HPLC测定新疆紫草不同部位中8种羟基萘醌的含量

建立同时测定新疆紫草Arnebia euchroma不同部位中左旋紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素等8种羟基萘醌含量的高效液相色谱法。采用Waters Xbridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30),检测波长275 nm,流速1mL·min~(-1),柱温30℃。定量结果显示,新疆紫草各部位中主要成分含量差异较大,根皮含量最高,其次是根,再次是茎残基,根木质部和地上部分含量较低。本研究为确定紫草药用部位提供科学依据。     

HPLC 测定紫草提取物中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的:建立HPLC测定紫草提取物中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量.方法:采用HPLC,Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相乙腈-水-甲酸(70:30:0.05),检测波长275 nm,柱温40℃,流速1 mL· min -1.结果:β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁在50～200 μg具有良好的线性关系(r=0.9998),平均加样回收率103.31％,RSD 1.44％ (n =5).结论:方法准确,重复性好,可作为紫草提取物的含量控制.     

紫草总萘醌的闪式提取工艺优选

目的:优选紫草中总萘醌的闪式提取工艺.方法:以紫草总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁转移率为指标,采用L9(34)正交试验考察溶剂用量、提取时间、提取电压对闪式提取工艺的影响,并与渗漉法进行比较.结果:最佳提取工艺为分别加14,8倍量95％乙醇于140 V电压下提取2次,每次2 min;总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均转移率分别为90.72％,70.68％.渗漉法中总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均转移率分别为79.03％,65.43％.结论:闪式提取法优于渗漉法,前者适用于紫草总萘醌的提取,优选的工艺稳定可行,具有良好的应用前景.     

紫草炭制前后萘醌类化合物含量变化及止血作用研究＊

目的 采用传统的蒙药炮制方法，对紫草进行炭制，通过紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对紫草炭制前后萘醌类化合物进行含量测定，比较原药材和炭制紫草中的含量变化。初步评价紫草炭制品的止血活性。方法 UV法测定原药材和炭制紫草的羟基萘醌总色素的含量，HPLC法测定β，β′- 二甲基丙烯酰阿卡宁含量。采用毛细管法测定小鼠全血凝血时间和出血时间。结果 UV和HPLC的结果表明，炭制紫草的羟基萘醌总色素和β，β′- 二甲基丙烯酰阿卡宁的含量均不同程度的下降。云南白药阳性对照组及给药三组均与空白对照组比较具有显著差异（P<0.01），延长全血凝血时间效果明显，且160101C炮制组的凝血时间最短，但是给药组之间均没有太明显的差异。结论 本研究可为今后的蒙医药中炭制紫草的质量标准及药理实验提供科学依据。     

新疆紫草羟基萘醌类化学成分的研究及对PDE4的抑制作用

目的 :研究新疆紫草羟基萘醌的主要成分及对PDE₄酶的抑制作用。 方法 :用硅胶柱层析、制备HPLC 和制备TLC等方法分离纯化新疆紫草中羟基萘醌化合物,通过理化性质和光谱数据进行结构鉴定。HPLC方法测定主要羟基萘醌类化合物对PDE₄酶的抑制活性。 结果 :分离鉴定了7个化合物,分别为去氧阿卡宁(1)、阿卡宁(2)、乙酰阿卡宁(3)、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁(4)、α-甲基丁酰阿卡宁(5)、异丁酰阿卡宁(6)和β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(7)。 结论 :化合物2,5,6为首次从新疆紫草中分离得到。首次评价了新疆紫草羟基萘醌类成分对PDE₄酶的抑制作用。     

新疆紫草羟基萘醌类成分对炎症细胞因子的抑制作用

目的研究新疆紫草羟基萘醌化合物对炎症细胞因子的抑制作用。方法采用酶联免疫法测定新疆紫草羟基萘醌化合物对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1D（IL-1D）等炎症细胞因子的抑制作用。采用Griess法测定分离纯化的6种不同羟基萘醌化合物（紫草素、去氧紫草素、乙酰紫草素、β’β-二甲基丙烯酰紫草素、α-甲基丁酰紫草素、异丁酰紫草素）对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放炎症细胞因子一氧化氮（N0）的抑制作用。结果新疆紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放TNF—α和IL-1D具有抑制作用;6种紫草羟基萘醌化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264．7释放NO具有抑制作用。结论新疆紫草羟基萘醌成分对炎症细胞因子均有不同程度的抑制作用,为进一步研发以炎症因子TNF-α抑制剂为靶向的类风湿关节炎治疗药物提供了一定的理论依据。     

中低压制备型色谱制备紫草萘醌成分的研究

 目的 建立新的色谱技术,分离纯化紫草萘醌成分。方法 采用中低压制备色谱和Flash柱进行分离纯化,利用理化性质和核磁共振谱、红外、质谱等技术鉴定结构,用高效液相色谱技术分析单体的纯度。结果 分离鉴定了6个化合物。分别为去氧紫草素,紫草素,异丁酰紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,纯度分别是99.62%,99.02%,99.5%,99.31%,99.3%,99.2%。结论 首次建立中低压色谱技术,快速、准确分离紫草药材的单体成分。     

