二氢青蒿素抑制结肠癌细胞株HCT-116并诱导凋亡的实验研究

目的：研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人结肠癌HCT-116细胞的体外抑制并诱导凋亡,并探讨其作用机制。方法：以不同浓度的DHA作用于体外培养的HCT-116细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪进行周期分析检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法,检测不同浓度的DHA作用于肿瘤细胞时,凋亡相关蛋白Bcl-2,bax,cleavad-PARP表达情况。结果：在DHA作用后,HCT-116细胞生长受到明显抑制,IC50（半抑制浓度）值为14.18μmol/L。并呈一定的量效和时效依赖关系。流式细胞仪检测亚二倍体（sub-G0）比例增高;Western-Blotting检测药物处理细胞后Bcl-2表达水平下调,而Bax、cleavad-PARP表达水平明显上调。结论：DHA能抑制HCT-116细胞的生长增殖并诱导细胞发生凋亡。     

PFT-α在调控热化疗损伤结肠上皮细胞增殖和周期中的作用

目的：探讨p53抑制剂PFT-α（p-fifty three inhibitor-alpha，PFT-α）对热化疗损伤肠上皮细胞增殖、周期的影响，及对热化疗损伤肠上皮细胞的保护作用。方法：MTT法分析PFT-α对结肠上皮细胞增殖及其对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。顺铂联合温热处理结肠上皮细胞，对比加入不同浓度的PFT-α，Annexin V-FITC／PI和PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。结果：PFT-α在低于50μmol／L时，对于结肠上皮细胞增殖无影响，高于60μmol／L则抑制细胞增殖（P＜0．01）。PFT-α在5～40μmol／L之间。PFT-α不影响DLD1细胞生长，达50μmol／L时，则对肿瘤细胞的生长有一定的抑制效应（P〈0．05）。达60μmol／L，这种抑制效应更明显（P〈0．01）。PFT-α呈浓度依赖性降低热化疗诱导的结肠上皮细胞凋亡率，使细胞G2／M延长。结论：PFT-α可使细胞G2／M期延长而保护结肠上皮细胞。     

奥氮平对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用机制。方法以Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及奥氮平对PC12细胞Bax、Caspase-3表达的影响,结果10^-14～10^-5mol／L的Aβ25-35减低PC12细胞存活率,50μmol／L及100μmol／I。奥氮平预处理24h可提高PC12细胞存活率,相同浓度Aβ25-35奥氮平预处理组与非处理组比较差异显著（P〈0．05）;0．01、2、20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Bax表达增加,50μmol／L奥氮平预处理使0．01μmol／L和20μmol／L Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax的表达减低（P〈O．05）;2μmol／L及20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Caspase-3的表达增高,5μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高,与非预处理比较差异显著（P〈O．05）。结论奥氮平可对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达有关。     

64排螺旋CT诊断Abernethy畸形二例

病例资料病例1,女,53岁。以发现高血糖7年,双下肢浮肿5 d入院。入本院后体检：脾肋下可触及5 cm。实验室检查：乙肝标志物均阴性,空腹血糖8．0 nmol／L,肝功能：总胆红素（T-BIL）为110μmol／L（正常3．4-17．7μmol／L）,直接胆红素（D-BIL）6．7μmol／L （正常0-6．8μmol／L）,间接胆红素（I-BIL）45μmol／L（正常1．7-10．2μmol／L）,肌酐220．0μmol／L （男性44-133μmol／L,女性70-108μmol／L,小儿25-69μmol／L）,谷氨酰转氨酶（GT）205 U／L （0-50 U／L）,     

