小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组。方法取正常小鼠肝脏，裂解肝脏后利用金属磷酸盐亲和层析树脂提取磷酸化蛋白．将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后，进行一维色谱聚焦分离，再将一维收集的pH值在8．5至4．0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析。结果成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白，并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI／UV图谱。其中．一维色谱聚焦分离pH值在8．5至4．0之间共收集16个组分，每个组分的二维UV图转换成pI／UV胶图。结论磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法，为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下坚实的基础。     

小鼠肝脏细胞质膜蛋白质组的提取和二维液相色谱分离

摘要：目的提取小鼠肝脏细胞质膜蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离细胞质膜蛋白质组的方法。方法采用差
速离心结合蔗糖密度梯度离心分离和富集分小鼠肝脏细胞质膜蛋白,样品经脱盐及用起始缓冲液置换后,进行一维色
谱聚焦分离, 然后收集pH!8.5~4.0 之间的组分进行二维反相高效液相色谱分离, 最后将获得的二维UV 图通过
ProteoVue软件转换成UV/pI 图谱。结果成功提取了肝脏细胞质膜蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了小鼠肝脏细
胞质膜蛋白的二维UV/pI 图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pHL8.5~4.0 区间的16 个组分,并将每个组分分进行二维色
谱分离后转换为UV/pI 图谱。结论为进一步全面研究小鼠肝脏细胞质膜蛋白功能和疾病差异蛋白质组研究打下了基础。
     

肿瘤细胞蛋白质组的二维液相色谱分离

目的:建立一种利用二维液相色谱法分离肿瘤细胞全细胞裂解液的方法.方法:将肿瘤细胞裂解样品用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后先对二维色谱条件进行优化和重现性分析,再将一维收集的pH值8.5～4.0之间的组分分别进行二维反相HPLC分离,利用ProteoVue软件将UV图转换成胶图.结果:一维色谱聚焦分离pH值8.5～4.0之间的组分共收集到16个,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图.结论:二维液相色谱分离法是一种有效的分离肿瘤细胞裂解液的方法.     

小胶质细胞蛋白质组三维分离方法的建立

目的:建立基于二维液相色谱法的三维分离小胶质细胞蛋白质组的方法.方法:将小胶质细胞裂解后制备全细胞蛋白,在传统的一维HPCF、二维HPRP分离后,增加了三维SDS-PAGE电泳,对小胶质细胞实现了三维分离.结果:经过优化后的三维分离,小胶质细胞全蛋白按照pH值由高到低的顺序分为34个组分,其中pH 8.5～4.0的部分包含16个组分,每一个组分又包含若干种蛋白质.结论:同传统的二维液相色谱分离方法相比,改进后的三维分离方法对小胶质细胞全蛋白具有更彻底、更好的分离效果,为后续的质谱鉴定提供了分离度更好的样品.     

液质联用技术对复方蒲公英灌肠液的色谱指纹图谱的分析

目的 确定复方蒲公英灌肠液中的活性成分。方法 利用三维高效液相色谱对复方蒲公英灌肠液的乙酸乙酯部分分离分析,采用液相色谱‐质谱联用技术对其色谱图谱进行确定。结果 通过质谱的质荷比(M/Z)及色谱保留时间的相互比较,确定了咖啡酸、阿魏酸和原儿茶醛3种活性成分。结论 液质联用技术可用于复方蒲公英灌肠液的定性分析。     

多发性硬化患者用药前后脑脊液蛋白质组学液相色谱技术体系的建立

目的 建立多发性硬化(MS)患者用药前后脑脊液蛋白质组一维、二维液相色谱分离的技术体系.方法 以MS患者用药前后脑脊液为研究对象,提取脑脊液蛋白质组,分别采用超高压液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)技术和二维色谱聚焦-反向液相色谱(PF-2D)技术进行分离鉴定.结果 分别获得MS患者用药前后脑脊液蛋白质组一维和二维液相色谱图谱,分离方法有良好的重现性.筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质.结论 用液相色谱技术筛选差异蛋白有助于寻找具有临床治疗意义的MS疾病标识物,为MS疾病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据.     

