赤芍水提物药物血清促HSC-T6细胞凋亡作用的实验研究

目的 应用流式细胞法,研究灌服赤芍水提物后的犬血清对乙醛造模后的肝星状细胞的促凋亡作用.方法 采用乙醛造模后的肝星状细胞株(HSC-T6)作为体外研究模型;以赤芍水提物给彼格犬1次性灌胃,取给药前的血清、给药后2,3 h血清作为实验药物血清.以流式细胞法检测以上采血时间点上2%浓度的血清对乙醛造模后的HSC-T6作用72 h后的促凋亡作用.结果 2,3 h两个时间点的含药血清能明显促进HSC-T6细胞的凋亡,和同样条件下用空白血清培养的HSC-T6细胞相比其凋亡比例(apoptosis,APOP)显著性增加(P＜0.05).在药物血清的作用下两个时间点组的HSC-T6细胞在G0/G1期细胞比例明显上升(P＜0.05);而S期细胞显著减少(P＜0.05);但G2/M期并没有一致性的变化.结论 两个时间点的药物血清对HSC-T6细胞都有显著的促凋亡作用,且能显著增加HSC-T6细胞在G0/G1期的比例及显著降低S期的比例,这可能是其抑制HSC-T6细胞增殖及促凋亡的原因之一.     

三七提取物含药血清对MNNG转化后GES-1细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:研究三七提取物犬药物血清作用于胃癌前细胞后,其凋亡相关基因蛋白表达的变化.方法:采用被N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N-nitroso-guanidine,MNNG)转化后的永生化人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞(简称MC细胞)作为胃癌前病变细胞的体外研究模型,用三七提取物一次性灌胃彼格犬,取给药后2 h的血清作为实验药物血清.以免疫组织化学法检测药物血清对MC细胞作用72 h后bcl-2、Bax和p21WAF13种凋亡相关基因蛋白表达情况,并与正常培养的MC细胞相比较.结果:药物血清作用后的MC细胞中Bax和p21WAF1的表达较正常培养的MC细胞升高(P<0.01);Bc1-2表达较正常培养的MC细胞降低(P<0.01).结论:三七提取物入血后可能是通过影响bc1-2、Bax和p21WAF1等对于凋亡具有调控作用的基因表达来实现对胃癌前细胞的抑制增殖及促凋亡作用的.     

三七提取物对GES-1细胞及MNNG转化后GES-1细胞增殖的抑制作用

目的:通过细胞培养方法,由研究灌服三七提取物后的犬血清对胃癌前细胞的抑制作用入手,以期找出三七入血后的最佳作用时间点(段).方法:采用永生化的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞以及N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitroso-guanidine,MNNG)进一步转化GES-1细胞后获得的细胞(以下简称MC细胞)作为胃癌前病变细胞的体外研究模型;以三七水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清、给药后不同时点的血清作为实验药物血清.以四甲基固氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法分别检测每个采血时间点上不同浓度(8%、4%、2%)含药血清对GES-1及MC细胞作用72 h后的抑制情况,并根据结果找出抑制作用最佳的药物血清时间点.结果:2 h和6 h含药血清刺激下的抑制率最高,两个时间点含8%药物血清的培养基对两种细胞的抑制作用均十分显著,其中2 h 8% GES-1组抑制率为70.8%(P<0.01),2 h 8%MC组抑制率为45.3%(P<0.01); 6 h 8%GES-1组抑制率为88.5%(P<0.01), 6 h 8%MC组抑制率为42.4%(P<0.01).结论:灌服三七提取物后2 h、6 h取的药物犬血清对GES-1及MC细胞的增殖抑制作用最强.     

三七提取物含药血清对MNNG转化后GES-1细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响（英文）

目的：研究三七提取物犬药物血清作用于胃癌前细胞后,其凋亡相关基因蛋白表达的变化。方法：采用被N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍（N-methyl-N＇-nitroso-guanidine,MNNG）转化后的永生化人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞（简称MC细胞）作为胃癌前病变细胞的体外研究模型,用三七提取物一次性灌胃彼格犬,取给药后2 h的血清作为实验药物血清。以免疫组织化学法检测药物血清对MC细胞作用72h后bcl-2、Bax和p21^WAF1 3种凋亡相关基因蛋白表达情况,并与正常培养的MC细胞相比较。结果：药物血清作用后的MC细胞中Bax和p21^WAF1的表达较正常培养的MC细胞升高（P〈0.01）;Bcl-2表达较正常培养的MC细胞降低（P〈0.01）。结论：三七提取物入血后可能是通过影响bcl-2、Bax和p21^WAF1等对于凋亡具有调控作用的基因表达来实现对胃癌前细胞的抑制增殖及促凋亡作用的。     

