甲状腺激素反应蛋白1基因-一个新的鼠脑甲状腺激素反应基因的克隆、表达分布及其功能预测

目的 克隆新的大鼠脑甲状腺激素反应基因，研究其表达特征并初步预测其功能。方法 建立先天性甲状腺功能减退(甲减)新生大鼠模型，用荧光标记的差异显示PCR(DD-PCR)技术、亚克隆、测序及相似性检索获得未知的大鼠脑甲状腺激素反应基因的cDNA片段。采用电子克隆、RT-PCR、测序并克隆其cDNA全长。经Northem印迹法证实其表达受到甲状腺激素的调节，并用半定量RT-PCR方法和生物信息学技术观察其分布转录水平和预测其功能。结果克隆了甲状腺激素反应蛋白1(thyroid hormoneresponse protein-1，TRP-1)基因全长cDNA，共973bp(基因登录号为AF348365)，在甲减新生大鼠的脑中，该基因的转录增强。该基因表达广泛，以脑组织中的表达水平最高；其在大鼠不同脑区的表达含量亦不同，以嗅脑最高。该基因的编码产物具有一些重要的结构域和功能基序。结论 TRP-1基因是新发现的甲状腺激素反应基因，它在正常的脑发育中可能具有重要的作用，其异常表达可能是甲减性脑发育障碍发生的分子机制之一。     

老年急性心肌梗死患者甲状腺激素与高敏C反应蛋白检测的临床意义

目的探讨老年急性心肌梗死(AMI)患者甲状腺激素及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平变化及其检测的临床意义。方法 89例AMI患者作为AMI组,另选取健康体检者80例作为对照组,比较两组甲状腺激素及hs-CRP水平;依据游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)三分位分为3组,比较3组性别、年龄、血糖、血脂、hs-CRP、心肌损伤标志物、游离甲状腺素(FT4)及促甲状腺素(TSH)水平,并分析FT3、FT4、TSH及hs-CRP与其余指标的相关性。结果 AMI组FT3水平显著低于对照组,hs-CRP水平显著高于对照组(P<0.05);与高值组相比,中值组和低值组hs-CRP、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白(c Tn)I水平均显著降低,且低值组显著低于中值组(P<0.05);中值组和低值组TSH水平显著高于高值组,且低值组显著高于中值组(P<0.05);FT3水平与hs-CRP、CK-MB、c Tn I水平呈显著负相关(P<0.05),FT4水平与c Tn I呈显著负相关(P<0.05),hs-CRP水平与总胆固醇(TC)、CK-MB、c Tn I水平呈显著正相关(P<0.05),TSH水平与上述指标无相关性。结论老年AMI患者存在甲状腺激素水平异常,且伴有hs-CRP水平升高,AMI患者FT3及hs-CRP可作为评估患者心肌损伤程度及预后的重要检测指标。     

瑞舒伐他汀抑制C反应蛋白诱导的血管内皮细胞血小板反应蛋白1 mRNA表达

目的 研究瑞舒伐他汀对C反应蛋白诱导的人血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达的影响.方法 体外培养人血管内皮细胞,ELISA和RT-PCR检测C反应蛋白对血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达的剂量与时间效应.Western blotting检测信号蛋白p38MAPK的表达水平.结果 C反应蛋白以剂量和时间依赖方式显著增加血管内皮细胞血小板反应蛋白1 mRNA表达,p38MAPK表达增加,其抑制剂SB203580减少p38MAPK的磷酸化及血小板反应蛋白1 mRNA表达水平,瑞舒伐他汀显著抑制p38MAPK表达及血小板反应蛋白1 mRNA和蛋白的表达.结论 C反应蛋白至少通过p38MAPK磷酸化途径直接诱导血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达,促进细胞炎症反应,而瑞舒伐他汀抑制C反应蛋白的这种效应.     

甲状腺激素对心肌细胞钙调控蛋白表达的影响

从基因及分子水平上阐明甲状腺激素对心肌舒缩功能的影响作用及其机制,将为心力衰竭的治疗提供新的方法和奠定理论基础。本文就甲状腺激素对心钙调控蛋白表达的调控以及对心功能的影响作一综述。     