吩噻嗪衍生物协同放射对HeLa细胞增殖的抑制效应比较研究

目的 探讨吩噻嗪衍生物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及与放射联合应用抑制肿瘤的协同效应。方法 采用MTT法和细胞克隆形成法检测细胞的增殖活性和细胞辐射敏感性。结果 比较了6种吩噻嗪衍生物对HeLa细胞增殖的抑制效应，发现化合物α-氯-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD2）、α-三氟甲基-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD3）和α-氯-N-二乙胺基乙基吩噻嗪（PTZD5）的作用比较明显，在10μmol／L浓度能产生出显著抑制效应，40-50μmol／L浓度作用3和4d，细胞增殖完全被抑制而死亡。PTZD2或PTZD3与放射联合应用，显示出明显抗HeLa细胞增殖的协同效应，10μmol／L PTZD3对2和4Gy照射细胞的增殖抑制的增强比分别为3．5和1．8。实验结果还表明，在照射前18h用药的协同作用更加显著。结论 吩噻嗪衍生物具有程度不同的抑制HeLa细胞增殖的作用，与放射联合应用具有抗肿瘤的协同效应，而且照射前18h用药的效应最佳。     

脑血管病患者血浆同型半胱氨酸含量测定分析

目的：探讨血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平与脑血管病之间的关系。方法：选择脑血管病254例，分为脑梗死组156例，脑出血组98例，另选健康体检者121例作为对照组，测定其空腹血浆Hcy浓度。结果：脑血管病组Hcy含量（18．45±9．32）μmol／L，其中亚型脑梗死组（18．48±9．49）μmol／L，脑出血组（18．40±9．10）μmol／L，均较对照组（13．92±4．13）μmol／L高（P〈0．01）。脑梗死组和脑出血组高同型半胱氨酸血症（Hhcy）发生率均高于对照组（P〈0．01）。结论：Hhcy与脑血管病密切相关，是脑血管病的独立危险因素。     

染料木黄酮联合5-FU对结肠癌HCT-116细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨染料木黄酮联合5-氟尿嘧啶对HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法经不同浓度的Gen和(或)5-FU处理HCT-116细胞后,用MTT法检测细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化情况;RT-PCR检测Suvivin表达水平。结果 Gen与5-FU联合应用后能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞发生S期阻滞,均较对照组和单用药组作用增强,并且下调了Suvivin的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gen可抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,将细胞阻滞于S期,并诱导细胞的凋亡,与5-FU联合应用具有显著协同效应,其机制可能与下调Suvivin表达有关。     

异丙酚对N-甲基-D-天冬氨酸致PC12细胞损伤时氨基酸水平的影响

目的 观察静脉麻醉药异丙酚对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）致PC12细胞损伤时氨基酸水平的影响，并探讨异丙酚细胞保护作用的可能机制。方法 建立300μmol／L NMDA诱导的PC12细胞损伤模型，采用高效液相色谱分析法测定PC12细胞氨基酸含量。结果300μmol／L NMDA处理4h可使PCI2细胞谷氨酸含量明显增加，但对天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸含量无明显影响；12．5和125μmol／L异丙酚与300μmol／L NMDA同时处理PCI2细胞4h后，谷氨酸含量较单纯NMDA组明显降低（P〈0．05）。结论 异丙酚可明显抑制NMDA诱导PC12细胞损伤所致的谷氨酸合成或释放，提示异丙酚可能通过抑制谷氨酸的合成或释放而产生细胞保护作用。     

