老年糖尿病肾病患者血浆差异蛋白的表达

目的探讨老年糖尿病肾病(DN)与健康人群血浆差异蛋白的表达。方法选取老年DN患者10例(试验组),同期查体健康人群10例(对照组),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D-DIGE)检测老年DN患者及健康志愿者血浆蛋白质组的表达情况,以差异表达1.5倍为截断值挑选蛋白质斑点并行质谱分析。结果应用老年DN患者及健康志愿者血浆成功构建差异表达双向凝胶电泳图谱,并分析筛选出33个差异表达斑点,通过质谱分析数据库比对鉴定出6种差异表达蛋白。结论 2D-DIGE技术可有效筛选老年DN相关特异蛋白,为进一步筛选DN血清标志物提供依据。     

慢性重型乙型肝炎患者血浆蛋白质组差异表达的初步研究

目的探讨慢性重型乙型肝炎患者血浆蛋白质组变化,为研究慢性重型乙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索。方法收集慢性重型乙型肝炎患者和健康对照者血浆各20份,去除血浆中高丰度蛋白。应用双向凝胶电泳（2-DE）技术构建两组研究对象血浆蛋白2-DE图谱,经Image Master差异分析软件进行分析,寻找差异蛋白质点。用电喷雾离子串联质谱（ESI-MS-MS）对重要的差异蛋白质点进行鉴定。结果经过样品预处理后,血浆中白蛋白和免疫球蛋白IgG含量大大减少,低丰度蛋白得到较好的富集。正常健康组蛋白质点287个,慢性重型乙型肝炎组蛋白质点297个,筛选出2倍以上的差异蛋白质点21个。鉴定出8个慢性重型乙型肝炎相关蛋白质,其中上调的蛋白质有α1-抗胰蛋白酶,载脂蛋白E;下调的蛋白质有补体因子B、CD5抗原样蛋白、纤维蛋白原B链、α-1B糖蛋白、载脂蛋白AI、触珠蛋白。结论成功鉴定了8个慢性重型乙型肝炎相关蛋白质。这些差异蛋白质功能涉及能量代谢、脂蛋白代谢、蛋白质分泌、补体旁路活化途径等过程。对这些重要蛋白质的结构和功能的进一步研究,对于进一步揭示慢性重型乙型肝炎发病分子机制及寻找治疗靶标可能具有重要的意义。     

幽门螺杆菌改变人肝细胞系HepG2蛋白质表达谱

目的研究H.pylori作用后肝细胞系HepG2蛋白质表达谱的改变,通过对差异蛋白质点的鉴定与分析,以探讨H.pylori对肝细胞的病理作用。方法采用体外肝细胞和H.pylori共培养,应用双向凝胶电泳分离H.pylori处理前后细胞总蛋白,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定。结果鉴定出7种表达上调的蛋白质点,包括整合素-β1、蛋白激酶C-α、LIM同源盒蛋白Lhx1、真核翻译起始因子2-β亚单位、PINCH蛋白、MAPK激酶3、Ras相关蛋白Rab-37等。这些蛋白质参与了基因表达调控、细胞免疫、细胞生长、信号传导等众多事件。结论H.pylori可能通过介导这些蛋白质的上调而发挥对HepG2细胞的病理作用。这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究H.pylori与人类肝胆疾病的关系。     

心功能衰竭大鼠模型心肌线粒体蛋白的差异表达分析

利用差异蛋白质组的方法识别心功能衰竭大鼠心肌代谢的异常 ,以期发现新的治疗靶点。对大鼠行冠状动脉左前降支结扎 ,术后 4周 ,左心室射血分数达 4 6 .4 %± 10 .9% ,成功建立心功能衰竭大鼠模型。实验动物分心功能衰竭组 (n =8)和对照组 (n =8) ,分别取左心室进行线粒体抽提。利用双向凝胶电泳技术显示差异蛋白的表达谱。再经胶内酶解 ,行质谱鉴定和蛋白数据库分析。结果发现 ,双向电泳显示 3个蛋白位点表达有显著差异 ,其中一条蛋白被证实为乙醛脱氢酶 2 ,它在心功能衰竭心肌中的表达显著下降。在心肌梗死后 3、7、14及 2 8天心肌乙醛脱氢酶 2mRNA的表达呈逐渐下降趋势。结果提示 ,在心功能衰竭大鼠的心肌线粒体中乙醛脱氢酶 2表达显著下调 ,而乙醛脱氢酶与硝酸甘油的转化有关。这为临床心功能衰竭患者使用硝酸甘油提供了很有价值的依据。     