急性心肌梗死患者炎症因子C反应蛋白对单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的探讨急性心肌梗死患者炎症因子C反应蛋白(CRP)与黏附分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的关系。方法检测20例急性心肌梗死患者(均选白2007年2～7月在北京医院心内科心脏监护室住院的患者)及27例健康对照者血清生化指标、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)及MCP-1水平,分析Hs-CRP与MCP-1的相关性。体外分离培养外周血单核细胞,以不同浓度CRP刺激单核细胞,用定量PCR测定MCP-1表达变化。结果与对照组比较,急性心肌梗死组血清Hs-CRP及MCP-1水平明显升高。急性心肌梗死组与健康对照组Hs-CRP水平分别为:(82.84±43.79)nmol/L和(2.09±5.31)nmol/L(P<0.01);急性心肌梗死组与健康对照组MCP-1水平分别为:(19.61±10.59)nmol/L和(10.78±5.10)nmol/L(P<0.05),且两者呈正相关(r=0.451,P<0.05)。CRP浓度依赖性地增加外周血单核细胞中MCP-1的表达。在CRP水平为47.0～188.0 nmol/L时差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。在47.0、94.0、188.0 nmol/L浓度刺激组中MCP-1相对表达量较未刺激组高44%、124%、142%。结论急性心肌梗死患者中,黏附分子MCP-1表达水平升高可能是由于炎症因子CRP增加导致。     

人甲状腺激素受体相互作用蛋白15与甲状腺激素受体的相互作用

目的　确立人甲状腺激素受体相互作用蛋白 15 (hTRIP15 )与甲状腺激素受体 (TR)的相互作用及其作用方式。方法　应用酵母双杂交技术及半乳糖苷酶定性或定量测定。结果　将构建质粒 (BD TRIP15与AD TR)共转化AH10 9酵母细胞后 ,在高严格度选择的培养基 (SD Leu Trp Ade His) 10天克隆长出 ,相比阳性对照质粒 (BD P5 3 +AD Tag)共转后 3天克隆生长。将构建载体及对照载体转化Y187酵母菌株 ,检测LacZ报告基因的表达 (β gal单位 ) ,阳性对照质粒 (BD P5 3 +AD Tag)为 14 9.5 7± 0 .5 1,BD TRIP15 +AD TR为 3 .2 3± 10 .15 ,加入T3 后为 2 .0 2± 0 .0 8,而阴性对照质粒 (BD P5 3 +AD LamC)仅为 0 .0 2± 0 .0 1β gal单位 ,且T3 呈剂量依赖方式抑制两者的相互作用。结论　hTPIR15能与TR共相互作用 ,T3 呈剂量依赖方式抑制两者间的作用 ,仅在超大剂量时才可完全阻断hTRIP15与TRα间的作用。     

老年急性脑出血患者血清高迁移率蛋白-1及C-反应蛋白表达变化及意义

目的观察老年急性脑出血患者血清高迁移率蛋白(HMGB)-1及C-反应蛋白(CRP)含量的变化。方法 80例健康对照者与101例老年急性脑出血患者,收集入院时、入院后3、5、9 h血液标本,运用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测HMGB-1及CRP含量,比较不同病情(轻、中及重度)及不同时间段HMGB-1及CRP含量变化。运用美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)标准评估神经缺损程度。结果不同程度脑出血组血清HMGB-1、CRP含量在入院后各时间点上都明显高于对照组(P<0.05)。随脑出血程度加重,各时间点HMGB-1、CRP水平均明显升高(P<0.05)。同组比较,入院后5、9 h高于入院时,入院后5 h高于入院后3、9 h(P<0.05)。不同程度脑出血组NIHSS评分均高于对照组(P<0.05),随脑出血程度加重,各时间点NIHSS评分均升高(P<0.05)。同组比较,入院后5、9 h NIHSS高于入院时,入院后5 h高于入院后3、9 h(P<0.05)。结论HMGB-1及CRP在急性脑出血发生发展过程中起着重要作用,揭示免疫因素与急性脑出血具有很大的相关性。     

高迁移率族蛋白1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的　研究胰腺癌 (PC)组织中高迁移率族蛋白 1(High mobility group box1,HMGB1)蛋白表达 ,并探讨其与癌分化程度、肿瘤大小、浸润、淋巴及血道转移的关系。方法　用免疫组织化学SABC方法 ,检测 73例胰腺癌组织、10例癌旁组织、6例正常胰腺组织 HMGB1蛋白表达。结果　HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达 (76 .7% ) ,在癌旁组织中仅有微弱表达 ,正常胰腺组织无表达 ;HMGB1的阳性率与癌分化程度无关 (P>0 .0 5 ) ;与肿瘤的大小、浸润、淋巴及血道转移呈正相关 (P<0 .0 1)。结论　 HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达 ,可作为胰腺癌生长、转移及预后的重要判定指标。     

