PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.     

细胞凋亡信号传导通路的研究进展

细胞凋亡（apoptosis），是生物体细胞的主动消亡过程，是多细胞有机体调控机体发育、控制细胞衰老、维持内环境稳定的重要机制。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控，具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内，激活靶分子而产生细胞效应，引发细胞凋亡。一般认为，细胞凋亡存在三条主要通路：线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路，各通路间互相联系，共同调节细胞凋亡。     

蛋白激酶C信号传导通路在缺氧性心肌细胞凋亡中的作用

目的　研究蛋白激酶C信号通路在心肌细胞缺氧性凋亡中的作用。方法　将培养的大鼠心肌细胞随机分成 8组 :(1 )对照组 ;(2 )缺氧 6h组 ;(3)缺氧 1 2h组 ;(4 )缺氧 2 4h组 ;(5 )PMA1 0nM组 ;(6 )PMA1 0 0nM组 ;(7)CHE1 μM组 ;(8)CHE1mM组。对照组常氧培养 2 4h。缺氧培养即将心肌细胞 95 %N2 ～ 5 %CO2 下 37℃缺氧培养。 (5 )和 (6 )组即于缺氧培养前 ,加入PKC激动剂PMA(Phorbol 1 2 myristate 1 3 acetata) ,使其终浓度分别为 1 0nM、1 0 0nM ,预处理 1 0min后再缺氧 2 4h。 (7)和 (8)组即于缺氧培养前 1 0min ,加入PKC抑制剂CHE(chelerythrine) ,使其终浓度分别为 1 μM、1mM ,然后再缺氧培养 2 4h。其余各组缺氧不同的时间。终止培养后分别检测细胞的凋亡率和活性。结果　单纯缺氧能引起心肌细胞的凋亡和坏死 ,以缺氧 2 4h最显著。PMA1 0nM预处理能明显减少心肌细胞缺氧性凋亡 (P <0 .0 5 ) ,而PMA1 0 0nM组和CHE1 μM组心肌细胞凋亡率明显增加 (P <0 .0 5 )。PMA和CHE对 2 4h缺氧诱导的心肌细胞坏死无明显影响。结论　蛋白激酶C信号传导通路参与了抗心肌细胞缺氧性凋亡的信号传导 ,但可能与抗缺氧性坏死的信号传导之间存在差异     

HIPK2在IL-2撤除诱导T细胞凋亡中的作用

目的 研究同源结构域相关的蛋白激酶2（homeodomain-interacting protein kinase 2,HIPK2）在白介素2（interleukin 2,IL-2）撤除诱导的T细胞凋亡中的表达及其作用.方法 IL-2依赖性的T细胞株（CTLL-2）,撤除IL-2后可诱导凋亡.运用PI染色和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,实时定量RT-PCR检测HIPK2及其他细胞凋亡相关基因的表达.通过反义技术下调HIPK2的表达,观察HIPK2在IL-2撤除诱导的T细胞凋亡中的作用.结果 随IL-2撤除时间延长,CTLL-2细胞凋亡率增加,细胞基因组DNA发生了明显片段化.参与死亡受体凋亡途径的基因FasL和Fas表达没有明显改变（P＞0.05）,Bcl-2家族中促凋亡基因Bim表达明显上调（P＜0.01）,抗凋亡基因Bcl-xL表达明显下调（P＜0.05）,HIPK2表达明显上调（P＜0.05）.下调HIPK2的表达可以显著降低CTLL-2在IL-2撤除后的细胞凋亡率（P＜0.01）,促凋亡基因Bim的表达被显著下调（P＜0.01）,而抗凋亡基因Bcl-xL明显上调（P＜0.05）.结论 HIPK2可以促进IL-2撤除诱导的CTLL-2 T细胞凋亡,这种作用可能与HIPK2上调促凋亡基因Bim和下调抗凋亡基因Bcl-xL的表达相关.     

