临床实验室CD34 +细胞计数检测现状与改进措施分析

目的:调查临床实验室开展CD34 +细胞计数的检测现状,分析存在的问题,为制定质量改进方案提供依据。 方法:以参加CD34 +细胞计数全国室间质量评价活动的101家实验室为调查对象,通过问卷调查和质评物检测,收集相关检测方法学信息及质评物检测结果。参考国内外指南文件确定CD34 ...     

鼻咽癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的检测

目的:探讨鼻咽癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T(Tr)细胞的变化及临床意义.方法:采用流式细胞检测技术对47例鼻咽癌患者以及18例健康者外周血CD4 CD25 T细胞进行观察,并比较不同病期的变化情况.结果:鼻咽癌患者外周血中CD4 CD25 T细胞的比例为(4.47±2.15)%,高于正常对照组(1.70±0.84)%(P＜0.05).鼻咽癌Ⅰ期外周血CD4 CD25 T细胞比例为(2.99±2)%;Ⅱ期为(3.54±1.97)%;Ⅲ期为(4.53±1.56)%,Ⅳ期为(6.53±1.73)%.Ⅰ Ⅱ期组为(3.3±1.88)%,低于Ⅲ Ⅳ期组的(5.53±1.88)%,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:鼻咽癌患者外周血CD4 CD25 T细胞与鼻咽癌病变的进展有关,并对鼻咽癌病人的免疫具有抑制作用.     

应用流式细胞仪检测脐血CD34+细胞的绝对值计数

[目的]应用流式细胞仪技术(FCM)精确测定CD34 细胞的绝对值计数,以指导脐血输注标本的选择,评价脐血的造血潜能.[方法]收集脐血100份,应用FCM测定CD34 细胞的绝对值计数,统计分析其与脐血常规、分娩方式及新生儿体重的关系.[结果]脐血CD34 细胞的绝对值均数为(48.5±27.9)/μL,与脐血白细胞有显著相关性,与红细胞、血小板无相关性.与新生儿体重有显著相关性.各分娩方式之间CD34 细胞的绝对值均散无差异.[结论]选择脐血白细胞计数较高、高出生体重儿及CD34 细胞绝对值计数高(＞100/μL)的脐血进行输注或移植将更有效.     

肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的: 探讨肺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞的变化及意义. 方法: 采用流式细胞技术检测60例肺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞的变化,并与健康对照组进行比较. 结果: ①肺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞总数高于健康对照者[(14.7±1.8)% vs (6.5±1.4)%, P<0.05];②化疗前肺癌患者外周血中CD4 CD25 T细胞明显高于化疗后[(14.7±1.8)% vs (6.8±1.4)%, P<0.05];③同时发现肺癌患者恶性程度越高,转移及分化程度低者CD4 CD25 T的表达水平越高,其预后也越差. 结论:肺癌患者外周循环血中CD4 CD25 T细胞水平较高,可能与肺癌患者免疫功能受损有关,可作为评估肺癌患者预后的一项指标.     

造血干细胞移植中单个核细胞计数与CD34~+细胞计数的比较

目的探讨造血干细胞移植中单个核细胞（MNC）计数与CD34＋细胞细胞计数之间的比较。方法 2006年4月-2012年8月,32例患者（男18例,女14例,中位年龄32岁）在我院进行外周血造血干细胞移植。25例自体、7例异基因（5名父系供者,2名同胞供者,男5例,女2例,中位年龄28岁）接受统一的动员方案,用全自动血细胞分离机以MNC程序进行外周血造血干细胞（PBSC）采集。32例患者均进行MNC计数及CD34＋细胞计数,进行相关分析,比较两种计数指标对造血重建的影响。结果①32例受者输入MNC的中位数为6.75（2.92-18.76）×108/Kg,输入CD34＋细胞的中位数5.03（2.35-15.14）×106/Kg;②32例受者造血重建均达到了100%。。结论 MNC作为造血干细胞含量的计数依据,其植活率和植活速度与CD34＋细胞作为依据的病例相似,结果表明：MNC计数完全可代替CD34＋细胞计数,可作为造血干细胞移植中造血干细胞含量的指标。     

