化疗药物剂量依赖性下调化疗敏感膀胱癌细胞中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的水平

目的探讨化疗药物诱导膀胱癌细胞凋亡及其对X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XIAP）表达和caspase-3剪切的影响。方法培养4种膀胱癌细胞系RT4、MGH-U1、EJ及T24,用低剂量阿霉素和丝裂霉素诱导凋亡启动,用细胞增殖分析试剂盒CCK-8分光法测定不同浓度化疗药物对膀胱癌细胞的杀伤力,确定化疗敏感细胞和耐药细胞,流式细胞术检测化疗药物诱导的细胞凋亡变化;用Western印迹检测阿霉素和丝裂霉素对膀胱癌细胞XIAP蛋白水平及caspase-3剪切的影响。结果4种膀胱癌细胞系中XIAP的表达水平差异无统计学意义。随着阿霉素和丝裂霉素的浓度增高,CCK-8检测到化疗药物对膀胱癌细胞的抑制率相应增加,流式细胞术检测到化疗药物诱导的细胞凋亡率相应增加。在化疗敏感的RT4细胞中可见caspase-3的剪切随着化疗药物浓度的增高而加强,而XIAP的蛋白水平却相应下降。这种效应在耐药的T24细胞中却不明显。结论阿霉素和丝裂霉素能剂量依赖性地杀伤膀胱癌细胞,而且这种杀伤力是通过诱导膀胱癌细胞凋亡实现的,XIAP和caspase-3与膀胱癌细胞的化疗耐药有一定相关性。     

生长激素联合顺铂、丝裂霉素诱导前胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究重组人生长激素 (rhGH)联合顺铂、丝裂霉素诱导前胃癌细胞 (MFC)凋亡的作用及其可行性 .方法 :通过MTT法检测rhGH联合顺铂、丝裂霉素和单独使用顺铂、丝裂霉素对MFC的体外杀伤作用 ,以IC50 和杀伤率表示 ;采用流式细胞技术、DNA凝胶电泳、透射电镜等技术检测细胞凋亡情况 .结果 :体外杀伤实验结果显示 ,rhGH联合顺铂组、rhGH联合丝裂霉素组抑制率分别为 86 6 5 % ,6 9 33% ;单独应用顺铂组和单独应用丝裂霉素组抑制率分别为 4 6 7% ,4 2 6 8% ;rhGH联合顺铂组、rhGH联合丝裂霉素组IC50 分别为 10 0ng/mL ,12 5 μg/mL .rhGH联合顺铂比单独使用顺铂时 ,对前胃癌细胞具有更强的杀伤作用 ,P <0 0 1,有极显著差异 ;rhGH联合顺铂组、rhGH联合丝裂霉素组用流式细胞技术检测有明显凋亡峰 ;DNA凝胶电泳呈明显的凋亡梯形条带 ;电镜观察有细胞凋亡形态学特征性改变 .结论 :根据本实验结果可推测胃癌围手术期应用rhGH联合化疗药物顺铂、丝裂霉素治疗 ,有良好的协同作用 ,可有效地诱导胃癌细胞凋亡 ,提高抗癌效果     

丝裂霉素诱导人膀胱癌细胞凋亡的研究

为进一步探讨丝裂霉素膀胱内灌注治疗膀胱肿瘤的机制，研究了丝裂霉素诱导人膀胱癌 Ｂ Ｉ Ｕ８７ 细胞凋亡的规律。形态学观察具有典型凋亡征象，胞浆浓缩，染色质凝集，核固缩、裂解及凋亡小体。凋亡指数与诱导时间呈正相关（ Ｐ＜ ０．０１）；流式细胞仪 Ｄ Ｎ Ａ 直方图上出现特征性的亚二倍体（亚 Ｇ１ ）峰；凋亡过程中伴 Ｂｃｌ２ 基因的下调，且与诱导时间呈负相关 （ Ｐ＜ ００１）。提示丝裂霉素诱导癌细胞凋亡是腔内化疗的重要机制，降低 Ｂｃｌ２ 的表达可提高膀胱癌腔内化疗的疗效。     

