DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的 探讨DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用.方法 采用抗酸杆菌涂片法、罗氏培养法、比例法药敏试验及DNA微阵列芯片法对海南地区的2069例疑似结核病患者痰标本进行检测,并对结核分枝杆菌检出率、耐药性及耐药基因突变特征进行分析.结果 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌检出率为明显高于罗氏培养法和...     

焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌四种药物耐药性

目的 利用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星的耐药性,并对其临床应用进行评价.方法 收集上海市肺科医院2008-2009年临床确诊的肺结核患者的痰标本培养阳性结核分枝杆菌89株.所有菌株按<结核病诊断实验室检验规程>进行分枝杆菌培养、菌种鉴定.另外10株已知药敏结果的结核分枝杆菌来自上海市肺科医院菌株库.利用焦磷酸测序技术,以10株已知药敏结果和经直接测序已知耐药基因突变情况的结核分枝杆菌为试验菌株,探索焦磷酸测序检测结核分枝杆菌rpoB、katG、gyrA、rrs耐药基因的最佳模式,并用该条件检测89株结核分枝杆菌临床分离株,检测结果与Bactec 960药敏法进行比较.结果 rpoB、gyrA基因检测宜采用焦磷酸测序序列分析模式,katG、rrs基因检测宜采用焦磷酸测序单核苷酸多态性模式.以Bactec 960药敏法测定结果为判断标准,则焦磷酸测序法检测89株结核分枝杆菌临床分离株对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性的敏感度分别为98.0%、64.1%、79.5%、78.3%,特异度分别为97.5%、100.0%、90.0%、100.0%,准确性分别为97.8%、77.5%、85.4%、94.4%,该法检测利福平、氧氟沙星、阿米卡星的检测结果与Bactec 960药敏检测结果一致性较好,Kappa值均≥0.7.结论 焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性具有快速、准确、高通量的优点,是一种可对结核分枝杆菌多种药物耐药性进行快速检测的方法.

Abstract：

Objective To develop an assay to determine Mycobacterium tuberculosis resistance to rifampin, isoniazid, ofloxacin and amikacin by pyrosequencing and evaluate the value of this method in clinical application. Methods Eighty-nine clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from tuberculosis patients were collected from Shanghai Pulmonary Hospital during 2008 to 2009. All strains were isolated from decontaminated sputum, cultured on Lowenstein-Jensen media and identified by traditional biochemical tests with standard methods. Ten Mycobacterium tuberculosis were selected from the strain bank of Shanghai Pulmonary Hospital. The optimal conditions of detection of rpoB, katG, gyrA and rrs gene by pyroseuencing were determined, using the 10 Mycobacterium tuberculosis strains whose drug susceptibility of Bactec 960 and sequence of rpoB, katG, gyrA, rrs gene were known. Then the drug susceptibility of 89 Mycobacterium tuberculosis clinical isolate strains were detected by pyrosequencing using this conditions and the results were compared with that of the Bactec 960 methods. Results The pyrosequencing program of sequence analysis was suitable for the detection of the mutations of rpoB and gyrA genes, and the program of single nucleotide polymorphism was suitable for katG and rrs genes. Among the 89 Mycobacterium tuberculosis clinical isolates,when using the drug susceptibility of Bactec 960 as the standard, the sensitivity of rifampin, isoniazid,ofloxacin and amikacin is 98.0%, 64. 1%, 79.5%, 78. 3% respectively, the specificity is 97.5%,100. 0%, 90. 0%, 100. 0% respectively, the accuracy is 97.8%, 77. 5%, 85.4%, 94. 4% respectively,tested by pyrosequencing. The results of the detection of resistance to rifampin, isoniazid, ofloxacin and amikacin in Mycobacterium tuberculosis using pyrosequencing technique were almost the same with that of Bactec 960, and Kappa ≥0. 7 in each detection. Conclusion Pyrosequencing is thus a rapid, accurate and high throughput method for detecting Mycobacterium tuberculosis resistance to these four drugs.     