类风湿关节炎患者外周血CD4+CD25+CD127-调节T细胞的检测及临床意义

目的探讨CD4＋CD25＋CD127-调节T细胞（Treg）在类风湿关节炎中的诊断价值及临床意义。方法选取42例类风湿关节炎（RA）患者和20正常健康者分为两组,采用流式细胞仪检测两组调节T细胞的表达频率,检测两组实验室指标,观察两组实验室指标与调节T细胞的关系。结果与正常对照组相比,RA组白细胞（WBC）、免疫球蛋白A（IgA）、抗链球菌溶血素O（ASO）、类风湿因子（RF）、糖酸蛋白（α1-AGP）、C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）显著升高（P〈0.05或P〈0.01）;血红蛋白（Hb）、CD25＋T细胞、CD4＋CD25＋T细胞、CD4＋CD25＋CD127-T细胞的表达频率降低（P〈0.05）。Spearman相关分析显示,CD25＋T细胞与Hb、IgM、ESR呈正相关,CD4＋CD25＋CD127-T细胞与IgM呈正相关（P〈0.01或P〈0.05）;CD25＋T细胞与RBC、IgA呈负相关,CD4＋CD25＋T细胞与补体C4呈负相关,CD4＋CD25＋CD127-T细胞与ASO呈负相关（P〈0.05）。结论CD4＋CD25＋CD127-Treg在RA患者的外周血中显著降低,并且与疾病的活动性高度相关,说明调节T细胞可能参与了RA的发病,早期检测可能为RA的诊断及治疗提供依据。     

小剂量G-CSF联合GM-CSF动员外周血CD34+细胞

目的 探讨小剂量粒单巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员外周血干细胞的效率。方法 20例成人恶性血液病按统计学配对方法等分为2组。非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)患者化疗方案为环磷酰胺2.0 g/d,静脉滴注,第1~2天,足叶乙甙0.2 g/d,静脉滴注,第1~3天;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者用阿糖胞苷2.0 g/d,静脉滴注,第1~3天,足叶乙甙用法同NHL。当白细胞低于1.0×10⁹/L时研究组10例应用GM-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.联合G-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.;对照组单用G-CSF 5 μg/d·kg·b.w.,全部皮下注射5~6 d。白细胞5.0×10⁹/L以上时应用CS-3000 pluse分离外周血单个核细胞,流式细胞术计数CD34⁺细胞。结果 产品细胞分类计数单个核细胞占95%~99%,在研究组CD34⁺细胞平均采集9.4(8.4~10.2)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 42.4(21.9~72.8)×10⁴/kg·b.w.,对照组平均采集CD34⁺细胞4.8(4.1~8.3)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 28.1(7.1~60.2)×10⁴/kg·b.w.,2组差异显著(P<0.05)。副作用2组相似。结论 恶性血液病患者化疗后应用G-CSF联合GM-CSF动员CD34⁺细胞的效果优于单用G-CSF。     

G-CSF动员的外周血与骨髓CD34+细胞黏附分子的表达

目的：研究黏附分子在外周血干细胞动员机制中的作用。 方法：应用流式细胞仪检测粒细胞集落刺激因子G-CSF动员的外周血细胞与骨髓CD34⁺细胞表达的黏附分子非常延迟抗原4(VLA-4)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)和L-选择素(CD62L)。 结果：G-CSF动员后的外周血CD34⁺细胞表达的VLA-4、LFA-1与骨髓CD34⁺细胞相比明显减少,CD62L无明显改变。 结论：黏附分子VLA-4及LFA-1降低可能是G-CSF动员造血干细胞进入外周血过程中的一个重要环节。     

