转B7-1基因的人多发性骨髓瘤细胞XG-7在激发杀肿瘤细胞CTL中的作用

为调查B7－1分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的CD8 的CTL，我们用含B7－1基因逆转录病毒载体PTG5192的包装细胞293E的培养上清，感染人多发性骨髓瘤细胞系XG－7（不表达B7－1分子），用新霉素G418选择并经流式细胞仪筛选，获得了稳定高表达B7－1分子的XG－7细胞（命名为XG－7－B7细胞）。在体外增殖实验中，XG－7－B7细胞显示出比母系细胞XG-7对外周血淋巴细胞（PBL）具有更大的刺激活性。表型分析证实XG-7-B7细胞所刺激的PBL是一群T细胞，其表型特征为CD3，CD8阳性，CD25、CD28也高表达，而CD4和CD16几乎不表达。这群细胞可在体外长期培养扩增，并可用作效应细胞。细胞毒实验结果表明：CD8 T细胞可杀死XG－7－B7细胞、母系细胞XG－7和其它肿瘤细胞如K562与Daudi细胞。结果提示，这群肿瘤持异的CD8 CTL细胞对肿瘤的过继免疫治疗具有潜在的应用价值。     

基于检查点阻断抗体的肿瘤靶向免疫治疗研究进展

免疫肿瘤学在近120年间逐渐形成,肿瘤可以被免疫系统识别,并且在某些情况下,免疫系统能调控肿瘤生长,甚至清除肿瘤。其中调控细胞免疫过程的关键分子成为肿瘤免疫治疗研究的新方向［1］。细胞毒性 T 淋巴细胞抗原－4（CTLA －4）和程序性死亡受体－1（programmed death －1, PD －1）具有负性免疫调节作用,能抑制 T 细胞的免疫应答,被称为免疫检查点（immune checkpoint ）。而能阻断这些免疫负调节物的单克隆抗体因其能直接提高 T 细胞的免疫功能获得了广泛关注,这种单克隆抗体现在被称作检查点阻断抗体（checkpoint blocking antibodies ）。检查点阻断抗体在临床上的进展是建立在对 T 细胞激活调控机制的基础研究上的。在 T 细胞激活的“双信号”模型中,抗原特异性的 T 细胞激活需要 T 细胞受体（TCR）和共刺激分子 B7－CD28两者的共同参与［2］。随后的研究在此双信号模型的基础上还发现了更多免疫调节信号,包括共抑制分子（CTLA －4、 PD －1、LAG －3）和共刺激分子（GITR、OX40、4－1BB）,如何通过调控这些免疫调节信号以强化 T 细胞的抗肿瘤免疫应答将是今后研究的重点。本综述主要关注 CTLA －4、PD －1等免疫抑制性分子的阻断抗体。 CTLA －4能与其配体 CD80（B7－1）和 CD84（B7－2）结合,减弱幼稚 T 细胞和记忆 T 细胞的早期激活［3］,而 PD －1主要通过其与配体 PD －L1和 PD －L2的相互作用来调控周缘组织 T 细胞的激活［4］。通过阻断CTLA －4和 PD －1的负调控通路可以强化 T 细胞的免疫应答以治疗肿瘤患者。     

PD-L1在脑胶质瘤中表达的研究进展

近年来,有关共刺激分子在免疫调节中的作用已经越来越受到广大研究者重视.已知协同刺激分子分为3个家族:B7家族、TNF家族和细胞因子家族.B7家族作为惟一能从抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)单向传送信号至T细胞的共刺激分子,其正向的共刺激分子是以CD28为代表,而负向的共刺激分子已成为目前研究的热点,其中共刺激分子PD-L1(又称B7-H1或者CD274)及其受体PD-1( programmed death 1) 的信号途径被认为与移植排斥反应、疾病免疫调节[1]、慢性病毒感染[2]、肿瘤免疫逃逸[3]等密切相关.     