小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离

目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。     

人肾组织磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳的建立与优化

目的:利用二维凝胶电泳法分离人肾组织磷酸化蛋白质组.方法:利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集人肾组织磷酸化蛋白.样品浓缩除盐后,进行一维等电聚焦分离和二维SDS电泳分离提取人肾组织磷酸化蛋白.结果:成功提取了人肾组织磷酸化蛋白,并得到了磷酸化蛋白的双向凝胶电泳图谱.结论:磷酸化蛋白富集技术与二维凝胶电泳技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步研究人肾组织磷酸化蛋白奠定基础.     

高效液相色谱法制备连翘酯苷对照品

目的 研究从中药材连翘中分离制备连翘酯苷对照品的高效液相色谱方法。方法 连翘药材经水提醇沉淀后,经聚酰胺柱层析得粗提物,粗提物用RP-HPLC法分离制备连翘酯苷单体。结果 分离制备的连翘酯苷纯度可达98%。结论 该方法上样量大,操作简单,提取物纯度高,可用于连翘酯苷对照品的大量制备。     

尖吻蝮蛇毒素组双向电泳和二维液相色谱研究

目的：初步研究尖吻蝮蛇蛇毒的蛋白质组分及其活性。方法：利用双向电泳和二维色谱（IEX＋HPLC）分析尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质组，并制备分离样品研究蛇毒中酶和毒素活性。结果：双向电泳分离检测得到128种蛋白质，其中24种蛋白质丰度较高，73种为酸性蛋白质，加种为碱性蛋白质。二维色谱展现58种蛋白质，其中26种蛋白质丰度较高。初步活性研究表明，尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质多数属于丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶A2家族，部分蛋白质可能属于去整合素家族。结论：双向电泳和二维色谱相互结合．有效分析了尖吻蝮蛇毒的蛋白盾组成和生物活性．     

小鼠H22肝癌细胞中高表达膜蛋白的初步分析

目的：为了对小鼠H22肝癌细胞中高表达膜蛋白进行初步的分析并探索其与肿瘤细胞恶性行为的相关关系。方法：分别培养并裂解小鼠正常旰细胞及H22肝癌细胞株,采用疏水性裂解液分步提取膜蛋白,双向电泳分离。ImageMaster 2D Platinum软件对电泳图谱进行对比分析,选择在H22细胞中典型的高表达膜蛋白并采用MALDI-TOF—MS进行鉴定。结果：从H22细胞中提取的膜蛋白约60％表现为高表达。8个典型的在H22细胞中高表达的膜蛋白被鉴定为紧联蛋白ZO-2、HMG—CoA还原酶、囊泡蛋白分选相关蛋白52、分选和装配结构组分50、巨噬细胞清道夫受体Ⅰ／Ⅱ型、硫酸酯酶修饰因子2、PKC和CKU底物蛋白3和C90rf135蛋白。结论：H22肝癌细胞中大多数膜蛋白表现为高表达。从已鉴定的膜蛋白推测,H22细胞功能改蛮可能涉及细胞迁移、膜融合、信号转导、基因表达调摔及能量代谢等．这种改变可能与肿瘤细胞的恶性行为相关。     

大黄高效液相色谱法指纹图谱分离条件的优化

目的　优化大黄高效液相色谱法指纹图谱 (HPL C- FPs)的分离条件。方法　以 RP- HPL C法 ,使用Shim- pack CL C- ODS柱 (6 .0 m m i.d.× 1 5 0 m m,5μm ) ,流动相为甲醇 - 1 m l/ L磷酸溶液 ,检测波长为 2 5 4 nm ,柱温为 4 0℃ ,考察大黄总提取物在不同梯度洗脱条件下的分离情况。结果　优选出的大黄 HPL C- FPs分离条件 ,可使大黄总提取物中各组分达到较佳分离 ,稳定性、精密度、重现性好。结论　该色谱分离条件可用于建立大黄药材HPL C- FPs的分离条件     

3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较

目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法.方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1 mg蛋白,以17 cm pI 3～10 固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱.结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均＜0.05).结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础.