人参皂甙抗休克作用的实验研究

目的:探讨人参皂甙对内毒素休克致急性肾衰大鼠起保护作用的机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、脂多糖(LPS)组和人参皂甙组,观察各组大鼠腹腔注射脂多糖后平均动脉压、内生肌酐清除率及肾血浆流量的变化。结果:与脂多糖组比较,人参皂甙组平均动脉压不同时间点均有回升,内生肌酐清除率在注射脂多糖后8h和10h有所恢复,肾血浆流量在注射脂多糖后6h,8h和10h,差异有显著性。结论:人参皂甙对内毒素休克致肾衰大鼠具有保护作用。     

人参皂甙诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察人参皂甙（GS）是否具有诱导髓性白血病HL－60细胞株的凋亡作用。方法：取不同浓度的GS处理HL－60细胞，观察GS所致的细胞形态学的变化；流式细胞术分析细胞DNH含量的改变，并进行DNA片段分析（DNA Ladder);用Annexin V-FITC试验法分析细胞凋亡百分率。结果：人参皂甙能够抑制HL－60细胞生长，在一定剂量和时间范围内可引起细胞凋亡。结论：提示人参皂甙能特异性地诱导HL－60细胞凋亡，可为临床应用人参皂甙作为化疗药物的辅助剂治疗白血病提供实验依据。     

人参皂苷Rg3联合化疗抑制大肠癌生长的实验研究

有研究表明，新生血管形成与肿瘤的生长、转移有密切关系，以血管生成为靶点的抗癌新药是当前肿瘤研究的热点。人参皂苷Rg3是目前国内唯一批准用于临床的中药单体肿瘤新生血管抑制剂。本研究拟通过实验研究中药靶向药物人参皂苷Rg3联合5-氟脲嘧啶化疗对抑制大肠癌生长和转移能否起到协同作用及作用机制，为中药抗肿瘤及中医药和化疗协同治疗肿瘤提供客观依据，促进中医药抗肿瘤研究的广度和深度，现将其研究方法和结果介绍如下。     

人参皂苷Rg3诱导膀胱癌细胞系EJ的凋亡作用

目的：探讨Rg3抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法：用一定质量浓度的Rg3 处理膀胱癌细胞系EJ细胞,MTT法检测细胞增殖活力和抑制率50%的时候药物的浓度(IC₅₀)；Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态；流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率；免疫细胞化学观察caspase-3的表达变化；琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果：Rg3抑制EJ细胞生长,呈浓度依赖关系,Rg3处理细胞48 h的IC₅₀为125.5 mg·L^-1；经150 mg·L^-1Rg3处理细胞24 h和48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光及caspase-3的表达增加；并呈时效依赖关系；用75 mg·L^-1Rg3处理细胞24,48,150 mg·L^-1的Rg3处理细胞48 h后,Rg3诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,S期和G₂/M期的细胞比率增加,G₀/G₁的细胞比率下降；凋亡率从对照组的(1.05±0.17)%分别上升到(8.41±0.98)%,(18.57±2.20)% 和(33.98±1.64)%,琼脂糖凝胶电泳检测出典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论：Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。     

人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及可能机制。 方法 :采用PC12细胞为模型 ,以不同浓度的DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测PC12细胞的亚二倍体峰 ,按Griess法测定NO代谢产物NO2 ·的浓度 ,并观察人参皂甙Rg1(10 μmol/L)预防性给药对其影响。 结果 :0、0 15、0 30、0 45和 0 6 0mmol/LDA处理组的凋亡率分别为 1 6 1±0 18、40 6 0± 1 74、46 6 7± 1 45、5 4 49± 1 6 1和 6 4 39± 1 6 0 % ,与Rg1预防组 0 73± 0 11、1 16± 0 0 9、1 35± 0 0 7、1 5 3± 0 10和 1 6 1± 0 12 %比较均有显著性差异 (P <0 .0 1) ;DA处理组的NO2 ·浓度分别为 1 82± 0 0 5、3 5 7± 0 0 2、8 82± 0 0 4、18 0 0± 0 0 7和 2 7 34± 0 0 9μmol/L ,与Rg1预防组的 1 0 0± 0 0 7、1 36± 0 0 7、1 2 5± 0 0 4、3 39± 0 11和 3 82± 0 11μmol/L比较亦都有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :NO生成增多可能是DA诱导PC12细胞凋亡的重要信号分子 ,人参皂甙Rg1可抑制NO生成 ,防止DA诱导PC12细胞凋亡     