CD28/PI3K在T细胞增殖、活化信号传递中的作用机制

TCR/CD3传导的抗原识别信号需要协同刺激信号才能使T淋巴细胞充分活化和增殖。在众多协同刺激分子中,CD28无疑是最为重要的一个。CD28可与抗原提呈细胞(APC)上的B7-1(CD80)和B7-2(CD86)结合,启动协同刺激信号,并在提高T淋巴细胞的反应性、诱导抗凋亡基因的表达、增加细胞因子的分泌(尤其是IL-2)、促进T淋巴细胞与APC的结合和抑制T淋巴细胞的凋亡等方面起着重要的作用。CD28协同刺激作用是近年来的研究热点之一,有关CD28及下游的磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-k inase,PI3K)活化参与的信号传导机制,已经有大量的研究…     

B7家族新成员的研究进展

T细胞活化除需要TCR传导的第一信号外，还需要协同刺激分子传导的第二信号。如果缺少刺激分子的第二信号将会导致调节性T细胞的无反应性或者是特异性免疫耐受。协同刺激信号是通过T细胞的协同刺激受体相应配体相互作用而介导的，其中经典的B7-1／B7-2-CD28／CTLA-4协同刺激途径对细胞的活化和耐受起关键性调节作用。而近年来新发现的协同刺激途径对已经活化T细胞具有重要调节作用，这些新的R7样分子主要是B7HI(又称PD-L1)，PD-12，B7H2(又称GL50，B7H，B7RP-1)和B7H1，PD-L287H2和B7H3分子与他们相应受体结合，参与细胞和体液免疫应答调节。现将其新成员B7H1和B7H2研究进展做一些介绍。     

吞噬凋亡肿瘤细胞的树突细胞疫苗抗肿瘤效果观察

目的：研究吞噬凋亡肿瘤细胞的树突细胞疫苗的抗肿瘤效果,以确定一种有效的树突细胞疫苗。方法：由黑色素瘤细胞（BLb-10)生成凋亡细胞,树突细胞（DC）与凋亡肿瘤细胞培育后,收集和提纯吞噬凋亡肿瘤细胞的树突细胞,再对其表型变化及抗肿瘤效果进行检测,并与加肿瘤细胞肽（mTRP2)的树突细胞的结果比较。结果：吞噬凋亡肿瘤细胞后,DC更加成熟。表现出促炎症细胞因子（IL－1,IL－6,TNF－α,IFN--γ和GM－CSF）,趋化因子（MIP－1,MIP－1和MIP－2）,细胞表面分子（HMC-Ⅱ,CD11bCD40和CD86）以及某些趋化因子受体（CCR7）表达增加而某些趋化因子受体（CCR2和CCR5）表达减少。吞噬了凋亡黑色素瘤细胞的树突细胞疫能（i）更强地刺激体外T细胞增生,（ii）诱导体内Th1型免疫反应而导致更有效的肿瘤特异细胞毒CD8＋细胞 介导的免疫,和（iii)防止了免疫鼠肺肿瘤转移,而加肿瘤细胞肽的树突细胞疫苗只能减少免疫鼠的肺肿瘤转移。结论：吞噬凋亡黑色素瘤细胞的树突细胞疫苗为癌细胞疫苗研究提供了新的途径。     

协同刺激分子B7-1/2对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响

目的：观察协同刺激分子B7-1／2(CD80／CD86)对日本血吸虫感染小鼠后Th1／Th2细胞因子水平的影响，探讨B7-1／2介导Thl／Th2，免疫偏移对控制血吸虫虫卵肉芽肿的作用。方法：取小鼠感染后6、8、10和12w的脾淋巴细胞用抗CD80mAb和抗CD86mAb处理后培养。72h，用ELISA双抗体夹心法测定培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平的动态变化。结果：抗CD80mAb和抗CD86mAb对IFN-γ的抑制作用不明显，但二者均能显著抑制IL-4的表达水平，尤其是抗CD86mAb对IL-4抑制作用非常显著。结论：通过干预B7：CD28协同刺激途径可以调节Thl／Th2细胞因子的表达水平，而且B7-2分子对Th2反应的影响作用大于B7—1分子。B7：CD28协同刺激途径可以调节Th1／Th2免疫偏移，为控制日本血吸虫肉芽肿病变提供了一种新途径。     

TIL细胞对不同肿瘤细胞的细胞毒活性研究

Ｂ７分子是提供协同刺激信号的重要分子，包括Ｂ７－１，其相应配体为ＣＥ２８。ＣＴＬＡ－４。Ｂ７－１分子与ＣＤ２８结合后能诱导协同刺激信号的产生，癌性胸水来源的淋巴细胞体外用重组人ＩＬ－２激活后，对肿瘤细胞也具有较强的细胞毒性，也被认为是一类ＴＩＬ。     

