醋酸棉酚对大鼠心血管系统的影响

实验以组织化学方法和电镜观察研究棉酚对心肌的影响。同时测定动物口服棉酚后,在清醒和麻醉条件下血压、心电图、心收缩力的变化。 将体重165～200g的雄性大鼠分为实验与对照二组。实验组(1)动物经口给棉酚(吐温80悬浮液)30mg/kg,实验组(2)经口给棉酚(吐温80悬浮液)15mg/kg;对照细胞同样剂量吐温80水溶液,各组每     

~(14)C—醋酸棉酚在大鼠体内代谢的研究

(一)大鼠内分布、定位的整体及组织放射自显影的动态观察(摘要)以~(14)C 标记的醋酸棉酚喂饲成年雄性大鼠,一次口服组的剂量为94微居里/35毫克/动物;累加服药(每日连续口服)组为4.45微居里/日/动物。分别于服药后不同时期取材制成整体及组织放射自显片。追踪标记棉酚在体内各脏器和组织中的吸收、分布和累积的定位变化动态。相应的组织切片用 H·E 染色,作细胞病理观察。结果摘述如下:     

~(14)C-醋酸棉酚在大鼠睾丸中亚细胞定位的电镜放射自显影研究(摘要)

<正> 棉酚的抗精子作用,在细胞水平上是以变态期精子细胞和中、晚期精母细胞受损而实现的,而在亚细胞水平上则以线粒体损伤最剧。放射化学研究表明,~(14)C-棉酚在大鼠睾丸5种亚细胞组分中以线粒体含量最高。本研究旨在以电镜放射自显影技术探讨棉酚的亚细胞作用位点,进一步阐明棉酚的生物学作用机理。     

棉酚对大鼠睾丸生精上皮抗精子发生作用的细胞学放射自显影及超微结构的观察(摘要)

成年 Wistax 雄性大鼠,分别于连续小剂量(30毫克/公斤体重/日)和1次大剂量(100毫克/公斤体重/鼠)口服棉酚后不同时间,取睾丸和附睾等生殖器官,进行了对药物干扰精子发生的动态过程,同位素放射自显影和电镜超微结构的观察,结果如下:1.大鼠连续口服棉酚(30毫克/公斤体重/日)4～5周后有半数以上动物以及6～7周后全部实验动物均失去生育力。睾丸生精上皮中最先出现形态损伤的是服药2～3周后的精子细胞和粗线期初级精母细胞。服药4周后,7～19期精子细胞和Ⅶ期     

神经生长因子对神经干细胞增殖的影响

目的:观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响.方法:取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12 B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实验组培养液中分别加入NGF至终浓度的50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L、2μg/L;培养液无添加成分作为阴性对照组.用MTT比色分析法测定细胞增殖能力,倒置显微镜下观察细胞增殖情况.结果:3 d MTT比色显示,50μg/L NGF组细胞增殖较其他各组低(P＜0.05);培养10 d时细胞活力测定表明各组细胞均有一定程度的增殖,10μg/L NGF组与阳性对照组比较差异无统计学意义,与阴性对照组比较差异有统计学意义.结论:在一定浓度范围内NGF能明显促进神经干细胞的增殖.     

放射自显影和高速闪烁自显影在中枢神经系统中的应用

本文选用30只猫和20只大白鼠进行了放射自显影及高速闪烁自显影联合应用的研究。将~3H—亮氨酸分别注入猫和大白鼠的中枢神经核团内,并严格按照放射自显影神经追踪术和高速闪烁自显影程序制备标本。结果放射自显影神经追踪术具有敏感性高、定位精确、神经元处于生理状态下进行实验等优点。同时结合高速闪烁自显影可早期判断注射位点。关于标记物的注人我们认为以高浓度、小体积,慢匀速注射为好。本文还对动物存活期,冰冻切片等问题进行了讨论。     

~(14)C-棉酚在大鼠睾丸亚细胞组分中的定量分布及作用位点的研究

~(14)C-棉酚在大鼠睾丸五种亚细胞组分中,以线粒体中含量最高,放射活性较其他组分高2～3倍,差别显著。~(14)C-棉酚和~3H-哇巴因双标记实验也表明,双标记的放射活性高峰均集中于线粒体,其次为细胞膜。这二种细胞组分的~(14)C和~3H放射活性均分别较其他组分高,差异显著。这有力地支持线粒体蛋白质容易与解偶联物质结合的论点,并为线粒体是棉酚的敏感靶子细胞器以及棉酚通过干扰线粒体功能而中断精子发生过程的假说提供了直接证据。     

