低氧诱导因子1αmRNA表达与神经细胞缺氧复氧损伤的关系

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF－1α）与神经细胞缺氧复氧损伤的关系。方法：氯化钴处理PC12细胞模拟缺氧，去除氯化钴模拟复氧，用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒和RT－PCR技术检测缺氧0，1，2，4，8，12，16h以及复氧4，8，12h LDH漏出与HIF－1α mRNA水平。结果：（1）氯化钴处理细胞后，LDH漏出逐渐增加，8h达高峰，随后逐渐下降；HIF－1α mRNA水平逐渐增加，4h达高峰，随后逐渐下降；（2）氯化钴处理4h,去除氯化钴后，LDH漏出于8h明显增加，HIF－1α mRNA表达于4h明显减少，8，12h略有升高。结论：HIF－1α对神经细胞缺氧复氧损伤具有保护作用。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用机制的研究

目的：探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）对缺氧复氧心肌细胞损伤及早期生长反应基因-1（Egr-1）蛋白表达的影响。方法：用1—3d的SD大鼠进行心肌细胞原代培养。取生长5-6d的心肌细胞分为对照组、缺氧复氧组、聚乙二醇＋脂质体组、反义寡核苷酸组、反义寡核苷酸＋F2组。除对照组外其他组均做缺氧复氧模型。通过测定肌酸激酶、乳酸脱氢酶、肌钙蛋白、超氧化物歧化酶、丙二醛及肿瘤坏死因子-α的变化，观察心肌细胞损伤及炎症反应情况：Westernblot法检测培养心肌细胞中Egr-1蛋白的表达水平。结果：与对照组比，反义寡核苷酸组及反义寡核苷酸＋F2组Egr-1蛋白表达明显减少（P（0．05），细胞损伤及炎症反应程度明显减弱（P〈0．01）；反义寡核苷酸组与反义寡核苷酸＋F2组比，Egr-1蛋白表达虽无统计学意义（P〉0．05），但细胞损伤及炎症反应改善情况却有统计学意义（P〈0．05）。结论：F2可通过抑制Egr-1蛋白表达来减轻缺氧复氧心肌细胞的损伤，它还可通过其他机制起到保护缺氧复氧心肌细胞损伤的作用。     

不同缺氧方法诱导BeWo细胞缺氧诱导因子1α表达的实验研究

【目的】探讨用于滋养细胞缺氧研究的缺氧方法及滋养细胞模型。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系,分4组培养:正常对照组、低氧浓度组、二氯化钴组和去铁敏组。培养4 8h后收集细胞,应用实时定量PCR方法,检测BeWo细胞HIF- 1αmRNA表达水平;应用Westernblot方法,检测BeWo细胞HIF -1α蛋白的表达水平。【结果】与正常对照组相比,低氧浓度组、二氯化钴组和去铁敏组的HIF- 1α蛋白和mRNA表达均明显升高;与低氧浓度组比较,二氯化钴组和去铁敏组HIF 1α蛋白和mRNA表达水平无明显差异。【结论】环境缺氧和细胞缺氧均可诱导BeWo细胞HIF 1α的表达,二氯化钴或去铁敏可以作为缺氧方法用于滋养细胞缺氧方面的研究,BeWo细胞也可作为一种细胞模型用于HIF -1α表达的研究。     

缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达与调控

目的：探讨低氧对滋养细胞转化生长因子3B(TGF-3β)的表达的诱导作用，以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用．方法：滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养：正常对照组、缺氧组、HIF—1α反义组和HIF-1α正义组．HIF-1α反义组和HIF-α正义组先加入HIF-1α寡核苷酸，常氧条件培养6h，再低氧条件培养48h．48h后，收集细胞，实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平，Western blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平．结果：与正常对照组相比，缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加，TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高；与HIF—1α 正义组比较，HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低，TGF-3β mRNA和蛋白表达也下降．结论：缺氧可以诱导滋养细胞TGF-3β表达，并且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控．     

缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达及机理的实验研究

【目的】探讨低氧对滋养细胞转化生长因子-3β(TGF- 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF -1)对TGF -3β表达的调控作用。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF- 1α反义组和HIF -1α正义组。HIF -1α反义组和HIF -1α正义组先加入HIF -1α寡核甘酸,常氧条件培养6h ,再低氧条件培养4 8h。4 8h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测TGF- 3β和HIF -1αmRNA表达水平,Westernblot方法检测TGF- 3β和HIF 1α蛋白表达水平。【结果】与正常对照组相比,缺氧组的HIF -1αmRNA和蛋白表达增加,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF- 1α正义组比较,HIF- 1α反义组HIF -1αmRNA和蛋白表达降低,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也下降。【结论】缺氧可以诱导滋养细胞TGF- 3β表达,并且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF 1调控。     

刺五加皂苷对化学诱导缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子-1α表达的影响及机制

目的探讨缺氧诱导因子（HIF）-1α在刺五加皂苷（ASS）对神经元缺氧保护中的作用及可能的调控机制。方法建立神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞分化和氯化钴诱导化学缺氧的神经元缺氧模型。采用Western blot和RT-PCR方法分别检测ASS对缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的基因转录、蛋白表达及ERK1/2磷酸化的影响。结果正常培养的PC12细胞几乎没有HIF-1α mRNA的转录和表达,氯化钴的处理可显著增加HIF-1α mRNA的转录和表达,ASS可进一步增加缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的转录和表达;ASS和NGF的预处理还可以增加磷酸化ERK1/2的表达。以上变化均有统计学意义（均P〈0.05）。ASS的上述作用与NGF作用的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论ASS对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用可能与促进HIF-1α mRNA的转录和通过激活ERK1/2途径进而抑制HIF-1α降解从而增加其含量有关。     

低氧诱导因子1α在肝癌细胞不同缺氧时间的表达情况及其与血管生成和细胞凋亡的关系

目的：为了探讨低氧诱导因子-α（Hypoxiainducible factor-α．HIF-h）在不同缺氧时间的肝癌细胞中的表达情况及其与血管生成和细胞I鼠亡的关系。方法；用氯化钴处理HepG2肝癌细胞模拟缺氧环境。用RT—PCR技术检测缺氧0．1，2,4．6，8h肝癌细胞中的HIF-1α,VEGF,bcl-2的表达。用western blot方法检测caspase-3蛋白的表达情况．。结果：细胞在氯化钴处理后4小时。HIF-1α．VEGF。bcl-2 mRNA达到高峰，随后下降；caspase-3蛋白的表达与前三者正好相反。结论：HIF-1a通过促进VEGF,bcl-2的表达。抑制caspase-3的表达，从而抑制肝癌细胞凋亡。且与缺氧程度有关。HIF-1α在肝癌的发生发展中发挥重要作用。     

雌马酚对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨雌马酚对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法以PC12细胞为研究对象,构建体外神经元缺氧/ 复氧损伤模型,用雌马酚进行干预。MTT法检测细胞活力,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量,免疫细胞化学法检测活性氧（ROS）含量,Western blotting 检测缺氧/复氧损伤的PC12 细胞内NADPH氧化酶2 （gp91phox）和磷酸化Src（p-Src）激酶的表达。结果雌马酚可有效减轻缺氧/复氧引起的PC12细胞损伤,降低缺氧/复氧损伤细胞培养上清液中LDH的活性和MDA的含量,明显抑制ROS的生成及gp91phox和p-Src的表达。结论雌马酚通过抑制p-Src激酶和gp91phox表达,减少ROS生成,从而对PC12细胞缺氧/复氧损伤产生保护作用。     

缺氧对PC12细胞HIF-1／JAK2／NF—kB信号级联的影响

目的研究缺氧对PCI2细胞HIF-1／JAK2／NF-kB信号级联的影响。方法制备缺氧细胞模型,采用EMSA、半定量RT—PCR技术和Westernblot法检测JAK2、HIF-1α、HIF—1β基因mRNA和蛋白表达水平以及NF-kB活性。结果PC12细胞JAK2、HIF—1α、HIF—1βmRNA和蛋白在缺氧后表达增强,6h达到高峰,显著高于正常对照组;PC12细胞核内NF-kB活性在缺氧后6h达到高峰,12h下降。加入JAK2抑制剂AG490后缺氧6hNF—kB活性明显降低。结论缺氧能增强JAK2、HIF-1α、HIF-1β的表达。HIF-1能激活JAK2,对缺氧受损脑组织有保护作用。     