新疆紫草化学成分研究

目的 研究新疆紫草Arnebia euchroma的化学成分。方法 采用硅胶、ODS、凝胶柱色谱等多种柱色谱分离技术进行分离纯化,通过质谱、核磁共振波谱、圆二色谱等技术并结合文献报道的数据,对化合物进行结构鉴定。采用CCK8法,研究化合物对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。结果 从新疆紫草石油醚部位中共分离得到24个化合物,分别鉴定为(S)-1-(6-异丙基-2,3-二氢-1H-茚-4-基)乙-1-酮（1）、(Z)-2-(2-(2,5-二羟基苯基)-2-氧亚乙基)-6-甲基庚-5-烯酸乙酯（2）、2-(2Z)-(3-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯基)-1,4-苯二醇（3）、新藏紫草酚（4）、(+)-(R)-脱氧碘化叶黄素（5）、3-(4-甲基-3-戊烯-1-基)-6-羟基-9-甲氧基-2H-1-苯并氧杂环庚烯-5-酮（6）、对羟基苯甲醛（7）、香草醛（8）、乙酰香草酮（9）、2-羟基-4-甲氧基肉桂醛（10）、guttaquinol B(11)、岩大戟内酯E(12)、3-乙酰氧基齐墩果酸（13）、羟基何帕酮（14）、β-谷甾醇（15）、豆甾-4-烯-3,6-二酮（16）...     

紫草醇提工艺优化研究

目的 优选紫草的醇提工艺,确定最佳提取工艺参数.方法 采用HPLC法,以β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁为检测指标,用正交实验法考察了4种因素(乙醇浓度、乙醇用量、温浸时间、温浸次数)对其含量的影响.结果 紫草的最佳提取工艺条件为加10倍量95%乙醇,于50℃温度下搅拌浸泡3次,每次60 min.结论 制备工艺合理,便于生...     

一测多评法同时测定新疆软紫草中6种萘醌类成分

目的建立新疆软紫草Arnebia euchroma中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素6种萘醌类成分的一测多评测定方法。方法采用高分辨LC-MS对软紫草药材中的主要萘醌类色谱峰进行鉴定。采用HPLC法,以乙酰紫草素为内参物,建立了乙酰紫草素与紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的相对校正因子,并考察了相对校正因子的耐用性和重现性。比较了外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制新疆软紫草药材的质量是准确、可靠的。     

新疆紫草化学成分的初步研究

目的对新疆紫草提取物中的化学成分进行初步研究。方法采用系统预试法,对紫草的水提液、酸性乙醇提取液、乙醇提取液、石油醚提取液进行研究,对其可能含有的化学成分进行初步确定。结果新疆紫草中可能含有氨基酸、蛋白质、糖及其苷类、皂苷、鞣质、酚类、有机酸、萜类、甾体类、香豆素及内酯、黄酮类、蒽醌类、生物碱类、油脂等化学成分。结论初步确定紫草可能含有的化学成分,为紫草的深度利用和开发奠定基础。     

正交试验优选紫草提取工艺

目的以紫草中总萘醌和左旋紫草素的含量为指标，研究超声萃取和索氏提取2种工艺方法在萃取紫草中有效成分的差异。方法通过正交试验安排实验条件，采用分光光度法测定紫草提取液中总萘醌含量，HPLC法测定提取液中左旋紫草素含量，比较超声萃取与索氏提取的提取效率，优选两种工艺方法的最佳工艺条件。结果2种工艺方法中，粒度对总萘醌的提取率均有非常显著影响，粒度较大的提取率高，但对紫草中左旋紫草素的提取率无显著影响；溶剂乙醇在2种工艺方法中表现出不同影响，超声萃取工艺乙醇的提取率较高，呈显著影响，而在索氏提取工艺中提取率较低，也呈显著影响。结论比较2种工艺，超声萃取具有高效、省时、节能的特点，优于索氏提取工艺。     

新疆紫草多糖的超声提取及含量测定

目的从新疆紫草中提取多糖,并测定其含量。方法运用超声技术用水提醇沉法提取紫草多糖,用酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果多糖含量2.267%,平均回收率为100.8%,RSD=0.48%(n=6)。结论运用超声技术从紫草中提取出多糖,反应速度加快,收率提高。     

软紫草与硬紫草萘醌类化学成分的研究

目的:对软紫草与硬紫草中萘醌类化学成分进行研究。方法:利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等方法分离纯化,通过理化常数和波谱数据鉴定化合物结构,利用圆二色谱测定萘醌化合物绝对构型。结果:从软紫草中分离得到6个化合物,鉴定为阿卡宁(AE-1),乙酰阿卡宁(AE-2),β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁(AE-3),异丁酰阿卡宁(AE-4),α-甲基-正丁酰阿卡宁+异戊酰阿卡宁(AE-5),β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(AE-6);从硬紫草中分离鉴定了6个化合物,分别为紫草素(LE-1),乙酰紫草素(LE-2),β,β-二甲基丙烯酰紫草素(LE-3),异丁酰紫草素(LE-4),α-甲基-正丁酰紫草素+异戊酰紫草素(LE-5),β-羟基异戊酰紫草素(LE-6)。结论:软紫草中萘醌类化学成分绝对构型为S型,硬紫草中为R型。     

