应用实时荧光PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA～SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌中检出22株携带肠毒素基因,阳性率为47.83%。以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%;不同来源的分离株携带肠毒素基因的比例不同,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占27.27%。结论:荧光PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法具有快速、敏感、特异性高的特点,适用于肠毒素基因的分型与分布的研究,适合基层疾控部门使用。     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒实验室检测分析

目的对某镇一村民办喜宴就餐者集体中毒事件进行病原菌的检测。方法参照GB-4789.10-2010分别对剩余食物、厨师手涂抹液、病人呕吐物及病人肛拭进行病原学检测。结果 12份剩余食物标本中有7份检出金黄色葡萄球菌;3名厨师有1名手上涂抹液检出金黄色葡萄球菌;32份病人呕吐物及肛拭标本有21份检出金黄色葡萄球菌。结论本次食物中毒是由金黄色葡萄球菌引起的。     

金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法的建立

目的建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于对金黄色葡萄球菌计数。方法根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列(GenBank:DQ399678.1),设计并合成引物和荧光标记探针,建立和优化反应体系,用已知浓度的金黄色葡萄球菌DNA模板作为外部参照,建立标准曲线。用加入金黄色葡萄球菌的模拟牛奶样品,把Baird-Parker平板计数结果和PCR定量检测结果进行比较,以评价体系性能。结果平板计数和荧光定量PCR的检测结果做比较,采用配对t检验,t=0.58,v=32,P0.05,其结果差异无统计学意义。结论所建立的金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法,操作较传统的方法简单直接,能有效地缩短整个检测的时限,并有较好的灵敏度和特异性,与传统方法相比,有较明显的优势。     

TaqMan探针法荧光定量PCR检测食品中金黄色葡萄球菌

目的:建立食品中金黄色葡萄球菌快速、简便、准确、高效的检测方法。方法:以金黄色葡萄球菌FemB基因中保守序列为目标,设计并合成引物和Taqman探针,构建重组质粒作为标准阳性模板,建立荧光定量检测体系,并考察该方法的灵敏性、特异性和重复性。结果:该法的灵敏度60拷贝/反应体系,能特异区分金黄色葡萄球菌与其它类型的细菌,同时,具有良好的重复性。结论:使用Taqman探针法荧光定量PCR技术能够对金黄色葡萄球菌进行快速准确地定量检测。     

荧光探针PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

目的 研究并建立荧光探针聚合酶链反应(PCR)技术,用于金黄色葡萄球菌(SAU)及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床检测.方法 采用标准化荧光探针PCR技术及操作流程,进行灵敏性及特异性的鉴定.结果 分析性灵敏性达到1×10 2拷贝/reaction,达到设计要求,具备高重复性;对1196例临床标本应用荧光探针PCR检测SAU,临床灵敏性为97.41％,临床特异性为98.47％,对527例SAU的临床样本进行MRSA筛查,临床灵敏性为99.74％,临床特异性为95.59％;对385份鼻腔拭子标本应用荧光探针PCR检测SAU,检出率达18.18％;对其中40株SAU进行MRSA筛查,检出率达42.50％.结论 荧光探针PCR技术检测SAU及其MRSA的方法具有较高的优越性,适合在临床检测应用.     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒调查

20 0 0年 10月 2 5日接某幼儿园校医报告 ,该幼儿园内有数十名学生早餐后出现不适 ,主要症状有恶心、呕吐 ,正在市妇儿医院就诊。接报告后 ,我们当即赴现场进行调查 ,发现有 6 7名学生和教职工有呕吐、恶心症状 ,其中住院治疗 30人 ,门诊输液治疗 37人。采集到幼儿园 10月 2 5日早餐剩余食品 3份 ,病人排泄物 5份。经调查确认 ,本次发病系金黄色葡萄球菌食物中毒 ,现将调查报告如下。现场调查1　临床表现1 1　症状和体征　 6 7例主要为呕吐占 86 6 % (5 8 6 7)、恶心占 5 3 7% (36 6 7) ,少数中毒患者出现腹痛 (16 4% )、腹泻 (8 9% )现…     