冠心病患者FgBβmRNA表达及蛋白质水平变化的临床意义

在凝血和纤溶因素中，纤维蛋白原(Fg)升高是慢性冠心病(CHD)的高危因素。1998年10月至2001年6月，我们对CHD患者进行了FgBβmRNA的表达和血浆Fg水平检测，观察其改变的临床意义，以期探讨Fg与CHD高危因素的关系。     

四氯化碳肝纤维化大鼠肝组织差异蛋白质组的动态变化

目的 探索肝纤维化形成过程中肝组织蛋白质组的变化,部分解析肝纤维化发生、发展的病理生理机制. 方法 采用四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型,应用双向凝胶电泳技术分离大鼠肝组织总蛋白质,经考马斯亮蓝染色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异蛋白质点.采用Western blot、免疫组织化学方法对细胞角蛋白(CK)8、CK18进行蛋白质表达水平的验证.计量资料采用单因素方差分析中的LSD法或非参数检验中的H检验进行统计学分析. 结果 大鼠造模后,随时间的推移,肝纤维化评分逐渐增加(3周组＜6周组＜9周组),建立了正常大鼠和大鼠CCl4肝纤维化形成过程3、6、9周肝组织双向凝胶电泳图谱,质谱鉴定了44种差异蛋白质;采用Western blot、免疫组织化学方法对CK8、CK18的验证结果与双向凝胶电泳结果基本一致.正常组及3、6、9周模型组CK8/CK18蛋白相对表达量分别为:0.113±0.005/0.170±0.030、0.473±0.046/0.530±0.070、0.682±0.087/0.780±0.080、0.837±0.096/1.390±0.130,各组间差异均有统计学意义(F值分别为196.085/74.088、13.870/16.115、75.800/75.900,P值均＜0.01). 结论 CCl4大鼠肝纤维化形成与发展过程中差异表达蛋白质的功能主要涉及细胞生长、发育与分化,细胞增殖与凋亡,血管新生或重构,氧化应激,物质代谢及转运,信号转导等.     

血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的差异表达

目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,Nan-oDrop 1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.306)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。     

人胰腺癌相关蛋白质的差异表达研究

胰腺癌5年存活率不超过5％，蛋白质组学（proteomics）的出现为寻找一种特异性高、敏感性强的胰腺癌肿瘤标志物带来了希望。蛋白质组学技术改变传统的分割式研究单个蛋白质的模式，建立全面、立体、快速的分析方法．以透视全体基因在特定细胞或组织的表达。本研究针对人正常胰腺、胰腺癌、胰腺癌旁组织，利用双向凝胶电泳（2-DE）技术以及质谱技术和生物信息学，分析胰腺组织不同生理状态下蛋白质的差异表达，旨在寻找胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物．为早期诊断奠定基础。     

抗体基因芯片应用于检测鼻咽癌组织切片蛋白质表达谱的研究

目的研究应用抗体基因芯片检测鼻咽癌组织特异性蛋白质表达谱的新技术方案。方法利用噬菌体抗体库筛选出抗鼻咽癌的特异性抗体库,以扩增抗体基因V-D-J片段作为标识分子用于制备抗体基因芯片;通过特异性抗体库与鼻咽癌肿瘤组织结合后,使标记引物扩增的V-D-J序列与抗体基因芯片进行杂交后显示癌组织的蛋白质表达谱,从而选择性通过免疫组织化学显示其中关键性蛋白质原位表达状况。结果肿瘤组织结合的抗体滴度可达到106～108数量级,标记的DNA分子效价约为10-6～10-8,以该文一次检测20个抗体为例,基因芯片检出有10～14个阳性蛋白质表达谱;免疫组织化学可显示阳性抗体在细胞中的结合部位。结论以抗体基因芯片为核心的技术方案,能在组织切片上同时检测含多个蛋白质表达谱,可以广泛应用于基础研究和临床诊疗过程。     

冠心病患者血浆内皮素含量变化的观察

<正> 内皮素(Endothelin,ET)是由血管内皮细胞合成、释放的,也是迄今所知体内最强、持续最久的收缩血管活性多肽.国内外大量的研究资料表明,ET对血管平滑肌细胞有促进其增生的效应,推测ET的含量,对冠心病的发病过程也具有一定的临床意义.为此,本文观察了31例冠心病患者血浆ET含量的变化,现报告如下.     