冬凌草甲素协同马法兰对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察冬凌草甲素（oridonin）和马法兰( melphalan)单药及联合用药对人骨髓瘤RPMI-8226细胞生长、凋亡和细胞周期的影响及二者的协同作用,阐明药物联合应用对骨髓瘤细胞的毒性增强作用。方法: 本实验共设4个RPMI-8226细胞处理组,即空白对照组（未加任何药物）、冬凌草甲素（10 μmol/L）组、马法兰（30 μmol/L）组和联合（冬凌草甲素 10 μmol/L + 马法兰 30 μmol/L）组。MTT法检测各用药组作用不同时间后RPMI-8226细胞的增殖抑制率,采用两药相互作用指数（CDI）评价联合用药性质;Annexin-Ⅴ/PI双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测药物作用前后细胞周期分布。结果:与空白对照组比较,冬凌草甲素组、马法兰组和联合组RPMI-8226细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01),均具有时间-效应依赖性,联合组各时间点细胞增殖抑制率明显高于单药组(P<0.01)。各时间点CDI值均小于1,即冬凌草甲素可协同提高马法兰的细胞毒作用。冬凌草甲素和马法兰单独处理RPMI-8226细胞36 h,细胞凋亡率分别为15.01%±0.47％ 和20.03%±1.30％,而联合组细胞凋亡率为43.06%±1.96％,与单药组比较显著升高(P<0.01)。流式细胞术DNA含量分析,各药物组RPMI-8226细胞主要阻滞于G0/G1期,S期细胞比例明显减少,除冬凌草甲素组S期细胞比例外,其余药物组各期细胞比例与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合组与单药组比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论: 冬凌草甲素联合马法兰通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制骨髓瘤细胞的增殖,其作用具有协同性。     

范德他尼联合5-氟尿嘧啶对肝癌细胞HepG2的作用研究

目的 探讨范德他尼(ZD6474)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌细胞HepG2的杀伤作用.方法 用MTT法检测ZD6474、5-氟尿嘧啶单药及其联合对HepG2细胞的增殖抑制,同时采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况.结果 ZD6474单药及5-FU单药对HepG2均有明显抑制作用,两药联合具有明显的协同作用(P<0.05).ZD6474主要使细胞阻滞于G0/G1期,5-FU则使细胞阻滞于S期.两药联合治疗同时产生G0/G1及S期阻滞.联合组凋亡率显著高于任一单药组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ZD6474和5-FU对肝癌HepG2细胞能产生增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用.     

通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:通过观察通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨通络散结丸治疗乳腺肿块性疾病的可能机制。方法:制备通络散结丸含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶CYP19及雌激素受体ER mRNA表达水平;流式细胞术(FCM)测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线。结果:与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24 h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19 mRNA、ER mRNA表达水平,表达水平分别降低0.346和0.128倍;药物血清作用48 h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以S期最为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48 h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96 h时抑制效果最明显。结论:通络散结丸药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制细胞生长。     

环孢素对体外培养人系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的 观察环孢素A对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 对体外培养的人肾小球系膜细胞分别加入0.01,0.1,1,2,5 μmol/L的环孢素A,药物作用24 h,48 h,72 h后用MTT法检测细胞增殖,药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,同时每种方法均设立对照组(不加药物干预组).结果 ①环孢素A能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,以72 h抑制作用最为明显;不同药物浓度在作用24 h,48 h,72 h后,系膜细胞增殖与对照相比差异均具有统计学意义(P<0.05);②环孢素A可阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,且随着药物浓度的增加,G0/G1期所占百分比逐渐增高,S期所占百分比逐渐降低,且其差异与对照相比具有统计学意义(P<0.05);③高浓度环孢素A可促进系膜细胞的凋亡.结论 环孢素A可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0/G1期;并且环孢素A有诱导系膜细胞凋亡的作用.     

