先天性巨细胞病毒感染对无症状患儿生长发育的影响

目的 探讨陕南贫困山区先天性巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对无症状患儿体格和智能发育的影响.方法 对1997年10月至2000年10月在陕南贫困山区出生的34例先天性HCMV感染无症状儿(宫内感染组)、72例妊娠期活动性感染无先天性感染儿(无宫内感染组)和106例无妊娠期活动性感染儿(正常组)进行随访,随访内容包括:新生儿期和幼儿期的体格测量、幼儿期和学前期的智能测定、学前期听力测试.结果 与正常组比较,宫内感染组和无宫内感染组新生儿出生时和幼儿期平均体质量、身长、头围,差异无显著性(P＞0.05);无论在幼儿期或学前期,宫内感染组智能发育落后的发生率明显高于正常组,尤其是言语能力明显低下(P＜0.05);与正常组相比,宫内感染组学前期纯音听阈异常的发生率显著增加(P＜0.05).结论 HCMV先天性感染对无症状儿的体格发育无明显影响,但可影响患儿远期言语能力和听力,对智能发育有明显影响.应重视HCMV宫内感染儿远期智能和听力的监测,对语言能力和听力异常的患儿应适时采取干预措施.     

人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮的相关性

目的：分析人巨细胞病毒（HCMV）在系统性红斑狼疮（SLE）患者中的感染状况及与SLE临床指标的相关性。方法：采集并分离60例SLE患者和111例健康体检者的外周血白细胞及血清标本,建立细胞内HCMVUL55及UL138基因高度敏感特异的PCR方法,并检测SLE患者及健康体检者外周血白细胞内HCMVUL55及UL138基因,以确定HCMV感染情况,利用罗氏公司电化学发光法试剂盒检测血清HCMVIgG和IgM,比较SLE患者与健康体检者外周血白细胞内HCMVUL55、UL138检测及血清IgG、IgM检测的阳性率和相关性,统计分析外周血白细胞内HCMV感染与SLE常见临床指标的关系。结果：琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示,建立的PCR方法能特异地检测外周血白细胞内HCMVUL55及UL138基因;血清HCMVIgG及细胞内HCMVUL138基因检测几乎全部呈阳性,SLE患者与健康体检者之间差异无统计学意义（P＞0.05）;血清HCMVIgM检测阳性率低,SLE患者血清HCMVIgM检测阳性率（为6.67%）略高于健康体检者（为0.90%）（P=0.052）;SLE患者外周血白细胞内HCMVUL55基因检测的阳性率明显高于健康体检者（P＜0.01）。HCMV感染4种检测方法的相关分析显示,细胞内HCMVUL138检测结果与血清HCMVIgG检测有较好的一致性。分析SLE患者外周血白细胞内HCMV感染状况与临床指标的相关性显示,与UL138基因不同,细胞内HCMVUL55检测呈阳性的SLE患者与检测呈阴性的SLE患者比较,存在多项明显差异的临床指标。结论：HCMV感染与SLE存在一定的相关性,但不同检测方法结果差异显著。     

孕期人巨细胞病毒活动性感染诊断、治疗及致病机制系列研究

为提高我国人口素质,优生优育,对严重危害胎儿生长发育的妊娠期人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的宫内感染诊断方法、治疗及致病机制进行了较系统的研究。1.实验室证实RT-PCR法可作为HCMV活动性感染的诊断指标:通过RT-PCR法对感染细胞HCMV晚期mRNA进行检测,发现HCMV晚期mR-NA在人     

广州地区HCMV临床病毒株UL137基因的结构特征与多态性

【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株，经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D52。对3株临床分离株进行HCMVUL137基因全序列PCR扩增，PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL137-pMD18-T重组质粒；基因测序；将HCMVUL137基因序列呈报GenBank，并进行基因生物信息学分析。【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株。克隆测序后呈报GenBank并被收录，收录序列号分别为：DQ180388、DQ180376、DQ180360。通过序列分析，结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守，同源性在96．91％～100％之间．其变异均为碱基替换：编码蛋白均由96个氨基酸残基组成，同源性在90．63％～100％之间，超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间：编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS、MYS、cAMPs三类，其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守，cAMPs位点仅在5株病毒出现；编码蛋白等电点在11．50～12．00之间，呈强碱性。【结论】广州地区临床低传代分离株HCMVUL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守，但仍存在-定多态性。提示HCMVUL137ORF可能是-个具有重要功能的基因。     