一起金黄色葡萄球菌引起食物中毒病原学检测

金黄色葡萄球菌因其产肠毒素菌株污染食品能引发急性食物中毒而广受关注,是引起肠道疾病和危害食品安全的常见病原菌^〔1〕。金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcus enterotoxin,SE)是一组有高度生物学活性的蛋白质,是一组超级抗原(superantigen,SAg)^〔2〕,金黄色葡萄球菌通常在富含蛋白质和水的食物中大量繁殖并产生大量的肠毒素,人食入含有肠毒素的食品而中毒。     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒调查

金黄色葡萄球菌食物中毒是目前较为常见的一种食物中毒,中毒的食品也比较复杂,有肉类、奶类及淀粉类。某市一起因食用肉丸子引起金黄色葡萄球菌食物中毒调查报道如下。     

食品中沙门菌实时荧光PCR快速检测方法的研究

目的利用荧光定量PCR技术，建立食品中沙门菌污染的快速敏感特异的检测方法。方法以沙门菌的fimY基因作为靶序列，设计一对引物和探针，以沙门菌菌株提取核酸DNA作为模板，优化引物和探针的浓度比和Mg^2＋浓度，以沙门菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性，并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0．8μmol／L，1．0μmol／L，Mg^2＋浓度为3mmol／L时，具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中，除沙门菌出现很好的阳性外，其余菌株均为阴性。在纯菌条件下，定量检测低限33cfu／ml。稳定性分析表明：同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5％。检测样品结果显示实时PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强，稳定性高，操作简便快捷，适应食品微生物检验发展需要，具有较大的推广及应用价值。     

化妆品中金黄色葡萄球菌的PCR快速检测

目的研究化妆品中金黄色葡萄球菌的快检方法。方法将金黄色葡萄球菌基因nuc作为靶基因并设计引物,使用PCR扩增技术对17株金黄色葡萄球菌及4株干扰菌进行特异性扩增。同时采用传统细菌分离培养法及PCR扩增法对9份不同性状加标化妆品进行金黄色葡萄球菌实际样品检测。结果琼脂糖凝胶电泳检测显示,17株金黄色葡萄球菌全部扩增出280 bp的目的条带,准确率为100%。同时,当9种化妆品样品内金黄色葡萄球菌添加浓度为1 CFU/g(或ml)以上时样品增菌液均能扩增出清晰的目的条带。结论菌落PCR检测技术快捷简便,其灵敏性与准确性均能满足化妆品中金黄色葡萄球菌检测需求。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因快速检测方法的评价

目的 对MecA基因探针分析快速检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的可靠性和临床实用性进行评估。方法 临床分离的96株金黄色葡萄球菌中，44株MRSA采用MecA基因探针快速分析，并与MecA基因的PCR结果比较。结果 MecA基因探针快速分析鉴定MRSA的灵敏度为97．7％，特异性为100％。结论 该方法灵敏度高，特异性强，简单易行，90min即可完成，是常规实验室检出MRSA快速而可靠的分析方法。     

两种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌下呼吸道感染标本的方法评估

目的评价两种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)下呼吸道感染标本的临床应用价值。方法 167份下呼吸道感染标本同时用直接多重PCR检测法、免疫富集联合多重PCR检测,并以常规细菌培养+PBP2a胶乳凝聚法检测结果为标准,评价两种方法的敏感性、特异性。结果直接多重PCR法检出MRSA4株,总检测率为2.3%;免疫富集联合多重PCR法检出MRSA20株,总检测率为11.9%;细菌培养+PBP2a胶乳凝集法为对照,免疫富集联合多重PCR检测法、直接采用多重PCR检测法的敏感性分别为100.0%、28.6%,特异性分别为96.1%、100.0%。结论免疫富集联合多重PCR法灵敏度高、特异性强、简单快速,适用于直接快速检测下呼吸道感染标本中的MRSA,该方法对及早发现、诊断MRSA感染患者有重要的意义。     