生长激素对结肠癌肿瘤细胞体外影响

目的: 检测生长激素对体外培养的结直肠癌细胞的影响,并探讨其作用机制?方法:结肠癌细胞株Lovo细胞随机分组,加或不加不同浓度的生长激素孵育不同时间后,以MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况?结果:MTT法测定表明,生长激素对Lovo细胞有明显的促进增殖效应,12~24 h起效,48 h时达高峰,生长激素达到一定浓度后,其促增殖作用不再增加?流式细胞仪检测生长激素对结肠癌细胞的影响显示:浓度为200 ng/ml的生长激素作用Lovo细胞24 h后,G0/G1细胞比例下降,S期细胞比例明显上升,G2/M期细胞比例稍上升,凋亡指数无明显变化(P=0.187);72 h时, G0/G1期细胞下降更为明显,S期细胞比例上升亦更为明显,G2/M期细胞上升明显,凋亡细胞比例明显增高(P < 0.01)?结论:生长激素对Lovo细胞有明显的促增殖作用,并有受体饱和效应?该作用是通过改变细胞周期分布,促进G0/G1期细胞向S期?G2/M期细胞转变实现的?     

ZD6474联合阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用

目的探讨ZD6474联合阿霉素对乳腺癌细胞MCF-7的抑制及杀伤作用。方法用MTT法检测ZD6474、阿霉素单药及其联合对MCF-7细胞的增殖抑制程度,同时采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果ZD6474单药及阿霉素单药对MCF-7细胞均有明显抑制作用,两药联合具有协同作用(P<0.05)。ZD6474主要使细胞阻滞于G0/G1期,阿霉素则使细胞阻滞于S期。两药联用后同时阻滞于G0/G1及S期。联合组凋亡率明显高于单药组(P<0.05),差异有统计学意义。结论ZD6474和阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用。     

三七醇提液对恶性肿瘤肝转移的干预作用

目的:观察三七醇提液对恶性肿瘤肝转移的干预作用。方法:建立肿瘤肝转移模型,观察不同剂量三七醇提液对荷瘤肝转移小鼠生存质量、肿瘤生长和肝转移的影响。结果:三七醇提液可以改善荷瘤肝转移小鼠的全身情况,并具有明显的抑瘤和抗肝转移作用,这种作用又以三七醇提液中、低剂量组更为明显。结论:三七醇提液可改善荷瘤鼠全身情况,并具有抑瘤、抗转移的作用。     

人参、三七、川芎提取物对血管平滑肌细胞衰老相关β半乳糖苷酶及p16-cyclinD/CDK-Rb通路的影响

目的：观察人参、三七、川芎提取物延缓自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat,SHR）血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法：取大鼠胸主动脉用于分离VMSC,采用原代细胞培养的方法建立SHR大鼠VMSC模型,实验分为Wistar-Kyoto（WKY）大鼠对照组、SHR模型组、缬沙坦组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用衰老相关β半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色法观察细胞衰老情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测各组细胞p16、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase4,CDK4）和成视网膜母细胞瘤蛋白（retinoblastoma protein,Rb）的表达。结果：SA-β-gal染色显示,与WKY组比较,SHR组SA-β-gal阳性细胞数明显增多（P〈0.01）,人参、三七、川芎提取物可使SHR VSMC SA-β-gal阳性细胞数明显减少（P〈0.01）;流式细胞仪检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC在G1期明显减少,S期细胞明显增加,中药干预后SHR的VSMC G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少（P〈0.05）;实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16和Rb mRNA表达量明显减少,cyclin D1和CDK4mRNA表达增加;人参、三七、川芎提取物干预后SHR VSMC p16和Rb mRNA表达量增加,cyclin D1和CDK4mRNA减少。蛋白质印迹法显示,与WKY组比较,SHR组VSMC的p16蛋白表达量明显减少,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量明显增加（P〈0.05）;中药干预后SHR VSMC p16蛋白表达增加,cyclin D1、CDK4和磷酸化Rb蛋白表达量减少（P〈0.05）。结论：人参、三七、川芎提取物通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达而发挥延缓SHR VSMC衰老的作用。     

扶正抑瘤颗粒药物血清诱导小鼠肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:采用扶正抑瘤颗粒药物血清,温育体外培养的H22小鼠肝癌细胞.流式细胞仪进行细胞周期分析,检测凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构变化;链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin-biotin peroxidase complex,SABC)免疫细胞化学法观察凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的变化.结果:扶正抑瘤颗粒药物血清可影响细胞周期,使小鼠肝癌H22细胞的增殖阻滞在G1/G0期,并可测到凋亡峰,同时可下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达(扶正抑瘤颗粒药物血清组与空白对照组比较,P<0.05).结论:扶正抑瘤颗粒可通过影响细胞生长周期,调节Bcl-2和Bax蛋白的表达诱导小鼠肝癌细胞凋亡.     