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞共刺激分子B7-1、B7-2与CD28的表达及意义

目的 探讨免疫共刺激分子B7-1、B7-2和CD28在过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞（PBMc）中的表达及其意义。方法 应用流式细胞仪（FCM）从蛋白质水平检测了38例过敏性紫癜（HSP）患儿（其中11例诊断为紫癜性肾炎）和20例正常儿童PBMC中B7-1、B7-2和CD28的表达，并分析其与24h尿微量白蛋白的关系。结果 过敏性紫癜患儿B7-2蛋白和CD28蛋白的表达水平（相对平均荧光强度，RMFI）均高于正常对照组（P〈0．05），各组间B7-1蛋白表达水平的差别无显著性意义（P〉O．05）。18例24h尿微量白蛋白（24hUMA）增高的HSP患儿共刺激分子B7-2、CD28蛋白的表达与24hUMA呈等级正相关。结论 过敏性紫癜患儿PBMC共刺激分子B7-2、CD28表达异常增加，可能参与HSP的起病，而且B7～2、CD28蛋白的表达与24h尿微量白蛋白呈等级正相关，提示可以作为监测HSP患儿病情以及检测早期肾脏损害的免疫学指标。     

活化T细胞膜信号分子表达与结肠癌细胞凋亡的相关性

目的：研究CpG寡脱氧核苷酸（CpGODN）作用于活化T细胞前、后的膜分子表达及与结肠癌细胞凋亡的相关性.方法：采用流式细胞术检测健康人外周血（PBLs）T细胞被刺激前、后的表型结构和结肠癌细胞凋亡指数变化;采用电镜观察肿瘤细胞超微结构变化.结果：CpGODN参与刺激作用结肠癌细胞前CD28分子表达略高于刺激前,而CD3分子表达则明显高于刺激前.电镜观察结果显示,效应细胞作用肿瘤细胞48h时部分肿瘤细胞发生坏死,部分出现凋亡;72h时肿瘤细胞凋亡明显;而结肠癌患者采用CpGODN共刺激PBLs后,CD3和CD8增高（P〈0.05）.结论：CpGODN共刺激可使T细胞表面信号分子增加,促使细胞因子及其激活的杀伤细胞分泌增加,至结肠癌细胞出现凋亡;肿瘤细胞凋亡与膜分子变化关系密切.     

胰腺癌神经组织浸润与肿瘤浸润性淋巴细胞亚型的相关性

目的:探讨胰腺癌神经组织浸润与肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)各亚型之间的关系.方法:随机选取胰腺癌外检标本54例,其中28例存在神经组织浸润,26例无神经组织浸润.H-E染色观察TIL的分布和密度,EnVision方法标记胰腺癌组织中TIL各亚型,并对阳性TIL进行计数,同时进行CD4、CD8免疫双标记,分析神经组织浸润与TIL亚型的相关性.结果: CD20 TIL呈簇状分布在间质内或散在于癌性上皮间;CD7 TIL散在于癌巢或间质内,一般不聚集呈簇状;CD4 TIL多散在于癌巢内,间质内较少;CD8 TIL多散在于癌性间质内.CD4 TIL为主的胰腺癌组织未见CD8阳性表达,CD8 为主的胰腺癌组织未见CD4阳性表达.有、无神经组织浸润的胰腺癌TIL中CD20、CD7、CD4、CD8、CD56、Fas阳性率分别为100%(28/28)、100%(26/26),100%(28/28)、100%(26/26),60.7%(17/28)、84.6%(22/26),96.4%(27/28)、50%(13/26),39.2%(10/28)、57.69%(15/26),92.85%(26/28)、53.84%(14/26). CD4、CD8、Fas阳性TIL数在有、无神经组织浸润的胰腺癌中差异显著(P＝0.001、0.000和0.004),各TIL亚型的免疫组化阳性强度与胰腺癌有无神经组织浸润无显著相关性(P＝0.993、0.990、1.000、0.991、0.993、0.997).结论:CD4、CD8和Fas阳性的TIL与胰腺癌神经组织浸润的发生关系密切;神经组织浸润时TIL分型的不同与其浸润至肿瘤组织中的先后次序有关,也可能与肿瘤对宿主的免疫逃避机制有关,还有待进一步研究.     