人参皂苷Rg3联合紫杉醇协同诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的:探讨人参皂苷Rg3联合紫杉醇是否具有协同诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法:将人胃癌BGC—823细胞裸鼠移植瘤动物模型,随机分为4组(每组10只):人参皂苷Rg3组(GS-Rg3:10mg.kg-1.d-1灌胃),紫杉醇组(紫杉醇10 mg/kg腹腔内注入,每周2次),联合组(人参皂苷Rg3+紫杉醇,用法同上),对照组(生理盐水组)。连续用药三周。用药结束后脱颈处死裸鼠,统计各组抑瘤率;流式细胞仪检测移植瘤细胞凋亡率,RT-PCR测定凋亡关键因子Caspase-3水平,电镜观察肿瘤细胞凋亡状态。结果:联合组(人参皂苷Rg3+紫杉醇)抑瘤率明显大于人参皂苷Rg3组和紫杉醇组(P<0.01);联合组肿瘤细胞凋亡率明显大于紫杉醇及人参皂苷Rg3组(P<0.01),联合组Caspase-3水平最高,与紫杉醇组、人参皂苷Rg3组比较有显著差异(P<0.05和P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3联合紫杉醇能协同诱导胃癌细胞凋亡,抑制肿瘤的生长。     

化疗联合人参皂甙Rg3治疗肺癌的实验研究

抗血管生成是目前肿瘤治疗中的研究热点,它主要通过抑制肿瘤的血管生长,阻断肿瘤的营养供应达到“饿死”肿瘤的目的。人参皂甙Rg3是从中药人参中提取的一种血管生长抑制剂,具有抑制肿瘤新生血管形成的作用。近年来的一些研究表明,化疗与血管生长抑制剂联合应用,可以提高肿瘤的治疗效果。健择(gemcitabine)是目前治疗肺癌的最有效药物之一,     

人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血大鼠脑组织GFAP表达的影响

目的:观察人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血梗死区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:52只SD大鼠采用Longa颈外动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为人参皂甙Rg1药物治疗组、单纯缺血组及假手术组,药物治疗组、单纯缺血组又分为24、48、72、168小时4个时间点,每个时间点各5只大鼠。观察各时间点大鼠神经功能缺损程度并采用免疫组织化学法观察脑梗死区GFAP的表达。结果:Rg1药物组神经功能评分较缺血组为好(P<0·05),GFAP阳性细胞于脑缺血24小时后即已出现,48、72、168小时大量表达,72小时为高峰,且药物组较手术组明显增多(P<0·05)。结论:人参皂甙Rg1能促进中枢神经系统较高水平的GFAP表达,可能对脑缺血损伤的恢复起重要作用。     

人参皂苷Rg3诱导小鼠肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤血管内皮生长因子生成的研究

目的观察人参皂苷Rg3对小鼠肝癌细胞凋亡的诱导作用,及肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)的变化,探讨Rg3抗肿瘤生长及抑制转移的机制。方法以Hca-F25//6A3-F(F)接种于615近交系小鼠,建立肝癌转移动物模型,分为5组:Rg3预防组(接种肿瘤前给Rg3)、Rg3治疗组(Rg3)、阳性对照组(PDD)、联合治疗组(Rg3 PDD)和阴性对照组(生理盐水),通过电镜及流式细胞仪分析肿瘤细胞的凋亡,并应用免疫组化方法检测VEGF的表达。结果人参皂苷Rg3预防组及治疗组电镜下可见较多细胞凋亡小体的形成;顺铂治疗组的形态改变以细胞破坏为主,凋亡的细胞较少;联合治疗组细胞的凋亡和坏死程度相当。流式细胞学检测分析结果为:Rg3预防组、治疗组及联合治疗组细胞凋亡的特征峰(5/5),而顺铂治疗组为(1/5),阴性对照组未见。应用Rg3各组均较未用药组VEGF表达减少。结论人参皂苷Rg3抗肿瘤生长及抑制转移的机制与诱导细胞凋亡、降低肿瘤血管生成有关。     

