋白。③血清CEA阴性结直肠癌患者与血清CEA阳性结直肠癌患者的1个差异点,经鉴定为免疫球蛋白lambda轻链。结论血清CEA阴性结直肠癌患者与血清CEA阳性结直肠癌患者、正常人血清的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可能成为血清CEA阴性结直肠癌患者诊断与判定预后的血清标志物。     

胃癌基因表达谱和蛋白质表达谱的分析研究

目的从转录组水平和蛋白质组水平寻找胃癌组织与正常胃组织间的差异表达基因和蛋白。方法应用含有14592个已知基因及表达序列标签的cDNA表达谱芯片获取基因表达谱信息．50％以上样本中Cy3／Cy5荧光强度比大于或等于2和小于或等于0．5的基因分别为在胃癌中表达上调或下调的基因。采用双向凝胶电泳（2-DE）分离32例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织总蛋白．对差异表达蛋白质点利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）进行分析．获取肽质量指纹图谱（PMF）。同时搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果与正常组织相比．胃癌组织中差异表达基因共有387个,其中表达上调的有149个基因．上调超过3倍的有29个基因：表达下调的有238个基因．其中下调超过5倍的有21个基因。在蛋白质水平鉴定了15个差异表达蛋白．在肿瘤组织中高表达的有10个．其余5个在肿瘤组织中低表达。胃癌中过表达的基凶与蛋白产物主要与细胞骨架运动、细胞增殖及信号传导有关．表达下调的则主要与细胞免疫防御、毒理代谢有关。结论从转录组水平和蛋白质组水平对胃癌基因表达谱进行分析．不仅有助于从分子水平全方位理解胃癌的发病机制及生物学特性．同时也有助于进一步发现新的胃癌相关标志物和基因治疗的靶点。     

骨折合并脑外伤时IGF-Ⅱ对骨折愈合的影响

目的测定骨折合并脑外伤后血清胰岛素生长因子2(insulin-like growth-factor 2,IGF-Ⅱ)的变化情况,并与单纯脑外伤、单纯骨折病人以及正常人进行对比,分析脑外伤后IGF-Ⅱ浓度变化与骨折愈合之间的关系,以期为临床骨折的治疗提供新的理论依据。方法选择52例住院患者,随机分为四组,每组13例,包括正常组、单纯骨折组、骨折合并脑外伤组及单纯脑外伤组。每例于伤后1、3、7、14d抽取外周静脉血5ml,采血后室温凝固30min,离心1000×G15min,收集分离血清,于-20℃冷冻保存。试验时严格按照IGF-Ⅱ试剂盒使用说明进行操作,计算出所有标本的IGF-Ⅱ的含量,并经统计学分析得出结论。结果单纯脑外伤组和单纯骨折组伤后第3天血清IGF-Ⅱ含量升高,1周时为正常组的2倍,2周时为正常组的3倍。骨折合并脑外伤组伤后第3天血清IGF-Ⅱ含量明显升高,为正常组的2倍,1周时可达5倍,2周时可达到7倍。其与单纯骨折组或单纯脑外伤组比较,差别均有统计学意义(P0.05)。结论骨折合并脑外伤病人IGF-Ⅱ含量明显升高,提示IGF-Ⅱ可能加速骨折愈合过程。     

骨折合并脑外伤时IGF—Ⅱ对骨折愈合的影响

目的测定骨折合并脑外伤后血清胰岛素生长因子2（insulin—like growth-factor2,IGF-Ⅱ）的变化情况,并与单纯脑外伤、单纯骨折病人以及正常人进行对比,分析脑外伤后IGF-Ⅱ浓度变化与骨折愈合之间的关系,以期为临床骨折的治疗提供新的理论依据。方法选择52例住院患者,随机分为四组,每组13例,包括正常组、单纯骨折组、骨折合并脑外伤组及单纯脑外伤组。每例于伤后1、3、7、14d抽取外周静脉血5ml,采血后室温凝固30min,离心1000×G15min,收集分离血清,于-20℃冷冻保存。试验时严格按照IGF-Ⅱ试剂盒使用说明进行操作,计算出所有标本的IGF-Ⅱ的含量,并经统计学分析得出结论。结果单纯脑外伤组和单纯骨折组伤后第3天血清IGF-Ⅱ含量升高,1周时为正常组的2倍,2周时为正常组的3倍。骨折合并脑外伤组伤后第3天血清IGF-Ⅱ含量明显升高,为正常组的2倍,1周时可达5倍,2周时可达到7倍。其与单纯骨折组或单纯脑外伤组比较,差别均有统计学意义（P〈0．05）。结论骨折合并脑外伤病人IGF-Ⅱ含量明显升高,提示IGF-Ⅱ可能加速骨折愈合过程。     

