阿萨伊油中β-谷甾醇及总甾醇含量测定和抗氧化活性研究

建立阿萨伊油中甾醇类成分的含量测定方法,并对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价。采用高效液相色谱法建立了阿萨伊油中β-谷甾醇、总甾醇(β-谷甾醇、豆甾醇之和,以β-谷甾醇计)的含量测定方法。采用Purosper STAR LP C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-异丙醇(30:70)为流动相,流速1 mL·min^-1,柱温为室温,蒸发光散射检测器漂移管温度70 ℃,雾化器流速2.0 L·min^-1。结果表明β-谷甾醇在0.766~6.38 μg线性关系良好,回归方程为Y=1.639X+0.702 7(r=0.999 2),平均加样回收率为95.7%(RSD 2.8%)。阿萨伊油中β-谷甾醇的质量分数为1.85 mg·g^-1,总甾醇的质量分数为1.93 mg·g^-1。同时采用总氧自由基清除能力(TOSC)法对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价,结果表明样品具有显著的抗氧化能力,样品浓度和抗氧化能力具有较好的剂量-效应关系。     

HPLC同时测定山腊梅清感茶中4种黄酮苷的含量

目的: 建立高效液相色谱方法同时测定山腊梅清感茶中4种黄酮苷含量的方法. 方法: 采用依利特hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm),以乙腈-0.1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长344 nm,柱温35 ℃. 结果: 芦丁在7.012~70.12 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为100.68%,RSD 3.3%,山柰酚-3-O-β-D-半乳糖-(6-1)-α-L-鼠李糖苷在5.126~51.26 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.48%,RSD 1.7%,山柰酚-3-O-芸香糖苷在2.631~26.31 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为101.82%,RSD 1.9%,紫云英苷在2.634~26.34 mg·L^-1线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为97.02%,RSD 1.7%. 结论: 该方法操作简便,准确,重复性好,可用于山腊梅清感茶的质量控制.     

高效液相色谱法测定三七地上部分γ-氨基丁酸的含量

采用高效液相色谱法测定不同产地的三七地上部分中γ-氨基丁酸的含量。色谱条件采用C₁₈柱色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈-4.1 g·L^-1醋酸钠缓冲液为流动相,检测波长为254 nm。γ-氨基丁酸在0.01~1.03 g·L^-1线性范围内线性关系良好;三七茎叶和花中γ-氨基丁酸的平均加样回收率分别为101.7%（RSD 1.1%,n=3）和97.3%（RSD=0.38% ,n=3）。结果表明,不同产地的三七茎叶和花样品GABA含量差异较小,但三七花中GABA平均含量高于茎叶,分别为0.49%,0.53%。该方法操作简便、结果稳定,适合于三七地上部分中γ-氨基丁酸含量测定,为三七地上部分资源综合开发提供依据。     

HPLC测定紫草提取物中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的: 建立HPLC测定紫草提取物中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。 方法: 采用HPLC,Agilent HC-C₁₈色谱柱 (4.6 mm ×250 mm,5 μm);流动相乙腈-水-甲酸(70:30:0.05),检测波长275 nm,柱温40 ℃,流速1 mL·min^-1。 结果: β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁在50~200 μg具有良好的线性关系(r=0.999 8 ),平均加样回收率103.31%,RSD 1.44%(n=5)。 结论: 方法准确,重复性好,可作为紫草提取物的含量控制。     

HPLC同时测定半枝莲中对香豆酸和肉桂酸的含量

目的:建立半枝莲药材中同时测定对香豆酸和肉桂酸含量的测定方法。方法:采用Eclipse SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长310,280 nm,柱温26℃。结果:对香豆酸和肉桂酸分别在0.148~1.776 μg(r=0.9998),0.062~0.992 μg(r=0.9996)呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.4%(RSD 1.5%),99.3%(RSD 1.8%),供试品溶液在12 h内稳定。通过对8批半枝莲药材的测定,结果发现湖北(批号130501)样品中2种成分含量总体优于其他产地样品。结论:该含量测定方法精密度良好,准确度高,适用于半枝莲药材中对香豆酸和肉桂酸的含量测定。     