DNA 微阵列芯片法用于检测结核分枝杆菌耐药性的研究

目的：通过与传统的比例法在结核分枝杆菌耐药性检测的比较,评价 DNA 微阵列法用于检测结核分枝杆菌耐药性的可行性。方法随机抽取本院2012年1月至2013年3月从临床标本中分离培养所得的结核分枝杆菌54株,通过 DNA 微阵列法和比例法分别进行异烟肼和利福平的耐药性检测并对结果进行比较分析。结果以比例法为金标准,DNA 微阵列法对异烟肼和利福平的耐药检测结果与比例法的符合率分别为75．0％、91．0％。结论 DNA 微阵列技术适用于临床一线耐药结核分枝杆菌的快速筛查。     

结核分枝杆菌噬菌体法直接药敏试验的临床应用

目的 探讨噬茵体微孔纸片法直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对4种抗结核药物耐药性的临床应用价值.方法 用噬菌体微孔纸片法检测215例痰标本中的MTB,同时检测其对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性.MTB检测结果与改良罗氏培养法、噬菌体生物扩增法(PhaB法)结果进行比较,药敏试验结果与比例法、PhaB法结果进行比较.结果 ①微孔纸片法的MTB检测阳性率33.0%,改良罗氏培养法32.8%,PhaB法34.8%.以改良罗氏培养法结果为评价标准,微孔纸片法检测MTB的敏感度92.5%,特异度为94.9%,准确度94.1%,阳性预测值(PPV)为89.9%.阴性预测值(NPV)为96.3%.②微孔纸片法直接药敏试验成功率21.5%,涂阳痰标本成功率73.8%,均为痰茵(++)及以上标本.以比例法药敏结果为评价标准,微孔纸片法检测MTB对4种药物耐药性的敏感度、特异度、PPV、NPV和准确度分别为:(链霉素)91.7%、90.9%、78.6%、96.8%和91.1%;(异烟肼)86.7%、96.7%、92.9%、93.5%和93.3%;(利福平)89.5%、91.7%、85.O%、94.3%和88.9%;(乙胺丁醇)87.5%、86.2%、77.8%、92.6%和88.9%.结论 微孔纸片法直接检测痰标本中MTB及其耐药性快速、简便、价廉,且观察结果直观,不需特殊仪器设备,适于基层医院推广应用.     

淮安地区350株痰结核分枝杆菌药敏结果及初复治耐药结果分析

目的分析淮安地区住院及门诊随访患者痰标本中分离出的结核分枝杆菌对4种常用抗结核药物的耐药情况,比较初治及复治患者对4种结核药物的敏感度差异,为临床治疗提供用药参考,减少经验用药加强规范合理用药减少结核分枝杆菌耐多药率的发生。方法采用比例法 对350株结核分枝杆菌进行两种一线抗结核药（异烟肼,利福平）两种抗结核药（氧氟沙星,卡那霉素）敏感性测定。结果350株结核分枝杆菌总体耐药率为37.7%（131/350）,而初治耐药率为30.4%（71/233）,复治耐药率为51.3%（60/117）。另外350株结核分枝杆菌的总体耐多药率为15.4%（54/350）,而初治耐多药率为11.2%（26/233）,复制耐多药率为23.9%（28/117）。与全国第五次结核病流行病学调查比较耐药率及耐多药率均有提高。结论复治肺结核患者分离出的结核分枝杆菌耐药率及耐多药率均较初治患者高。加强患者管理,规范治疗对初治患者尤为重要。     

Xpert MTB/RIF检测痰标本结核分枝杆菌与利福平耐受性的临床应用研究

目的分析Xpert MTB/RIF方法用于临床快速检测结核分枝杆菌(MTB)与利福平耐受性的临床意义。方法收集2015年1-12月在惠州市结核病防治研究所及5个县区医院结核科就诊的肺结核患者痰标本552例,进行涂片镜检、Xpert MTB/RIF核酸检测和改良罗氏培养,并对培养阳性者进行药敏实验。评价各种方法 MTB检测灵敏度与特异度,对比传统药敏方法和Xpert MTB/RIF检测利福平耐药性的结果并分析。结果 Xpert MTB/RIF与改良罗氏培养法对MTB检测结果相比,敏感度95.3%、特异度93.1%;耐药性对比结果中,所有阳性标本中利福平耐药的敏感度82.1%,特异度97.8%;Xpert MTB/RIF检测MTB分级与改良罗氏培养分级一致性分析中,kappa=0.688,提示两者结果具有良好的一致性。结论 Xpert MTB/RIF可用于临床早期快速检测结核分枝杆菌与利福平耐药检测的筛查,有利于临床快速决策。     