Drak2在高糖诱导胰岛β细胞凋亡中的作用

目的 探讨Drak2在高糖诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用。方法 不同浓度葡萄糖诱导刺激,模拟体外胰岛细胞糖毒性损伤后的细胞凋亡模型,通过CCK8检测葡萄糖作用后细胞的存活率;Western印迹法检测不同糖浓度时Drak2的表达情况,完成糖浓度的筛选。构建Drak2-pcDNA3.0质粒,应用基因转染技术构建Drak2过表达可诱导细胞系,Western印迹法分析糖诱导前后胰岛β细胞Drak2的表达。Real-Time PCR测定Drak2、Bax、Bcl-2的mRNA水平,流式细胞法测定诱导前后的凋亡情况。结果CCK8结果显示,随着培养液中糖浓度上升,Rinm 5mf凋亡逐渐增加,随着时间的增加(24、48、72h)凋亡也逐渐增加,呈一定的量效关系。Western印迹法显示在糖浓度22.2mmol/L培养72h时,Drak2的表达量最多。构建Drak2过表达,在转染6h后开始葡萄糖诱导,在高糖诱导72h时过表达组Drak2蛋白是正常组的6倍。Real-Time PCR显示,过表达组Drak 2 mRNA在葡萄糖诱导前开始增加,在高糖诱导72h时增高明显(P<0.05),凋亡相关基因BAX、Bcl-2表达均有增加(P<0.05)。流式细胞仪检测显示高糖诱导后,过表达组凋亡率明显高于正常组(P<0.05)。结论 Drak 2过表达促进高糖诱导的胰岛β细胞凋亡。     

钙敏感受体参与MAPK通路诱导细胞凋亡信号传导通路的机制研究

目的钙敏感受体(calcium-sensing recetor,CaR)具有七个跨膜区的G蛋白耦联受体,它通过激活PLC系统引起肌浆网释放钙从而引起细胞内钙的升高。CaR与心肌细胞凋亡的关系及相关信号传导途径。方法大鼠乳鼠心肌细胞培养复制缺血再灌注损伤,并分为五组,分别:1)对照组;2)模拟缺血/再灌注组;3)GdCl3 NiCl2 CdCl2组;4)SP600125组;5)SB203580组;观察加入CaR激动剂时CaR的表达情况;MTT法和流式细胞仪观察细胞凋亡;Western Blot检测心肌组织,同时还检测了培养心肌细胞中磷酸化JNK和p38的表达。结果心肌缺血/再灌注和加入CaR激动剂时CaR的表达明显高于对照组,细胞内钙升高幅度明显大于对照组。HE染色、TUNEL和电镜观察发现缺血/再灌注和激动剂组损伤明显,并且凋亡细胞广泛存在。同时,细胞浆中cyt c和Caspase3的表达明显增加,而线粒体中的cyt c和胞浆中的Bcl2的表达下降。磷酸化JNK和p38的表达增多,在加入JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580心肌细胞凋亡率明显下降,磷酸化JNK和p38的表达减少。结论CaR参与大鼠心肌缺血/再灌注损伤介导细胞内钙超载。CaR激活后,通过诱发线粒体损伤而引起cytc-Caspase 3途径促进心肌细胞凋亡;同时亦可激活JNK和p38酪氨酸蛋白激酶途径参与细胞凋亡。     

p-ERK1/2在一氧化氮诱导的HepG2细胞凋亡中的作用

探讨p-ERK1/2在一氧化氮诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡中的作用。用不同浓度的硝普钠(sodium nitroprusside ,SNP)处理HepG2细胞12 h,通过运用荧光探针技术与Griess法检测细胞内一氧化氮浓度,流式细胞术测定肿瘤细胞的凋亡率,Western blot检测p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果发现：一氧化氮通过上调p-ERK1/2的表达水平诱导HepG2细胞的凋亡,1 mmol/L SNP可以诱导HepG2细胞凋亡,胞内一氧化氮含量与p-ERK1/2蛋白表达量均高于对照组,转染ERK1过磷酸化质粒则明显促进肿瘤细胞的凋亡。实验结果显示,一氧化氮通过上调p-ERK1/2的表达水平诱导HepG2细胞的凋亡,此研究发现了p-ERK1/2在一氧化氮诱导肿瘤细胞凋亡过程中的新作用,可进一步深入探讨其相关机制。     

p38MAPK信号传导通路在冠心病中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPKs)酶属于酪氨酸激酶系统,是细胞内的主要信息传递系统,是信号从细胞外转到细胞内的传递者,它可以诱导某些应激性蛋白的快速表达,如热休克蛋白、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、ATP敏感性钾通道、抗氧化因子等,从而介导细胞能产生各种反应.     

TLR-2和TLR-4在不同疾病胸腔积液中的水平及临床意义

目的探讨不同疾病胸腔积液中Toll样受体2（TLR-2）及Toll样受体4（TLR4）的水平及其临床意义。方法收集81例胸腔积液及其同源外周血,其中结核性胸腔积液组32例,肿瘤性胸腔积液组28例,细菌性胸腔积液组21例。应用酶联免疫吸附（ELISA）法测定胸水上清液和血清中TLR-2和TLR-4的浓度,并对结果及意义进行分析。结果（1）胸腔积液间：结核组TLR-2浓度（22．19±2．12）ng／L分别与肿瘤性组（14．50±1．93）ng／L、细菌组（13．99±2．36）ng／L相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;肿瘤性组、细菌组间相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。而TLR4在三组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。（2）血清中：细菌组TLR-4浓度（5．34±2．13）ng／L,分别与结核组（1．54±1．09）ng/L、肿瘤性组（0．10±0．06）ng／L相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）胸腔积液与血清中：TLR-2和TLR-4比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。（4）结核性胸腔积液中：TLR-2和TLR-4具有相关性（P〈0．05）。结论TLR-2可有助于结核性与非结核性胸腔积液的鉴别。TLR-2和TLR-4在结核性胸膜炎发病中可能具有共同作用。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠大血管Toll样受体2表达的影响