外周血CD34~+细胞与急性脑梗死及脑血管病危险因素的相关性

目的:探讨急性脑梗死是否会动员CD34+细胞到外周血及其与脑血管病危险因素的相关性。方法:筛选急性脑梗死32例(A组),脑血管病危险因素32例(B组),健康对照组20例(C组)。流式细胞仪测定外周血CD34+含量。结果:①A、B、C 3组CD34+含量分别为(0.036±0.023)%,(0.073±0.021)%和(0.094±0.022)%,有显著性差异(P<0.001)。②CD34+含量与高血压、糖尿病呈负相关,与HDL-C/LDL-C呈正相关(P<0.05)。吸烟,TC,HDL,LDL与CD34+无相关性(P>0.05)。③高血压、糖尿病、HDL/LDL是CD34+含量的独立影响因素(P<0.05)。④CD34+含量越低,CSS评分越高。结论:①急性脑梗死动员CD34+细胞到外周血效率差。②脑血管病危险因素中高血压、糖尿病患者外周血中CD34+含量降低,HDL-C/LDL-C增高能增加外周血中CD34+含量,可能通过影响其危险因素参与了急性脑梗死的发生发展。     

流式细胞仪检测晚期肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的临床意义

目的 检测晚期肺癌患者外周血中CD4+ T细胞、CD4+CD25+ T细胞、CD4+FOXP3+ T细胞亚群,分析其在不同类型肺癌中表达的特点,以探讨在晚期肺癌患者中检测CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞的临床意义.方法 收集我院初次收治的晚期肺癌患者71例(其中鳞癌35例、腺癌33例、腺鳞癌3例)和同期健康查体正常者28例的外周血,采用流式细胞术检测外周血中相应的T细胞亚群.比较其在晚期肺癌患者与正常人之间以及不同类型肺癌中表达的差异及特征.结果 ①晚期肺癌患者CD4+CD25+ T细胞、CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+T细胞的比例分别为24.3%±7.8%和7.9%±2.1%,与对照组(19.1%±3.4%和5.9%±3.5%)相比均明显升高,差异有显著性(P＜0.01).CD4+ T细胞占总淋巴细胞的比例以及CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例与对照组相比,差异无显著性(P>0.05).②鳞癌中CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+ T细胞的比例为6.8%±1.9%,低于腺癌(7.7%±1.1%),差异有显著性(P＜0.05).结论 ①在肺癌患者外周血中,CD4+ T细胞占总淋巴细胞的比例同正常人相比无变化,CD4+CD25+ T细胞和CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+ T细胞均明显增多.②在不同类型肺癌中,CD4+FOXP3+ T细胞比例数是腺癌高于鳞癌.     

深低温冻存对SLE患者外周血CD34+ 阳性细胞活性的影响

目的探讨深低温冻存对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血CD34^＋细胞活性的影响。方法ClinMACS磁性分选系统分选CD34^＋细胞。采用5％二甲基亚砜,6％羟乙基淀粉和4％人血白蛋白作冷冻保护剂,-80℃直接冻存。观察不同时相复温后的细胞台盼兰拒染率、CFU—GM计数以及移植后造血恢复时间。结果SLE患者与正常人脐血CD34^＋细胞冻存后1～90d,细胞活性无明显差异。SLE患者与非自身免疫性疾病患者同样方法冻存造血干细胞,移植后造血恢复特征相似。结论-80℃深低温保存对SLE患者造血干细胞活性无影响。     

脐血CD34^＋细胞分离方法比较

目的：比较不同方法分离脐血单个核细胞（MNC）及纯化CD34＋细胞效果。方法：采集脐血48份，在室温下保存12、24、48小时，分别用密度离心法和羟乙基淀粉（HES）沉淀法分离脐血MNC，再用免疫磁珠法纯化CD34^＋细胞，以台盼蓝拒染法检测细胞存活率。结果：脐血在室温下保存48小时分离MNC和CD34^＋细胞数最多．其次为12小时，在24小时分离所得最低（P〈0．05）；HES沉淀法较密度离心法分离所得MNC和CD34^＋细胞数明显增多（P〈0．05）；6组细胞存活率差异无统计学意义（P〉0．05）；免疫磁珠法纯化CD34^＋细胞可达（88±5）％的纯度。结论：HES沉淀法优于密度离心法，且48小时分离为优，免疫磁珠法纯化CD34＋细胞可提高纯度：各种方法对细胞存活率无明显影响。     

