绒毛DNA的分离方法

1986年5月11～16日,世界卫生组织顾问、荷兰著名生化遗传学专家Hans Galjaard教授在哈尔滨医科大学讲学,介绍了绒毛DNA分离法,该法对国内具有一定的参考价值,现介绍如下:     

饱合氯化钠提取基因组DNA和PCR扩增方法

20世纪中叶由于电子显微镜的问世超微病理学得到了迅猛发展,最令人兴奋不已的是近30年随着细胞生物学、免疫学、遗传学和分子生物学的进步,推动了分子病理学的形成和不断充实。分子病理学的出现使人们得以在蛋白质和核酸等分子水平上研究疾病的原因、发病机制及其发生和发     

尿液DNA提取方法与PCR扩增产物的比较

尿液ＤＮＡ提取方法与ＰＣＲ扩增产物的比较肖莎，郭琳琅，区士欢聚合酶链反应（ＰＣＲ）是近年来建立的一种快速、敏感、特异的体外ＤＮＡ扩增技术。能否获得完整、满意的ＤＮＡ是ＰＣＲ分析的最主要的基本步骤。我们在实际工作中对尿液中的巨细胞病毒ＤＮＡ（ＣＭＶ－Ｄ...     

从组织切片中提取单个细胞DNA进行PCR的方法

从组织切片中提取单个细胞ＤＮＡ进行ＰＣＲ的方法邓飞吕广能李甘地刘卫平聚合酶链反应（ＰＣＲ）敏感性极高，微量的ＤＮＡ污染也会导致假阳性的出现，所以对其模板ＤＮＡ纯度要求很高。而何杰金病侵犯的淋巴结中，肿瘤性成分ＨｏｄｇＫｉｎ细胞和Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂ...     

石蜡包埋组织PCR检测中DNA提取方法的比较及改进

目前,PCR常用于新鲜组织或细胞提取标本中的核酸分子的检测,较少用于检测石蜡包埋的陈旧组织中的DNA,其主要原因是后者核酸的提取较为困难。针对这种情况,我们在对文献报道的几种石蜡包埋组织提取DNA的方法进行了比较的基础上,进行了改进,提高了石蜡包埋组织提取DNA进行PCR的阳性率,现介绍如下。     

石蜡包埋组织DNA提取方法的比较及巢式PCR技术的应用

确定从福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织中提取DNA的最佳方法,增强长片段PCR产物的成功扩增率,便于分子生物学与临床医学的有机结合。本文选取正常甲状腺FFPE标本20份,分别应用一步法、酚/氯仿抽提法和试剂盒法三种不同的方法提取总DNA,并应用传统PCR法和巢式PCR法对线粒体DNA(mtDNA)的D环区进行扩增。结果酚/氯仿抽提法所得样本DNA的OD260/D280比值最高,为1.703±0.086。一步法、酚/氯仿抽提法和试剂盒法提取DNA的普通PCR长片段扩增成功率分别为0%、5%和10%,而巢式PCR长片段扩增成功率分别为0%、95%和85%。可见用蛋白酶K消化、酚/氯仿纯化法提取的FFPE组织标本DNA质量可靠,巢式PCR技术是从石蜡标本中扩增长片段DNA的有效方法。     

微量全血提取DNA及PCR扩增HLA-DRB和DQB基因方法的探讨

微量全血提取ＤＮＡ及ＰＣＲ扩增ＨＬＡ-ＤＲＢ和ＤＱＢ基因方法的探讨余进，万军梅，李明，张锐发深圳市红十字会医院深圳５１８０２９采用外周静脉血提取ＤＮＡ的方法很多；例如酚抽提法、ＴＥ缓冲液溶细胞法等。ＰＣＲ扩增ＤＮＡ片段的最大优点之一，是对模板ＤＮＡ的?..     

一种用PCR快速检测绒毛性别的方法

本文采用快速提取绒毛细胞DNA,用Y染色体特异性引物,通过PCR扩增Y染色体上特异性片段。对胎儿进行性别鉴定。在对10例流产绒毛所做结果,为男性,3例为女性,并与染色体G、C带对照。完全一致。     

线粒体DNA提取方法的比较

目的将提取线粒体 DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较 ,以得到最方便快速提取线粒体 DNA的方法。方法分离 Wistar大鼠小肠上皮细胞 ,用 3种方法提取线粒体 DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体 ATPase 8亚基基因 PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体 DNA。结果改进高盐沉淀法线粒体 DNA量最多 ,Triton法最少。 OD2 6 0 / OD2 80均在 1.78～ 1.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体 DNA用于PCR扩增 ,测定出了线粒体 DNA ATPase 8亚基基因序列。结论改进高盐沉淀法提取线粒体 DNA具有操作简单 ,产量多的优点 ,该法所提取 mt DNA可用于 mt DNA测序     

未经DNA提取的革兰氏阳性Frankia菌的PCR扩增

未经ＤＮＡ提取的革兰氏阳性Ｆｒａｎｋｉａ菌的ＰＣＲ扩增Ｆｒａｎｋｈ是一种固定氮的放线菌、它在体外生长缓慢，不可能进行经典的细菌基因分析。因此，以ＰＣＲ为基础的分析方法显示出了其优越性。目前，在ＰＣＲ扩增之前要从Ｆｒａｎｋｉａ菌中抽提出ＤＮＡ，因有许多...     