丹红、C反应蛋白与基质金属蛋白酶1表达的关系

目的探讨中药丹红、C反应蛋白与THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶1表达的关系。方法采用佛波醇将THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,用酶联免疫吸附法测定细胞基质金属蛋白酶1蛋白表达峰值时间。再将其分为对照组、C反应蛋白干预组、丹红注射液干预组。酶联免疫吸附法测定不同组别细胞培养上清液中基质金属蛋白酶1蛋白浓度,再用逆转录聚合酶链反应测定细胞不同时间和C反应蛋白干预组基质金属蛋白酶1的mRNA表达。并将基质金属蛋白酶1蛋白浓度和mRNA表达进行比较分析。结果显微镜下观察到细胞株THP-1在佛波醇诱导下转变为巨噬细胞,在24 h细胞的上清液基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达到峰值。与对照组相比,C反应蛋白干预组中基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达升高,5、10、25、50 mg/L C反应蛋白干预时基质金属蛋白酶1表达逐渐增高(P<0.05),呈剂量依赖性。与对照组相比,丹红注射液干预组中基质金属蛋白酶1的表达降低,0、200、400、800、1 600、3 200 mL/L丹红干预时基质金属蛋白酶1的表达减低(P<0.05),呈节段性依赖性递减,且0 mg/L和50 mg/L C反应蛋白干预下两组干预基质金属蛋白酶1表达无差异(P>0.05)。结论 THP-1细胞分化成巨噬细胞后,在24 h基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达最高,C反应蛋白能促进THP-1源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶1,丹红能抑制基质金属蛋白酶1分泌,在有C反应蛋白干预基质金属蛋白酶1表达无显著差别。     

单核细胞趋化蛋白1在重症急性胰腺炎相关肺损伤中的作用

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)早期并发急性肺损伤(ALI)发病机制中的作用.方法 按数字表法将40只SD大鼠随机分为对照组和ANP 3、6、12 h组,每组10只.采用15%左旋盐酸精氨酸2.0 mg/g体重腹腔注射方法制作大鼠ANP模型,观察胰腺及肺组织病理学改变,检测肺湿/干重比,RT-PCR检测肺组织MCP-1 mRNA的表达.结果 腹腔注射左旋盐酸精氨酸后大鼠胰腺发生出血、坏死,符合ANP病理改变.ANP组肺组织明显水肿,3、6、12 h的病理评分分别为3.75±0.58、5.50±0.63、5.86±0.54;肺湿/干重比为4.85±0.38、4.97±0.47、5.03±0.46;肺组织MCP-1 mRNA表达量为0.36±0.08、0.56±0.15、0.72±0.21.均较对照组的0.12±0.05、4.32±0.33、0.21±0.05显著升高(P＜0.05或＜0.01),且MCP-1 mRNA表达与肺湿/干重比及肺组织损害程度均呈正相关(r=0.75,r=0.89,P＜0.05).结论 ANP早期肺组织MCP-1 mRNA表达上调,并在ANP并发的ALI中发挥重要作用.     

广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆表达及免疫学效应分析

目的 对广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1(Ac-fmp-1)基因的开放读码框进行克隆、表达及重组蛋白的免疫学效应分析,评价其重组蛋白在免疫学诊断中的应用前景。方法 逆转录聚合酶链反应扩增目的基因,克隆至原核表达载体pET-30a-c(+),重组质粒转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子亲和层析(Ni-IDA)纯化分离表达产物。免疫印记(Western-blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫性。结果 广州管圆线虫Ac-fmp-1基因的编码区有1 251个碱基,编码417个氨基酸。原核表达载体pET-Ac-fmp-1构建成功,IPTG诱导表达获得了体外高效表达的重组融合蛋白,经亲和层析得到纯化蛋白。融合蛋白可被感染广州管圆线虫的SD大鼠血清及病人血清所识别;作为包被抗原用于ELISA检测大鼠血清其敏感性与特异性均为100%,与粗抗原无差别;检测广州管圆线虫病人血清敏感性为100%,与粗抗原有差别;检测其他寄生虫病人血清与正常病人血清其特异性为100%和98%,与粗抗原相比特异性较高。结论 广州管圆线虫Ac-fmp-1基因在原核表达系统获得高效表达,编码蛋白可能是虫体的重要抗原成分,在免疫学诊断方面有潜在的应用前景。     

Monocyte chemotactic protein-1 gene polymorphism and spontaneous bacterial peritonitis

I read with great interest the article by Gbele et al published in issue 44 of World J Gastroenterol 2009.The results of their study indicate that-2518 Monocyte chemotactic protein-1(MCP-1)genotype AA is a risk factor for spontaneous bacterial peritonitis in patients with alcoholic cirrhosis.However,there are some items that need to be discussed.     