基于ERα-EGFP核颗粒形成的荧光成像分析快速识别环境中雌激素样物质

目的：利用基于荧光成像分析的细胞高内涵分析（ high content analysis ，HCA）技术，建立快速识别环境中雌激素样物质的方法。方法以稳定表达雌激素受体α（ ERα）-增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein，EGFP）融合蛋白（ERα-EGFP）的人骨肉瘤U2OS细胞为模型，以雌激素（17-β-雌二醇）为阳性对照药，以黄体酮为阴性对照药，基于ERα-EGFP核颗粒形成的荧光成像分析探查环境污染物质双酚A、壬基酚、邻苯二胺、对氨基苯酚、间苯二酚、间氨基苯酚、对苯二胺和甲基-2，5-二胺硫酸盐等对ERα-EGFP细胞核颗粒形成作用（ Foci作用）的影响，分析其量效关系；并利用荧光素酶报告基因实验验证HCA的结果。结果 HCA结果显示，仅有双酚A、壬基酚和阳性药17-β-雌二醇能够剂量依赖地促进ERα-EGFP 细胞核颗粒形成作用，其EC50分别为（1．48±1．79）μmol／L、（3．70±0．78）μmol／L及（4．17±0．41） nmol／L，最小检出浓度分别为1 nmol／L（17-β-雌二醇）、300 nmol／L（双酚A和壬基酚）；邻苯二胺、对氨基苯酚、间苯二酚、间氨基苯酚、对苯二胺和甲基-2，5-二胺硫酸盐等不能诱导ERα-EGFP细胞核颗粒形成作用。荧光素酶报告基因实验结果同样显示，活性药物双酚A、壬基酚和阳性药17-β-雌二醇能够剂量依赖地诱导ERα报告基因ERE-Luc的活性，其EC50分别为（2．31±0．21）μmol／L、（6．60±0．94）μmol／L及（4．46±0．56）nmol／L；最小检出浓度是3 nmol／L（17-β-雌二醇）、300 nmol／L（双酚A）和1μmol／L （壬基酚）。 HCA和荧光素酶报告基因实验的结果基本一致，但HCA方法更为灵敏，实验步骤更为简便。结论基于荧光成像定量分析的HCA技术能够快速和灵敏地识别具有ERα激动活性的环境物质，是分析环境雌激素的有效方法。受试化合物中双酚A和壬基酚有明确的ERα激动活性。     

小补心汤总黄酮含药血清对皮质酮损伤神经细胞的保护作用

目的探讨小补心汤总黄酮（XBXT-2）含药血清的神经保护作用。方法采用血清药理学方法分别制备大鼠的空白血清、氟西汀（10 mg/kg）和XBXT-2（25,50,100,200 mg/kg）含药血清。采用皮质酮损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）、人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）及原代培养大鼠海马神经元为体外药理学模型,应用ATP生物发光法检测XBXT-2及氟西汀含药血清对损伤细胞存活率的影响。结果皮质酮（50～300μmol/L）能够浓度依赖性地抑制SH-SY5Y的存活,氟西汀与XBXT-2（25,50 mg/kg）含药血清能显著提高皮质酮（100μmol/L）损伤的SH-SY5Y的存活率（P〈0.01,P〈0.05,P〈0.01）;与空白对照组比较,200μmol/L皮质酮导致PC12的存活率显著下降（P〈0.01）,氟西汀与XBXT-2（25,50,100 mg/kg）含药血清能显著对抗这种损伤（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）;100μmol/L皮质酮使原代海马神经元存活率显著下降（P〈0.001）,XBXT-2（25、50 mg/kg）对这种损伤具有显著的保护作用（P〈0.05,P〈0.001）,其作用与阳性药氟西汀含药血清相当。结论 XBXT-2含药血清对皮质酮所致的神经细胞损伤具有明显保护作用,这可能是其抗抑郁效应的重要细胞机制之一。     

阿魏酸钠对抗Aβ_（25-35）诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响。方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸（20μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）＋谷氨酸（20μmol/L）孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸（50μmol/L）诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Western blot观察阿魏酸钠的保护作用。结果单独应用Aβ25-35（5μmol/L）和单独加入谷氨酸（20μmol/L）引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%±1.5%增加到43%±8%;阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低。结论阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响。方法①采用MTT法测定AG014699在不同浓度、不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖作用的影响;②用流式细胞仪测定AG014699在50μmol/L浓度下对人卵巢癌细胞株SKOV3作用24h后对细胞周期及凋亡的影响。结果①MTT测定：在24、48、72h时AG014699在10μmol/L分别测得的OD值与对照组相比,P〈0.05,有统计学差异;②流式细胞仪测定：AG014699在50μmol/L浓度下对SKOV3作用24h能明显改变细胞的周期分布,诱导细胞凋亡。结论 AG014699能明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖并诱导其凋亡。     