丝裂霉素诱导人膀胱癌细胞凋亡的研究

为进一步探讨丝裂霉素膀胱内灌注治疗膀胱肿瘤的机制，研究丝裂霉素诱导人膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞凋亡的规律，形态学观察具有典型凋亡征象，胞浆浓缩，染色质凝集，核固缩，裂解及凋亡小体。凋亡指数与诱导时间呈正相关（Ｐ〈０．０１）；流失细胞仪ＤＮＡ直方图上出现特征性的亚二倍体（亚Ｇ１）峰，凋亡过程中伴Ｂｃｌ－２基因的下调，且与诱导时间呈负相关（Ｐ〈０．０１），提示丝裂霉素诱导癌细胞凋亡是腔内化疗的重要机制，降     

膀胱癌化学药物敏感性试验

目的:筛选膀胱癌化学治疗敏感性药物.方法:通过30例膀胱癌细胞原代培养,观察常用化学治疗药物的抑制率.结果:膀胱癌细胞对不同化学药物的敏感性不同(F＝3.4251,P＜0.01),敏感性由高至低依次为:卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌、表阿霉素、5-氟尿嘧啶、吡柔比星、喜树碱、阿霉素、氨甲蝶呤、长春新碱;不同个体的癌细胞对同一药物的敏感性存在明显差异.结论:膀胱癌化学治疗首选卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌,建议以药物敏感性试验选药,实现治疗个体化方案.     

支气管动脉化疗对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响

为研究支气管动脉灌注顺铂、阿霉素等联合化疗药物对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响。我们选择 1996～ 1998年间在我院接受手术治疗的 40例非小细胞肺癌 ,其中单纯手术切除的 2 0例为对照组 ;术前 2周接受过支气管动脉化疗的2 0例为实验组。应用原位DNA断端标记法检测两组标本的癌细胞凋亡水平。结果 :两组间凋亡指数以及两组间鳞癌凋亡指数比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;两组间腺癌凋亡指数以及两组内鳞癌和腺癌间凋亡指数比较无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :支气管动脉灌注顺铂、阿霉素等联合化疗药物能诱导非小细胞肺癌细胞凋亡。     

C—erbB—2基因产物在耐药非小细胞肺癌的表达

Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因在肺癌中可呈过度表达或转录复制数增加，应用免疫细胞化学方法结果体外药敏试验检测耐药非小细胞肺癌中Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因产物Ｐ１８５表达。结果显示Ｐ１８５在９５例非小细胞肺癌中阳性率为５４％，９５例肺癌标本同时做丝裂霉素、阿霉素、顺铂和长春新碱的体外药敏试验，Ｐ１８５阳性表达的肺癌细胞对４种抗癌药全不敏感或单药敏感者占７５％（Ｐ〈０．０５）。提示Ｐ１８５可作为肺癌的耐药标志物。     

吉西他滨对膀胱癌细胞敏感性的实验研究

目的:探讨吉西他滨体外对人膀胱癌T24细胞株,以及对不同个体膀胱癌细胞生长抑制的影响,明确吉西他滨对膀胱癌细胞有无明显抑制效应,是否适用于浅表性膀胱癌的术后灌注化疗.方法:体外培养膀胱移行细胞癌T24细胞,用生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)检测不同浓度吉西他滨对肿瘤胞生长抑制的影响,光学显微镜观察不同时间段肿瘤细胞形态学变化.收集我院经尿道膀胱肿瘤切除术的40例浅表性膀胱癌患者的新鲜肿瘤标本,应用ATP-TCA技术检测肿瘤细胞对的吉西他滨的敏感率.结果:T24膀胱癌细胞株对吉西他滨表现为耐药;吉西他滨作用T24膀胱癌细胞株一定时间后,与对照组相比未见明显细胞凋亡或坏死;ATP-TCA法检测40例不同个体膀胱癌细胞对吉西他滨耐药率为90％.结论:吉西他滨体外对膀胱癌T24细胞株无生长抑制作用,对40例不同个体膀胱癌细胞耐药率为90％,初步说明该药不适合浅表性膀胱癌的术后灌注化疗.     

