淫羊藿甙对成骨细胞凋亡的影响

目的 通过研究淫羊藿甙对体外培养的成骨细胞凋亡的影响,探讨淫羊藿甙防治骨质疏松的可能机制.方法 采用酶消化法和机械分离法获得新生SD大鼠成骨细胞,取第四代细胞随机分为,雌二醇组(1×10-8 mmol/l),淫羊藿甙低剂量组(1 ng/ml),中剂量组(10 ng/ml),高剂量组(100 ng/ml)对照组,经药物处理48 h后,用TUNEL和扫描电镜的方法检测成骨细胞的凋亡.结果 与对照组相比较,淫羊藿甙各剂量组的凋亡指数均下降(P<0.05),其中淫羊藿甙中剂量组的凋亡指数下降明显,差异有高度统计学意义(P<0.01);扫描电镜显示淫羊霍甙各组的凋亡细胞较对照组减少,尤以淫羊霍甙中剂量组最少.结论 淫羊藿甙可以通过抑制成骨细胞的凋亡,促进骨形成,减少骨吸收,从而发挥抗骨质疏松的作用.     

淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

本实验根据小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力对巨噬细胞产生白细胞介素－１（ＩＬ－１）和肿瘤坏死因子的能力进行活测定。观察了淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。     

淫羊藿甙对大鼠早期卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡影响的初步研究

目的 探讨淫羊藿甙对早期卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对受孕11.5 d大鼠灌胃[100mg/(kg·d)]直至生产,分别取淫羊藿甙灌胃组(试验组)和空白对照组中出生2 d、4 d、8 d龄新生大鼠卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化染色观测caspase-3的定位和表达水平.结果 在试验组新生大鼠,2d龄卵巢卵母细胞巢内卵母细胞比例增高,原始卵泡比例下降;4 d龄卵巢中原始卵泡比例显著增高,发育卵泡比例降低;8d龄卵巢各不同发育阶段卵泡比例与对照组相一致;试验组2d卵巢内TUNEL阳性率降低;Caspase-3主要在卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞中表达,2 d卵巢表达水平高于4 d卵巢.结论 淫羊藿甙能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗;能降低2 d龄卵巢卵母细胞的凋亡率,抑制卵母细胞凋亡,增加原始卵泡池的储备量.     

HPLC法测定复方淫羊藿颗粒剂中淫羊藿甙的含量

采用高效液相色谱法以甲醇－水（５５：４５）为流动相，色谱柱为ＯＤＳＣ＿(１８)，检测波长为２７０ｎｍ，测定复方淫羊藿颗粒剂中淫羊藿成含量，结果表明在２１．４～１０μｇ·ｍ￣(－１)浓度范围内线性关系良好，ｒ＝０．９９９８，加样回收率：９８．７２％。     

淫羊藿降压有效部位中活性成分淫羊藿甙含量的RP—HPLC分析

建立了淫羊藿Epimediumgrandiflorum降压有效部位中降压活性成分淫羊藿甙（icariin）含量的RP－HPLC分析方法。并对由不同产地的淫羊藿药材制备的淫羊藿降压有效部位中淫羊藿甙的含量进行了分析。这为淫羊藿降压有效部位质量标准的制定奠定了基础。     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞分泌细胞因子的影响

目的观察不同浓度的淫羊藿甙对成骨细胞分泌的IL-6、TGF-β、TNF-αmRNA表达的影响,以17β-雌二醇作为阳性对照比较淫羊藿甙与雌激素对于细胞因子表达影响的差异。方法体外培养新生SD大鼠颅盖骨分离的成骨细胞,加入不同浓度的淫羊藿甙及17β-雌二醇,用RT-PCR测定的IL6、TGF-βα1、TNF-αmRNA的表达水平的变化。结果10μg／ml淫羊藿甙和三个浓度的17β-E2都能够促进TGF-β1 mRNA的表达,抑制IL-6和TNF-αmRNA的表达。5μg／ml的淫羊藿甙能够促进TGF-β1mRNA的表达并抑制IL-6 mRNA的表达。但对于TNF-α mRNA表达没有抑制作用。其中三个浓度的17β-E2组和淫羊藿甙组之间对于IL-6和TNF-αmRNA表达的影响没有显著性差别,而10-8mol／L17β-E2对TGF-β1 mRNA表达的影响作用最强。结论淫羊藿甙治疗骨质疏松的部分机理可能与抑制IL6、TNF-α mRNA的表达和促进TGF-β1 mRNA的表达有关。     