孕期巨细胞病毒感染可以确诊

华中科技大学同济医学院闻良珍教授等在“九五”科技攻关收尾之际于国内外率先确立用 RT- PCR技术进行产前巨细胞病毒宫内感染的诊断方法 ,同时还从祖国医药宝库中寻得良方 ,有望打破孕期巨细胞病毒感染长期无药可治的局面。孕期感染 ,特别是巨细胞病毒 (HCMV)是引起流产、死胎、先天畸形或智力低下及进行性神经性耳聋的严重致病原因。据调查 ,我国大城市孕妇 HCMV感染相当普遍 ,L g G阳性平均检出率为 87.1% ,但迄今尚未确立胎儿宫内活动性感染的诊断方法 ,孕妇一旦感染亦无药可治。研究人员对我国武汉、沈阳、上海三地区 5 80 8例育…     

孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系

目的 探讨孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对53例HCMV感染的孕妇血液中HCMV DNA进行定量检测,并检测其胎儿血、新生儿血或胚胎绒毛中HCMV DNA含量.结果 胎儿发生宫内感染及妊娠不良结局与孕妇血中HCMV DNA含量有关,发生胎儿宫内感染的孕妇,其HCMV DNA含量达到105copies/mL以上,且随着血中HCMV DNA含量的增高,感染率呈显著增高趋势.结论 孕妇血中HCMV DNA含量升高是胎儿宫内HCMV感染及发生妊娠不良结局的重要因素之一,当孕妇血中病毒含量>105copies/mL时,其病毒含量可作为导致胎儿宫内感染的参考阈值.     

人巨细胞病毒原发感染BALB/c小鼠大脑皮质模型的建立

目的建立人巨细胞病毒(HCMV)原发感染BALB/c小鼠大脑皮质的模型,为进一步研究其发病机制奠定实验基础。方法分别用2×106、2×105、2×104、2×103、2×102PFU/ml的HCMV AD169株腹腔注射6~8周SPF级BALB/c小鼠雌雄各6只作为实验组,同时设立灭活病毒对照组和细胞对照组。1个月后取各组小鼠大脑皮质组织进行病毒分离与鉴定、PCR和RT-PCR分别检测各标本中HCMVUL83基因及UL54的转录、HE染色。结果2×106、2×105PFU/ml实验组的雌性小鼠病毒分离、PCR及RT-PCR均为阳性;HE染色可见海马区出现了明显的病理变化。雄性小鼠、低剂量(2×104、2×103、2×102PFU/ml)实验组、灭活病毒组和HF对照组均为阴性。结论HCMV AD169株腹腔注射6~8周龄SPF级雌性小鼠1个月可测出大脑皮质发生急性炎症反应,为HCMV所致的原发感染状态,且小鼠性别及病毒的接种量可能与感染发生存在密切关系。     

人巨细胞病毒UL145基因在先天感染患儿临床株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL145序列在先天感染患儿临床株中的基因多态性，探讨HCMV基因多态性与先天感染引起的不同临床症状之间的关系。方法：对16株临床低传代分离株和15株未传代临床株的HCMV临床标本分别进行UL145全序列PCR扩增，对PCR扩增阳性的31例标本进行序列测定及分析，并且与9株已在GenBank递交的HCMVUL145序列进行比较分析。结果：序列分析结果表明31株HCMV临床株的UL145基因是高度保守的。所有临床株的HCMVUL145开放阅读框架均为393bp，编码蛋白含有130个氨基酸。所有临床株的核苷酸同源率为95．9％～100％，编码蛋白的同源率为97．7％～100％。临床症状不同的患儿其HCMVUL145基因及其编码蛋白具有相似的结构。所有先天感染患儿临床株的UL145编码蛋白具有蛋白激酶C（PKC）磷酸化功能位点和酪蛋白激酶（CK2）磷酸化功能位点。结论：HCMVUL145基因在临床株中是高度保守，未发现其与HCMV先天感染不同临床症状间存在明显的关系。HCMV UL145基因的高度保守性在先天感染中具有重要作用。     