胰腺癌血清相关蛋白质分子的差异表达

目的 利用双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)的方法建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常对照人群外周血清的差异蛋白质双向凝胶电泳图谱并分析差异蛋白质点.方法 双向差异凝胶电泳分离20例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者和20例正常对照组人群外周血清蛋白,比较不同血清中蛋白质表达的差异.结果 成功建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人之间的外周血清蛋白质双向差异凝胶电泳图谱,软件分析共发现了168个明显差异表达的蛋白质点,其中在胰腺癌组与正常对照组的比较中有22个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,29个蛋白质点下调;在胰腺癌组和慢性胰腺炎组的比较中有24个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,54个表达下调;在慢性胰腺炎组和正常对照组的比较中有20个蛋白质点表达上调,19个蛋白质点表达下调.结论 双向差异凝胶电泳是快速有效的分离蛋白质新的方法,得到的双向差异凝胶电泳图谱以及显著表达差异的蛋白质点为质谱鉴定提供了实验基础.

Abstract：

Objective To analyze and compare the proteomes expressed by human pancreatic carcinoma, chronic pancreatitis and normal control groups. Methods Differencial expression of the proteomes in peripheral serum was analyzed by fluorescence 2-D difference gel electrophoresis (2D-DIGE). Results 2D-DIGE protein maps in 20 patients with pancreatic cancer, 10 patients with chronic pancreatitis and 20 normal controls were analyzed and 168 spots were identified by gel-analysis software. Between pancreatic cancer group and normal control group 22 protein spots were up-regulated and 29 spots down-regulated; 24 spots were up-regulated and 54 spots down-expressed between pancreatic cancer group and chronic pancreatitis group; 20 spots were up-regulated and 19 spots down-regulated between chronic pancreatitis group and normal control group. Conclusion 2D-DIGE was a rapid and efficient method to separate proteins. 2D-DIGE protein maps and different protein spots would provide an exprimental basis for the phase of mass spectrometry.     

脑外伤合并骨折患者骨折愈合过程中TGF-β1的作用

目的研究脑外伤合并骨折患者血清及骨痂中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达变化。方法将57例骨折分为两组,单纯骨折组31例和脑外伤合并骨折组26例:①在伤后1、2、3、4周时取空腹静脉血,采用ELISA方法进行血清中TGF-β1含量的测定;②根据手术距受伤时间分为3~7 d、8~14 d、15~21 d 3个时间段,于术中取骨痂,采用免疫组化染色,进行TGF-β1阳性细胞表达率测定;③在伤后2、4、8周行X线摄片。结果①ELISA:脑外伤合并骨折组血清中TGF-β1的含量在1~3周时均显著高于单纯骨折组,4周时两组比较差异无统计学意义;②免疫组织化学染色:脑外伤合并骨折组在各时间段TGF-β1表达阳性细胞率均显著高于单纯骨折组;③X线观察:脑外伤合并骨折组较单纯骨折组生成骨痂加速、量多、骨折线模糊。结论脑外伤可能主要是通过促进体液因素中TGF-β1等生长因子的表达来加速骨折愈合过程的。     

人去浆膜层胆囊组织蛋白质表达谱的建立与分析

目的 采用蛋白质组学技术分析胆固醇结石患者与正常人去浆膜层胆囊组织蛋白表达谱的差异,通过质谱技术鉴定差异表达蛋白,为胆石成因提供实验依据.方法 提取胆固醇结石患者和正常人去浆膜层胆囊组织蛋白,构建相应的双向电泳蛋白质表达谱并应用ImageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息,采用质谱鉴定差异表达蛋白质.结果 胆固醇结石患者与正常人去浆膜层胆囊组织差异蛋白质表达谱均获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,差异表达谱结果显示19个蛋白点在两者之间差异较大,质谱成功鉴定11个,1个重复.其中Tropomyosin 4（TPM4）、Transgelin （sm22）、Transthyretin （TTR）、CyanometRhbl.1、Haptoglobin-related protein precursor、Chain A,the structure of Holo type human Cu,Zn superoxide dismutase在结石组中表达上调,Myosin、Peroxiredoxin 3（Prdx3）、Hypothetical protein、T cell receptor alpha chain在结石组中表达下调.TTR、TPM4、SM22、Prdx3蛋白差异为Western blotting和RT-PCR所验证.结论 初步建立了胆固醇结石患者与正常人去浆膜层胆囊组织的差异蛋白质表达谱,分析、鉴定并验证了差异蛋白点,为胆固醇结石形成的关键调控蛋白质研究提供实验依据.     