姜黄素对新生大鼠卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对新生大鼠卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响。方法：雌性SD大鼠分为母鼠灌胃组（受孕11.5d母鼠灌胃姜黄素（100mg·kg^-1·d^-1）直至分娩,分别取出生后1、2和4d龄雌仔鼠卵巢）,新生鼠腹腔注射组（正常出生1d龄雌仔鼠腹腔注射姜黄素（100mg·kg^-1·d^-1）,连续4d,分别取出生后2、4d龄卵巢）和对照组（以母、幼均未用药的正常同天龄新生鼠的卵巢为对照）。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察不同发育阶段的卵泡比例,TUNEL染色检测卵巢内卵母细胞凋亡情况。结果：在1d龄卵巢中,母鼠灌胃组未装配卵泡比例明显低于对照组（P〈0.05）,而原始卵泡的比例明显增加（P〈0.05）;在2d龄卵巢中,新生鼠腹腔注射组未装配卵泡比例明显低于对照组（P〈0.05）,而原始卵泡比例则明显高于对照组（P〈0.05）;在4d龄卵巢中,新生鼠腹腔注射组的原始卵泡比例显著下降（P〈0.05）。早期初级和发育卵泡比例显著升高（P〈0.05）。在1、2d龄卵巢中,母鼠灌胃组和新生鼠腹腔注射组卵母细胞TUNEL阳性率均明显低于对照组（P〈0.05）。结论：姜黄素能加快新生大鼠卵母细胞巢破裂,促进原始卵泡的发育启动,同时能抑制卵母细胞凋亡,可能有益于延长卵巢的生殖寿命。     

药物对大鼠卵巢颗粒细胞的影响

目的探讨阿米卡星、清热活血中药对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的形态和功能影响。方法收集30日龄SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞,分别加入不同药物进行细胞培养,并取培养液作放射免疫测定性激素,颗粒细胞作透射电镜观察细胞器。结果阿米卡星、莪术组的颗粒细胞核周见空泡,胞器基本消失,孕激素低于生理盐水组(P<0.01),阿米卡星组的雌二醇也低于各组(P<0.05)。结论阿米卡星、莪术直接用药有碍大鼠卵巢功能。     

阿魏酸对去卵巢大鼠骨微结构的影响

目的 观察阿魏酸对去卵巢大鼠骨微结构改变的作用。方法 2月龄雌性大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组、模型组和阿魏酸低、高剂量组,每组10只。除假手术组外,模型组和阿魏酸低、高剂量组均通过摘除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松模型,分别采用等量生理盐水和20、80mg/（kg·d）阿魏酸灌胃,干预12周后,处死各组大鼠获取大鼠血清检测骨代谢指标,用Micro-CT检查记录大鼠股骨骨密度和骨微结构,切取干骺端骨质行HE染色,观察骨组织切片。结果 病理切片显示,模型组大鼠骨小梁变薄稀疏,髓腔增大;阿魏酸组大鼠骨小梁数目（Tb.N）和骨连接增加,骨小梁间隙变小。与模型组比较,阿魏酸低、高剂量组大鼠骨密度增加[（0.176±0.014）g/cm2、（0.198±0.027）g/cm2比（0.153±0.026）g/cm2,P均<0.05]、皮质骨骨小梁体积比率（BV/TV）增加[（34.521±6.364）%、（39.483±10.586）%比（26.357±8.243）%,P均<0.05]、骨小梁厚度（Tb.Th）增加[（0.116±0.031）mm、（0.129±0.028）mm比（0...     