冠心病患者血浆periostin蛋白与血管内皮生长因子的相关性

目的测定冠心病患者血浆periostin蛋白和血管内皮生长因子水平,分析periostin蛋白与血管内皮生长因子之间的关系并探讨其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法测定180例冠心病患者(其中急性心肌梗死患者58例,陈旧性心肌梗死患者30例,不稳定型心绞痛患者40例,稳定型心绞痛患者52例)和52例健康体检者血浆periostin和血管内皮生长因子水平,比较各组间的差异有无统计学意义。结果急性心肌梗死组、陈旧性心肌梗死组、不稳定型心绞痛组和稳定型心绞痛组血浆periostin蛋白及血管内皮生长因子水平显著高于对照组。在不同类型冠心病患者中,血浆periostin蛋白水平除在陈旧性心肌梗死组与稳定型心绞痛组之间以及不稳定型心绞痛组与陈旧性心肌梗死组之间比较差异无无显著性外,其余各组之间两两比较均有统计学差异(P<0.05或P<0.01),且在急性心肌梗死组>不稳定型心绞痛组>陈旧性心肌梗死组>稳定型心绞痛组;在不同类型冠心病患者中,血浆血管内皮生长因子水平在各组之间两两比较均具有统计学差异(P<0.05或P<0.01),且在急性心肌梗死组>不稳定型心绞痛组>陈旧性心肌梗死组>稳定型心绞痛组。冠心病患者血浆peri...     

铜绿假单胞菌相关性肺损伤的蛋白质差异表达研究

目的 利用蛋白质组学方法筛选铜绿假单胞菌急性肺损伤特异相关蛋白质,为鉴别诊断感染与非感染因素引起的急性肺损伤提供理论依据.方法 建立感染(铜绿假单胞菌急性肺损伤)与非感染(包括机械通气急性肺损伤、油酸急性肺损伤)大鼠模型,应用双向凝胶电泳技术分离总蛋白,Image Master双向凝胶电泳软件分析差异表达蛋白质点后,应...     

冠心病患者血浆cAMP、cGMP水平变化及临床意义

不稳定性心绞痛(UAP)和急性心肌梗死(AMI)是冠心病的严重类型,而冠状动脉栓形成是UAP、AMI的重要诱因.我们对不同类型冠心病患者血浆cAMP、cGMP浓度进行了检测,以探讨其在冠心病发病中的作用. 资料与方法:观察对象为1999年10月至2001年1月我院收治的冠心病患者,均符合国际心脏病学会及WHO1979年制定的诊断标准.其中稳定性心绞痛(SAP)组28例,男16例、女12例,年龄31～77岁、平均54± 12.7岁.UAP组48例,男27例、女21例,年龄30～82岁、平均56±15 .4岁.AMI组23例,男15例、女8例,年龄36～78岁、平均58±13.3岁 .对照组为26例健康人,无心绞痛病史,心电图、Holter超声心动图正常,男1 5例、女11例,年龄34～72岁、平均年龄52±12.4岁.     

燃煤污染型砷中毒肝损伤患者血清差异蛋白质的筛选

目的 对比分析燃煤污染型砷中毒肝损伤患者和健康人血清中差异表达的蛋白,筛选与燃煤污染型砷中毒致肝损伤发生密切相关的血清蛋白质.方法 6例血清标本来自于贵州省兴仁县交乐病区燃煤型砷中毒肝损伤患者及病区健康人(对照组),采用双向凝胶电泳(2-DE)分离血清中总蛋白,硝酸银染色后经图像分析识别差异表达的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质点,寻找与燃煤污染型砷中毒致肝损伤有关的蛋白质.结果成功地建立了血清2-DE图谱.差异蛋白分析显示,砷中毒肝损伤组平均蛋白点数为(824±31)个,对照组为(782±42)个,两组血清2-DE图谱的匹配率为94.9%(782/824).筛选出两组间的差异蛋白点49个,对其中表达量差异3倍以上的30个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,鉴定出相关蛋白10个.与对照组比较,其中α2-巨球蛋白、B细胞受体相关蛋白31、细胞角蛋白1、载脂蛋白A-I在砷中毒肝损伤组表达上调,触珠蛋白、α2-HS-糖蛋白、细胞外信号调节激酶4、锌指蛋白323、ZAP-70、SP40表达下调.结论成功地建立了分辨率高、重复性较好的燃煤污染型砷中毒肝损伤患者血清2-DE图谱,并筛选出一些与健康人血清中差异表达的蛋白质,这些蛋白质能否作为燃煤污染型砷中毒肝损伤诊断的血清标志物还有待于进一步验证.