大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的研究

目的:观察大黄素对Hela细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测大黄素对Hela细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪检测Hela细胞凋亡,Western blot检测Hela细胞中凋亡相关蛋白Cytochome c、Apaf-1、Fas、FasL、FADD的表达.结果:空白组Hela细胞呈现典型的多边形和鹅卵形细胞,胞体丰满,边缘清晰,而大黄素处理过的Hela细胞边缘变钝,出现很多皱缩和细小的碎片,表明大黄素对Hela细胞的生长具有毒性作用.MTT法检测结果显示大黄素对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.流式细胞仪定量检测Hela细胞的凋亡结果显示,大黄素在0、20、40、80 μM时诱导Hela细胞凋亡率分别为0.8%、8.2%、22.1%、43.7%.Western blot法检测结果显示,在内源性线粒体途径中,大黄素能够浓度依赖性地增加Cytochrome c 和Apaf-1蛋白表达;在外源性死亡受体途径中大黄素能够浓度依赖性地增加Fas、FasL和FADD表达.结论:大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导Hela细胞凋亡.     

人参皂苷Rg3诱导淋巴管内皮细胞凋亡作用的研究

目的：探讨人参皂苷Rg3（20（R）-Ginsenoside Rg3）对淋巴管内皮细胞的抑制效应及凋亡诱导作用。方法：取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养;VIII因子对淋巴管内皮细胞进行鉴定。用含不同浓度人参皂苷Rg3处理淋巴管内皮细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变;Hoechst 33258荧光染色检测淋巴管内皮细胞凋亡。结果：经VIII因子对培养的淋巴管细胞进行鉴定,为典型淋巴管内皮细胞。随着药物浓度的升高,作用时间的延长,人参皂苷Rg3对淋巴管内皮细胞的生长抑制率逐渐增高;在人参皂苷Rg3作用下,淋巴管内皮细胞呈凋亡改变,出现凋亡小体。结论：人参皂苷Rg3能诱导淋巴管内皮细胞凋亡,抑制淋巴管内皮细胞增殖。     

人参皂苷Rg3与TRAIL联合应用对大肠癌细胞株HCE8693作用的实验研究

 目的将人参提取成分20(R)-人参皂苷Rg₃和肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因,联合应用于人大肠癌细胞株HCE8693,来寻求传统中药与现代基因治疗对肿瘤治疗的新途径。方法将人参皂苷Rg₃联合重组腺病毒载体介导的TRAIL基因(Ad／GT-TRAIL)作用于大肠癌细胞株HCE8693。通过MTT比色法与流式细胞仪研究分析其对HCE8693细胞的作用效果。结果 单独应用浓度为0.01％,0.017％,0.025％,0.05％的人参皂苷Rg₃及2000MOI的Ad／GT-TRAIL对HCE8693细胞的生长抑制率分别为8.6％,8.6％,18.7％,21.9％和24.3％;凋亡诱导率分别为5.4％,7.6％,20.3％,20.9％和23.2％。联合应用后,对HCE8693细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用,分别达17.8％,25.7％,37.3％,46.2％及18.9％,20.1％,46.2％,56.0％。人参皂苷Rg₃对HCE8693的生长抑制及促凋亡作用存在浓度依赖现象。结论一定浓度的人参皂苷Rg₃或TRAIL能有效抑制HCE8693的生长,人参皂苷Rg₃对HCE8693的生长抑制及促凋亡作用有浓度依赖性。联合应用后,其对HCE8693的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强,其协同作用的机制值得进一步探索。     

人参皂甙Rg1对抗Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的实验研究

目的:观察人参皂甙 Rg1对 Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响以及 Rg1对 Caspase-3活性的影响。方法:用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色、TUNEL 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳方法观察神经元凋亡形态学和生态改变;荧光分光光度计法检测凋亡效应分子 Caspase-3活力的变化;RT-PCR 法检测 Cas-pase-3 mRNA 的表达水平。结果:人参皂甙 Rg1预处理可显著降低 Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元的凋亡率,凋亡细胞特有的 DNA 梯形条带消失,Caspase-3活力下降,Caspase-3 mRNA 表达下调。结论:人参皂甙 Rg1可通过抑制 Caspase-3的激活,使 Aβ_(1-40)诱导的大鼠皮层神经元减少凋亡。     

