肝癌基因治疗中体内直接基因转移方法的研究进展

基因治疗是目前肝癌治疗研究的热点．人们已建立了多种肝癌治疗研究的模式，如抑癌基因治疗、反义核酸治疗、自杀基因治疗、细胞因子基因治疗等，体外实验已取得初步的成功。但临床宴践的开展还有一定困难，主要原因是还未建立起安全有教的基因转移方法。基因转移技术是基因治疗的关键技术，在很大程度上对基因治疗的成功和临术应用起决定作用。基因转移的方法有两种：一种是回体转移法(ex vivo)．即在体外将目的基因导入细胞后．再将转基因细胞回输体内．使目的基因在体内表达．从而达到治疗目的；另一种是体内直接转移法(in vivo)．包括原位转移法(in situ)，即将外源基因直接导入体内的有关组织器官，使其进     

血管基因疗法

基因转移已开始进入临床应用阶段，基因转移疗法是将基因物质转入体细胞以改变疾病的发病机理过程。血管基因疗法已位于这一领域的前哨，正试用于严重周围血管疾病的治疗。基因转移的技术在过去几年中发展很快，有直接（体内）和间接（体外）两种，所谓间接法是在体外孵有宿主细胞，继之插入治疗基因，后而回输这些基因调控的细胞给宿主。现有多种技术可将DNA转入哺乳动物细胞。外源性基因有经转染或转导的病毒或非病毒媒介物。DNA转染可用物理方法（微注射）、化学方法（脂质体）或病毒依赖性机制，而转录则用逆转录病毒载体。第一个治…     

垂体瘤转化基因表达与肿瘤关系研究进展(文献综述)

垂体瘤转化基因 (PTTG)是新近发现的一种肿瘤转化基因 ,其在多种正常增生性组织中有表达 ,在多种恶性肿瘤组织中呈现高表达。通过体内、体外试验均证实PTTG在促进细胞转化及肿瘤形成中起着重要作用 ,并与部分肿瘤侵润和转移有关     

垂体瘤转化基因表达与肿瘤关系研究进展（文献综述）

垂体瘤转化基因(PTTG)是新近发现的一种肿瘤转化基因，其在多种正常增生性组织中有表达，在多种恶性肿瘤组织中呈现高表达。通过体内、体外试验均证实唧在促进细胞转化及肿瘤形成中起着重要作用，并与部分肿瘤侵润和转移有关。     

实体瘤的基因转移技术

基因转移技术是肿瘤基因治疗成功的关键因素之一。本文综述了实体瘤基因治疗中的几种基因转移方法，包括逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒三种病毒性载体系统、脂质体介质导法、裸ＤＮＡ直接注射法以及靶向性基因转移技术（其中包括受体靶向性、组织特异性调控序列及肿瘤浸润性淋巴细胞）。实体瘤体内基因转移技术的深入研究，必将促进肿瘤基因治疗早日进入临床，并能提高目前肿瘤体内基因治疗的效果。     

实体瘤的基因转移技术

基因转移技术是肿瘤基因治疗成功的关键因素之一。本文综述了实体瘤基因治疗中的几种基因转移方法，包括逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒三种病毒性载体系统、脂质体介导法、裸ＤＮＡ直接注射法以及靶向性基因转移技术（其中包括受体靶向性、组织特异性调控序列及肿瘤浸润性淋巴细胞）。实体瘤体内基因转移技术的深入研究，必将促进肿瘤基因治疗早日进入临床，并能提高目前肿瘤体内基因治疗的效果。     

靶向软骨的非病毒纳米基因载体体内外转染特性的研究

目的 采用一种靶向软骨的非病毒纳米基因传递系统,携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)在体内外对软骨细胞进行转染,探讨一种临床可用的促进软骨修复的方法.方法 将高相对分子质量壳聚糖(HMWC)适度降解,成为低相对分子质量壳聚糖(LMWC),并与EGFP的质粒复合形成稳定的非病毒纳米基因传递系统.经过体外的转染实验后,这些纳米复合物被进一步注射到伴有全层软骨缺损的新西兰大白兔动物模型膝关节中,探讨其在体内传递治疗基因促进软骨修复的可能性.结果结果显示LMWC/DNA纳米复合物可以有效地转染体外单层培养的软骨细胞和软骨组织片.在体内应用时,LMWC/EGFP基因纳米复合物可以安全有效地转染软骨细胞,并表现出一定的靶向性.结论 本研究显示了由LMWC/DNA纳米复合物介导的体内转染方法促进软骨修复的可行性,其有望成为一种简单、安全、有效、可控并且可早期使用的促进软骨修复的方法.     

基因疗法在骨科运用的可能性

基因疗法是指将外源性基因转移到个体以达到治疗疾病的目的。早期设想是将基因疗法作为一种补偿机制治疗遗传性疾病。近年来,采用基因转移方法将基因疗法作为一种药物转移系统(ｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍ)可治疗获得性疾病[1]。首例基因转移成功是一个标记基因...     