张家口地区汉族人MBL基因多态性及其血浆含量相关性分析

目的建立检测MBL基因ExonⅠ54位密码子点突变的方法,初步调查健康汉族人MBL基因54位密码子点突变的情况,检测其血浆含量,探讨两者的相关性。方法根据MBL基因序列设计引物,建立MBL基因点突变检测方法(即PCR-RFLP);用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定其血浆浓度。结果建立特异、敏感的检测MBL基因54位密码子点突变的方法,测得基因突变频率为0·23;血浆MBL含量平均值(1·99±1·51)mg/L;两者呈负相关(r=-0·62)。结论所建立的测定MBL的PCR-RFLP方法,特异性高,重复性好,较为灵敏(最低检出量为160pg DNA);测定健康汉族人MBL基因点突变频率与其血浆含量,并证明两者呈负相关。     

人胚肺成纤维细胞感染人巨细胞病毒不同时间病毒载量的分析

目的:检测人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HELF)后不同时间点HCMV DNA载量,以明确HCMV感染HELF的时效性.方法:将HCMV接种HELF细胞,收集感染后3,5,8,10,15,20,30,60,120 min时间点细胞,提取病毒DNA,以即刻早期1基因(IE-1)为靶基因进行荧光定量PCR检...     

人巨细胞病毒UL135基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL135基因编码序列在临床低传代分离株中的多态性，探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床疾病之间的关系。方法：对29株经荧光定量PCR方法检测HCMV．DNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行HCMVUL135全序列PCR扩增，并对PCR扩增阳性的25例标本进行序列测定及分析。结果：29株临床低传代分离株有25株PCR扩增阳性。25株分离株UL135开放读码框架（0RF）长度均与Toledo株相同，其核苷酸的变异率为0．1％-2．6％。与Toledo株相比，部分分离株具有氨基酸翻译后修饰位点的新增或缺失。25株临床分离株UL135蛋白质二级结构预测结果显示了第28位、313—317位、161—163位、171位氨基酸均有蛋白质结构二级的改变。结论：25株HCMV临床低传代分离株UL135基因及其编码产物的氨基酸序列比较保守，但仍存在一定程度的多态性，未发现UL135基因的变化与HCMV先天感染导致的不同疾病存在着相关联系。     

Sequence variability of human cytomegalovirus UL143 in low-passage clinical isolates

Background Human cytomegalovirus （HCMV） infects a number of organs and tissues in vivo. The different symptoms and tissue tropisms of HCMV infection perhaps result from genetic polymorphism. A new region of DNA containing at least 19 open reading frames （ORFs） （denoted UL133 to 151） was found in the low-passage HCMV clinical strain, Toledo, and several other low-passage clinical isolates, but not present in the HCMV laboratory strain, AD169. One of these genes, UL143, was studied to explore the sequence variability of UL143 ORF in HCMV clinical isolates and examine the possible association between gcne variability and the outcome of HCMV infection. Methods The UL143 gone of the strains obtained from suspected congenitally HCMV-infectcd infants was amplified by polymerase chain reaction （PCR） and sequenced. Results Nineteen sequences of the strains were divided into 2 major groups, G1（n=16） and G2（n=3）. All of the sequences had frame-shift mutation compared to Toledo. Nucleotide polymorphisms conferred substantial amino acid substitutions when compared with Toledo. All 16 UL143 putative proteins of the strains in G1 had a new myristylation site and loss of two PKC sites owing to missense mutations. No convincing relationships were observed between the presence of HCMV disease and the UL143 sequence group. Conclusions HCMV-UL143 existed in low passage isolates. Sequence variability caused by frame -shift mutation was found in all HCMV clinical strains. No obvious linkage was observed between UL143 polymorphisms and the outcome of suspected congenital HCMV infection.     

人巨细胞病毒UL138基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)UL138基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系.方法:对30株经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV-UL138全序列PCR扩增,对16株进行HCMV-UL138基因全序列测序及结果分析.结果:30株临床分离株中有20株UL138基因PCR扩增阳性.16株临床分离株HCMV-UL138开放阅读框架及编码蛋白的重要功能基团均高度保守.核苷酸序列进化树的分析结果表明:除20M外,先天性巨结肠株只存在于2a型,而小头畸形株仅存在于2b型.结论:HCMV UL138基因高度保守,但存在一定的多态性.     