哮喘患儿急性发作期CD4+ CD25+ 调节性 T细胞水平和体质量指数的关系

 【目的】 探讨急性发作期哮喘患儿外周血CD4+ CD25+ 调节性T细胞(Tr)的变化及其与体质量指数(BMI)的关系&;#65377; 【方法】 外周血来自70例哮喘发作组患儿&;#65380;30例缓解组和50例正常对照组小儿&;#65377;将哮喘发作组再分为体质量正常组(40例)和超重组(30例)&;#65377;应用流式细胞术检测患儿外周血的Tr细胞数变化,并计算患儿的BMI&;#65377; 【结果】 急性发作期组患儿外周血Tr水平 [(6.17 ± 1.72)%]明显低于缓解期组患儿[(7.56 ± 1.48)%]和对照组儿童[(7.13 ± 1.48)%](P < 0.05),而缓解期患儿外周血Tr水平与对照组儿童无明显差异(P > 0.05)&;#65377;正常体质量哮喘患儿CD4+ CD25+ Tr水平[(6.34 ± 1.71)%]明显高于超重患儿[(4.74 ± 1.20)%](P < 0.05)&;#65377;哮喘组患儿外周血CD4+ CD25+ Tr水平[(6.17 ± 1.72)%]与其BMI水平(16.00 ± 2.14)呈显著的负相关(rp = -0.814,P < 0.05)&;#65377; 【结论】 外周血Tr水平在哮喘患儿发作期显著降低,而在超重的患儿更低,且其水平与患儿的BMI呈显著的负相关&;#65377;     

脐血CD34+细胞向内皮细胞定向诱导分化的实验研究

目的探讨人脐血CD34 细胞体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并检测其表型。方法采集新鲜脐血经抗凝处理及无菌包装,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34 单个核细胞,M-199培养基中诱导分化,细胞形态学观察CD34 和CD34-细胞生长情况,流式细胞仪检测内皮细胞CD31表型,免疫组化验证蛋白水平表达。结果细胞形态学观察发现,刚分离的CD34 和CD34-单个核细胞呈圆形,形态小。CD34 细胞培养3d后有明显集落形成,7d后呈梭行细胞,出现典型线样排列结构。经诱导培养后,内皮细胞表型CD31阳性率为(70.03±10.27)%。免疫组化染色证实了内皮特异性成分ecNOS和flk-1/KDR蛋白水平的表达。而CD34-细胞单独培养,少部分细胞贴壁,呈现出不规则形态。结论MACS法分离脐血CD34 细胞,体外诱导扩增和分化后贴壁细胞具有内皮细胞形态,通过流式细胞仪和免疫组化验证了贴壁细胞中大部分细胞具有内皮系标志物表达。     

体外培养与扩增对脐血CD34+细胞及HLA抗原表达的影响

采用免疫组织化学方法．观察脐血细胞体外培养与扩增前后ＣＤ３４~＋细胞的比例以及ＨＬＡ抗原的表达。结果表明：脐血ＣＤ３４~＋细胞的百分比以及ＨＬＡ抗原的表达于体外培养前后无显著性变化（Ｐ＞０．０５）,而在细胞因子的联合作用下,经一定时间的扩增后,ＣＤ３４~＋细胞百分比下降（Ｐ＜０．０１）,ＨＬＡ抗原的表达有一定程度的提高。提示：体外扩增对脐血ＣＤ３４~＋细胞的比例以及ＨＬＡ抗原的表达有一定的影响,而未加细胞因子的体外直接培养则不产生明显影响。     