目的:研究选择性血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(缬纱坦)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠大血管Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响.方法:将31只SD大鼠随机分成正常对照组(NC组)和DM造模组,造模组给予STZ 60 mg/(kg·次)腹腔注射,再随机分为DM组和DM 缬沙坦干预组(DV组),DV组给予缬沙坦20 mg/(kg·d)灌胃.于12周时乌拉坦麻醉,取胸主动脉,用RT-PCR方法检测STZ诱导的DM大鼠大血管组织中TLR2 mRNA表达的变化,Western blot检测大血管中TLR2蛋白表达的变化.结果:与NC组相比,DM组和DV组大鼠的血糖明显升高(P＜0.01).而DM和DV组间血糖差异无显著性(P＞0.05);DM大鼠大血管组织中TLR2 mRNA和蛋白的表达明显高于NC组(均P＜0.01),而DV组大血管组织中TLR2 mRNA和蛋白的表达明显低于DM组(P＜0.01),差异均具有显著性.结论:DM大鼠大血管组织中存在TLR2表达的增加,缬纱坦可能通过降低血管组织TLR2表达而对糖尿病大血管炎性改变起防治作用.     

Lipopolysaccharide upregulates the expression of Toll-like receptor 4 in human vascular endothelial cells

目的：探讨内皮细胞TLR2和TLR4的表达以及内毒素对其表达的影响。方法：按RNA提取试剂盒说明书提取内毒素作用后的ECV-304(人脐静脉内皮细胞株)和人脐静脉内皮细胞总RNA,运用逆转录PCR(RT-PCR)检测细胞TLR2和TLR4mRNA的表达。结果：人脐静脉内皮细胞和ECV304细胞株均能表达TLR2和TLR4mRNA,但是,TLR4的表达水平明显强于TLR2的表达,LPS能明显上调TLR4的表达,但对TLR2的表达无影响。结论：本研究提示TLR4能明显上调LPS作用的信号转导分子,在LPS对内皮细胞的激活效应中具有重要的作用;ECV-304是内皮细胞研究的良好的实验模型,可代替人脐静脉内皮细胞而较为广泛应用。     

湖南汉族人群中Toll样受体2和4基因遗传多态性与冠心病的关系

目的：探讨湖南地区汉族人群Toll样受体(Toll-like receptor 2,TLR2)及TLR4基因多态性与冠状动脉粥样 硬化性心脏病(冠心病)的关系。方法：运用Sanger测序技术检测180例正常对照组及167例无血缘关系湖南汉族人 群冠心病组中TLR2 SNP 2258A>G及TLR4 SNP896A>G和SNP1196C>T的多态性。结果：TLR2 SNP 2258A>G及TLR4 SNP896A>G基因型频率和等位基因频率在冠心病组和正常对照组之间的分布差异无统计学意义(P>0.05),TLR4 SNP1196C>T在两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论：湖南地区汉族人群TLR4基因多态性位点SNP1196C>T与 冠心病有关。     

Relationship between the expression of Toll-like receptor 2 and 4 in mononuclear cells and postoperative acute lung injury in orthotopic liver transplantation