瘀胆血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）体外诱导其分化为肝细胞的可行性。方法分离、纯化并鉴定大鼠骨髓MSCs,制备正常及瘀胆大鼠血清,取第3代MSCs分组培养：A组：DMEM＋10％FBS;B组：肝细胞生长培养基（HGM）＋5％FBS0、组：HGM＋5％正常大鼠血清;D组：HGM＋5％瘀胆大鼠血清;E纽：HGM＋5％瘀胆大鼠血清＋25ug／LHGF。观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,采用RT～PCR检测甲胎蛋白（AFP）和细胞角蛋白18（CK18）的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白（ALB）的含量。结果培养过程中,D、E组出现多角形及双核细胞,A、B、C组细胞形态无明显变化。生长曲线显示细胞生长速度C组最快,D、E组均较B组快（P〈0．05）。D、E组于诱导第7,14天出现AFPmRNA阳性表达,第14,21天出现CK18mRNA阳性表达,D、E组上清波中白蛋白浓度随诱导时间延长逐渐升高,且E组高于D组（P〈0．05）。A、B、C组未见AFP、CK18表达及白蛋白浓度变化。结论正常大鼠血清能明显促进MSCs的增殖;瘀胆血清对MSCs有一定促增殖作用,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用HGF能提高分化率。     

沙美特罗/丙酸氟替卡松吸入治疗中重度COPD的临床观察

目的探讨吸入型肾上腺糖皮质激素（ICS）与长效β2-受体激动剂（LABA）的预混制剂沙美特罗/丙酸氟替卡松（SAL/FP）对中重度慢性阻塞性肺疾病（COPD）的治疗作用。方法COPD病人70例（全部病例入组前未使用过任何剂型的激素、受体激动剂、抗胆碱药,无氧疗史）,随机分成两组,A组35例,吸入沙美特罗/丙酸氟替卡松（SAL/FP）干粉剂,1吸/次,2次/天;B组35例,不吸入上述药物;两组病人均服用沐舒坦30mg/tid。观察治疗3月、6月、12月三个时间点病人临床症状、乔治生活质量评分、肺功能、血中IL-8和TNF-α的水平、急性发作次数、住院次数、住院费用。结果观察期各不同时间点A、B两组肺功能、圣.乔治生活质量评分（SGRQ）、急性加重发生次数及、健康状态和住院次数、等各项观察指标差异有显著性（P〈0.05）;A组明显优于B组,治疗前后诱导痰IL-8和TNF-α明显减低（P〈0.05）;但住院费用A、B两组无明显差别（P〉0.05）。结论ICS与LABA治疗中重度COPD具有良好协同作用,其预混制剂（SAL/FP 50/250μg）干粉剂使用方便,近期疗效好,有临床应用价值,可短期改善COPD的FEV1的水平,对全身炎症反应无明显抑制作用,医疗费用没有明显增加。     

高原健康人缺氧诱导因子-1α、诱导性一氧化氮合酶和一氧化氮的海拔性变化与红细胞变形能力的关系研究

目的：观察缺氧诱导因子-1α、诱导性一氧化氮合酶、一氧化氮和红细胞滤过指数在不同海拔的变化,探讨缺氧诱导因子-1α、诱导性一氧化氮合酶和一氧化氮的海拔性变化对红细胞变形能力的影响。方法：对不同海拔高度（西宁2 260m A组、刚察县3 300m B组、甘德县4 800m C组）320例健康人检测了缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、诱导性一氧化氮合酶（i NOS）、一氧化氮（NO）和红细胞滤过指数（EFI）。结果：随着海拔的升高,健康人HIF-1α水平和EFI上升,而i NOS和NO随之降低;甘德组HIF-1α水平（7.65±1.36）μg/L明显高于刚察组（5.39±1.02）μg/L和西宁组（4.18±1.14）μg/L（均P〈0.01）,刚察组HIF-1α水平明显高于西宁组;甘德组血清i NOS和NO（5.86±1.43）μmol/L、（38.53±4.23）μmol/L明显低于刚察组（9.44±2.13）μmol/L、（47.85±3.77）μmol/L和西宁组（12.23±2.07）μmol/L、（59.23±4.01）μmol/L（均P〈0.01）,同时刚察组i NOS和NO水平明显低于西宁组（P〈0.01）;EFI随着海拔升高而增加[西宁组：（4.67±0.49）μmol/L、刚察组：（7.05±1.51）μmol/L、甘德组：（11.45±1.78）μmol/L],各组比较有明显差异（P〈0.01）;相关分析表明：EFI与HIF-1α水平呈正相关（P〈0.01）;而与i NOS和NO呈负相关。结论：HIF-1α、i NOS和NO海拔差异性的形成在红细胞变形能力异常的病理生理机制中发挥着重要作用,而随海拔高度升高机体i NOS和NO水平的生物学特性进一步降低是导致海拔差异健康人红细胞流变形异常加重的中心环节。     