脊柱推拿促进缺血缺氧性脑病幼鼠生长发育的研究

目的：观察推拿是否促进缺血缺氧性脑病（hypoxic ischemic encephalopathy,HIE）幼鼠生长发育,以寻求有效干预HIE的手段。方法将新生SD幼鼠随机分为对照组（n=12）、模型组（n=13）和推拿组（n=12）。选择出生后第3天（3-day-postnatal,P3）的幼鼠,采用单侧颈总动脉结扎联合缺氧的方法制备HIE模型,造模后2d（P5）开始进行脊柱推拿干预;对各组幼鼠的体质量、睁眼时间和耳朵张开时间进行检测,并进行步态实验和负向趋地实验。结果与对照组比较,模型组幼鼠体重均显著降低（P〈0.01、P〈0.05）,而推拿组幼鼠体重比模型组明显增加（P〈0.01、P〈0.05）;与对照组比较,模型组幼鼠睁眼时间、耳朵展开时间和步态反射出现的时间均较延长（P〈0.05）;而推拿组幼鼠睁眼时间、耳内展开时间和步态反射出现的时间均明显缩短（P〈0.01、P〈0.05）。与对照组比较,模型组幼鼠爬至倾斜板顶端所需时间均显著长于对照组（P〈0.01、P〈0.05）,而推拿组幼鼠爬至倾斜板顶端所需时间比模型组缩短（P〈0.01、P〈0.05）。结论脊柱推拿可以促进HIE幼鼠的生长发育,可能成为干预脑缺血缺氧性疾病的有效手段之一。     

补肾活血组方对大鼠卵巢颗粒细胞的作用

目的探讨补肾活血组方对雷公藤致卵巢储备功能下降大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及相关基因Bcl-2及Bax表达的影响。方法 12周龄SD雌性大鼠60只,随机分6组：补肾活血组方低、中、高剂量组,六味地黄药组,正常组,雷公藤组。观察大鼠卵巢组织病理形态、卵巢颗粒细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax的表达。结果补肾活血组方中、高剂量组卵巢组织的颗粒细胞层厚度和闭锁卵泡/生长卵泡的比值与雷公藤组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或〈0.05）。补肾活血组方中、高剂量组的卵巢抑制凋亡基因Bcl-2表达增强、促凋亡基因Bax表达减弱,与雷公藤组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或〈0.05）。结论补肾活血组方中、高剂量组能促进卵泡成熟,延缓颗粒细胞衰老,提高卵巢的储备功能。     

β－内啡肽及其抗血清对新生大鼠缺氧性脑水肿的影响

通过结扎７日龄大鼠右侧颈总动脉合并高温低氧环境制备新生鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型，观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤时β－内啡肽（β－ＥＰ）与脑水肿的关系及给予β－ＥＰ或β－ＥＰ抗血清对脑水肿的影响。结果表明，外源性β－ＥＰ可使脑水肿明显加重，而给予β－ＥＰ抗血清则使脑水肿明显减轻。提示β－ＥＰ可能是新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时引起脑水肿的病理“介质”之一，过量的β－ＥＰ有加重脑水肿的作用。     

白藜芦醇对荷卵巢癌大鼠免疫功能的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对荷卵巢癌大鼠免疫功能的影响。方法 通过右腋窝皮下注射接种卵巢癌NUTU-19细胞悬液的方法制备荷卵巢癌大鼠模型,取50只模型大鼠随机分为:模型对照组、白藜芦醇(200、100、50mg/kg)治疗组和顺铂2mg/kg治疗组(阳性对照);白藜芦醇各治疗组隔天灌胃给药1次,顺铂组隔天腹腔注射给药1次,共给药治疗5次。治疗完成后,观察比较各组大鼠一般状态及皮下肿瘤生长情况;处死动物后剥取肿瘤组织,称量瘤重量并计算抑瘤率;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法测定各组大鼠脾淋巴细胞转化率;通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;通过流式细胞仪检测各组大鼠血中T淋巴细胞亚群(CD4⁺、CD8⁺)百分率,并计算CD4⁺/CD8⁺比值;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理性形态学变化。结果 与模型对照组比较,白藜芦醇治疗组大鼠皮毛松散、饮食差状况减轻,瘤体减小、活动度差、硬度差,以200mg/kg治疗组效果最为显著;白藜芦醇(200、100mg/kg)治疗组肿瘤重量显著减轻且抑瘤率显著升高(P<0.05);脾淋巴细胞转化率显著升高(P<0.05);血清中IL-2和TNF-α含量均显著降低(P<0.05);白藜芦醇(200、100mg/kg)治疗组血液中CD4⁺百分率显著升高(P<0.05),白藜芦醇200mg/kg治疗组CD8⁺百分率显著升高,CD4⁺/CD8⁺比值显著升高(P<0.05);白藜芦醇治疗组肿瘤组织呈现片状坏死、瘤细胞皱缩等病理性形态学变化,以200mg/kg治疗组最为明显。结论 白藜芦醇能够显著提高卵巢癌大鼠免疫功能,作用机制可能与其能够有效降低炎性因子(IL-2、TNF-α)水平,提高CD4⁺、CD8⁺百分率及CD4⁺/CD8⁺比值有关。     