多种细胞因子组合对脐血干/祖细胞体外扩增的影响

目的　探讨在体外培养液中不同细胞因子组合对脐血 CD34+ 细胞的扩增作用以及扩增后的 CD34+ 细胞的造血功能。方法　用 FL、SCF、TPO、IL - 3、TL - 6组合成不同的实验组 ,对脐血中分离纯化的 CD34+ 细胞经 6d的短期体外扩增 ,扩增后经流式细胞仪分析 ,L TC- IC、祖细胞集落群计数 ,从而求得较好的细胞因子组合组。结果CD34+ 细胞扩增倍数为 3 .1～ 8.6倍 ,16份脐血 CD34+ 细胞数达到 10× 10 6 以上的细胞总数 ;扩增的 CD34+ 细胞再造血功能与原始 CD34+ 细胞无显著差异。FL是扩增组合中不可缺少的细胞因子 ,同时还证实 TPO与其他细胞因子组合有扩增 CD34+ 细胞的作用 ,但单独使用 TPO稍长时间会使 CD34+ 细胞过多向巨核细胞分化。结论　 FST3 6细胞因子组合能使部份单位体积的脐血 CD34+细胞体外扩增达一定数量 ,为干细胞移植于成人提供了一定的实验依据与方法     

不同的冻存方法对脐血CD34~+细胞的影响

目的 :研究不同冻存方法对脐血CD34+ 细胞的影响 ,探讨脐血CD34+ 细胞先分离后冻存的可能性 ,以寻找脐血保存的更好方法。方法 :对 31份脐血采用全脐血直接冻存 ,分离为单个核细胞冻存 ,和分离为CD34+ 细胞冻存 ,3种不同的冻存方法 ;用造血祖细胞培养技术、活细胞染色技术、流式细胞技术等方法研究冻存前后脐血造血祖细胞活性的变化。结果 :冻存后细胞活度下降 ,集落形成率下降 ,以全脐血冻存组为甚 ;CD34+ CD38- 比例冻存后增高。结论 :先分离后冻存法可行 ,且具有减小冻存体积 ,对造血祖细胞损伤较小的特点 ;早期造血祖细胞可能更能耐受冻存处理     

CD34+HPC来源的树突状细胞体外扩增和功能研究

目的研究脐血CD34^ HPC体外扩增诱导产生功能性树突状细胞(DCs)的有效方案。方法Ficoll分离脐血获得单个核细胞。免疫磁珠阳性分选CD34^ HPC,^sH^-TdR检测DCs激发异体T细胞增殖的能力。MTT法检测特异性CTL的杀伤能力。结果SCF FL GM—CSF IL-4诱导生成的DCs激发T细胞增殖和特异性CTL的杀伤能力均高于其他组。结论SCF FL GM—CSF IL-4可有效扩增CD34^ HPC并诱导产生功能性DCs。     

神经免疫性疾病外周血调节性T细胞的变化及意义

目的通过分析神经免疫性疾病患者外周血中CD4~+CD25~+-Tregs的变化,探讨其在神经免疫性疾病发病中的意义。方法应用流式细胞仪检测44例神经免疫性疾病患者外周血中CD4~+、CD4~+CD25~+及CD4~+CD25highT细胞比例。结果患者与健康对照者比较CD4~+T细胞比例无变化,但CD4~+CD25~+及CD4~+CD25highT细胞比例明显降低。结论神经免疫性疾病患者外周血中CD4~+CD25~+-Tregs比例降低,可能是其发病的重要因素。     

脐血CD34~+细胞体外短期培养扩增研究

为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前后有核细胞、CD34 + 细胞、CD34 + /CD38- 细胞、CFU GEMM、CFU GM和BFU E数量的变化。结果在 3种不同的细胞因子组合中 ,同时应用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子培养 7d的扩增效果最好。突出的发现是在这种条件下CD34 + /CD38- 细胞亚群达到平均 1 97.9倍的扩增效果。提示 :SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子是脐血CD34 + 细胞体外扩增理想的细胞因子组合