不同预后小肠间质瘤的比较蛋白质组学分析

目的:分析不同预后小肠间质瘤病人组织蛋白质质点,寻找判断小肠间质瘤预后的候选蛋白质。方法:预后不良组和预后良好组小肠间质瘤组织各5例,经双向凝胶电泳分离总蛋白质,运用图像分析软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定部分差异蛋白质点。结果:比较蛋白质组学共鉴定出蛋白质28个(预后不良组中9个蛋白质表达上调,19个蛋白质下调)。预后不良组小肠间质瘤组织中微管不稳定蛋白(stathmin)、血清结合珠蛋白(haptoglobin 2,HP-2)和微管蛋白表达明显升高。结论:不同预后小肠间质瘤组织的蛋白质谱存在差异,stathmin和HP-2及微管蛋白可能成为判断小肠间质瘤病人预后的3种因子,为今后小肠间质瘤病人的临床预后判断提供依据。     

正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异蛋白组学研究

目的 应用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸离子电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF-MS)的蛋白组学方法,观察正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异表达蛋白质.方法 收集7例脊髓室管膜瘤标本作为肿瘤组,4例尸解得到的脊髓室管膜标本作为对照组.提取各组标本的蛋白质,定量后进行IEF和SDS-PAGE双向电泳分离,得到的2-DE图谱经染色后,通过软件找到差异蛋白点并且使用MALDI-TOF-MS技术进行鉴定,部分差异蛋白质进行Western blot验证.结果 成功鉴定出50个有效的差异蛋白质点(其中肿瘤组较对照组上调24个,下调13个,仅在肿瘤组中表达10个,仅在对照组表达3个).Western blot实验证实了差异蛋白波形蛋白(Vimentin)、膜联蛋白Ⅰ(Annexin Ⅰ)和HSPA8在肿瘤组中的高表达.结论 应用2-DE串联MALDI-TOF-MS技术能够建立具有高分辨率及可重复性的正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤2-DE图谱,并能有效鉴定差异蛋白质.其中的Vimentin、Annexin Ⅰ、HSPA8等蛋白可能与脊髓室管膜瘤的发病机制有关.     

兔脑死亡状态对肝脏蛋白质表达谱的影响

目的 分析兔脑死亡状态下肝脏存在的差异蛋白质,为揭示脑死亡状态下肝脏损伤的影响因素提供实验依据.方法 采用缓慢颅内加压法建立兔脑死亡模型.提取脑死亡后6h标本蛋白质进行双向凝胶电泳.利用PDQuest凝胶图像分析软件对图像进行分析.将两组间差异在2倍以上的蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱鉴定.在NCBI数据库中检索,鉴定出相应的蛋白质,并用蛋白印迹法进行验证.结果 双向凝胶电泳显示,假手术组可检测到大约(973±34)个蛋白质点,脑死亡组可检测到大约(987±38)个蛋白质点.经成组比较共计有52个明显差异表达的蛋白质点,与假手术组相比,上调29个,下调23个.10个差异蛋白点分别为线粒体醛脱氢酶、过氧化物酶6、3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、乙醇脱氢酶、二氢嘧啶酶相关蛋白4、Runt相关转录因子1、无机焦磷酸酶、谷氨酸-半胱氨酸连接酶的调节亚基、微粒细胞色素B5.其中,RUNX1是我们比较关注的一个蛋白.通过蛋白印迹法对RUNX1在各组织中的表达情况进行验证发现,随着脑死亡时间的延长,RUNX1在肝脏中的表达逐渐减少.结论 双向凝胶电泳结合质谱鉴定是差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具,鉴定出的蛋白质RUNX1可能与脑死亡后肝脏损伤的发生、发展有关,有助于对脑死亡后肝脏损伤机制的了解.     