Background The aim of this study was to investigate the potential relationship between the dynamic expression of Toll-like receptor 2 and 4 （TLR2/4） in peripheral blood mononuclear cells as well as changes in serum concentration of inflammatory factors and acute lung injury （ALl） in patients after orthotopic liver transplantation （OLT）. Methods The peripheral blood samples of 27 patients （23 men and 4 women with ASA Ⅲ to Ⅳ） who received OLT were collected for measurement of TLR2/4 at T1 （after induction of anesthesia）, T2 （25 minutes after anhepatic phase）, T3 （3 hours after graft reperfusion） and T4 （24 hours after graft reperfusion）. The expression of TLR2/4 in mononuclear cells was measured by flow cytometry. The serum concentrations of tumor necrosis factor （TNF）-α, interleukin （IL）-1β and IL-8 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Twenty-seven patients were assigned to ALl group （n=-9） and non-ALl group （n=-18） according to the diagnostic criteria of ALl. The expression of TLR2/4 in the ALl group or non-ALl group was analyzed. Results Compared to the non-ALl group, the volumes of blood loss, ascites, total output and transfused red blood cells were higher in the ALl group, and the anhepatic phase lasted longer （P 〈0.05, P 〈0.01）. The expression of TLR2/4 in mononuclear cells increased significantly at T3 and T4, and serum concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-8 increased significantly too. There was no significant difference in Child-Turcotte-Pugh （CTP） scores between the ALl group and non-ALl group （P 〉0.05）. The expression of TLR2/4 in mononuclear cells increased significantly at T3 and T4 in the ALl group （P 〈0.05, P〈0.01）. A positive correlation was noted between the expression of TLR4 in mononuclear cells and the serum concentrations of TNF-α, IL-1β （P=0.041, P=0.046） in the ALl group. In the non-ALl group, statistical results showed that the expression level of TLR2/4 in mononuclear cells was not significantly different during the peri-operative period of OLT （besides TLR4 expression at T4）. Compared to expression in mononuclear cells was more significant in the mononuclear cells exceeded that at T1 by one time were more 16. the non-ALl group, the increasing amplitude of TLR2/4 ALl group. The patients whose TLR2/4 expression in likely to suffer from ALl （P=0.013）, with a relative risk of Conclusion The expression level of TLR2/4 in mononuclear cells increases significantly in the peri-operative period of OLT, and it may be a high risk factor for occurrence of postoperative ALl.     

右美托咪啶对老年患者全麻术后炎症因子水平及单核细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的观察右美托咪啶对老年腹部手术患者围术期炎症因子水平及单核细胞TLR2和TLR4表达的影响。方法选择老年全麻患者91例,采用随机数字表法将患者分为：右美托咪啶组（D组）46例和对照组（C组）45例。两组均常规咪达唑仑、顺苯磺酸阿曲库铵、舒芬太尼、依托咪酯行麻醉诱导,诱导前10min,D组静脉输注右美托咪啶针,负荷量0.5滋g/kg,再分别恒速静脉输注右美托咪啶针0.5滋g/（kg·h）至术毕前30min;C组采用同样方法静脉输注等容量0.9%氯化钠溶液。记录舒芬太尼、瑞芬太尼和异丙酚用量。于麻醉前（T0）、手术开始1h（T1）、手术结束后12h（T2）及24h（T3）时各采集右颈内静脉血5ml,采用ELISA测定HMGBl、TNF-α、IL-6水平,并采用流式细胞仪检测单核细胞TLR2和TLR4的表达水平。结果与C组比较,D组瑞芬太尼针和丙泊酚针用量明显减少（P＜0.01）,舒芬太尼用量差异无统计学意义（P＞0.05）。与C组比较,D组TNF-α、IL-6和HMGB1水平在T1、T2、T33个时点均明显降低（P＜0.05）;D组单核细胞TLR2和TLR4的表达水平在T1、T2、T33个时点均明显降低（均P＜0.05）。结论右美托咪啶可以降低老年腹部手术患者围术期炎症因子水平及抑制单核细胞TLR2和TLR4表达。     

烧伤患者外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达的变化

目的观察烧伤患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化。方法选取深II度以上烧伤30%~50%TBSA烧伤患者23例,伤后48 h取外周血20 mL,同时抽取健康献血者(设为对照组)12例,外周血20 mL。常规方法分离出单个核细胞,用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人TLR4抗体对外周血单个核细胞进行免疫染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞率及其平均荧光强度(MFI)。结果烧伤后48 h,患者外周血单个核细胞TLR2-FITC阳性细胞数量上升,为(57.57±18.56)%,与对照组的(26.32±10.31)%相比,P<0.05;细胞表面TLR2-FITC荧光强度下降,TLR2-FITC MFI为58.5±18.76,低于对照组(69.79±23.42);TLR4-PE阳性率为(29.84±13.28)%,与对照组的(12.75±5.18)%相比,P<0.05;TLR4-PE MFI减弱,与对照组相比,P<0.05。结论烧伤患者外周血单个核细胞TLR2/4阳性数量均升高,而TLR2/4表达强度降低。     

Toll样受体与固有免疫的进化

固有免疫是在进化中形成的免疫机制,在对抗微生物的入侵方面,固有免疫的策略是通过模式识别受体(PRR)识别微生物的病原相关分子模式(PAMP)。Toll样受体是近年来在多种生物体内发现的一类介导固有免疫的细胞膜受体家族,它通过活化一系列与免疫相关的基因表达而发挥作用,在进化中表现高度的保守性,但其功能却随着动物进化中免疫机能的复杂化而多样化。对Toll样受体研究的深入可以加深我们对固有免疫的发生与进化的认识。