临床低传代人巨细胞病毒株UL148开放阅读框mRNA的表达与鉴定

目的 研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株特有基因UL148的结构,分析其结构多态性与HCMV先天性感染致病的关系;研究UL148的表达情况,探讨其产物可能的功能及在致病机制中的可能作用.方法 采集广州地区新生儿HCMV感染患者尿液标本进行病毒分离培养,从分离的病毒株中提取病毒DNA,扩增鉴定UL148基因片段;TA克隆,基因测序;抽提病毒总RNA,用RT-PCR方法鉴定UL148基因mRNA表达情况.结果 成功分离到HCMV低传代临床株,获得UL148基因全序列.RT-PCR产物检测582 bp大小的特异性条带,证实了UL148基因mRNA的表达.结论 广州地区临床低传代HCMV分离病毒株存在UL148基因结构,证实UL148开放阅读框是具有mRNA水平表达的基因结构.     

SEQUENCE CONSERVATION OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS UL140 OPEN READING FRAME IN CLINICAL STRAINS

Objective To investigate the variability of human cytomegalovirus （HCMV） UL140 open reading flame （ORF） in clinical strains, and to explore the relationship between the variability of UL140 ORF and different symptoms of HC-MV infection. Methods HCMV UL140 ORF was amplified by polymerase chain reaction and sequenced selectedly in 30 clinical strains. Results UL140 ORF of all clinical strains was amplified successfully. Compared with that of Toledo strain, the nucleotide and amino acid sequence identities among all strains were 96.5% -100.0% and 95.2% -100. 0%, respectively. All of the nucleotide changes were substitutions. The post-translational modification sites were conserved. The result of phylogenetic tree showed that the strains did not cluster according to different clinical symptoms. Conclusion HCMV UL140 ORF in clinical strains is highly conserved, which may play an important role in HC-MV infection.     

广州地区HCMV临床病毒株UL137 基因的结构 特征与多态性

 【目的】 研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV) 临床低传代分离株 UL137 基因的结构特征与基因多态性? 【方法】 从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株,经多重PCR鉴定后分别命名为HCMV D2?D3和D52?对3株临床分离株进行HCMV UL137基因全序列PCR扩增,PCR产物纯化后进行基因克隆,构建HCMV UL137-pMD18-T重组质粒;基因测序;将HCMV UL137基因序列呈报GenBank,并进行基因生物信息学分析?【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株?克隆测序后呈报GenBank并被收录,收录序列号分别为:DQ180388?DQ180376?DQ180360?通过序列分析,结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守,同源性在96.91%～100%之间,其变异均为碱基替换;编码蛋白均由96个氨基酸残基组成,同源性在90.63%～100%之间,超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间;编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS?MYS?cAMPs三类,其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守,cAMPs位点仅在5株病毒出现;编码蛋白等电点在11.50～12.00之间,呈强碱性?【结论】 广州地区临床低传代分离株HCMV UL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性?提示HCMV UL137 ORF可能是一个具有重要功能的基因?     

人巨细胞病毒UL141片段在临床低传代分离株中的多态性研究

目的:研究人巨细胞病毒不同临床分离株UL141基因多态性,并分析这种多态性与人巨细胞病毒先天感染疾病之间的关系.方法:对荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA阳性的临床低传代分离株进行UL141基因全序列PCR扩增,对扩增阳性的标本进行测序及分析.结果:19株临床低传代分离株在Toledo株UL141基因227位均缺失一个碱基T,因此产生两个新的ORF(UL141A和UL141B).与Toledo株相应片段比较,UL141A预测蛋白质第75位氨基酸后序列和翻译后修饰位点产生大量变异.UL141B高度保守.结论:临床分离株的UL141片段产生两个新的ORF.     

人巨细胞病毒UL137基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行全序列的测序，核实测序结果，拼接出UL137基因编码序列，进行相关分析。结果：经分析获得22株HCMV临床分离株UL137ORF核苷酸序列，核苷酸变异分布于整个编码区，但主要集中在5’端220—290bp处，均为核苷酸碱基替换，无插入及移码突变。在UL137预测编码蛋白氨基酸序列中，新增2个半胱氨酸位点，导致17株临床分离株在71-76位氨基酸出现了N相连豆蔻酰化位点（MYR）的新增，及第90～92位氨基酸硫化cAMP位点的相应缺失。结论：HCMVUL137基因在临床低传代分离株中高度保守，但存在一定的多态性。