平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的:研究中药复方平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法:采用CCK-8比色法和磷脂酰丝氨酸外翻分析法分别检测平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的作用。平肺浸膏(1 g.mL-1)由中日友好医院药学部提供,实验前经定性滤纸粗滤,0.22μm滤膜过滤后分装。人肺腺癌A549细胞常规复苏、培养及传代,处于对数生长期开始用于实验。实验分为空白对照、生药终浓度1,5,10 g.L-1共4组。细胞以7×104/mL接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后加不同浓度平肺浸膏,对照组只换液不加药。分别于加药后24,48,72 h用CCK-8法检测细胞增殖情况。将细胞以3×104/mL接种于6孔培养板,5 h细胞贴壁后加不同浓度的平肺浸膏。药物作用17 h后收获细胞,应用磷脂酰丝氨酸外翻分析法,于流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:平肺浸膏生药5,10 g.L-1在体外作用24 h以上表现出对A549细胞增殖的抑制作用,与常规对照组相比存在统计学差异(P<0.05),且这种抑制作用随时间和药物浓度增加而增强。生药10 g.L-1可诱导早期细胞凋亡,与常规对照组相比存在统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方平肺浸膏能够抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡。     

去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的：研究去氢骆驼蓬碱对白血病细胞的作用及其机制。方法：采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对各白血病细胞的生长抑制作用;以U937、HL-60为作用细胞,用琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的作用;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡过程中Bcl-2表达的变化情况。结果：去氢骆驼蓬碱对白血病细胞有明显的生长抑制作用,其对各白血病细胞抑制率无明显差异,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2在白血病细胞中有表达,并随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：去氢骆驼蓬碱可诱导白血病细胞凋亡,其作用与降低Bcl-2表达有关。     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的:研究苦瓜蛋白对诱导K562细胞凋亡相关基因P53和Bcl-2表达的影响。方法:采用CCK-8法检测苦瓜蛋白对K562细胞体外生长的影响;采用Giemsa染色和电镜观察细胞形态学变化;利用流式细胞仪,采用Anexinn-V法检测苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的作用;采用流式细胞仪检测苦瓜蛋白对Bcl-2和突变型P53蛋白表达的影响。结果:K562细胞经苦瓜蛋白处理后,细胞生长受到明显抑制,光镜和电镜下见到典型的细胞凋亡形态学变化;Anexinn-V法检测到细胞凋亡,凋亡率随药物作用时间延长而升高,5μg/ml苦瓜蛋白诱导凋亡效果最明显;Bcl-2和突变型P53表达下降。结论:苦瓜蛋白能够诱导K562细胞凋亡,发生机理与其调控Bcl—2和突变型P53的表达有关。     

氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果浓度为1.77,3.55,5.32mmoL/L的氧化苦参碱对OS732骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%,29.0%,47.0%;流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%,18.6%,27.7%;DNA电泳见DNA"梯形"图谱;显微镜显示细胞的凋亡形态。结论氧化苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。     

熊果酸诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的:探讨三萜类中药成分熊果酸(Ursolic Acid,UA)诱导乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用,从而为开发应用于治疗乳腺癌的药物提供科学依据.方法:应用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理MCF-7细胞,采用MTT法、活细胞原位光镜和荧光染色技术、流式细胞技术(FCM)、荧光免疫组织化学技术,研究药物诱导细胞凋亡引起的形态改变、细胞周期变化、p 53蛋白表达.结果:UA剂量依赖性的抑制MCF-7细胞增殖,半数生长抑制剂量(IC50)为22.6±3.0 μmol/L,凋亡促进因子p 53蛋白表达量增加,有典型的凋亡形态学特征,核质向边缘固缩,有凋亡小体.结论:UA通过抑制MCF-7细胞生长和上调p 53的表达诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤细胞的作用.     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗白血病的疗效机理。该当以ＨＬ－６０细胞株为体外模型，终浓度为０．２０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３作用２４、４８ｈ后，用ＰＩ／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ双标记，流式细胞术观察Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０细胞凋亡及其对细胞株端粒酶活性的影响。结果：Ａｓ２Ｏ３作用于ＨＬ－６０细胞后ＰＩ阴性／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ细胞性细胞增多，提示细胞发生凋亡，ＤＮＡ周期分析显示主要作用在     

人参总皂甙对大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察人参总皂甙对由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法:利用第4代心肌细胞,随机分成7组,以10~(-3)mol/L 外源性羟自由基(OH~-)诱导心肌细胞凋亡为模型,分别观察4种不同浓度的人参总皂甙(25、50、100、150 mg/L)对心肌细胞存活率、形态学、心肌细胞凋亡百分率、DNA 琼脂糖凝胶电泳等参数的影响。结果:与凋亡组比较,加用不同浓度的人参总皂甙各组,随着人参总皂甙浓度升高,心肌细胞存活率明显升高,心肌细胞凋亡程度降低,呈剂量依赖性。结论:人参总皂甙能抑制由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡。