免疫抑制剂姜黄素逆转胰岛素抵抗的研究

【目的】为探讨姜黄素（curcumin）对胰岛素抵抗的治疗作用及其机制。【方法】利用胰岛素抵抗的小鼠模型,观察姜黄素对小鼠胰岛素抵抗的水平、转录因子I-κBα、循环细胞因子的变化。【结果】①姜黄素能抑制TNFα刺激Fao细胞NF-κB激活;②姜黄素治疗后小鼠的空腹血糖水平没有明显下降,但空腹胰岛素的水平下降约30%,葡萄糖耐量曲线的水平也明显下降;③循环中TNFα[（34.5±3.4）pg/mL vs（31.3±1.1）pg/mL]水平没有明显改变,而IL-1β[（33.9±3.2）pg/mL vs（15.6±1.1）pg/mL]和IL-6[（72.1±9.8）pg/mL vs（47.2±5.3）pg/mL]水平明显被抑制;④胰岛素刺激的IRS-1酪氨酸的磷酸化水平明显升高,而胰岛素受体的磷酸化水平没有明显改变。与IRS-1酪氨酸的磷酸化水平平行,P85的磷酸化水平也明显升高,AKT的磷酸化的水平也明显升高。【结论】姜黄素能提高小鼠胰岛素敏感性,有治疗改善肥胖诱导的胰岛素抵抗的作用。     

TNF琢对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

【目的】探讨肿瘤坏死因子琢(TNF琢)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据。【方法】脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析。【结果】①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF琢刺激浓度分别为0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNF琢刺激浓度达20ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P<0.05)。②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNF琢(5ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNF琢作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNF琢刺激浓度分别为10ng/mL(31.16%±10.44%)和20ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P<0.001)。【结论】①TNF琢刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取。②TNF琢可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系,可能阻碍了胰     

胰岛素抵抗大鼠的肝脏中丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与血清TNF-α相关

目的 探讨胰岛素抵抗大鼠胰岛素受体底物-1丝氨酸,酪氨酸磷酸化与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的关系.方法 雄性Wistar大鼠30只(体质量80～120 g),随机分为普通饮食组(NC)及高脂饮食组(FH)2组,每组15只.喂养10周,以高胰岛素-正常血糖钳夹技术评估胰岛素抵抗大鼠模型.应用ELISA法检测大鼠血清TNF-α含量,Western Blot法检测肝脏组织中胰岛素受体底物-1丝氨酸磷酸化(IRS-ISer636)及酪氨酸磷酸化(IRS-ITyr456)表达.结果 FH组葡萄糖输注率(GIR)60-120水平明显低于NC组[(1.56±0.43 vs.5.15±0.66)mg/(kg·min),P<0.01];FH组大鼠TNF-α、IRS-ISer636均高于NC组[(15.43±2.16 vs.5.4±2.16)pg/mL,P<0.01;(109.45±13.75 vs.94.23±15.05),P<0.05],IRS-ITyr456水平低于NC组[(111.08±14.28 vs.125.77±14.51),P<0.05].TNF-α水平与IRS-ISer636呈正相关(r=0.503,P=0.024),与IBS-ITyr456呈负相关(r=-0.521,P=0.019).结论 胰岛素抵抗大鼠TNF-α水平与IRS-ITyr456负相关,与IBS-ISer636正相关,提示TNF-α引起胰岛素抵抗机制可能与IBS-1磷酸化异常有关.     

TNFα对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

[目的]探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据.[方法]脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析.[结果]①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF α刺激浓度分别为0、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNFα刺激浓度达20 ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P＜0.05).②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNFα(5 ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNFα作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNFα刺激浓度分别为10 ng/mL(31.16%±10.44%)和20 ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P＜0.001).[结论]①TNFα刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取.②TNFα可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系,可能阻碍了胰岛素的受体后信号传导并与IR有关.     