扶正解毒颗粒对染镍大鼠肾组织核因子-κB活化的影响

目的: 研究中药扶正解毒颗粒(FJG)对硫酸镍(NiSO₄)染毒大鼠肾组织核因子-κB (NF-κB)活化的影响。方法: 50只Wistar大鼠采用NiSO₄ 2.5 mg ·kg^-1 ip(连续7 d,此后间日1次)制备肾损伤模型,随机分为NiSO₄组(模型组)、 FJG高、中、低剂量组(分别为20,10,5 g ·kg^-1 ·d^-1),二硫基丁二酸(DMSA),50 mg ·kg^-1 ·d^-1)组。另设NS组(空白对照)及FJG对照组(FJG 10 g ·kg^-1 ·d^-1)。各组大鼠ig 1次/d,共4周。测定各组大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及24 h尿蛋白定量(24 h-UP),免疫组化SP法观察肾组织NF-κB活化。结果: NiSO₄组大鼠出现肾功能损伤,NF-κB活化:肾小球(34.62±9.11)%,肾小管(62.45±14.78)%; FJG大剂量组NF-κB活化:肾小球(2.08±0.64)%,肾小管(11.48±3.39)%,明显低于NiSO₄组(P<0. 01),肾功能损伤亦明显减轻(P<0.05,P<0. 01)。结论: FJG可能通过抑制肾组织NF-κB活性的异常升高而发挥拮抗镍性肾损伤的作用。     

花旗松素对β-淀粉样肽损伤神经元的保护作用及机制

目的: 研究花旗松素对 β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)损伤神经元的保护作用及其机制. 方法: 从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ(5 μmol·L^-1)、不同浓度花旗松素(20~100 μmol·L^-1)共同孵育24 h,CCK8法检测细胞存活率,Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活性的变化. 结果: 在细胞活力实验中,与正常组相比,模型组细胞活力显著下降(49.2±1.3) %,不同浓度的花旗松素可以提高神经元活力,其中80 μmol·L^-1花旗松素给药组细胞活力增至(68.7±3.2) %,与模型组相比有极显著差异;细胞凋亡结果显示,与正常组相比较,模型组细胞凋亡率为(50.8±1.5) %(P<0.01),不同浓度的花旗松素给药组可以降低细胞凋亡率,其中40 μmol·L^-1 花旗松素凋亡率为(41.5±2.7) %,与模型组比较呈显著性差异(P<0.05);凋亡酶caspase-3的活性与正常组(0.12±0.02) U·μg^-1比较,模型组的caspase-3的活性升高(2.37±0.16) U·μg^-1,P<0.01),与模型组相比,40 μmol·L^-1花旗松素组caspase-3显著降低(1.77±0.07) U·μg^-1, P<0.01).花旗松素能明显提高Aβ损伤神经元的细胞活力,抑制神经元的凋亡,降低凋亡酶caspase-3的活性. 结论: 花旗松素对Aβ损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3活性从而实现抗凋亡作用有关.     

HPLC同时测定正天丸中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

该研究以高效液相色谱同时测定正天丸(钩藤、白芍、川芎、当归、防风等)中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。试验中采用Insertil ODS-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长230 nm。由试验结果可知,芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷在11.37~170.5,2.188~32.82,2.896~43.44,3.000~45.00 mg·L^-1峰面积与进样量线性关系良好,r分别为 0.999 9,0.999 9,1.000 0,1.000 0;回收率(n = 6)分别为102.3%(RSD 1.2%),99.71%(RSD 1.9%),101.2%(RSD 1.2%),99.40%(RSD 2.4%)。按所建方法对5批样品中上述4种成分的含量进行测定,结果均令人满意。该方法简便、准确,重复性好,可用于正天丸中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量控制。     