膀胱移行细胞癌中粘蛋白MUC1的表达与肿瘤浸润性树突状细胞的分布

目的研究膀胱移行细胞癌中粘蛋白MUC1表达和肿瘤浸润性树突状细胞（TIDC）分布的变化，探讨二者在膀胱癌侵袭、转移及化疗耐药过程中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测MUC1和TIDC在膀胱移行细胞癌的表达和定位及MUC1在T-24细胞、BIU-87和耐药株BIU-87／A中的表达。应用流式细胞仪检测BIU-87、耐药株BIU-87／A及T-24细胞在阿霉素、长春新碱、顺铂3种化疗药物作用48h后的凋亡率：结果MUC1在各期膀胱移行细胞癌中均表达，表达模式各有特点，MUC1的染色分型同肿瘤的病理分级和临床分期密切相关（P〈0．001）。DC的数量同肿瘤病理分级呈负相关．随着病理分级的升高阳性细胞数明显减少（P〈0．005）。MUC1存BIU-87、T-24细胞膜、胞浆中均有浅棕色弱阳性表达，在BIU-87／A的胞膜、胞浆中均有深棕色强阳性表达，两者细胞平均光密度值差异有显著性（P〈0．01）。流式细胞仪检测BIU-87、T-24和BIU-87／A的自发凋亡率分别为1．15％、1．40％、0．90％，在阿霉素、长春新碱、顺铂3种化疗药物作用48h后．BIU-87的凋亡率分别为45．69％、47．70％、44．50％，T-24的凋亡率分别为43．79％、46．17％、44．50％，均有明显升高（P〈0．01），但两种细胞之间及3种化疗药之间差异无显著性（P〉0．05）。耐药株BIU-87／A在阿霉素、长春新碱作用48h后的凋亡率分别为19．88％、21．41％．均明显低于亲本细胞株BIU-87（P〈0．05）。结论MUC1的表达模式和TIDC数量的监测可以作为膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的判断指标。TIDC的减少可能是膀胱癌免疫逃逸和耐受的重要环节，肿瘤细胞表面高密度的MUC1可能参与膀胱移行细胞癌侵袭转移和化疗耐药机制。     

过表达miR-218增强食管鳞状细胞癌对顺铂敏感性

目的 研究miR-218 在食管鳞癌细胞中对顺铂药物敏感性的影响.方法 采用递增药物浓度、间歇冲击作用的方法构建耐药细胞株;实时荧光定量PCR检测miR-218 在食管鳞癌细胞株Eca109 与顺铂耐药株Eca109-CisR差异性表达;进一步在顺铂耐药株Eca109-CisR中过表达miR-218:① CCK8实验检测细胞增殖;② 流式细胞仪检测细胞凋亡率;③ Western blot方法检测凋亡抑制蛋白Survivin、Mcl-1及Bcl-2的相对表达量.结果 miR-218在顺铂耐药株Eca109-CisR细胞中呈低表达;过表达 miR-218 增加顺铂耐药株Eca109-CisR对顺铂的药物敏感性;Western blot结果证实凋亡相关蛋白Survivin、Mcl-1 及 Bcl-2相对表达减少.结论 miR-218表达有助于增加食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性,且给对顺铂耐药的食管鳞癌患者提供潜在的基因治疗靶点.     

丝裂霉素C联合蛙皮素增强抗胃癌作用的体外实验

目的：探讨丝裂霉素C联合蛙皮素在体外诱导人胃癌细胞的凋亡作用。方法：利用体外细胞培养、MTT比色技术及流式细胞仪等方法，在对照组、丝裂霉素C（MMC）组、蛙皮素（BOM）组和MMC＋BOM组中，用不同浓度的BOM及MMC，对人胃癌细胞株SGC7901的生长曲线、细胞抑制率和细胞凋亡率的影响。结果：在一定浓度范围内，BOM对胃癌细胞的促生长作用及MMC的抑制作用均呈时间一剂量依赖性。BOM组、对照组、MMC组和MMC＋BOM组的胃癌细胞生存率依次为90．00％、82．96％、65．07％、60．14％；凋亡率在MMC＋BOM组明显增高（29．26％），与对照组（4．72％）或BOM组（5．13％）两两比较时，具有显著性差异（P〈0．01）；MMC＋BOM组凋亡率（29．26％）较MMC组（25．11％）高，在统计学上具有差异性意义（P〈0．05）。结论：虽然BOM在体内外能刺激胃癌细胞增殖，但与抗癌药MMC联合后，可协同MMC对胃癌细胞的凋亡，提高抗癌药的疗效。     

