塞来昔布增强 KB/VCR 细胞对长春新碱敏感性与诱导凋亡的相关性研究

目的：探讨环氧化酶－2（COX －2）抑制剂塞来昔布增强口腔癌耐长春新碱细胞株 KB ／VCR 细胞对长春新碱敏感性与诱导凋亡的相关性。方法将 KB ／VCR 细胞分别采用长春新碱、塞来昔布及长春新碱联合塞来昔布处理后,用 MTT 法检测 KB ／VCR 细胞的生长抑制率,Annexin V －FITC ／PI 双标法检测细胞早期凋亡率,Western blot 检测抗凋亡蛋白 Bcl －xl 和Bcl －2的表达。结果塞来昔布以时间和剂量依赖方式抑制 KB ／VCR 细胞的生长,当塞来昔布浓度≤10μmol ／L 时,其对KB ／VCR 细胞的生长无明显影响。但小剂量的塞来昔布（10μmol ／L）与长春新碱（1．5μmol ／L）作用 KB ／VCR 细胞24、48及72 h 后,其生长抑制率分别为（33．16±4．66）％、（39．20±5．77）％、（44．01±4．27）％,显著高于长春新碱组（1．5μmol ／L）（P均＜0．01）。流式细胞术检测结果示联合用药组处理24 h 后早期凋亡率显著高于长春新碱单独用药组（P 均＜0．01）。West-ern Blot 结果显示联合用药组较其他给药组明显下调 Bcl －2、Bcl －xl 的表达（P 均＜0．01）。结论 COX －2抑制剂塞来昔布促进长春新碱对 KB ／VCR 细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,可能与下调 Bcl －2、Bcl －xl 蛋白表达有关。     

siRNA沉默COX-2基因对KB/VCR细胞的增殖及侵袭的影响

目的:观察siRNA沉默口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞COX-2基因后,对KB/VCR细胞增殖及侵袭能力的影响。方法:将KB/VCR细胞分为COX-2 siRNA组、阴性对照组及空白对照组,采用RT-PCR检测各组细胞COX-2 mRNA的表达,蛋白印迹法检测COX-2蛋白的表达,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,Transwell小室测定各组细胞侵袭能力的变化。结果:COX-2 siRNA组细胞的COX-2蛋白和mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。COX-2 siRNA组细胞的生长抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。COX-2 siRNA组细胞的侵袭能力也明显降低。结论:COX-2 siRNA能特异性沉默KB/VCR细胞的COX-2基因,使KB/VCR细胞生长得到抑制,并减弱其侵袭能力。     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

塞来昔布对Tca8113细胞环氧化酶-2表达及诱导凋亡的作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制、COX-2表达调节及诱导凋亡的作用。方法在Tca8113细胞中分别加入含有不同浓度塞来昔布的培养液,培养24、48、72 h后,采用MTT方法测定细胞生长抑制率,采用免疫组化方法观察COX-2蛋白在Tca8113细胞中的表达,应用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征,应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞的早期凋亡率,相对定量荧光定量PCR检测Tca8113细胞中COX-2 mRNA的表达。结果COX-2蛋白在Tca8113细胞中呈强阳性表达,塞来昔布在抑制细胞生长的同时,抑制Tca8113细胞COX-2蛋白的表达;Tca8113细胞经塞来昔布处理后凋亡细胞多见,与对照组相比,塞来昔布处理组早期凋亡细胞增多有统计学意义;塞来昔布调节COX-2 mRNA表达的作用与对照组相比无统计学意义。结论塞来昔布主要以剂量依赖的方式抑制Tca8113细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2蛋白表达有关,而对COX-2基因作用较弱,其作用机制有待进一步研究。     

苦参碱对KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用

目的　观察中药苦参的提取物苦参碱对口腔上皮癌KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用。 方法　MTT法观察苦参碱对体外培养的KB及KBv200细胞存活率的影响。吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色检 测二者细胞凋亡率。流式细胞术分析苦参碱对细胞周期的影响;扫描电镜观察苦参碱作用后的细胞形态学变化。 结果　苦参碱质量浓度在0·50、1·00、1·50、2·00 mg/ml时,均有抑制KB及KBv200增殖的作用,双荧光染色及流式细 胞术提示苦参碱可诱导KB及KBv200细胞凋亡,使细胞生长停滞在S期;扫描电镜观察发现不同质量浓度的苦参 碱作用24 h后,细胞出现体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂等凋亡现象。结论　苦参碱对KB及KBv200细胞有 增殖抑制作用,可诱导KB及KBv200细胞凋亡,其机制可能与其导致细胞S期阻滞有关。     