脂联素蛋白在膝骨关节炎血清中的表达

目的通过对膝骨关节炎(KOA)Kellgren-Lawrence分级(K-L分级)的各阶段的血清样本进行同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)蛋白组学分析,查找正常组与KOA组的血清差异蛋白。方法收集符合美国风湿病学院诊断标准KOA患者60例,再参照K-L分级标准,分为K-L 0、Ⅱ、Ⅳ级3个亚组进行对比,每个亚组单纯随机抽样选取10例男性与10例女性。去除血清高丰度蛋白,进行稳定同位素116、117、118的i TRAQ标记、反相色谱柱分离、质谱检测,采用Swissport数据库检索蛋白峰图,并行生物信息学分析。采用Western blot技术对代表性血清差异蛋白行表达验证。并采用Image J软件计算条带的曝光值,分析差异蛋白组间差异。结果通过对不同样品的i TRAQ肽段实验标记、Q-star质谱鉴定和Mascot蛋白搜索软件搜库,共筛选出有意义差异蛋白169个。通过K-L 0级组与K-LⅡ级、Ⅳ级组对比,共筛选出有意义差异蛋白89个,其中上调的差异蛋白有75个,下调的差异蛋白有14个。通过Western blot验证结果显示,与正常对照组相比,脂联素蛋白在KOA患者血清中表达量上调(F=10.06,P0.05),C反应蛋白表达下调(F=6.26,P0.05)。结论本实验通过i TRAQ定量蛋白组学分析和Western blot验证发现脂联素蛋白在KOA患者的血清中的上调表达。脂联素蛋白可能是KOA发生发展过程中的生物标志物,为KOA发生发展机制及血清标志物的研究提供了新的线索。     

基于iTRAQ技术的BMP-2诱导肌源C2C12细胞向成骨细胞分化过程中的蛋白质组学研究

 目的 应用iTRAQ技术观察BMP-2诱导肌源C2C12细胞向成骨细胞分化过程中蛋白质表达组的变化。方法 将肌源C2C12细胞接种于BMP-2诱导分化体系中进行分化诱导,提取第7天的分化蛋白以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测,分析差异表达的蛋白质,并进行生物信息学分析。结果 iTRAQ 试剂标记的BMP-2诱导肌源C2C12分化细胞蛋白质表达谱分析筛选出明显差异表达蛋白质点为23个,表达上调的蛋白质点8个,下调的蛋白质点15个。通过趋势分类发现上述差异蛋白在C2C12细胞成骨分化的各时期（第1至7天）均存在蛋白的差异表达。其中部分上调蛋白在分化早期表达水平升高、部分上调蛋白在分化晚期表达水平升高;同样,部分下调蛋白在分化早期表达水平下降,部分下调蛋白在分化晚期表达水平下降。初步鉴定SERCA3、细胞色素b5、S100A4、ATPase inhibitor、ATPIF1等5个蛋白表达出现动态变化,证实上述蛋白可能与诱导成骨分化机制有关。结论 本研究差异蛋白表达趋势的结果显示全程监测C2C12细胞成骨分化的必要性,提示iTRAQ技术是研究细胞分子蛋白改变的有效的蛋白质组学方法,SERCA3、细胞色素b5、S100A4、ATPase inhibitor、ATPIF1等5个蛋白可作为诱导成骨分化机制研究的候选靶标。     

基于iTRAQ技术筛选肝细胞癌微血管侵犯的生物标记物

目的 利用核素标记的相对和绝对定量(iTRAQ)技术比较肝内无血管侵犯和微血管侵犯的肝细胞癌(HCC)患者的血清,筛选并鉴定其差异表达的蛋白质,以作为HCC微血管侵犯的生物标记物.方法 收集无血管侵犯和微血管侵犯的HCC患者血清各15例,组内等量混合后利用免疫亲和柱去除14种高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记后的样本利用二维色谱分离,经串级质谱鉴定及相对定量.结果 鉴定得到75种蛋白质,其中差异表达的蛋白有20种(上调或下调20%),微血管侵犯组较无血管侵犯组上调的蛋白有12种,下调的有8种.结论 鉴定出多种与肝癌微血管侵犯相关的生物标记蛋白,为肝细胞癌转移和复发的预测和术后的干预治疗提供了实验依据.     

骨肉瘤与良性骨肿瘤差异蛋白质组学研究

[目的]比较骨肉瘤与良性骨肿瘤蛋白质组学差异,探寻骨肉瘤特异性标记物.[方法]分别提取5例骨肉瘤肿瘤标本和5例良性骨肿瘤总蛋白,进行双向电泳,重复3次;银染、扫描后进行ImageMaster 2DE软件分析以发现差异蛋白并对差异蛋白质点进行MS+ MS/MS质谱鉴定,获取肽质指纹图谱并在NCBI数据库中找到匹配蛋白质.[结果]所获得的双向电泳银染图谱重复性较好,骨肉瘤组织蛋白质点数约为1 296±179,骨良性肿瘤组织蛋白质点数约为1 098±152,明显差异的蛋白质点38个,其中12个被成功鉴定,7个蛋白质在骨肉瘤中表达上调,其中热休克蛋白60、应激诱导磷酸化蛋白1在骨良性肿瘤中表达缺失;5个蛋白质在骨肉瘤中表达下降,以锚定蛋白下降最明显.[结论]蛋白质组学的分析能成功的发现骨肉瘤与骨良性肿瘤的差异蛋白质,为寻找骨肉瘤特异标记物提供依据.