共刺激分子CD28/CTLA-4:B7在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达

目的 探讨CD28、CTLA-4（CD152）、B7—1（CD80）及B7—2（CD86）共刺激分子在强直性脊柱炎（AS）患者的外周血淋巴细胞上的表达异常与免疫功能紊乱的关系。方法 采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者CD28和CTLA-4在外周血CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的表达及CD80和CD86在CD19^＋B细胞上的表达。用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果 AS患者CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的CD28和CTLA-4，CD19^＋B细胞上CD80和CD86的表达较正常对照组显著增高（P〈0．05）；AS患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高（P〈0．01）。结论 AS患者T细胞上表达过量的CD28，与B细胞的B7结合，激活T、B细胞，产生大量免疫球蛋白，同时刺激激活的T细胞表达CTLA-4，使T细胞不能充分表现效应功能。     

协同刺激分子CD28/B7及CD40/CD40L在哮喘特异性免疫治疗中的作用

目的探讨协同刺激分子CD28／B7—1、CD28／B7—2及CD40／CD40L在哮喘发病中的作用及在特异性免疫治疗前后表达水平的变化。方法选择30例哮喘患者为实验组,30例健康人群为对照组。采用流式细胞仪方法比较两组间T、B淋巴细胞表面CD28／B7—1、B7—2及CD40／CD40L的表达及与血清总IgE水平的相关性,以及哮喘患者特异性免疫治疗前后T、B淋巴细胞表面CD28／B7—1、B7—2及CEl40／CEl40L的表达水平。结果与健康人群相比,哮喘患者CD28、CD40L、B7—2及CD40表达水平均增高。血清总IgE水平与T淋巴细胞表达CD40L水平呈正相关。特异性免疫治疗6个月后,哮喘患者T、B淋巴细胞表达的CD28／B7—2及CD40／CD40L水平均有所下调,但均未达正常水平。结论协同刺激分子CD28／B7—2及CD40／CD40L表达水平的上调在哮喘发病中可能起重要作用,特异性免疫治疗能下调哮喘患者CD28／B7-2及CD40／CD40L的表达水平,并可能由此间接下调血清总IgE水平,起到相应的治疗作用。     

共刺激分子在Behcet病患者结节红斑组织中的表达

目的探讨Behcet病患者结节红斑中B7:CD28/CTLA-4的表达及意义。方法采用免疫组化方法对5例Behcet病活动期患者腿或臂部结节红斑中CD4、CD8、CD19、CD68、HLA-DR、B7-1、B7-2、CD28和CTLA-4分子表达的情况进行了检测,并用双重染色方法探讨了细胞来源。结果Behcet病结节红斑中表皮约90%的细胞表达B7-1和B7-2,但无CD28和CTLA-4表达。真皮和皮下表达CD4、CD8、CD19、CD68、HLA-DR、CD1a、CD28、CTLA-4、B7-1和B7-2的细胞均显著增多。双染结果显示,100%CD4+T细胞表达CD28分子,47.9%的CD4+T细胞表达CTLA-4分子。100%CD68+细胞表达B7-1和B7-2分子。分别有74.5%和60.8%的HLA-DR+细胞表达B7-1和B7-2分子。结论CD28和CTLA-4分子主要表达于CD4+T细胞,B7-1和B7-2分子主要表达于单核巨噬细胞、抗原提呈细胞和角朊细胞。B7:CD28/CTLA-4通路可诱导巨噬细胞和T淋巴细胞的功能和活性,对Behcet病患者结节红斑的发生、炎症的持续和扩大起重要作用。     

枸杞多糖对荷瘤小鼠肿瘤微环境T淋巴细胞亚群及树突状细胞的影响

目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对荷瘤小鼠体内肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群和树突状细胞(dendritic cells,DCs)的影响,探讨LBP对荷瘤机体免疫逃逸的干预作用.方法:用LBP给H22荷瘤小鼠灌胃,连续2周后,测定肿瘤重量,采用流式细胞术检查肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltrating lymphocyte,TIL)中T淋巴细胞亚群和DCs的数量,以及协同刺激分子CD80(B7-1)表达的变化.结果:LBP可明显抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤浸润CD4 、CD8 细胞的数量.LBP高剂量组CD4 和CD8 细胞数量的百分比高于模型组(P＜0.05).LBP低剂量和高剂量组肿瘤浸润DCs数量及B7-1表达均较模型组升高,但差异无统计学意义.结论:LBP的抗肿瘤作用可能与恢复荷瘤小鼠TIL中CD4 、CD8 的细胞数量、解除机体的免疫抑制状态及增强机体的抗肿瘤免疫功能有关.LBP能否恢复荷瘤机体DCs的表型及功能尚待进一步研究.     