基因芯片检测技术检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药的实际应用效果评价

目的 评价基因芯片检测技术(基因芯片技术)在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果.方法 利用传统罗氏培养及药敏试验和基因芯片技术同时对开封市2011年3～11月登记的541例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏培养及药敏试验为金标准对基因芯片技术的检测效果进行评价.结果 具有完整的异烟肼和利福平耐药检测结果的473例患者纳入分析.基因芯片技术对初治涂阳患者异烟肼耐药的检测效果与金标准有统计学差异(P<0.05),灵敏度为68.97%,Kappa值为0.51,阳性预测值为46.51%;检测复治涂阳患者异烟肼耐药的灵敏度为92.59%,Kappa值为0.76,阳性预测值为78.13%;检测初治涂阳患者利福平耐药的灵敏度为90.48%,Kappa值为0.82,阳性预测值为76.00%;检测复治涂阳患者利福平耐药的灵敏度为91.18%,Kappa值为0.82,阳性预测值为88.57%.所有检测结果的特异度均>87.00%,阴性预测值均>93.00%.结论 基因芯片技术对初治涂阳患者异烟肼耐药的检测效果不理想,可能会导致该技术对初治涂阳患者耐多药检测的阳性预测值偏低,在结核病防治工作中造成过度诊断.     

Rapid detection of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis directly from stained sputum smears using single-tube nested polymerase chain reaction deoxyribonucleic acid sequencing

Microscopy is the mainstay of laboratory diagnosis of tuberculosis especially in resource poor countries. The World Health Organization has also recommended microscopy as the mainstay of diagnosis for directly observed treatment, short course. Using DNA extracts from Ziehl-Neelsen (ZN)-stained sputum smears, a single-tube nested polymerase chain reaction was optimized to confirm Mycobacterium tuberculosis complex and detect rifampin (RIF) resistance by sequencing, using a combination of novel (rpoB47 and rpoB158) and previously described (rpoB105 and rpoB293) primers. Carryover DNA was strictly monitored using several negative controls, and inhibition was ruled out by spiked controls. No such target was detected from negative controls and purified genomic DNA from other nontubercular mycobacteria. Resistance could be detected in 91.1% (51/56) slides. The results obtained were concordant with the 1% proportion method and DNA sequencing performed on culture isolates. Our results demonstrate that the method is suitable for rapid detection of susceptibility to RIF in acid-fast bacillus-positive ZN-stained slides obtained from patients suspected of harboring drug-resistant M. tuberculosis.     

7种实验方法诊断结核病的临床应用价值

目的评估直接涂片法、浓集涂片法、结核分枝杆菌罗氏培养法、BACTEC MGIT960系统培养结核分枝杆菌法、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)扩增法、结核分枝杆菌IgG抗体检测等7种方法对临床结核诊断的应用价值。方法对临床确诊的672例肺结核患者和62例健康体检者的痰标本用7种结核菌检测方法进行检测。结果 672例患者中检测阳性率分别为直接涂片法17.0%(115/676)、浓集涂片法25.6%(173/676)、改良罗氏培养法32.2%(218/676)、BACTEC MGIT960系统培养结核分枝杆菌法45.7%(309/676)、实时荧光定量PCR 90.1%(609/676)、SAT扩增法96.4%(652/676)、结核分枝杆菌IgG抗体检测法65.4%(442/676)。对照组只有荧光PCR法和结核抗体法检出阳性,阳性率分别为8.1%、12.9%。涂阴标本经罗氏培养法+结核抗体法+SAT法联合检出阳性率高于单一检测方法。结论涂片法操作简便、快速和价格便宜,但阳性率低,在长时期内其依然是基层医院诊断结核病的主要检测手段;结核分支杆菌培养能进行菌种鉴定和药物敏感试验仍是不可缺少的方法,但周期长;结核抗体法方便,简单,仍是结核实验室诊断的重要手段,但不能区分感染与发病;荧光PCR扩增法快速,灵敏,有较好诊断价值,但设备昂贵,技术要求高,易污染;SAT法快速,灵敏,要求较荧光PCR扩增法低,可以辅助诊断结核病。同时联合检测提高诊断率,并满足不同临床需要。     

膜芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的研究

目的 验证膜芯片技术在结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药性检测中的应用价值.方法 收集393例临床标本（包括痰液、尿液、胸腔积液、腹水标本）,根据结核分枝杆菌耐药位点的DNA序列,设计用于检测rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因常见突变类型的膜芯片,对上述临床标本进行检测,并将其与传统微生物敏感性试验结果进行比较,对不相符结果用聚合酶链反应产物直接测序（PCR-DS）进行验证.结果 以常规培养法为金标准,膜芯片法扩增结核分枝杆菌的敏感性、特异性、准确性分别为90.4%、98.8%和95.7%,其对结核分枝杆菌RFP、INH、SM和EMB耐药性检测的敏感性分别为92.3%、83.3%、68.8%和83.3%;准确性分别为98.6%、97.3%、96.6%、和98.5%;特异性均达到100.0%.结论 膜芯片法检测结核分枝杆菌耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,可作为常规微生物敏感性试验的补充.     