蒺藜皂苷对缺氧-复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响

目的：观察蒺藜皂苷（Tribulus terrestrisL．saponion，TTLS）对大鼠皮层神经元经缺氧一复氧后细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：离体培养大鼠皮层神经元，先用95％N：与5％CO2混合气体造成细胞缺氧3h，再给予95％O2。与59／6CO2混和气复氧12h，建立缺氧复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。中药组于缺氧-复氧时均加入TTLS进行干预。AnnexinV—FITC／碘化丙啶（propidiumiodide，PI）双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；JC-1荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的变化，荧光酶标仪测定神经元胞浆内caspase-3／7的活性，并采用免疫细胞化学法观察细胞Bax蛋白表达情况。结果：细胞缺氧3h复氧12h后，凋亡率明显增加，线粒体膜电位显著降低，胞浆内caspase-3／7活性增多，Bax蛋白大量表达（P〈0．01）。TTLS能抑制缺氧-复氧损伤的皮层神经元线粒体膜电位的降低，减少caspase-3／7活性，并可降低Bax蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡的发生。结论：缺氧一复氧可以诱导皮层神经元的凋亡。TTLS可降低缺氧-复氧诱导细胞凋亡的发生，其机制与维持线粒体膜电位的稳定，抑制caspase酶活性，降低Bax蛋白表达有关。     

预缺氧对大鼠低压缺氧性脑损伤保护作用的实验研究

目的 探讨预缺氧对严重低压缺氧引起大鼠海马神经细胞损伤及学习记忆能力降低的保护作用.方法 ①Wistar大鼠分为对照组、单纯缺氧组、预缺氧复合缺氧组.光镜和电镜观察大鼠海马CA1区神经元形态变化;TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡.②单纯缺氧组和预缺氧复合缺氧组大鼠进行穿梭箱主动回避训练,随后进行低压缺氧,观察大鼠学习记忆能力的改变.结果 预缺氧复合缺氧组大鼠CA1区神经元病理改变较轻,神经元凋亡显著低于单纯缺氧组(P＜0.05);预缺氧复合缺氧组大鼠在严重缺氧后受电击次数和主动逃避时间的增加显著低于单纯缺氧组(P＜0.05).结论 缺氧引起大鼠海马CA1区神经元凋亡等病理改变,并导致学习记忆能力降低;预缺氧对海马CA1区神经元的缺氧性损伤具有保护作用,并能有效减轻严重缺氧所导致的学习记忆能力下降.     

缺氧感受和信号转导

缺氧作为一种伤害刺激能够导致机体整体直至细胞水平发生相应的反应.对于外界氧分压的变化,氧感受器能够感受细胞内外氧分压的变化,产生活性氧(ROS),再由ROS激活下游激酶,直至缺氧相关转录因子的激活,产生诸如红细胞生成素(EPO)、血管衍生生长因子(VEGF)等,而使机体更好地适应外界变化.     

缺氧预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的抗凋亡保护作用

目的研究缺氧预处理对正常肝细胞株L02缺氧复氧损伤的抗凋亡细胞保护机制.方法建立缺氧预处理细胞模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组(hypoxia reoxygenation,H/R组)和缺氧预处理组(hypoxic precondition,H/P组).使用流式细胞术,检测细胞缺氧复氧处理后l、6、12、18、24 h细胞凋亡率,并分别检测各组细胞缺氧复氧处理后12 h时bcl-2、bcl-xl、bax和P53蛋白的表达量,同时通过透射电镜观察细胞超微结构变化.结果H/P组和H/R组比较,细胞凋亡率显著下降,bcl-2、bcl-xl蛋白表达显著升高,P53、bax蛋白表达量显著降低,透射电镜下可见细胞结构基本维持正常.结论缺氧预处理对缺氧复氧导致的L02肝细胞损伤有明显的保护作用.肝缺氧预处理过程中,bcl-2、bcl-xl、bax及P53蛋白参与了细胞凋亡调控作用.     

西洛他唑抗高原缺氧的药效学评价

目的:高原环境具有低氧分压的特点,氧分压降低导致肺泡携氧量降低,组织可利用氧气减少,从而引发机体组织损伤.西洛他唑是一种磷酸二酯酶III抑制剂,能够增加血红蛋白(hemoglobin,Hb)在组织中的释氧量.本研究旨在探讨西洛他唑的抗缺氧活性及在急进高原缺氧模型中的抗缺氧作用.方法:将40只雄性BALB/C小鼠随机分为...