Experimental study on the antitumor effect of mouse B7-1 gene

ＴｗｏｓｉｇｎａｌｔｈｅｏｒｙｆｏｒＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｕｍｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ［１－２］．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔ...     

乳腺癌原发灶B淋巴细胞浸润与预后的关系

目的探讨早期乳腺癌原发灶B细胞与临床病理特征以及预后的关系。方法回顾性收集2000年1月~2002年12月在解
放军总医院手术的130例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者的临床资料及石蜡切片,用免疫组织化学法检测乳腺癌原发灶间质中CD20阳性
B淋巴细胞的浸润情况并分析其与CD8和CD4阳性淋巴细胞密度的关系,以及分析CD20阳性细胞浸润与乳腺癌临床病理特
征及预后的关系。结果在部分乳腺癌（37.69%,49/130）间质可见CD20+B细胞聚集分布,并可观察到CD3+T细胞聚集在CD20+
B细胞聚集区的周围形成淋巴滤泡样结构。总体分析时,CD20+细胞聚集与预后不相关。在激素受体阴性（雌激素受体和孕激
素受体均为阴性)患者的COX多元分析中,CD20+细胞聚集与较好的DDFS（HR=0.251,95% CI=0.071-0.894,P=0.033）、OS
（HR=0.325,95%CI=0.103-1.028,P=0.056）相关。而在激素受体阳性（雌激素受体和孕激素受体至少有一个阳性)患者,CD20+
细胞聚集与DFS（P=0.997）、DDFS（P=0.759）、OS（P=0.700）均不相关。在激素受体阳性患者,术后辅助内分泌治疗可显著改善
CD20+细胞聚集阴性患者的OS（P=0.001）。结论CD20+细胞聚集在激素受体阴性乳腺癌患者有预后预测价值。术后辅助内分
泌治疗的远期疗效与乳腺癌原发灶CD20+细胞聚集相关,并进而影响CD20+细胞聚集与乳腺癌预后的关系。
     

新型重组免疫抑制蛋白B7-2-L-PE40KDEL的分子构建与生物活性及结构特性

目的：构建重组B7－2－L－PE40KDEL融合蛋白,特异性杀伤CD28高表达的T细胞,选择性阻断T淋巴细胞活化过程中的B7：CD28／CTLA－4共刺激信号系统,由此诱导免疫耐受,特异性防治移植物抗宿主疾病（GVHD）和宿主抗移植物疾病（HCGD）。方法：采用基因融合序列重叠延伸（SOE）策略,构建新型重组pRSETA-B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的原核表达载体,实现融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,利用亲和层析等方法进行蛋白质纯化。对该融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性等进行模拟分析。采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD28受体的T细胞的活性进行测定。结果：构建并高效表达了B7－2－L－PE40KDEL融合蛋白,所获融合蛋白的纯度大于95％。该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示,其柔性及抗原性、亲水性表位均未显著改变。活性测定显示,该重组融合蛋白能有效特异性地杀伤高表达CD28的人T淋巴瘤细胞系,而对未来表达CD28的人白血病细胞系则无任何杀伤。结论：具有靶向性免疫抑制活性的新型重组B7－2－L-PE40KDEL毒素融合蛋白的构建、表达对特异性防治GVHD和HVGD可能产生积极的影响。     

干扰素治疗慢性乙型肝炎患者B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系

目的初步探讨聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞和mDCs上共刺激分子B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系。方法纵向观察接受聚乙二醇干扰素α-2a治疗的28例CHB患者其mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达变化,分析B7-H1/PD-1表达与聚乙二醇干扰素α-2a治疗效果之间的关系。结果聚乙二醇干扰素α-2a治疗12周时,早期病毒学应答组患者B7-H1在CD3＋T细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、mDC上表达及PD-1在CD3＋T细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞上表达水平均明显低于非早期病毒学应答组患者,两组差异显著,P值分别为0.009,0.009,0.009,0.042,0.004,0.017,0.004。结论聚乙二醇干扰素α-2a抗病毒疗效可能与CHB患者mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达相关。