结核分枝杆菌耐利福平和异烟肼相关基因快速检测的应用研究

目的 利用DNA芯片检测技术直接检测痰标本中结核分枝杆菌耐利福平(RFP)、异烟肼(INH)相关的耐药基因(rpoB、katG/inhA),评价DNA芯片检测技术临床应用的可行性.方法 对586份涂阳痰标本使用L-J培养并用终点法确定其耐药性,同时利用DNA芯片检测技术检测痰标觋本中结核分枝杆菌的rpoB、katG/inhA常见基因突变位点的突变情况,比对两种方法的检测结果,对不符合的菌株测定其相应DNA序列,评估上述试验的准确性.结果 (1)586份涂阳痰标本,其中3(+)163份、2(+)204份、1(+)217份,培养阳性584份.耐药结果显示,对INH、RFP敏感的菌株分别为361株和327株,耐药菌株分别为223株和247株,其中低浓度耐药、高浓度敏感菌株分别为93株和59株,低浓度、高浓度均耐药菌株分别为130株和188株.(2)耐药基因特异性片段扩增阳性标本367份(62.8%)、阴性217份(37.2%).对INH耐药相关基因(katG/inhA)突变检出率是28.4%,突发发生位点集中在katG315位密码子(89.8%);对RFP耐药相关基因(rpoB)突变检出率是55.9%(137/247),突变发生位点主要在rpoB 531和rpoB 526位密码子,发生率分别是68.6%和16.1%.(3)对L-J药敏结果与DNA芯片检测结果不符的菌株进行DNA序列分析,发现有漏检现象.结论 DNA芯片技术直接检测样本中结核分枝杆菌的相关耐药基因存在可行性,如直接应用于临床样本检测,关键要解决样本中DNA的提取效率、PCR的扩增效率和试验的质量控制.     

云浮地区肺结核病患者结核分枝杆菌复合群耐药性分析

目的 分析云浮地区肺结核病患者结核分枝杆菌复合群(MTBC)耐药特点,为制定个体化治疗方案提供指导.方法 收集云浮市区及4个县区结核病门诊初诊结核病患者痰培养阳性菌株1571株,采用对硝基苯甲酸(PNB)鉴定培养管进行MTBC鉴别试验;采用比例法进行菌株对9种抗结核病药物(4种一线,5种二线)的体外药物敏感性试验.结果...     

PCR—ELISA测定结核分枝杆菌DNA临床应用评价

目的　评价聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)测定结核分枝杆菌DNA临床应用价值。方法　用PCR ELISA测定 436例肺结核、172例非结核病人痰标本中的结核分枝杆菌DNA ,并结合临床诊断和痰菌检查对实验结果进行分析。结果　 436例活动性肺结核病人本法最终阳性 341例 ,阳性率 78.2 1% ,其中痰菌阳性病人本法阳性率为 97.0 7% ,痰菌阴性病人阳性率为 5 5 .33 % (10 9/ 197) ;而 172例对照患者只有 3例假阳性 ,假阳性率 1.74%。结论　本法测定痰液结核分枝杆菌DNA对肺结核的诊断具有很高的敏感性和特异性 ,尤其对痰菌阴性的活动性肺结核病人具有重要辅助诊断价值     

探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变

目的 评价探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的应用价值,为临床检测提供指导依据.方法 613份痰标本于2009年9月至2010年4月收集自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心.结核分枝杆菌H37Rv标准株来源于国家结核病参比实验室.37株包含结核与非结核分枝杆菌的标准盘由中国药品生物制品检定所提供.首先采用梯度稀释的野生型标准株H37Rv DNA考察探针熔解曲线分析法的分析灵敏度,然后用标准盘验证其检测特异性,最后以测序法为对照方法,采用613份结核分枝杆菌的标本评价该方法的临床应用价值.结果 探针熔解分析法可检测到3拷贝/反应,且能特异检测结核分枝杆菌.613份结核分枝杆菌的检测结果显示,符合要求的583份标本的试剂盒检测结果与测序结果完全一致,其中embB306突变菌株数为34株,embB 378-380突变菌株数为23株,embB 406突变菌株数为3株,embB 497突变菌株数为3株.结论 探针熔解分析法检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变特异性好,灵敏度高,能有效地检测临床标本常见乙胺丁醇耐药突变位点,是值得推广的快速检测方法.