基因转移技术在整形外科学研究中的应用

基因转移技术指将外源性基因 (目的基因 )通过一定载体导入靶细胞 ,以补偿靶细胞的基因缺陷或调节靶细胞的蛋白分泌水平 ,最终使靶细胞获得新的生物学行为或功能的一种高新技术。它是近年来分子生物学迅速发展的重要标志 ,也是临床基因治疗的主要手段。1　基因转移的基本程序[1,2 ]1.1　目的基因的选择与克隆　目的基因指通过转移使细胞获得新的生物学行为的基因。其选择的原则是选择的基因其产物对疾病的疗效必须相当肯定。例如 :血管内皮细胞生长因子是一种强大的血管生成诱导剂 ,肯定了它的血管生成刺激功能后 ,在缺血组织或器官的转基因…     

胰腺癌转移抑制相关基因的研究进展

恶性肿瘤的侵袭与转移是由一系列基因调控系统所组成，单纯某种机制难以将基因完全归类，故目前尚无概念明确的“肿瘤转移抑制基因”，仅认为一部分能够抑制肿瘤转移的基因，称为肿瘤转移抑制相关基因(metastasis—suppressor gene)。反之，称为肿瘤转移促进相关基因(metastasis-enhance gene)。肿瘤抑制相关基因主要是抑制     

基因治疗在肝脏移植中的应用

基因治疗已成为目前在分子水平治疗疾病的手段 ,在基础与临床方面研究都取得了较大进展。移植中应用基因治疗有许多优越性 ,现阶段基因治疗应用于动物肝脏移植的实验研究已证明具有其可行性。基因治疗可以针对某个特异的移植器官 ,达到局部免疫抑制的效果 ,而且活体内基因转导可以产生持续的生物调控基因产物的长期表达[1 ] 。另外 ,基因治疗能在低温下进行 ,不影响离体肝的功能。一、肝脏移植基因治疗的转移方法1.间接法 :将目的基因在体外转导至原代培养的靶细胞如肝细胞或心肌细胞 ,然后将已发生结构改变的靶细胞再转入组织或器官如肝脏…     

骨形态发生蛋白基因治疗在骨科的应用

实验证实,骨形态发生蛋白(BMP)具有极强的骨诱导活性。基因治疗是一种将遗传信息转移到靶细胞,使靶细胞合成该基因编码蛋白的治疗方法。活体外(ex vivo)技术指从患者提取特定的细胞,在体外将DNA转导入细胞,然后再将基因处理后的细胞移入目标部位;而活体(in vivo)技术则是将目标基因通过载体(包括     

PML生长抑制因子过表达抑制前列腺癌细胞生长和致瘤能力的实验研究

为探讨ＰＭＬ（Ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅａｋｅｍｉａ）生长抑制因子对人前列腺癌细胞的作用，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导基因转染技术将ＰＭＬ基因和Ｇ４１８抗性基因联合导入体外培养的人前列腺癌细胞，经Ｇ４１８筛选、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测出ＰＭＬ蛋白过表达细胞克隆，经体外生长抑制试验和裸鼠体内致瘤能力试验，观察ＰＭＬ过表达对前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力的影响。结果证实ＰＭＬ基因被成功地导入前列腺癌细胞中并得到高效表达。过表达ＰＭＬ蛋白的细胞体外生长能力和裸鼠体内致瘤能力明显低于对照细胞。提示ＰＭＬ生长抑制因子过表达能够有效地抑制前列腺癌细胞的体外生长和裸鼠体内的致瘤能力。     

5-氟胞嘧啶对CD基因修饰的胰腺癌细胞作用的电镜观察

目的　应用微观检查方法探讨 5 氟胞嘧啶 (5 flurocytosine,5 FC)对胞嘧啶脱氨酶 (cyto sinedeaminase ,CD)基因修饰的胰腺癌细胞体外、体内杀伤的作用机制。方法　构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的腺病毒载体 ,经包装、扩增后制备纯化高效的CD腺病毒液 ,体外培养胰腺癌细胞并建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,电镜下观察转染CD基因及加入前药 5 FC后胰腺癌细胞的微观变化情况。结果　含CD基因腺病毒载体经酶切鉴定正确 ,病毒滴度为 2× 10 11pfu/ml,电镜观察到CD/5 FC系统对胰腺癌的体外杀伤是一种凋亡现象而非坏死 ,而体内实验观察到坏死与凋亡并存 ,同时亦观察到淋巴细胞浸润。结论　CD/5 FC系统对胰腺癌的作用 ,有多种因素及旁观者效应参与其内。体外结果显示 ,凋亡小体的摄入和毒性代谢产物的直接作用可能起主要作用。体内实验结果显示细胞坏死与凋亡并存 ,免疫反应在抑制肿瘤生长中也起着重要作用。     

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原发性肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一 ,每年使大约 10 0万例病人死亡[1] ,由于肝癌的总体疗效欠佳 ,因此迫切需要新的治疗手段。肝癌的免疫基因治疗目前还主要集中在临床前的阶段 ,但是已经显示其良好的应用前景 ,本文就这一方面的研究介绍如下。1　基因转移系统高效的基因转移对基因治疗的成功至关重要 ,目前有两大类基因转移的载体 :病毒与非病毒载体。1.1　病毒载体1.1.1　逆转录病毒载体 :逆转录病毒可以高效感染体外培养的分裂细胞 ,并整合到宿主基因组中使外源基因稳定表达 ,适用于体外感染肿瘤细胞并随后注射到宿主体内。这…     