Synthetic Smac Peptide Enhances Chemo-sensitivity of Bladder Cancer Cells

The effects of synthetic Smac peptide （SmacN7） on chemotherapeutic sensitivity of bladder cancer cells were investigated. SmacN7 penetratin peptide was synthesized and delivered into T24 cells. MTT assay was used to evaluate the viability of T24 cells induced by low-dosage of MMC Flow cytometry was used to analyze the proportions of apoptosis. Western blot was used to detect the expression of XIAP and Caspase-3. The activity of Caspase-3 was measured and the effect of SmacN7 combined with MMC on T24 cell lines was also determined. The results showed that SmacN7 penetratin peptide could successfully interact with endogenous XIAP, increase the proportions of apoptosis of T24 cell lines induced by low-dosage of MMC in a dose-and time-dependent manner. An obvious down-regulation of XIAP expression and up-regulation of Caspase-3 was identi-fied by Western blot. The activity of Caspase-3 in experimental group was significantly increased as compared with that in the control group. As compared with MMC group, the viability of T24 cells in SmacN7 penetratin peptide＋MMC group was markedly decreased to 2.22 and 3.61 folds at 24 h and 48 h respectively. It was concluded that SmacN7 penetratin peptide could act as a cell-permeable IAP inhibitor, inhibit the proliferation, induce apoptosis and enhance the chemo-sensitivity of bladder cancer cells to MMC. These findings indicate that SmacN7 penetratin peptide may be a very promising ageut for bladder cancer treatment when used in combination with chemotherapy.     

溶瘤病毒联合丝裂霉素对膀胱癌细胞体内外杀伤的实验研究

目的 探讨溶瘤病毒与丝裂霉素联合应用对膀胱癌T-24细胞体内外生长的抑制效应和机制.方法 将溶瘤病毒不同的感染复数或与丝裂霉素（0.1 mg/L）联合应用,通过细胞生长抑制实验及裸鼠皮下移植瘤模型,观察其对膀胱癌T-24细胞的作用及其机制.结果 与单独应用相比,溶瘤病毒与低剂量的MMC联合可明显抑制T-24细胞体外生长,诱导T-24细胞凋亡,裸鼠体内肿瘤发生时间延迟,4周后肿瘤体积与单独应用时相比,差异有显著性（P＜0.05）.与体外处理结果一致.结论 溶瘤病毒与MMC联合应用可显著增强MMC对T-24细胞的杀伤作用,进一步提高膀胱癌的疗效.     

组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂联合抗癌药物对膀胱癌细胞功能影响的研究

目的:探究组蛋白甲基化酶EZH2特异性抑制剂UNC1999与针对DNA 的化疗药物丝裂霉素C对膀胱癌T24 细胞的抑制效应。方法:组蛋白甲基化酶EZH2特异性抑制剂UNC1999 和化疗药物丝裂霉素C单独使用或者联和使用处理T24细胞,Q-PCR法检测EZH2基因的表达水平,用Western blot法检测EZH2以及下游H3K27me3蛋白的表达水平,MTT法测定T24 细胞的增殖,划痕实验检测细胞的迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:UNC1999与丝裂霉素C单独使用以及联合用药都能引起EZH2表达水平的下调,同时引起T24 细胞增殖能力降低, 迁移能力下降,凋亡水平上调,两者联合使用效果更加明显。结论:UNC1999以及MMC均可引起膀胱癌细胞EZH2表达水平的下调,同时联合使用效果最大, 可明显降低细胞的增殖侵袭能力,上调凋亡水平,为膀胱癌的化疗治疗、用药方法以及后续的机制研究提供了参考。     

国产新型光敏剂CDHS801光动力学杀伤膀胱癌机理的实验研究

目的研究光敏剂CDHSS01光动力学治疗膀胱癌机理。方法将膀胱癌T24细胞与CDHSS01共同孵育,采用激光共聚焦显微镜为成像工具,应用线粒体荧光探针MitoTracker RED CMXRose和MitoTracker Green FM进行CDHS801的亚细胞定位分析。MTT法检测光动力学治疗后存活率,激光共聚焦显微镜丫啶橙／溴化乙锭染色观察T24染色情况,电镜检测细胞超微结构的变化以及流式细胞仪判断细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜下,CDHSS01和线粒体荧光探针发出的荧光都位于细胞浆内,在核周呈点状散在分布。PDT后实验组细胞存活率明显降低,细胞膜完整性丧失被染成黄色,流式细胞仪PI染色在sub-G1期出现了凋亡峰,透射电镜下细胞染色质于核膜下浓聚边集形成新月体,细胞发生凋亡,对照组则没有这些表现。结论CDHSS01经膀胱癌T24细胞摄取后,分布在细胞浆内,主要在线粒体内,激光照射后膀胱癌细胞发生了凋亡。     