Abstract：

Objective To evaluate the potential use of a probe melting analysis (PMA) assay in detecting the embB mutations which confer resistance against ethambutol in Mycobacterium tuberculosis. Methods The analysis sensitivity and specificity of PMA were investigated by detecting a serially diluted H37 Rv DNA and a reference panel from National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Product. Six hundred and thirteen sputum samples were collected from the Xiamen Center for Disease Control and Prevention, Xiamen First Hospital and Center for Zhangzhou Disease Control and Prevention from September 2009 to April 2010. The PMA assay was then evaluated by detecting 613 clinical isolates and the results were compared with the sequencing results. Results The PMA assay could specifically detect Mycobacterium tuberculosis and had a limit of detection of 3 copies per reaction. The assay results with 613 clinical isolates showed that PMA gave a 100% concordance with sequencing in the 583 qualified samples, among which 34 were mutations at embB 306,23 at embB 378-380, 3 at embB 406 and 3 at embB 497. Conclusions PMA assay is a sensitive and specific method enabling efficient detection of common embB mutations causing ethambutol-resistance. The rapidness of this method together with its reliability would facilitate its use in routine testing.     

174株耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药耐药情况分析

目的：分析该院耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药的耐药情况,为耐多药结核病的治疗提供参考。方法采用回顾性分析法分析2011年5月至2013年5月结核病患者痰标本培养及药敏结果资料,对比分析耐多药分枝结核杆菌对5种二线药物耐药比率。结果初治耐多药结核分枝杆菌对二线耐药情况如下：耐药顺次由高到低依次为左氧氟沙星、对氨基水杨酸、丙硫异烟胺、阿米卡星及卷曲霉素的耐药比率分别为17．7％、14．5％、12．9％、8．1％及3．2％,耐两种的比率为4．8％,耐3种及3种以上的比率均为3．2％;复治情况的耐药顺次同初治顺次,但耐药比率不同,分别为50．0％、33．9％、25．9％、21．4％和16．1％,耐2种的比率为16．1％,耐3种为13．4％,耐3种以上的为12．5％。初治与复治的各种情形耐药比率比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论该院耐多药结核杆菌耐药比率低于国内平均水平,复治病例耐药比率高于初治。     

显微镜观察药物敏感度检测技术在二线抗结核药耐药性检测中应用

目的 探讨MODS同时快速检测4种二线抗结核药耐药性的效果.方法 用24孔细胞培养板建立显微镜观察药物敏感性技术,进行二线抗结核药物耐药性检测,并对最佳检测条件进行探讨.将该技术用于上海市肺科医院2007-2008年住院肺结核患者痰标本分离60株结核分枝杆菌对丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星耐药性检测,并与传统罗氏药敏结果进行比较,对2种方法检测结果不符的菌株进行MIC测定.结果 MODS检测丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为96.7%(58/60)、98.3%(59/60)、91.7%(55/60)、96.7%(58/60).以传统罗氏药敏结果为判断金标准,MODS检测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值及准确性丙硫异烟胺分别为100%、87.5%、87.5%、100%、96.7%,阿米卡星分别为100%、90.0%、90.0%、100%、98.3%,卷曲霉素分别为76.9%、95.7%、83.3%、93.8%、91.7%,左氧氟沙星分别为100%、96.0%、83.3%、100%、96.7%.结论 MODS检测丙硫异烟胺、阿米卡星、卷曲霉素、左氧氟沙星耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点,与传统罗氏药敏结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速检测方法之一.     

4种检测方法在结核病临床诊断中的应用价值

目的探讨结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核分枝杆菌快速培养试验、结核分枝杆菌抗体免疫球蛋白M(IgM)与免疫球蛋白G(IgG)联合检测,以及痰液或肺泡灌洗液涂片4种肺结核诊断方法的临床诊断价值。方法选取该院2014年10月至2015年5月临床初次诊断为结核病,且尚未用药的住院患者516例,对所有患者行T-SPOT.TB、结核分枝杆菌快速培养试验、结核分枝杆菌抗体IgM与IgG联合检测和痰液或肺泡灌洗液涂片检测,计算并比较各方法的灵敏度。结果 T-SPOT.TB的灵敏度(88.76%)高于结核分枝杆菌快速培养试验(45.74%)、结核分枝杆菌抗体IgM与IgG联合检测(72.87%)、痰液或肺泡灌洗液涂片(17.25%),差异均有统计学意义(P0.01)。结论 T-SPOT.TB在检测结核分枝杆菌感染、辅助结核病诊断方面具有很高的应用价值,同时联合其他检测方法可提高诊断率,满足不同的临床需要。     