塞来昔布抑制Tca8113细胞释放PGE_2及抑制细胞增殖的作用

目的研究选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞生长抑制、诱导细胞凋亡与释放前列腺素E2（PGE2）的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测PGE2含量,AO/EB荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化。结果塞来昔布以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞生长及释放PGE2,其抑制PGE2释放与抑制细胞生长及诱导细胞凋亡均呈负相关,AO/EB荧光双染观察发现经塞来昔布处理24h后,细胞出现典型的凋亡变化,凋亡细胞多见。结论塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞生长及诱导细胞凋亡与其抑制PGE2释放密切相关。     

环氧化酶-2及其选择性抑制剂塞来昔布与舌鳞状细胞癌侵袭的研究进展

环氧化酶(COX)是致炎物质地诺前列酮合成过程中的重要限速酶.COX-2是环氧化酶的诱导型,参与炎症反应和肿瘤的发生.包括舌鳞状细胞痛在内的大多数恶性肿瘤均有COX-2的阳性表达.COX-2的活性增强还能提高细胞与细胞外基质蛋白的黏附能力,增强基质金属蛋白酶的表达水平,增加肿瘤细胞的侵袭力.进一步研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布与舌鳞状细胞癌侵袭之间的关系,对舌鳞状细胞癌的治疗和预后有非常重要的意义.     

塞来昔布对Tca8113细胞侵袭性影响的体外研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenease-2,COX-2)抑制剂——塞来昔布(celecoxib)对Tca8113细胞侵袭性的抑制作用。方法:用划痕实验检测Tca8113细胞的迁移能力;不同浓度的塞来昔布处理人舌鳞癌Tca8113细胞后,用MTT法检测细胞-基质黏附力的变化;用Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:10、20μmol/L的塞来昔布作用24 h后,细胞的侵袭能力分别下降了54%和73%(P<0.001),细胞-基质黏附力也明显降低(P<0.001)。结论:Tca8113细胞是高侵袭性细胞,塞来昔布对Tca8113细胞侵袭的抑制作用呈剂量依赖性。     

EGFR抑制剂西妥昔对舌鳞癌多药耐药细胞Tca8113/CBP细胞内阿霉素浓度的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂西妥昔在舌鳞癌多药耐药中的作用.方法 Westernblot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113/CBP EGFR的表达,流式细胞术检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113/CBP细胞内阿霉素浓度的影响.结果 细胞系Tca8113和Tca8113/CBP均有EGFR的表达(P＞0.05).EGFR受到抑制后,Tca8113/CBP细胞内阿霉素浓度升高(P＜0.05).结论 EGFR抑制剂西妥昔可使舌癌多药耐药细胞细胞内药物浓度升高.     

体内诱导法建立的Tca8113细胞耐卡铂细胞株的耐药性表达研究

目的探讨通过体内诱导法得到的耐药细胞株的耐药性表达情况。方法以人舌癌Tca8113细胞系为研究对象,实验组采用荷瘤耐药动物的肿瘤细胞培养获得,对照组为体外连续培养诱导其产生耐药性。用四唑蓝法检测细胞耐药指数,标记生物素链亲和素法免疫细胞化学检测耐药相关蛋白P糖蛋白、谷胱甘肽S转移酶π、多药耐药蛋白和拓扑异构酶Ⅱ的表达,逆转录PCR检测多药耐药基因、多药耐药蛋白、拓扑异构酶Ⅱ和谷胱甘肽S转移酶π的表达。结果免疫细胞化学和逆转录PCR显示2组细胞多药耐药蛋白、谷胱甘肽S转移酶π、拓扑异构酶Ⅱ等表达均升高,但体内诱导较体外诱导可以获得更高、更稳定的耐药性。诱导后的Tca8113细胞对氨甲喋呤、卡铂、平阳霉素、长春新碱耐药性明显升高,而对5-氟尿嘧啶耐药性增加不明显。结论体内诱导得到的细胞株耐药性明显高于体外诱导株,肿瘤细胞的耐药现象受多种基因的调节。体内诱导Tca8113卡铂耐药细胞株Tca8113/CBP-vo可以作为肿瘤耐药研究的平台。     