同型半胱氨酸和白介素-18与急性脑梗死发病的相关性研究

目的：分析血浆同型半胱氨酸（Hcy）及白介素（IL）-18与急性脑梗死发病的相互关系。方法：选择我院老年病科2006-04－2008-05的住院脑梗死患者103例,健康对照46例,测定血清中IL-18及Hcy水平。结果：脑梗死组的血清IL-18浓度（212.57±86.72 pg/ml）明显高于对照组（121.45±75.65 pg/ml）（P〈0.05）;脑梗死组Hcy浓度（8.84±3.15μmol/L）明显高于对照组（6.92±1.23μmol/L）（P〈0.05）;在脑梗死患者,IL-18升高组血浆Hcy的浓度（10.1±3.5μmol/L）明显高于IL-18正常组（8.3±2.6μmol/L）,直线相关性显示IL-18水平和Hcy明显相关（r=0.42,P〈0.05）。结论：急性脑梗死患者血清中IL-18、Hcy浓度明显高于正常对照,另外IL-18可能是脑梗死患者Hcy的独立决定因素。     

血尿酸和5-羟色胺水平与青少年抑郁症发病机制的关系

目的 研究青少年抑郁症患者血尿酸和5-羟色胺水平,探索青少年抑郁症的发病机制.方法 对青少年抑郁症患者（病例组）和健康青少年（对照组）各106例进行血尿酸水平检测,对41例抑郁症患者的5-羟色胺水平进行分析.结果 病例组血尿酸为（435.61 ±101.36） μmol/L,高于对照组（332.73±63.52） μmol/L,差异有统计学意义（=8.86,P＜0.001）.病例组中高血尿酸者51例,占48.11％;病例组5-羟色胺水平显著低于全国常模（P=0.005）,并与血尿酸水平显著负相关（r=-0.48,P＜0.01）.结论 高血尿酸可作为青少年抑郁症早期诊断的一个指标,青少年抑郁症可能是由于脑内神经元DNA氧化损伤所致.     

黄芩苷协同头孢唑啉对金黄色葡萄球菌生物膜的体外研究

目的 研究黄芩苷对金黄色葡萄球菌（S.a）生物膜（BF）的破坏作用以及与头孢唑啉（CEZ）的协同杀菌效果。方法选取临床分离的编号为17546的S.a构建体外BF模型,试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MICs）和最低杀菌浓度（MBCs）,结晶紫染色法半定量BF,连续稀释法活茵计数。结果BF经黄芩苷作用24h后BF半定量结果显示,黄芩苷组吸光度值为（1．284±0．076）,黄芩苷＋CEZ组第16h、24h分别为（0．931±0．206）、（0．611±0．738）,均少于空白对照组（P〈0．01）。黄芩苷＋CEZ组第8h、16h、24hBF内的活菌计数分别为（6．906±0．376）×lgCFU／ml、（6．801±0．109）×lgCFU／ml、（6．014±0.340）×lgC-FU／ml．均少于空白对照组（P〈0．01）。结论黄芩苷和CLA能破坏S.a已形成的BF,并可增强CEZ对BF内S.a的清除作用。