Detection of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis strains by using a specialized oligonucleotide microarray

DNA microarray represents one of the major advances in diagnostic sequencing of polymerase chain reaction (PCR) products. Until now, arrays have been relatively expensive, complex to perform, and difficult to interpret, limiting their wide application in the clinical laboratory. A moderate-density oligonucleotide microarray that can rapidly identify Mycobacterium tuberculosis rifampin-resistant strains was developed. The method is based on the detection of point mutations and other rearrangements in the rpoB gene region determining rifampin resistance. Rifampin resistance was determined by hybridizing fluorescently labeled, amplified genetic material generated from bacterial colonies to the array. Fifty-three rifampin-resistant M. tuberculosis and 15 rifampin-susceptible M. tuberculosis were tested and results were concordant with those based on culture drug susceptibility testing and sequencing. Rifampin-resistant clinical isolates were detected in as little as 1.5 hours after PCR amplification with visual results. It is demonstrated that oligonucleotide microarray is an efficient, specialized technique to implement and can be used as a rapid method for detecting rifampin resistance to complement standard culture-based method.     

结核病3种实验诊断方法比较与分枝杆菌耐药性分析

目的 比较结核病3种实验诊断方法,分析目前深圳市分枝杆菌耐药情况.方法 统计2009～2010年深圳市第三人民医院临床确诊结核病患者痰标本涂片镜检、培养和PCR检测结果,并对分枝杆菌菌种及对治疗药物耐药情况进行统计分析.结果 共有640例资料齐全的结核病确诊病例入选,其中肺结核537例、结核性胸膜炎82例、结核性脑膜炎21例,分枝杆菌涂片镜检阳性率分别为44.1%、5.3%和13.3%,分枝杆菌培养法阳性率分别为59.9%、12.9%和30.0%,PCR检测阳性率分别为52.2%、16.7%和26.3%.经分枝杆菌菌种鉴定,人型结核分枝杆菌占67.0%、牛型结核分枝杆菌占16.8%、非结核分枝杆菌占16.2%,人型结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素的耐药率分别为16.4%、14.8%、4.7%和15.6%.结论 目前结核病实验诊断方法主要有涂片镜检、培养和PCR检测,病原菌以人型结核分枝杆菌为主,对3种主要抗结核药物的耐药率较高.另外,菌阴结核约占40%,目前对菌阴结核、活动性结核与陈旧性结核的诊断和鉴别诊断困难,期待新的方法.     

HIV/AIDS合并结核感染患者中分枝杆菌检测技术比较和耐药表型研究

目的 对HIV/AIDS合并结核分枝杆菌(MTB)感染实验室诊断技术进行比较研究,分析患者MTB的药物敏感性和耐药表型.方法 应用T-SPOT.TB试剂盒和rRNA扩增直接检测(MTD)试剂盒对HIV/AIDS合并MTB感染患者进行检测,同时做抗酸杆菌涂片、TB-DNA和结核菌培养,比较以上几种实验方法 阳性检出率.对MTB培养阳性的患者做五种药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、吡嗪酰胺)敏感性试验.结果 T-SPOT.TB对HIV/AIDS合并MTB感染阳性检出率为68.1%(64/94),明显高于其他四种实验方法,MTD的阳性检出率为40.0%(30/75),涂片查抗酸杆菌阳性率18.1%(17/94),TB-DNA阳性率35.5%(27/76),结核菌培养阳性检出率为26.6%(25/94);T-SPOT.TB与其他四种实验方法 比较有明显统计学差异(P<0.01);MTD阳性检出率高于其他三种方法,但与TB-DNA、结核菌培养比较无差异,与涂片查抗酸杆菌比较有统计学差异(P<0.05).T-SPOT.TB、PPD检测结核的敏感度随CD4 T淋巴细胞水平的升高而增强.25例确诊HIV/AIDS合并结核患者中,五种药全敏感76.0%(19/25),耐多药耐药率为16.0%(4/25),单耐异烟肼耐药率8.0%(2/25).结论 T-SPOT.TB和MTD在HIV/AIDS合并MTB感染中是一种快速敏感的检测方法,可作为HIV/AIDS合并结核感染的辅助诊断.大部分HIV/AIDS合并结核患者对目前一线抗结核药仍敏感,但耐药患者多为耐多药.