Celecoxib enhances the inhibitory effect of cisplatin on Tca8113 cells in human tongue squamous cell carcinoma in vivo and in vitro

J Oral Pathol Med (2010) 39 : 579–584 Background: Overexpression of cyclooxygenase‐2 (COX‐2) is associated with carcinogenesis, invasiveness, and metastasis of malignant tumors. Inhibition of COX‐2 is one hot topic of research in prevention and treatment of malignant tumors. Because of the selective and specific inhibition on the activity of COX‐2, the roles of celecoxib in prevention and treatment of tumors have attracted broad attention in recent years. In this study, we investigated the inhibitory effect of celecoxib combined with cisplatin on the proliferation of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 in vivo and in vitro. Methods: Human tongue squamous cell carcinoma tumor cells Tca8113 and a mouse model with Tca8113 cells were used to study the growth inhibition of cisplatin enhanced by celecoxib. Drug treatment of Tca8113 in vitro and mice bearing xenografts in vivo were used. The level of COX‐2 expression was detected by Western blotting. Sensitivity of cells to drug treatment was analyzed by MTT assay. Results: Treatment of Tca8113 cells with cisplatin (CDDP) had less effect on the expression of COX‐2, whereas the COX‐2 expression was significantly down‐regulated after treatment with celecoxib alone or in combination with CDDP for 24 h. In addition, the combination of celecoxib with CDDP was also able to inhibit the Tca8113 line heterotransplanted in Balb/c nude mice. Conclusions: Those findings indicate that a low dose of celecoxib could augment CDDP‐induced growth inhibition of Tca8113 cells and its xenograft in Balb/c nude mice.     

Th1/Th2细胞在口腔扁平苔藓发病中的研究

###############################################################################################################################################################################################################################################################     

舌鳞癌SD大鼠血清中Th1/Th2漂移与肿瘤进展的关系

目的:检测舌鳞癌SD大鼠血清中Th1与Th2型细胞因子的含量,并探讨其与肿瘤病变进展的关系。方法:选取80只SD大鼠,采用0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物自然饮水喂养36周,诱发建立舌鳞癌动物模型61只。另取20只SD大鼠,普通自来水喂养作为对照,根据舌根病灶的大小分为4组。制备外周静脉血血清,酶联免疫吸附法测定Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的含量,采用方差分析进行统计学处理。结果:随着大鼠舌根部病变的进展,外周血中IFN-γ的含量逐渐降低,舌根肿块直径<5mm组和舌根肿块直径≥5mm组与舌根黏膜正常组比较,具有统计学差异(P<0.05);3组病变鼠血清中均未能检测出IL-2,与舌根黏膜正常组[平均为(24.13±15.12)pg/ml]比较,存在显著性差异(P<0.05);血清中IL-4与IL-10的含量随着大鼠舌根部病变的发展而增加,但各组之间IL-4无统计学差异(P>0.05);而IL-10在组间的两两比较均具有统计学差异(P<0.05)。结论:舌鳞癌SD大鼠血清中Th1型细胞因子向Th2型漂移,其程度与肿瘤进展密切相关。     

Comparative analysis of c‐erbB‐2 (HER‐2/neu) in squamous cell carcinoma of the tongue: does over‐expression exist? And what is its correlation with traditional diagnostic parameters?

Objectives:  Over-expression of the proto-oncogene c-erbB-2 (HER-2/ neu ) has been shown to be a prognostic marker in many kinds of cancer, whereas conflicting data exist about the prevalence of HER-2/ neu over-expression in squamous cell carcinoma (SCC) of the tongue. The status of Her-2/ neu was evaluated in a series of SCC of the tongue to verify the frequency of over-expression of HER-2/neu and evaluate the correlation with traditional diagnostic parameters of this neoplasm.
Method:  Fourty patients with SCC of the tongue were investigated for over-expression of the protein through immunohistochemistry using CB11 antibody, the Hercep Test^® kit and FISH.
Results:  Data obtained using the Hercep Test^® differ from published reports concerning the over-expression of Her-2/ neu and there was no correlation between levels of expression of Her-2/ neu and other clinico-pathological and/or prognostic parameters. Of the 40 specimens, using CB11 we obtained results in line with published reports; however, with the Hercep Test^® we found only 1 positive case (2.5%) (score 3+).
Conclusion:  These data, confirmed by FISH, suggest that Her-2/ neu is not a suitable marker that could play a primary role in the clinical-therapeutic management of SCC of the tongue.