新疆紫草种子包衣育苗技术研究

目的应用种子包衣技术,探索提高新疆紫草育苗成活率的有效措施。方法以非豆科牧草种衣剂对新疆紫草种子包衣处理,采用对比分析方法,以浸种灵及空白组为对照,定期观测出苗率、成苗率以及生长量,比较各处理种子的育苗效果。结果经包衣处理后,种子的出苗率、保苗率和当年的生长量分别提高14.25%、46.31%和42.02%。结论新疆紫草种子经包衣处理后能够显著提高育苗的成活率,有效促进幼苗的生长发育。     

新疆紫草提取物对小鼠急性四氯化碳性肝损伤的保护作用

目的研究新疆紫草提取物AEJ-I、AEJ-Ⅱ对小鼠急性四氯化碳(CC l4)性肝损伤的保护作用。方法腹腔注射0.1? l4橄榄油溶液制备小鼠急性化学性肝损伤模型,以肝脏系数、脾脏系数,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的水平和肝脏病理组织学变化为观测指标,观察AEJ-I、AEJ-Ⅱ对小鼠急性CC l4性肝损伤的影响。结果AEJ-I、AEJ-Ⅱ各剂量组均可显著降低小鼠血清ALT,AST活性(P<0.01);AEJ-I高剂量组能使肝组织中SOD、GSH-Px活性升高、MDA含量下降(P<0.05);AEJ-I低剂量组可以升高肝组织GSH-Px活性(P<0.05),而对肝组织其它指标均无明显影响(P>0.05);AEJ-Ⅱ高剂量组能降低MDA含量(P<0.05),而对肝组织其它指标AEJ-Ⅱ各剂量组影响均不明显(P>0.05);AEJ-I、AEJ-Ⅱ均可不同程度地改善肝脏病理组织性损伤。结论AEJ-I、AEJ-Ⅱ对小鼠急性CC l4性肝损伤具有保护作用。     

新疆紫草无性繁殖体系的建立

目的 为了促进新疆紫草大面积人工栽培，缓解自然资源匮乏的现状，通过组织培养技术建立了新疆紫草的无性繁殖体系。方法 诱导新疆紫草多种外植体脱分化均已成功，胚状体扩增后萌发出大量的试管苗；愈伤组织扩增后诱导出大量的不定芽，不定芽经诱导生根后，得大量的试管苗，试管苗土栽成活。结果 外植体脱分化期间，2，4-D不可缺少，KT的作用优于BA；嫩芽切段脱分化最快，愈伤组织质量最好；降低2，4-D浓度有利于愈伤组织扩增和再分化；一定浓度KT或BA都可诱导出不定芽，前者还有利于球形胚的形成；球形胚培养初期，培养基中加入适量激素能使球形胚大量增殖，并很快发育；适当的昼夜温差(10℃～28℃)和自然光照有利于壮苗的形成和移栽成活。在移栽的236株试管苗中，31株土培成活，成活率达13．2％。结论 通过组织培养方法建立的新疆紫草无件繁殖体系稳定，可用。     

新疆紫草多糖的提取工艺研究

利用正交设计法优选紫草多糖的提取工艺。实验结果表明，紫草多糖超声提取的最佳工艺条件为：提取时间为0．5h。提取次数为3次，固液比1：12。最佳工艺条件具有重现性、可靠性。     

新疆紫草提取物凝胶剂的制备及质量考察

目的:制备新疆紫草提取物凝胶剂并考察其初步的质量。方法:采用正交试验设计,以卡波姆-940、丙二醇的用量及pH为考察因素,以凝胶剂的光泽度、涂展性、均匀度、离心性为指标进行综合评分,筛选优化处方,制备新疆紫草凝胶剂。采用紫外分光光度法测定左旋紫草素的含量。结果:优化处方为卡波姆-940 0.7%,丙二醇10%,pH 6.5,左旋紫草素在5～30mg.L-1与吸收度呈良好的线性关系,相关系数为0.999 9。平均加样回收率为95.7%(RSD 3.06%,n=6)。体外释药曲线符合Higuchi方程。结论:该凝胶剂制备工艺简单,质量可控,各项指标符合凝胶剂的质量标准。     

药用紫草研究进展

紫草是我国传统的中药材,以根药用,具有多方面的功效。目前,能够药用的紫草有2种,为新疆紫草和内蒙紫草。对紫草的基原考证、道地沿革、生产特点、采收和加工、药材质量特征、药用历史及应用进行了概述,并对资源的综合利用和保护作出展望。