瑞舒伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后细胞凋亡的影响

目的 观察瑞舒伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后细胞凋亡的影响.方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照组、损伤组和治疗组,每组12只.损伤组和治疗组分别建立大鼠左侧颈动脉球囊损伤模型,右侧颈动脉未予球囊损伤.治疗组于损伤前3 d始连续每天给予瑞舒伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃,对照组和损伤组予9g/L氯化钠溶液灌胃.术后14 d取左侧颈总动脉.进行HE染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素-dUTP缺口标记技术(Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling,TUNEL)的凋亡检测.结果 共30只大鼠成功完成本次实验.①血管损伤14 d,可见明显的新生内膜:损伤组和治疗组的内膜面积、内膜/中膜面积的比值较对照组增大(P<0.05);与损伤组比较,治疗组内膜/中膜面积的比值减少,管腔面积增加26%(P<0.05).②对照组血管偶可见单个散在的凋亡细胞;损伤组凋亡细胞阳性率为(12.3±1.8)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组凋亡细胞数目增多,凋亡细胞阳性率达(26.8±3.2)%,与损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05).凋亡细胞主要位于新生内膜.结论 瑞舒伐他汀可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生,可促进大鼠颈动脉球囊损伤后的细胞凋亡.瑞舒伐他汀促进细胞凋亡的作用可能与其抑制内膜增生有关.     

短期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的：探讨短期能量限制对雌性大鼠生殖寿命的影响。方法：21只8周龄雌性sD大鼠随机分为对照组和能量限制组,并监测大鼠体质量及动情周期变化,8周后取大鼠卵巢,其切片由苏木精．伊红染色,观察存活卵泡数和不同发育阶段的卵泡比例。结果：对照组体质量持续上升,能量限制组较平缓。能量限制组健康卵泡（135．3．4±11．7）比对照组（90．7±7．1）多（P〈0．05）,原始卵泡数（57．7±7．7）与对照组（19．4±4．0）比显著增多（P〈0．001）,原始卵泡比例（41．9±2．9）比对照组（20．5±3．5）要多（P〈0．01）,而发育和成熟卵泡比例与对照组比则降低。结论：短期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少每个周期成熟卵泡的个数来降低卵泡消耗,有益于生殖寿命延长。     

黄芩素对雷公藤甲素诱导的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用

目的:探讨黄芩素对雷公藤甲素诱导的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法:收集大鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养24 h后,用雷公藤甲素损伤大鼠卵巢颗粒细胞;干预组添加终浓度分别为50、100、200μmol/L的黄芩素,对照组添加相同体积的二甲基亚砜(DMSO)溶液,继续培养24 h(或以上)。采用MTT法测定卵巢颗粒细胞活力,流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡,Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白的表达情况;测定各组卵巢颗粒细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,评价抗氧化能力。结果:雷公藤甲素可显著降低大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导细胞凋亡,并使SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量增加;雷公藤甲素处理细胞的同时添加黄芩素干预后,卵巢颗粒细胞相对活力增加,细胞凋亡减弱,胞内SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低。Western blot结果显示,经过雷公藤甲素处理,卵巢颗粒细胞中促凋亡蛋白Bax表达量显著上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低;黄芩素干预后可以显著下调Bax表达量,上调Bcl-2表达量。结论:黄芩素可明显改变卵巢颗粒细胞的抗凋亡及抗氧化能力,对雷公藤甲素诱导的细胞凋亡起保护作用。