基因转移技术和基因治疗在肾脏病研究中的应用

近年来,免疫学、细胞生物学、遗传学和分子生物学等学科知识和技术的迅速发展,为人们深入研究肾脏疾病的发病机理和寻找更为理想和有效的治疗方法奠定了基础。随着肾脏细胞体外培养技术的建立和日益成熟,使我们对肾脏不同细胞通过自分泌或旁分泌等机制产生的多种细胞因子以及相关的调节机制,对在模拟病理条件下细胞的增殖状态以及细胞外基质的产生等方面的认识有了长足的进展。但是,肾脏细胞在体内的情况要比在体外复杂很多,例如,细胞-细胞,细胞-细胞外基质和细胞-细胞因子之间的相互作用是一个十分复杂的网络系统,单凭体外细胞培养的方法很难对上述问题进行全面的阐述。基因转移技术的发展不仅使研究一种基因在某一特定细胞中过度表达的结果及其调节机制成为可能,而且,转基因动物还为观察某一目的基因过度表达或被阻断后对机体的影响提供     

人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。 　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具     

肝癌自杀基因治疗与基因体内导入方法和途径的实验研究

我们采用携带单纯疱疹病毒胸苷激酶 (ＨＳＶ ｔｋ)基因的质粒型ＥＢ病毒(ＥＢＶ)复制子表达载体ｐＤＲ2 /ｔｋ ,研究其转染人肝癌细胞 (ＳＭＭＣ 772 1)后对更昔洛韦 (Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ )和阿昔洛韦(ＡＣＶ)的敏感性 ,包括杀伤作用和“旁观者效应”。在此基础上 ,根据肝脏的血供及肝癌手术治疗特点 ,利用携带人ＩＬ 2基因的ＥＢＶ复制子表达载体ｐＤＲ2 /ＩＬ 2 ,研究肝癌基因治疗中接近临床应用的最佳体内直接基因转移方法和途径。1.材料和方法 :表达载体ｐＤＲ2 /ｔｋ和ｐＤＲ2 /ＩＬ 2在中国预防医学科学院病毒所国家重点实…     

TK自杀基因对甲胎蛋白阳性肝癌的特异性杀伤作用

目的观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统在体内外对人肝癌细胞的杀伤效应.方法在体外按MOI值为100、10、1、0用重组腺病毒转染人肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721,48 h后用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率.在两种肝癌裸鼠模型上,瘤体内注射重组腺病毒(1×1012 pfu/L)0.1 ml,GCV作用后观察抑瘤效果.结果体外MOI为100时,可杀死99.8%的BEL-7402细胞和17.8%的SMMC-7721细胞,两者差异有显著性(P＜0.05).体内BEL-7402组肿瘤生长明显受到抑制.结论在体内外,腺病毒介导的含AFP调控序列的HSV-tk/GCV自杀基因系统对甲胎蛋白(AFP)阳性肝癌细胞具有特异性杀伤作用,该系统可望用于肝癌的特异性基因治疗.     

K-ras基因突变与结直肠癌临床病理因素的关系

目的 建立K-ras基因简单、快捷、经济的检测方法,并将检测结果与临床病理因素进行相关性分析.方法 采用PCR-直接测序法和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性测序法(PCR-RFLP)同时检测40例结直肠癌肿瘤组织标本K-ras基因第12、13密码子突变情况;另113例患者仅用PCR-RFLP-测序法检测K-ras基因第12、13密码子突变情况.将K-ras基因突变检测结果与临床病理因素进行相关性分析.结果 40例结直肠癌患者的肿瘤组织经常规PCR扩增后直接测序无一例发现K-ras基因第12、13密码子的突变;而这40例标本经PCR-RFLP-测序法检测发现:8例含有K-ras基因第12密码子突变,3例含有K-ras基因第13密码子突变,总突变检出率为27.5%(11/40).153例结直肠癌肿瘤组织标本经PCR-RFLP-测序法检测共发现突变58例,突变率为37.9%(58/153),其中第12密码子突变46例,第13密码子突变12例.G→A是K-ras基因突变最常见的突变形式(25/58,43.1%).K-ras基因第12和13密码子突变与患者性别、肿瘤浸润深度、分化程度、与淋巴结转移、远处转移及分期无明显相关性(P＞0.05),与年龄、肿瘤发生部位密切相关(P＜0.05),年龄越大突变概率越低,突变最常发生的肿瘤部位为升结肠.结论 PCR-RFLP-测序法能够快捷、灵敏地检测出肿瘤组织中K-ras基因的突变,适合作为K-ras基因突变常规检测方法.K-ras基因第12和13密码子突变是结直肠癌中一个常见的分子事件,与患者年龄、肿瘤发生部位有相关性.