侧脑室注射神经肽Y对癫痫大鼠脑源性神经营养因子表达的影响

目的研究脑室内注入神经肽Y(NPY)对白细胞介素-1β(IL-1β)致痫大鼠海马结构内脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法将16只健康雄性Wistar大鼠随机分为实验组(n=8)和对照组(n=8).实验组脑室注射NPY(6nmo1/5μl),对照组给予等容量生理盐水,5min后再注射IL-1β(2500U/kg),观察痫性发作持续时间并于痫性发作后2小时处死动物.用免疫组化方法观察齿状回(DG)和海马CA3区BDNF的免疫组织化学反应.结果实验组痫性发作时间短于对照组.实验组DG颗粒细胞层、分子层的BDNF免疫反应性高于对照组相应各层,各组比较有显著性差异(P＜0.01).实验组CA3区锥体细胞层、放射层及腔隙层免疫反应性均高于对照组相应各层,各组比较有显著性差异(P＜0.01).实验组DG分子层和CA3区放射层及腔隙层免疫反应性分别高于颗粒细胞层和锥体细胞层免疫反应性,各组比较有显著性差异(P＜0.01).CA3区分子层未见BDNF免疫反应性表达.结论脑室内注射NPY可缩短痫性发作时间,促进致痫大鼠海马内BDNF的表达.     

醋酸棉酚对雌性小鼠生殖器官形态影响的初步观察(简报)

为探索棉酚能否用于女性节育,本实验选用C57-BL雌性小鼠40只,平均体重20～22克,实验及对照各20只。醋酸棉酚用1％甲基纤维素配成混悬液,50毫克/公斤体重/日剂量灌喂,每周6次,连喂10周后改为每周喂2次,对照组喂1％甲基纤维素。于喂后6、12和24周分别取材,作病理切片及扫描电镜观察,结果表明,服药后6和12周实验和对照鼠子宫     

应用蛋白质组分析法初步探讨胆囊收缩素在皮质神经元中的信号转导途径

目的:通过应用蛋白质组学的方法与技术,对八肽胆囊收缩素(octapeptite cholecystokinin,CCK8)作用于乳小鼠皮质神经元后蛋白质磷酸化状态进行分析,为初步探讨胆囊收缩素在皮质神经元中的信号转导途径提供依据.方法:培养乳小鼠皮质神经元,掺入32P-NaH2PO4(2.03×105Bq/ml)2h,实验组及对照组分别加入CCK8和无磷培养基进行培养,收集细胞,提取蛋白,蛋白含量测定.双向电泳分离蛋白,放射自显影获得磷酸化蛋白质的电泳图谱.结果:①对蛋白质组分析法中各个环节实行了筛选及优化,得到比较清晰的放射自显影图谱.②由放射自显影图谱可见,与CCK8信号转导相关的磷酸化蛋白质大约有46个,包括了多种蛋白激酶、细胞膜受体、胞内信号分子、转录因子等.结论:蛋白质组学的方法与技术可以行之有效的应用于信号转导途径中蛋白质磷酸化状态的分析.根据神经元蛋白质磷酸化状态分析的结果,可推测CCK8在皮质神经元的信号转导途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径等.     

醋酸棉酚、孕酮、丹那唑及GnRH-A对人子宫内膜细胞DNA合成的影响(文摘)

本实验采用固相液闪法,分别测定了10~(-6)M醋酸棉酚、孕酮、丹那唑及促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)与离体人子宫内膜细胞短期培养后,~3H-TdR掺入量的变化.结果除GnRH-A外,醋酸棉酚等药物     

甘草酚和5-FU联合处理对结肠癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的 探讨甘草酚(GC)和5-FU联合处理对结肠癌细胞的增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及机制。方法 以人结肠癌细胞系HCT116为研究对象,细胞分别以0,2.5,5,10,15,20μmol/L 5-FU以及0,5,10,20,30,40μmol/L GC处理细胞48 h,用结晶紫染色法计算细胞存活率以确定最佳处理浓度。HCT116细胞分别以10μmol/L 5-FU、20μmol/L GC及10μmol/L 5-FU+20μmol/L GC处理12,24,36,48,60 h,用结晶紫染色法计算细胞存活率以确定最佳处理时间。HCT116细胞分别常规培养(对照组)、10μmol/L 5-FU、20μmol/L GC及10μmol/L 5-FU+20μmol/L GC处理48 h,采用结晶紫染色法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测裂解多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、程序性死亡配体1(PD-L1)、磷酸化组蛋白H3(p-Histone H3)和磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)的表达水平。固定5-FU与GC的浓度比例为1∶2,细胞分别以不同...     