新诊断2型糖尿病患者血清炎症因子及外周血单个核细胞中核因子κB活性变化

 【目的】探讨新诊断2型糖尿病患者血清炎症因子超敏-C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平及外周血单个核细胞（PMNC）中NF-κB的活性变化。【方法】选择健康成人66例，新诊断2型糖尿病患者92例，分为正常对照组和2型糖尿病组，分析比较两组血清炎症因子及PMNC中NF-κB活性水平。血清hs-CRP、TNF-α、IL-6采用酶联免疫吸附法测定。免疫印迹分析检测PMNC中核因子KBp65（Set^536）的磷酸化水平，β-actin作为内参。【结果】2型糖尿病组患者的血清CRP、IL-6、INF-α水平均显著高于正常对照组（P〈0．001）；糖尿病组患者PMNC中NF-κB P65（Ser^536）磷酸化水平高于正常对照组（0．85±0．38vs0．47±0．25，P〈0．05）；在糖尿病组，log（CRP）与质量指数（BMI）、腰围、腰臀比、稳态模型法估计的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、log（IL-6）、log（TNF-α）、糖基化血红蛋白（hemoglobin，Alc）呈正相关。【结论】结果提示2型糖尿病患者处于炎症状态，血清炎症因子水平及PMNC中NF-κB活性的升高可能与胰岛素抵抗和动脉粥样硬化的形成有关。     

胰岛素抵抗大鼠肝脏丝氨酸/酪氨酸磷酸化IRS-1表达异常与脂联素相关的研究

目的 探讨胰岛素抵抗大鼠丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与脂联素(APN)的关系.方法 高脂饲料喂养10周建立胰岛素抵抗大鼠模型,并用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术评估.应用ELISA法检测大鼠血清APN含量,Western blot法检测肝脏组织中胰岛素受体底物1(IRS-1)磷酸化丝氨酸(IRS-1Ser636)及磷酸化酪氨酸(IRS-1Tyr465)表达.结果 高脂组大鼠葡萄糖榆注率(GIR60～120)明显低于基础饲料组(1.56±0.43vs5.15±0.66 mg·kgM-1·min-1,P<0.01);与基础饲料组相比,高脂饲料组大鼠血清APN水平显著降低(0.70±0.07vs 0.85±0.12 pg/ml,P<0.01),IRS-1Tyr465蛳表达显著降低(111.68±13.41vs127.77±13.17,P<0.05),IRS-1Ser636水平显著升高(109.47±13.75vs94.23±15.05,P<0.05).血清APN水平与IRS-1Tyr465正相关(r=0.68,P<0.01),与IRS-1Ser636负相关(r=-0.70,P<0.0).结论 胰岛素抵抗大鼠APN水平与IRS-1Tyr465正相关,与IRS-1Ser626负相关,提示APN改善胰岛素抵抗机制可能与纠正IRS-1磷酸化异常有关.     

胰岛、肝细胞水平胰岛素抵抗与系统胰岛素抵抗关系的研究

目的通过观察酪氨酸磷酸化的胰岛素受体底物(P-Ikbα)在胰岛素抵抗小鼠肝脏、胰腺的表达随时间变化的差异性,了解细胞水平胰岛素抵抗与系统胰岛素抵抗的关系。方法 C57小鼠随机分为高脂组、胰岛素兴奋组和对照组,均尾静脉监测血糖、体重及胰岛素水平变化。取肝脏、胰腺应用Western Blot方法检测P-Ikbα的表达。结果与对照组相比,高脂组和胰岛素兴奋组肝脏、胰腺P-Ikbα蛋白表达随时间延长而减少。血清胰岛素水平在造模第7天升高,而肝脏的IRS-1酪氨酸磷酸化在第14天末低于正常对照组,胰腺在第21天末低于正常组。结论肝脏IRS-1酪氨酸磷酸化水平的降低早于胰腺;血清胰岛素升高发生时间早于细胞水平胰岛素抵抗发生时间。     

Giα介导的胰岛素信号转导在烫伤大鼠胰岛素抵抗中的作用

目的：探讨Giα介导的胰岛素信号转导在烫伤大鼠胰岛素抵抗中的作用，初步阐明烫伤后发生胰岛素抵抗的信号转导分子机理。方法：①Western杂交检测严重烫伤大鼠肝脏细胞Giα含量的变化规律，并检测烫伤3d大鼠肝脏细胞IRS-1的酪氨酸磷酸化。②血糖仪和放射免疫法检测烫伤大鼠血糖及胰岛素水平，并统计分析与Giα表达水平的关系。结果：①烫伤后1-6d肝细胞Giα明显降低，以伤后第3天最为明显。同步检测IRS-1的酪氨酸磷酸化，发现在胰岛素刺激下IRS-1不能发生酪氨酸磷酸化。②烫伤大鼠血糖和胰岛素水平均明显升高。对烫伤3d的血糖和Giα进行相关分析，发现Giα的表达水平和血糖呈明显的负相关。结论：Giα表达减少可能是烫伤大鼠IRS酪氨酸磷酸化障碍及产生胰岛素抵抗的一个重要机制。     

替米沙坦对高血压病脉压和CRP、TNF-α、IL-6的影响

 【目的】 检测高血压病患者血浆hs-CRP?TNF-α?IL-6水平,探讨其与脉压的关系?观察其受替米沙坦/HCT和比索洛尔的影响,分析两类药物抗炎和降低脉压作用的差异?【方法】 90例高血压病患者和15例健康对照者,检测血浆hs-CRP?TNF-α?IL-6水平;高血压病患者随机分为两组,分别应用替米沙坦/HCT(80 mg/12.5 mg,qd )和比索洛尔(5 mg,qd)治疗6周,观察两亚组患者血压?脉压及血浆hs-CRP?TNF-α?IL-6水平的变化?【结果】 和健康对照组比较,高血压病患者血浆炎症因子水平升高[hs-CRP(mg/L)3.4±3.1 vs 1.2±1.6,TNF-α(pg/L)4.5 ± 3.1 vs 1.1 ± 1.3,IL-6(pg/L)187 ± 43 vs 36 ± 11,均P < 0.05];高血压病患者分组治疗6周后,替米沙坦/HCT组患者血浆炎症因子水平明显下降,而比索洛尔组无明显变化[降低值hs-CRP(mg/L)1.83 ± 1.67 vs 0.10 ± 1.50,TNF-α(pg/L)2.4 ± 1.9 vs 0.2 ± 1.2,IL-6(pg/L)48 ± 13 vs 12 ± 8,均P < 0.05],替米沙坦组脉压的下降较比索洛尔组明显[PP(mmHg)8.5 ± 7.6 vs 2.1 ± 8.9,P < 0.05)]?【结论】 高血压病患者血浆hs-CRP?TNF-α?IL-6水平升高?可能与脉压有关,替米沙坦/HCT较比索洛尔更明显降低脉压和炎症因子水平?     

姜黄素抑制脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞炎症反应

目的：探讨姜黄素（curcumin）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells, RPE）炎症反应的抑制作用。方法：体外培养人RPE细胞株ARPE-19,CCK-8测定不同浓度姜黄素（5、10、20、30、40 ?滋mol/L）或不同浓度姜黄素和脂多糖（5 ?滋g/mL）刺激后细胞的活性,以此确定姜黄素的最适作用浓度。实时荧光定量（real-time poly－merase chain reaction, RT-PCR）检测白细胞介素（interleukin,IL）-8和IL-6的mRNA表达变化,酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定IL-6和IL-8的蛋白表达水平。Western blot检测IκB-α、p-IκB-α蛋白表达变化。结果：CCK-8：不同浓度姜黄素对ARPE-19细胞活性无影响（P5 ?滋mol/L=0.998,P10 ?滋mol/L=1.000,P20 ?滋mol/L=0.124,P30 ?滋mol/L=0.092,P40 ?滋mol/L=0.078）,预先作用不同浓度的姜黄素对细胞活性有保护作用,20 ?滋mol/L保护作用明显（P=0.041）。PCR：姜黄素+LPS组IL-8的mRNA相对表达量（4.965±3.863）比LPS组（106.331±37.314）明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的mRNA相对表达量（0.992±0.374）比LPS组（2.175±0.560）明显降低（P=0.005）。ELISA：姜黄素+LPS组IL-8的蛋白表达量[（191.600±18.773） pg/mL]比LPS组[（589.025±38.880） pg/mL]明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的蛋白表达量[（113.906±27.947） pg/mL]比LPS组[（243.380±38.001） pg/mL]明显降低（P=0.000）。Western blot：与LPS组相比较,姜黄素+LPS组的p-IκB-α蛋白的表达水平降低（P=0.001）。结论：姜黄素通过抑制NF-κB活性抑制了脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞的炎症反应,保护视网膜色素上皮细胞。