石蜡包埋组织提取DNA不同条件下的PCR扩增

背景：在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中会对DNA造成损害,提取的DNA在用于PCR扩增时部分结果并不理想。 目的：比较分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。 方法：从10.0 μm×2、10.0 μm×4和10.0 μm×5石蜡包埋食管癌组织切片中提取DNA,以0.05,0.1,0.2 μg模板DNA量扩增内参基因β-actin,PCR反应循环次数分别为35,40,45次,分析影响PCR反应的因素。 结果与结论：琼脂糖凝胶电泳结果显示以10.0 μm×2组织切片量,PCR反应循环次数40次,PCR反应模板DNA量      0.05 μg扩增取得的目的基因DNA的质量最高。说明减少石蜡包埋组织用量和减少模板DNA量有助于获得高质量的PCR反应条带,且PCR反应循环次数应大于40次,小于45次,再增加循环次数,则意义不大。 关键词：石蜡包埋组织;提取DNA;PCR反应;循环次数;模板DNA doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.017     

适用于三维微血管成像的定量分析方法

目的 随着高分辨率三维成像技术的发展,微血管成像已成为临床诊断和实验研究的重要手段.为了在定性观察的基础上定量分析血管形态,本文提出一套完整的图像处理方法,并基于此设计了包括血管分割、血管细化、定量分析在内的血管形态分析流程.方法 首先利用数学形态学方法实现血管结构提取,接着给出计算血管密度、直径等指标的方法,并引入血管的“卷曲度”参数,以衡量血管的扭曲或异常程度.结果 将上述方法应用于1个肝脏血管和3个肿瘤血管灌注成像实例,统计各项形态指标,发现肝脏血管和肿瘤血管在血管密度、分支结构、直径分布以及卷曲度方面均有较大不同.结论 本文方法可有效定量三维血管结构,不仅能够定量较为规则的肝脏血管的形态特征,而且对于尺寸更小、结构更精细的肿瘤血管也能准确地定量分析,因此可以为肿瘤的早期诊断和药物治疗的效果追踪提供重要依据.     

大鼠脑线粒体DNA提取方法

本研究用一种简便方法提取大鼠脑线粒体 DNA(m t DNA) ,所得的线粒体 DNA纯度为 1.8± 0 .0 1,得率为每克脑组织 0 .8～ 1.0 μg线粒体 DNA,以此为模板进行 PCR反应 ,扩增线粒体 DNA编码基因 ,产量丰富、特异性高。该方法操作简便、成本低 ,适用于一般实验室     

不同方法提取基因组DNA的比较

目的通过对不同方法的比较建立一种遗传工程鼠基因组DNA鉴定提取最简单快速的方法。方法以大鼠和小鼠的鼠尾及脚趾为实验材料,采用酚氯仿、煮沸法、涡旋离心法提取基因组DNA;通过琼脂糖凝胶的方法检验DNA质量,通过对时间的统计分析比较3种方法提取DNA的速率。利用PCR技术检测DNA的扩增效果。结果煮沸法、涡旋离心法和酚氯仿提取的DNA比较,电泳条带均较弱。涡旋离心法所耗费的时间最短,煮沸法次之,酚氯仿法耗时最长。除了煮沸法外,涡旋离心法和酚氯仿方法提取的DNA在用于PCR检测时都能得到清晰的目的条带。结论在使用PCR进行基因型初步鉴定时,涡旋离心法是三种方法中最简单快速的首选方法。     

一种可通用的快速提取高质量基因组DNA以用于PCR等技术的方法

研究任何有机体的分子机制和结构，都需要高质量的ＤＮＡ。到目前为止，仍没有一种普遍而简单的基因组ＤＮＡ提取法可大规模地应用于各种不同的真核生物，通常不同的组织需要不同的方法和不同的组织准备步骤。对于一种可通用的方法的需求非常迫切，尤其是当成百上千的样品...     

PCR与DNA测序

聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction,PCR)能以酶促反应的方式使位于两段寡聚核苷酸顺序之间的DNA片段特异性扩增上百万倍。其重要用途之一就是从克隆的DNA片段中或直接从基因组DNA中制备测序模板。为了避免线状双链模板在测序反应中复性,一般使用单链DNA(ssDNA)模板。它可直接由PCR制备,也可用酶处理,电泳分离或亲和纯化等方法直接从双链DNA(dsDNA)制备。PCR与测序的结合使得扩增和测序两反应能在同一试管中进行。如果终止核苷酸或测序引物带有荧光标记,则整个程序还可望完全自动化。     

适用于医学动态监测数据的稳健参数估计方法

目的 :介绍并分析适用于医学动态监测数据的稳健参数估计方法。方法 :结合分布假设和稳健统计给出了参数估计方法。首次提出了一种迭代求取形状参数稳健估计的算法。结果 :该方法对医学动态监测中某种生理量异常所占百分比值统计量的参数估计优于临床普遍采用的方法。结论 :通过对分布拟合、估计优效性和可实现性、估计稳健性等的理论分析和模拟实验表明该方法是一种高效、可靠的稳健参数估计方法