PI3K/AKT抑制剂联合放射对CNE-1细胞Ku70、Ku80表达的影响

目的:分析体外研究磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号转导通路抑制剂(LY294002)联合放射对鼻咽癌细胞CNE-1Ku70、Ku80mRNA表达的影响,探讨PI3K/AKT抑制剂影响放射敏感性的机制。方法:体外培养人鼻咽癌细胞CNE-1,取指数生长期细胞分为四个实验组:对照组(A)、单纯放射组(B)、单纯药物组(C)、加药联合放射组(D);RT-PCR检测各组Ku70、Ku80mRNA的表达水平。结果:RT-PCR结果显示,放射后Ku70mRNA的表达增高,而抑制剂LY294002单纯作用CNE-1细胞后Ku70mRNA的表达水平无改变,但联合放疗后,可以降低放射后的Ku70mRNA的表达水平(P0.05);本实验中Ku80mRNA的表达水平在各实验组中未观察到明显改变。结论:LY294002联合放疗可抑制Ku70表达,通过减少CNE-1细胞DNA损伤后的再修复影响放射敏感性。     

模拟缺血预适应对原代培养乳鼠窦房结细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过观察不同时间、不同次数的模拟短暂缺血刺激对随后较长时间缺血/再灌注乳鼠窦房结细胞活性的影响,以探讨模拟缺血预适应(IP)对原代培养乳鼠窦房结细胞的保护作用.方法取培养2 d的窦房结细胞,分为对照组、模拟缺血/再灌注(I/R)组及IP1(缺血5 min/再灌注5 min)组、IP2(5 min/5 min×2)组、IP3(5 min/5 min×3)组、IP4(10 min/10 rmin)组、IP5(10min/10min×2)组、IP6(10min/10min×3)组、IP7(20 min/20min)组、IP8(20 mir/20min×2)组、IP9(20 min/20min×3)组,在模拟缺血3 h/再灌注4 h结束后,通过PI染色及MTT比色法检测各组乳鼠窦房结细胞PI染色阳性率及D490值的变化.结果①各实验组乳鼠窦房结细胞D490值均较对照组明显降低(P＜0.01),但IP2组、IP3组、IP4组、IP5组及IP7组D490值却较I/R组明显升高(P＜0.01).②各实验组PI染色阳性窦房结细胞百分率均较对照组明显增高(P＜0.01),但IP2组、IP3组、IP4组、IP5组及IP7组PI染色阳性率却较I/R组显著降低(P＜0.01).结论模拟IP对随后较长时间I/R的乳鼠窦房结细胞具有保护效应,而这种保护作用的产生可能与累计的模拟缺血刺激"总时程"有关.     

SPECT对干细胞移植后梗死心肌细胞活性及心肌灌注的评价

目的 :应用SPECT观察干细胞移植后犬急性梗死心肌内血流灌注及心肌细胞活性的改变情况。方法 :取12只成年犬骨骼肌 ,分离干细胞并培养、传代、标记。将DAPI标记的干细胞 ,自左冠状动脉前降支注入急性心肌梗死动物模型缺血心肌中。 2 ,4 ,8周后自前肢浅静脉注射99Tcm-MIBI 2 0mCi,6 0min后显像 ,进行断层采集 ,范围从右前斜 4 5°到左后斜 4 5°,共 180°。结果 :实验前各实验动物SPECT心肌断层显像 ,所有断层均见不到显影的放射性缺损 ;实验组SPECT心肌断层显像与对照组比较 ,所有断层均见不到显影的放射性缺损 ,只可见到显影的稀疏区域 ,心肌血流灌注及细胞活性得到明显改善 ;实验组心肌灌注显像评分与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :干细胞移植可使缺血心肌的血流灌注及细胞活性得到明显改善 ;门控99Tcm-MIBISPECT心肌灌注显像操作简便 ,安全无创 ,结果准确可靠 ,能直观地反映缺血心肌内细胞活性及血流灌注的情况。     

急性肝损伤小鼠肝组织中的自噬现象

目的探讨在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤模型中,肝脏组织的自噬情况。方法将60只雄性Balb/C小鼠随机分为5组(每组均包括实验亚组和对照亚组,各6只)。实验组小鼠腹腔注射LPS(100μg/kg)和D-GalN(350mg/kg)溶液,对照组小鼠只注射无菌等量生理盐水,分别于注射后2、4、8、12、24h处死小鼠,取其血液及肝脏。另取3只小鼠饥饿处理24h作为自噬阳性对照组。所有小鼠于处死前24h经高压尾静脉注射法注射溶于2ml生理盐水的GFP-LC3质粒100μg。生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;透射电镜、荧光显微镜下观察小鼠肝脏的自噬情况。结果各实验组血清ALT、AST水平均明显高于相应对照组(P<0.01)。透射电镜显示,实验组和自噬阳性对照组肝组织中可见大量肝细胞发生自噬。荧光显微镜下可见GFP-LC3绿色荧光蛋白。8、12、24h实验组及自噬阳性对照组每高倍镜视野下平均GFP-LC3荧光点数目明显高于对照组(P<0.01)。结论 LPS和D-GalN可诱导小鼠发生急性肝损伤,而自噬是这一过程中的重要形态学特征。     