四起金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及毒素分析

目的对4起食物中毒的10株菌株进行金黄色葡萄球菌的鉴定及毒素分析。方法按照食品卫生检测标准GB 4789.10-94、《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》W S/T 80-1996及葡萄球菌肠毒素检测试剂盒说明书进行操作。结果这10株菌均鉴定为金黄色葡萄球菌,并检出葡萄球菌A型肠毒素,且其中1株同时检出葡萄球菌C型肠毒素。结论应加强食品卫生的管理工作,防止金黄色葡萄球菌污染食品,防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成。     

实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立一种快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法。方法收集临床诊断或疑似为败血症患者的血标本，直接提取细菌基因组DNA，确定其敏感性；以金黄色葡萄球菌nuc基因和MRSA的mecA基因为靶序列，合成引物，采用实时荧光PCR技术对上述基因进行检测，并将其结果与细菌常规培养结果对比，分析该方法检测MRSA的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。结果直接从血标本中提取细菌基因组DNA的灵敏度为10’CFU／mL。MRSA阳性血标本实时荧光PCR灵敏度为46．15％，特异性为100．00％，阳性预测值为100．00％，阴性预测值为56．25％。结论使用该方法快速检测临床血标本中MRSA的灵敏度不高，欲应用于临床快速诊断尚有若干问题需解决。     

聚合酶链式反应对食物中肉毒的检测

目的用PCR方法鉴定肉毒食物中毒的病原菌。方法用1对人工合成的寡核苷酸引物护增A、B、E、F和G型肉毒神经毒素基因的一段264bp的DNA片段，并对2个食物中毒样品的增菌产毒培养液及分离的菌株进行检测。结果从食物中毒样品中检测出肉毒梭菌。结论PCR方法能快速、准确的鉴定肉毒食物中毒样品中的病原菌。     

荧光实时PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）mecA基因的荧光实时PCR法。方法对荧光实时PCR法的实验条件进行优化,并用该法检测临床分离的109株金黄色葡萄球菌,其结果与苯唑西林纸片扩散法的结果进行比较。结果109株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性37株、阴性72株;苯唑西林纸片扩散法检测出MRSA27株、MSSA82株,经配对χ^2检验,荧光实时PCR法检出率显著高于苯唑西林纸片扩散法（P〈0.01）。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA并可实时监测反应进程,比普通PCR法更加简便、快速,可以弥补苯唑西林纸片扩散法漏检隐匿型、临界型耐药株的不足。     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒病原学检测及耐药分析

目的实验室检测分析福州市一起食物中毒的病原菌及耐药情况。方法参照WS/T 81-1996、WS/T 13-1996、WS/T 80-1996、WS 271-2007附录B2和GB/T 4789. 5-2012标准。结果该起食物中毒标本共检出3株金黄色葡萄球菌。这些菌株均产肠毒素,其中ZD2017-13和ZD2017-14 2株菌产肠毒素C,ZD2017-16产肠毒素B。这3株菌均为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MARS),均对头孢西丁、氨苄西林、苯唑西林和青霉素耐药。结论从该起食物中毒标本中分离得到的金黄色葡萄球菌均产肠毒素,为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,且对多种抗生素耐药。     

多重PCR检测食品中的金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌

目的建立一种能同时检测食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法采用7.5%NaCl肉汤对食品样品中的金黄色葡萄球菌进行增菌,同时采用GN增菌剂对食品样品中的志贺菌和沙门菌进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、志贺菌的ipaH基因、沙门菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应(PCR)反应对食品样品中上述三种病原菌的目标基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果特异性实验表明本方法的特异性良好。对污染金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的牛奶样品进行检测,检出限为1cfu/ml。结论本实验建立的多重PCR检测方法适用于食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点。