高效液相色谱法测定香青兰提取物中田蓟苷的含量

目的 :建立香青兰提取物中田蓟苷的含量测定方法。 方法 :色谱柱为Reliasil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.5%甲酸(25 ∶75), 检测波长323 nm,流速为1.0 mL ·min^-1,柱温为40℃。 结果 :田蓟苷在18.26~91.30 mg ·L^-1呈良好的线性关系,r=0.9998(n=5),平均回收率99.09%,RSD 1.53%(n=9)。 结论 :建立的测定方法简便可行、重复性好,适用于香青兰提取物的质量控制。     

高效液相质谱联用技术鉴定刺五加注射液中苯丙素类化学成分

刺五加药材的化学组成已有报道,而未见刺五加注射液化学物质基础的研究报道。该研究采用液相色谱离子阱质谱（LC-MSⁿ）和液相色谱四极杆飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）技术对刺五加注射液中苯丙素类化学成分进行定性分析。采用Ultmate^TM XB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以0.5%甲酸溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温20℃。根据高分辨和多级质谱数据,并结合对照品及文献数据,在刺五加注射液中共推断出54个苯丙素类成分,包括苯丙酸类成分34个,木脂素类成分16个,香豆素类成分4个,其中28个成分在刺五加中未见报道,通过对照品比对鉴定了14个化合物结构。该研究建立的方法可以简便快速地对刺五加注射液中的苯丙素类化学成分进行鉴定,研究结果为明确刺五加注射液化学物质基础提供了科学数据。     

华南木姜子的化学成分研究

通过大孔吸附树脂、MCI树脂、正相硅胶、Sephadex LH-20、制备薄层色谱和反相HPLC等多种色谱分离方法相结合,从华南木姜子树枝乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分离得到11个化合物,分别为N-反式-3,4-亚甲二氧基肉桂酰基-3-甲氧基酪胺(1),N-反式对香豆酰基-3-0-甲基多巴胺(2),N-顺式对香豆酰基-3-O-甲基多巴胺(3),(+)-芝麻素(4),(+)-松脂素(5),4,4′-二羟基-3,3-二甲氧基木脂烷-7-酮(6),4-羟基-3,5′-二甲氧基-4′,7-环氧-8,3′-新木脂烷-9,9′-二醇(7),苯甲酸(8),对羟基苯甲酸乙酯(9),对羟基苯甲醛(10)和4-羟基-3-甲氧基苄醇(11).化合物1为一新化合物,化合物2～n均为首次从该植物中分离得到.     

中华青牛胆中2个新的木脂素葡萄糖苷

目的研究中华青牛胆Tinospora sinensis的化学成分及其体外抗神经炎症活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS和制备型HPLC等色谱分离技术对化学成分进行分离纯化,并运用理化性质结合现代谱学(ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、ECD)解析技术进行结构鉴定。利用脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞模型进行抗神经炎症活性筛选。结果从中华青牛胆藤茎的95%乙醇水提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为中华青牛胆木脂苷C(1)、中华青牛胆木脂苷D(2)、裂环异落叶松脂醇-9-O-β-吡喃葡萄糖苷(3)、(+)-松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、(+)-丁香脂素(5)、tanegoside A(6)、(E)-3-[(2,3-trans)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-hydroxymethyl-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl]-N-(4-hydroxy-phenethyl)acrylamide(7)、银钩花胺酰B(8)、反式-N-p-香豆酰基酪胺(9)、N-反式-阿魏酰酪胺(10)、N-反式-咖啡酰酪胺(11)、克罗酰胺K(12)、顺式-克罗酰胺K(13)。发现7个化合物具有抗神经炎症活性。结论所分离鉴定的化合物包括木脂素和生物碱,其中化合物1和2为新化合物,3、5、7、8、10~13为首次从该植物中分离得到。化合物9和10的活性强于阳性对照米诺环素。     