骨髓间充质干细胞修复放射性涎腺损伤大鼠实验研究

目的:分析放射性涎腺损伤大鼠经骨髓间充质干细胞修复后的效果。方法:选取30只大鼠，10只作为空白组，剩余20只建立放射性涎腺损伤大鼠模型，将建模大鼠分为放射对照组、实验组各10只。实验组给予100μl骨髓间充质干细胞悬液，腹腔注射，1次/d,共注射7 d,空白组、放射对照组不做干预，正常喂养。检测对比各组大鼠唾液流量、腮腺指数、下颌下腺指数、水通道蛋白5(AQP5) mRNA表达量及蛋白相对表达量。结果:与空白组相比，放射对照组、实验组唾液流量、腮腺指数、下颌下腺指数水平、AQP5 mRNA表达量、蛋白相对表达量下降(均P<0.05);与放射对照组相比，实验组唾液流量、腮腺指数、下颌下腺指数水平、AQP5 mRNA表达量、蛋白相对表达量上升(均P<0.05)。结论:放射性涎腺损伤大鼠经骨髓间充质干细胞干预后唾液流量、腮腺指数、下颌下腺指数上升，其机制可能与AQP5表达量增加有关。     

麒麟类可可脂对昆明小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响

麒麟类可可脂(Kylinfat简称K脂)是用乌梅果实皮脂制备的类可可脂,用于替代可可脂生产巧克力。本测试选用昆明小鼠30只,分5组,实验组分高、中、低3个剂量组,每天分别给予K脂(加热液化后)10、5和1mg/kg体重,阴性对照组每天给5ml/kg体重花生油,阳性对照组每天给予50mg/kg体重环磷酰胺,各组均连续3d灌胃。末次灌胃后6h处死动物取股骨,按常规方法测得各实验组骨髓嗜多染红细胞微核率分别为1.5‰、1.67‰和2。     

脐血移植的人鼠嵌合裸鼠模型的建立

目的用BALB/c裸鼠建立脐血移植的人鼠嵌合裸鼠模型。方法将30只BALB/c裸鼠随机分成实验组和对照组,每组各15只,实验组再根据输注有核细胞数的不同分成A、B、C三组。采用~(60)Co治疗仪γ-射线对实验组和对照组进行亚致死剂量照射,照射后实验组经裸鼠尾静脉输入分离的人新鲜脐血有核细胞(NC),A、B、C3组分别输入NC1.0×107个/只、2.0×107个/只、3.0×107个/只,对照组经尾静脉注入等体积无菌生理盐水。移植后分别检测实验组和对照组外周血白细胞和外周血人源性CD34 和CD45 细胞水平。结果1脐血移植前及移植后第8周实验各组与对照组之间WBC数差异无统计学意义(P>0.05);移植后第1、2、3、4周实验各组与对照组之间WBC数不全相同(P<0.05)。各时间点WBC水平与移植前相比,移植后实验各组与对照组WBC均下降,第1周WBC数最低,但随时间的延长WBC逐渐增加,到第4周实验各组WBC已恢复至移植前水平,而对照组WBC水平仍较低(P=0.000),第8周恢复正常。2外周血中的人源性CD34 细胞和CD45 细胞在第4周时均已出现,但总体水平较低。实验组A的CD34 和CD45 细胞数水平各个时段均较实验组B和实验组C低(P<0.05);而实验组B和实验组C的人源性CD34 和CD45 细胞数水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用BALB/c裸鼠能成功建立脐血移植的人鼠嵌合动物模型。     

不同旋光异构体棉酚对睾丸支持细胞的影响

研究不同旋光异构体棉酚对体外培养大鼠睾丸中支持细胞的影响。观察到不同旋光异构体棉酚均能引起支持细胞形态产生变化,细胞器中以线粒体变化最明显,表现为SDH活性减弱,有些酶粒变粗,电镜下看到线粒体肿胀,嵴排列不规则,甚至断裂或消失。细胞受损伤程度按( )<(±)<(-)棉酚程序。上述变化与口服棉酚大鼠睾丸中支持细胞变化相似。