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1.
目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA~SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌中检出22株携带肠毒素基因,阳性率为47.83%。以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%;不同来源的分离株携带肠毒素基因的比例不同,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占27.27%。结论:荧光PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法具有快速、敏感、特异性高的特点,适用于肠毒素基因的分型与分布的研究,适合基层疾控部门使用。 相似文献
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邓振利 《河南预防医学杂志》2012,23(1):74-74
目的对某镇一村民办喜宴就餐者集体中毒事件进行病原菌的检测。方法参照GB-4789.10-2010分别对剩余食物、厨师手涂抹液、病人呕吐物及病人肛拭进行病原学检测。结果 12份剩余食物标本中有7份检出金黄色葡萄球菌;3名厨师有1名手上涂抹液检出金黄色葡萄球菌;32份病人呕吐物及肛拭标本有21份检出金黄色葡萄球菌。结论本次食物中毒是由金黄色葡萄球菌引起的。 相似文献
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目的建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于对金黄色葡萄球菌计数。方法根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列(GenBank:DQ399678.1),设计并合成引物和荧光标记探针,建立和优化反应体系,用已知浓度的金黄色葡萄球菌DNA模板作为外部参照,建立标准曲线。用加入金黄色葡萄球菌的模拟牛奶样品,把Baird-Parker平板计数结果和PCR定量检测结果进行比较,以评价体系性能。结果平板计数和荧光定量PCR的检测结果做比较,采用配对t检验,t=0.58,v=32,P0.05,其结果差异无统计学意义。结论所建立的金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法,操作较传统的方法简单直接,能有效地缩短整个检测的时限,并有较好的灵敏度和特异性,与传统方法相比,有较明显的优势。 相似文献
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目的:建立食品中金黄色葡萄球菌快速、简便、准确、高效的检测方法。方法:以金黄色葡萄球菌FemB基因中保守序列为目标,设计并合成引物和Taqman探针,构建重组质粒作为标准阳性模板,建立荧光定量检测体系,并考察该方法的灵敏性、特异性和重复性。结果:该法的灵敏度60拷贝/反应体系,能特异区分金黄色葡萄球菌与其它类型的细菌,同时,具有良好的重复性。结论:使用Taqman探针法荧光定量PCR技术能够对金黄色葡萄球菌进行快速准确地定量检测。 相似文献
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目的 研究并建立荧光探针聚合酶链反应(PCR)技术,用于金黄色葡萄球菌(SAU)及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床检测.方法 采用标准化荧光探针PCR技术及操作流程,进行灵敏性及特异性的鉴定.结果 分析性灵敏性达到1×10 2拷贝/reaction,达到设计要求,具备高重复性;对1196例临床标本应用荧光探针PCR检测SAU,临床灵敏性为97.41%,临床特异性为98.47%,对527例SAU的临床样本进行MRSA筛查,临床灵敏性为99.74%,临床特异性为95.59%;对385份鼻腔拭子标本应用荧光探针PCR检测SAU,检出率达18.18%;对其中40株SAU进行MRSA筛查,检出率达42.50%.结论 荧光探针PCR技术检测SAU及其MRSA的方法具有较高的优越性,适合在临床检测应用. 相似文献
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20 0 0年 10月 2 5日接某幼儿园校医报告 ,该幼儿园内有数十名学生早餐后出现不适 ,主要症状有恶心、呕吐 ,正在市妇儿医院就诊。接报告后 ,我们当即赴现场进行调查 ,发现有 6 7名学生和教职工有呕吐、恶心症状 ,其中住院治疗 30人 ,门诊输液治疗 37人。采集到幼儿园 10月 2 5日早餐剩余食品 3份 ,病人排泄物 5份。经调查确认 ,本次发病系金黄色葡萄球菌食物中毒 ,现将调查报告如下。现场调查1 临床表现1 1 症状和体征 6 7例主要为呕吐占 86 6 % (5 8 6 7)、恶心占 5 3 7% (36 6 7) ,少数中毒患者出现腹痛 (16 4% )、腹泻 (8 9% )现… 相似文献
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金黄色葡萄球菌食物中毒是目前较为常见的一种食物中毒,中毒的食品也比较复杂,有肉类、奶类及淀粉类。某市一起因食用肉丸子引起金黄色葡萄球菌食物中毒调查报道如下。 相似文献
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目的利用荧光定量PCR技术,建立食品中沙门菌污染的快速敏感特异的检测方法。方法以沙门菌的fimY基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以沙门菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg^2+浓度,以沙门菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性,并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8μmol/L,1.0μmol/L,Mg^2+浓度为3mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除沙门菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,定量检测低限33cfu/ml。稳定性分析表明:同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%。检测样品结果显示实时PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。 相似文献
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目的研究化妆品中金黄色葡萄球菌的快检方法。方法将金黄色葡萄球菌基因nuc作为靶基因并设计引物,使用PCR扩增技术对17株金黄色葡萄球菌及4株干扰菌进行特异性扩增。同时采用传统细菌分离培养法及PCR扩增法对9份不同性状加标化妆品进行金黄色葡萄球菌实际样品检测。结果琼脂糖凝胶电泳检测显示,17株金黄色葡萄球菌全部扩增出280 bp的目的条带,准确率为100%。同时,当9种化妆品样品内金黄色葡萄球菌添加浓度为1 CFU/g(或ml)以上时样品增菌液均能扩增出清晰的目的条带。结论菌落PCR检测技术快捷简便,其灵敏性与准确性均能满足化妆品中金黄色葡萄球菌检测需求。 相似文献