地骨皮化学成分研究

目的研究地骨皮Lycii Cortex(root bark of Lycium chinense)的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS等多种色谱学方法分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从地骨皮95%乙醇提取物的醋酸乙酯部位中分离得到12个化合物,分别鉴定为反式-N-对羟基香豆酰酪胺(1)、反式-N-阿魏酰酪胺(2)、二氢咖啡酰酪胺(3)、芹菜素(4)、阿魏酸(5)、对羟基香豆酸(6)、3-羟基-1-(4-羟基苯基)-丙基-1-酮(7)、3,4-二羟基苯丙酸(8)、3,4-二羟基苯丙酸甲酯(9)、对羟基苯甲酸(10)、4-甲氧基水杨酸(11)、烟酸(12)。结论化合物8和9为新的天然产物,化合物1、6、11及12为从该植物中首次分离得到。     

Active constituents from Sophora japonica exhibiting cellular tyrosinase inhibition in human epidermal melanocytes

Aim of the Study

There is greater consumer awareness of plant-based skin-care products. Sophora japonica L. (Fabaceae) has been used traditionally as a hemostatic agent and also has skin-care and whitening benefits. The effect of the isolated active compounds of Sophora japonica L. (Fabaceae) that inhibits tyrosinase activity in human epidermal melanocytes (HEMn) was examined.

Materials and methods

We used the mushroom tyrosinase inhibitory assay to isolate active constituents from the extracts. The structures of these constituents were characterized by physical and spectroscopic analyses. Cellular tyrosinase kinetics were analyzed and showed by Lineweaver–Burk plot.

Results

A new compound, N-feruloyl-N′-cis-feruloyl-putrescine (8), together with four flavonoids and three putrescine derivatives were obtained after assay-guided isolation of S. japonica. In HEMn, compound 8 was minimally cytotoxic (cell viability >90% at 100 μM) and the IC₅₀ value for suppression of cellular tyrosinase activity was estimated as 85.0 μM. Zymography analysis demonstrated the compound's concentration-dependent effects and the kinetic analysis indicated the compound's mixed-inhibitory action.

Conclusions

We concluded that the new compound 8 is the most potent component of S. japonica yet discovered. Its pigment inhibition activity may be exploitable cosmetically.     

氮、磷、钾缺乏对西洋参根分泌物中 酚酸类化合物的影响

目的:研究氮、磷、钾元素缺乏对西洋参根系分泌物中具有自毒作用的酚酸类化合物的影响.方法:以二年生健康西洋参幼苗为试验材料,设计Hoagland全营养液以及分别去除氮、磷、钾元素4个处理进行水培试验,2周后收集不同处理的培养液,用XAD4和XAD7离子交换树脂富集其中不同极性的根系分泌物.Folin-Ciocalteu试剂法测定不同根系分泌物中总酚酸含量,HPLC测定香草酸、对香豆酸、肉桂酸3种单体酚酸含量.结果:与全营养条件相比,缺氮或缺钾情况下西洋参根分泌物中总酚酸含量显著升高(P<0.05);而磷的缺乏可导致西洋参根分泌物中总酚酸含量显著降低(P<0.05);缺乏3种元素之中的任何一种均可使香草酸、对香豆酸、肉桂酸在根系分泌物中的比例显著降低(P<0.05).结论:氮、磷、钾的缺乏可导致西洋参根系分泌物中的酚酸发生不同变化.     

The selective effect of N-feruloylserotonins isolated from Leuzea carthamoides on nociception and anxiety in rats

The effects of N-feruloylserotonins, substances isolated from the seeds of Leuzea carthamoides (WILLD.) DC., on nociception and anxiety were studied in Wistar rats. Nociceptive responses were measured using the plantar and tail-flick tests which were administered before and after swimming stress (3 min, water temperature 32 degrees C). Anxiety was evaluated using an elevated plus maze. In Experiment I, neither basal nociception nor stress-induced analgesia was influenced significantly. Separating the animals into groups based on their basal nociceptive sensitivity, either high- or low-pain threshold revealed that N-feruloylserotonins have selective effects, especially on rats with high-pain thresholds. In these animals, N-feruloylserotonins reduced the stress-induced analgesia that followed swimming stress. In Experiment II, basal nociceptive sensitivity correlated with indicators of anxiety; high-pain threshold rats were more anxious in the elevated plus maze, with less frequent visits to open arms. The opposite effect was seen in low-pain threshold rats. N-feruloylserotonins did not influence anxiety in low-pain threshold rats, although it reduced anxiety in the high-pain threshold rats as indicated by the increased ratio of open arm visit frequency compared to closed arm visit frequency in the elevated plus maze. From these results we concluded that N-feruloylserotonins have selective stress-reducing effects in stress-sensitive animals.     