大黄虫丸含药血清对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的:观察大黄虫丸含药血清对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法:12只SD大鼠随机分为大黄虫丸组(DHZCW组)、鸦胆子组、生理盐水组,按常规方法制备含药血清。然后以细胞培养液将含药血清稀释成不同的浓度(40%、20%、10%、5%),采用MTT法检测不同浓度含药血清对A549细胞增殖的影响。结果:与生理盐水组比较,20%、40%DHZCW组和20%、40%鸦胆子组OD值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与鸦胆子组比较,40%DHZCW组OD值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大黄虫丸含药血清与鸦胆子油口服乳液含药血清均具有体外抑制人肺腺癌A549细胞增殖的作用。     

三七总皂苷联合阿糖胞苷对K562细胞的影响

[目的]考察三七总皂苷联合应用阿糖胞苷对白血病细胞K562细胞活力、增殖抑制、诱导凋亡的协同作用.[方法]处于对救生长期的白血病K562细胞,给予三七总皂苷、阿糖胞苷以及两药的联合,采用MTT试验、集落形成实验、Annexin V-PI双染流式细胞检测等实验手段进行分析检测.[结果]单用三七总皂苷对K562白血病细胞有一定的增殖抑制作用,对抑制集落形成和诱导凋亡作用不明显;相同剂量的三七总皂苷联用阿糖胞苷后,对K562细胞的增殖抑制、集落形成和凋亡有明显的增强.[结论]三七总皂苷联用阿糖胞苷对白血病细胞K562有明显的抗肿瘤作用,提示三七总皂苷可提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,为临床用三七总皂苷抗白血病的辅助治疗提供依据.     

健脾益气化瘀解毒方含药血清对结肠癌 HCT116细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的探讨健脾益气化瘀解毒方含药血清对人结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关蛋白Bcl-x L和Bax蛋白表达的影响。方法 10%、15%、20%健脾益气化瘀解毒方含药血清处理HCT116细胞12、24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖;不同浓度含药血清处理24、48 h后,碘化丙啶染色法检测细胞周期及凋亡率。蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞内Caspase-3,Bcl-x L和Bax蛋白的表达;对照组均予以相同浓度空白鼠血清及10%胎牛血清(FBS)。结果细胞增殖:12 h后15%、20%含药血清与相同浓度鼠空白组比较,对HC116细胞的抑制作用具有统计学意义(P0.05),72 h对HCT116细胞的抑制作用最强(P0.05),健脾益气化瘀解毒方含药血清对HCT116细胞增殖具有良好的抑制作用,并与时间、浓度呈正相关。细胞周期:10%及15%含药血清组G2期细胞减少,而G1期与S期细胞增多,20%含药血清组G1期与S期细胞减少,而G2期细胞增加,48 h作用明显,而空白鼠血清细胞周期则无明显变化,说明含药血清能阻滞细胞周期,与时间呈正相关。细胞凋亡:与相应浓度对照组比较,含药血清处理24、48 h后,HCT116细胞晚期凋亡率增加,并且随浓度、时间增加凋亡率增加(P0.05),说明含药血清能促使HCT116细胞凋亡,与时间、浓度呈正相关。Western blot检测显示,与空白鼠血清组相比,15%含药血清可上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3、Bcl-x L的蛋白表达(P0.05)。结论健脾益气化瘀解毒方可能通过将结肠癌HCT116细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,通过上调凋亡相关蛋白Bax,下调Caspase-3、Bcl-x L蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

三七对胃癌前病变大鼠胃粘膜癌基因蛋白异常表达的影响

采用幽门弹簧插入加热糊复合方法 16周复制大鼠胃癌前病变模型 ,免疫组化法检测三七粉0 .6 g/ (kg·d)治疗 12周对胃癌前病变大鼠胃粘膜上皮细胞表皮生长因子受体 (EGFR)、C erbB 2、H ras、Bcl 2等癌基因蛋白表达水平的影响。结果显示大鼠癌前病变胃粘膜上述 4种癌基因蛋白阳性表达细胞较正常组大鼠明显增多 ,表达强度显著增强 (P <0 .0 1) ,而三七治疗组 4种癌基因蛋白阳性细胞数和表达强度均显著低于模型组和蒸馏水组 (P <0 .0 1)。提示胃癌前病变大鼠胃粘膜上皮细胞存在着EGFR、C erbB 2、H ras、Bcl 2等癌基因表达的异常增高现象 ,三七则有可能通过降低上述癌基因的异常表达发挥治疗胃癌前病变的作用。