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因快速检测方法的评价 总被引:4,自引:1,他引:3
目的 对MecA基因探针分析快速检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的可靠性和临床实用性进行评估。方法 临床分离的96株金黄色葡萄球菌中,44株MRSA采用MecA基因探针快速分析,并与MecA基因的PCR结果比较。结果 MecA基因探针快速分析鉴定MRSA的灵敏度为97.7%,特异性为100%。结论 该方法灵敏度高,特异性强,简单易行,90min即可完成,是常规实验室检出MRSA快速而可靠的分析方法。 相似文献
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目的评价两种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)下呼吸道感染标本的临床应用价值。方法 167份下呼吸道感染标本同时用直接多重PCR检测法、免疫富集联合多重PCR检测,并以常规细菌培养+PBP2a胶乳凝聚法检测结果为标准,评价两种方法的敏感性、特异性。结果直接多重PCR法检出MRSA4株,总检测率为2.3%;免疫富集联合多重PCR法检出MRSA20株,总检测率为11.9%;细菌培养+PBP2a胶乳凝集法为对照,免疫富集联合多重PCR检测法、直接采用多重PCR检测法的敏感性分别为100.0%、28.6%,特异性分别为96.1%、100.0%。结论免疫富集联合多重PCR法灵敏度高、特异性强、简单快速,适用于直接快速检测下呼吸道感染标本中的MRSA,该方法对及早发现、诊断MRSA感染患者有重要的意义。 相似文献
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目的对4起食物中毒的10株菌株进行金黄色葡萄球菌的鉴定及毒素分析。方法按照食品卫生检测标准GB 4789.10-94、《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》W S/T 80-1996及葡萄球菌肠毒素检测试剂盒说明书进行操作。结果这10株菌均鉴定为金黄色葡萄球菌,并检出葡萄球菌A型肠毒素,且其中1株同时检出葡萄球菌C型肠毒素。结论应加强食品卫生的管理工作,防止金黄色葡萄球菌污染食品,防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成。 相似文献
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目的建立一种快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法。方法收集临床诊断或疑似为败血症患者的血标本,直接提取细菌基因组DNA,确定其敏感性;以金黄色葡萄球菌nuc基因和MRSA的mecA基因为靶序列,合成引物,采用实时荧光PCR技术对上述基因进行检测,并将其结果与细菌常规培养结果对比,分析该方法检测MRSA的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。结果直接从血标本中提取细菌基因组DNA的灵敏度为10’CFU/mL。MRSA阳性血标本实时荧光PCR灵敏度为46.15%,特异性为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为56.25%。结论使用该方法快速检测临床血标本中MRSA的灵敏度不高,欲应用于临床快速诊断尚有若干问题需解决。 相似文献
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目的用PCR方法鉴定肉毒食物中毒的病原菌。方法用1对人工合成的寡核苷酸引物护增A、B、E、F和G型肉毒神经毒素基因的一段264bp的DNA片段,并对2个食物中毒样品的增菌产毒培养液及分离的菌株进行检测。结果从食物中毒样品中检测出肉毒梭菌。结论PCR方法能快速、准确的鉴定肉毒食物中毒样品中的病原菌。 相似文献
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目的建立检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)mecA基因的荧光实时PCR法。方法对荧光实时PCR法的实验条件进行优化,并用该法检测临床分离的109株金黄色葡萄球菌,其结果与苯唑西林纸片扩散法的结果进行比较。结果109株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性37株、阴性72株;苯唑西林纸片扩散法检测出MRSA27株、MSSA82株,经配对χ^2检验,荧光实时PCR法检出率显著高于苯唑西林纸片扩散法(P〈0.01)。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA并可实时监测反应进程,比普通PCR法更加简便、快速,可以弥补苯唑西林纸片扩散法漏检隐匿型、临界型耐药株的不足。 相似文献
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目的实验室检测分析福州市一起食物中毒的病原菌及耐药情况。方法参照WS/T 81-1996、WS/T 13-1996、WS/T 80-1996、WS 271-2007附录B2和GB/T 4789. 5-2012标准。结果该起食物中毒标本共检出3株金黄色葡萄球菌。这些菌株均产肠毒素,其中ZD2017-13和ZD2017-14 2株菌产肠毒素C,ZD2017-16产肠毒素B。这3株菌均为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MARS),均对头孢西丁、氨苄西林、苯唑西林和青霉素耐药。结论从该起食物中毒标本中分离得到的金黄色葡萄球菌均产肠毒素,为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,且对多种抗生素耐药。 相似文献
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多重PCR检测食品中的金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌 总被引:9,自引:0,他引:9
目的建立一种能同时检测食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法采用7.5%NaCl肉汤对食品样品中的金黄色葡萄球菌进行增菌,同时采用GN增菌剂对食品样品中的志贺菌和沙门菌进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、志贺菌的ipaH基因、沙门菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应(PCR)反应对食品样品中上述三种病原菌的目标基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果特异性实验表明本方法的特异性良好。对污染金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的牛奶样品进行检测,检出限为1cfu/ml。结论本实验建立的多重PCR检测方法适用于食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点。 相似文献