宽苞水柏枝化学成分研究

目的 研究宽苞水柏枝Myricaria bracteata的化学成分。方法 应用多种色谱技术进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果 从宽苞水柏枝嫩枝95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位和大孔树脂30%乙醇洗脱部分中分离得到14个化合物,分别鉴定为丁香脂素（1）、(?)-南烛木脂酚（2）、(?)-异落叶松脂素（3）、Ν-反式阿魏酰基酪胺（4）、Ν-反式阿魏酰基-3-甲氧基酪胺（5）、Ν-反式阿魏酰基-2′-甲氧基酪胺（6）、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-6″-甲酯（7）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-6″-甲酯（8）、槲皮苷（9）、鼠李柠檬素（10）、没食子酸（11）、没食子酸甲酯（12）、E-咖啡酸（13）、E-阿魏酸（14）。结论 化合物1～6、14为首次从该属植物中分离得到,化合物7、8、12、13为首次从该植物中分离得到。     

石菖蒲根茎的化学成分研究

目的 研究石菖蒲Acorus tatarinowii根茎的化学成分.方法 利用不同的色谱分离纯化方法,并通过理化性质和波谱技术鉴定化合物结构.结果 从石菖蒲根茎90％乙醇提取液中分离得到13个化合物,分别鉴定为反式丁烯二酸(1)、烟酸(2)、对羟基苯甲酸(3)、尿嘧啶(4)、N-反式-对羟基苯乙基香豆酰胺(5)、胸腺嘧啶(6)、两型曲霉醌A(7)、丁二酸(8)、石菖蒲醇(9)、石菖蒲醇-12-β-D-葡萄糖苷(10)、β-谷甾醇(11)、2,5-二甲氧基对苯醌(12)、5-羟甲基糠醛(13).结论 化合物1～7均为从菖蒲属植物中首次分离得到.     

青牛胆含氮类成分研究

目的研究青牛胆Tinospora sagittata的块根中含氮类化学成分及其体外抗肿瘤活性。方法采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱等手段分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。分别采用台盼蓝排斥法和MTT法测试单体化合物对HL-60和MCF-7细胞的抗增殖作用。结果从青牛胆块根的乙醇提取物中分离得到9个化合物,分别鉴定为四氢巴马汀(1)、四氢药根碱(2)、药根碱(3)、巴马汀(4)、neoechinulin A(5)、echinuline(6)、N-反式阿魏酸酪酰胺(7)、尿嘧啶(8)、三乙胺氢碘酸盐(9)。结论化合物5、6、8、9为首次从青牛胆属植物中分离得到。化合物1、3~5、7对HL-60细胞显示弱的抗增殖作用。     

野菊不同部位绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量测定

目的:检测湖南衡阳产野菊不同部位(叶、花、花蕾、嫩茎及老茎)中绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量.方法:以80％的乙醇为溶剂,用超声法提取野菊不同部位中的绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸.采用高效液相色谱法检测绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量,以0.05％磷酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长327 nm.结果:绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的质量浓度在10～100 mg·L-1(r =0.996,r =0.992)与蜂面积呈良好的线性关系(n=5),平均回收率(n=6)分别为98.5％,99.7％.野菊叶、花、花蕾、嫩茎及老茎中绿原酸的含量分别为1.08％,0.44％,0.39％,0.58％及0.52％;3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量分别为1.66％,1.01％,0.82％,0.93％,0.64％,其中野菊叶中绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量最高.结论:野菊不同部位均含有绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸,但它们的含量存在明显差异.