离子通道相关蛋白FXYD6功能区的原核表达及纯化

目的构建FXYD6蛋白功能区（FXYD6-ex）的原核表达质粒,并诱导FXYD6-ex在原核细胞中表达与纯化,以进一步研究FXYD6功能。方法用全长FXYD6 cDNA扩增FXYD6-ex,扩增产物插入克隆质粒载体pMD18-T Simple并用限制性内切酶酶切,将目的片段插入以限制性内切酶切后的表达质粒载体pET28a（＋）中,经PCR电泳和测序证实后转化宿主大肠杆菌Rossetta,异丙基-β-8-D硫代半乳糖（IPTG）诱导重组蛋白表达,镍柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶和Western blot检测鉴定蛋白表达及纯化情况。结果成功构建pET28a（＋）-FXYD6-ex大肠杆菌表达载体,并实现该蛋白在大肠杆菌中的高表达,分离纯化的产物纯度达90%。结论本研究成功对FXYD6-ex进行原核表达及纯化;此为后续制备该蛋白抗体库及进一步研究其具体功能奠定了良好基础。     

按蚊TEP1基因的原核表达及鉴定

目的原核表达斯氏按蚊TEP1蛋白。方法PCR方法从斯氏按蚊扩增TEP1基因,并插入原核表达载体pQE-80L,构建重组表达质粒pQE-80L/TEP1。转化DH5α菌,IPTG诱导表达融合蛋白及质谱鉴定。结果成功表达重组质粒,经过质谱鉴定为斯氏按蚊TEP1分子。结论成功表达了按蚊TEP1蛋白为后续的抗体制备及TEP1功能研究奠定了基础。     

人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因在大肠杆菌的表达及临床测定应用

目的 表达有抗原活性的人甲状腺过氧化物酶（hTPO）片段,并将表达产物用于临床测试。方法 将hTPO抗原决定簇基因连入pGEX-4T-3,然后转入E.coli BL21,异丙基β－D－硫代半乳糖苷诱导表达。表达产物谷胱甘肽巯基转移酶（GST）－hTPO经亲和层析纯化,并鉴定免疫学活性。以GST－hTPO为抗原建立检测血清TPO抗体（Ab）的ELISA方法。用此方法检测一批自身免疫性甲状腺疾病（AITD）患者血清TPOAb,用病理学方法观察同批患者甲状腺组织吕HLA－DR抗原、树突状细胞及淋巴细胞浸润程度。结果 成功地表达了hTPO抗原决定簇基因,纯化产物GST－hTPO纯度高,有良好的免疫学活性,以此抗原建立的ELISA方法有良好的重复性,CV在5．93％－7．59%之间。ELISA方法与RIA方法比较,检测结果显著相关（n=37,r=0.613,P＜0．001）。血清TROAb水平及HLA－DR抗原、树估状细胞分布随甲状腺组织淋巴细胞浸润程度加重呈逐渐增多趋势。结论 原核表达产物GST－hTPO可用于建立TPOAb常规检测方法;AITD患者血清TPOAb水平与甲状腺组织损伤有密切关系。     

活化蛋白-1和巨噬细胞炎性蛋白-1α在实验性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸的影响

目的研究活化蛋白(AP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α在佐剂性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸(SA)对它们的影响。方法随机将大鼠分成4组:正常对照组(NC组)、模型组(M组)、SA1组(腹腔注射SA0.5mg·kg-·1d-1)、SA2组(腹腔注射SA1.0mg·kg-1·d-1)。免疫组织化学检测各组C-fos、MIP-1α的表达;生化法测C反应蛋白。结果NC组未见C-fos和MIP-1α表达,M组C-fos及MIP-1α大量表达(P<0.05),C反应蛋白水平升高(P<0.01);与M组比较,SA1组及SA2组C-fos、MIP-1α表达降低(P<0.05),C反应蛋白水平下降(P<0.01),且SA2组更明显。结论AP-1和MIP-1α在大鼠佐剂性关节炎发生发展具有重要作用;亚砷酸能下调AP-1和MIP-1α的表达,降低CRP的水平,提示亚砷酸对RA有一定的治疗作用。     

甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达及免疫反应性分析

目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性。结果获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的蛋白表达条带,Western blot结果显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性。结论成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法的建立提供了生物材料。