重组复合高效干扰素抗人乳腺癌细胞的体外实验研究

目的 了解重组复合高效干扰素(rSIFN-co)在体外抗乳腺癌细胞的作用,以及与抗肿瘤药物合用的协同抗肿瘤作用,并初步探讨其可能的作用机理.方法 采用MTT比色法和流式细胞仅技术,检测rSIFN-co、干扰素(干复津)、抗肿瘤药物(盐酸表柔比星),以及联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞及人乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞增殖、凋亡的影响,采用免疫组化SABC法检测经过各药物处理的MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞中P53、Bcl-2、CerbB-2蛋白的表达.结果 rSIFN-co对MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞均具有增殖抑制、促进凋亡作用,作用强于干复津,且有剂量依赖性及时间依赖性倾向;rSIFN-co与盐酸表柔比星联用具有协同增效的作用;rSIFN-co可下调MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞P53、CerbB-2蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达水平.结论 rSIFN-co诱导MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞凋亡、抑制其增殖作用可能与下调肿瘤细胞P53、CerbB-2蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达水平有关.     

人骨巨细胞瘤化疗药物体外实验作用的分析

用体外培养的骨巨细胞瘤细胞系为研究对象,采用四氮唑蓝（ＭＴＴ）分析法着重观察了６种骨肿瘤的常用化疗药物：氨甲喋啶（ＭＴＸ）、阿霉素（ＡＤＲ）、顺铂（ＣＤＤＰ）、长春新碱（ＶＣＲ）、盐酸氮芥（ＮＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）对骨巨细胞瘤的体外药物作用模式。结果发现ＭＴＸ呈坪型;ＡＤＲ呈双相指数型;ＣＤＤＰ呈阈值指数型;ＶＣＲ呈简单指数型;ＮＭ呈阈值指数型;ＭＭＣ呈简单指数型。除ＭＴＸ对其无作用外,其余都对其有一定的细胞毒作用。因而认为临床上对浸润型骨巨细胞瘤可开展化学治疗     

丝裂霉素C与C2-神经酰胺或抗Fas单克隆抗体联合治疗膀胱癌的体外研究

目的:探讨丝裂霉素C(MMC)与C2-神经酰胺(C2-Cer)或抗Fas单克隆抗体(anti-FasmAb)联合应用对人膀胱癌BIU-87和T24细胞生长的抑制作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定MMC、C2-Cer、anti-FasmAb单独应用及MMC分别与C2-Cer或anti-FasmAb联合应用对人膀胱癌BIU-87和T24细胞生长的抑制作用,并应用CHOU-TALALAY联合指数法对药物联合应用的效果进行判定。结果:药物单用及MMC分别与C2-Cer、anti-FasmAb合用对BIU-87和T24细胞的生长均有抑制作用,药物合用时的中效浓度与单用时比较有不同程度的降低。MMC与C2-Cer合用时,对于BIU-87细胞,表现为协同作用(CI<1);对于T24细胞,低浓度(0%1)。MMC与anti-FasmAb合用时,对于BIU-87细胞,在大部分效应范围(18%1);对于T24细胞,则在大部分效应范围(0相似文献   

Enhanced sensitivity to mitomycin C by abating heat shock protein 70 expression in human bladder cancer cell line of BIU-87

Background Bladder cancer is a relatively common tumor in the urinary system, in which mitomycin C (MMC)-based chemotherapy or combination chemotherapy has been mainly used to treat patients with advanced bladder cancer. The prognosis of patients with advanced bladder cancer is still extremely poor in spite of recent therapeutic advances. To improve the prognosis, the sensitivity of tumor cells to mitomycin C by the induction of apoptosis with the abating heat shock protein 70 (HSP70) expression in human bladder cancer cell lines of BIU-87 was investigated. Methods HSP70 expression was abated in BIU-87 cells by HSP mRNA antisense oligomers. MTT assay and the clone-forming test were used for evaluating the sensitivity of cells to MMC. Apoptosis was assessed using both fluorescent microscopy after staining the cells with Hoechst 33258 and DNA fragment ladder agarose electrophoresis. Thirty-two male six-week-old BALB/c nude mice, at the beginning of the experiment, were used to evaluate the effect of antisense oligomers (ASO) on the tumor formation in vivo. Results HSP70 expression in BIU-87 was effectively abated by HSP70 mRNA antisense oligomers. The percentage of apoptotic cells in ASO group was greater than in sense oligomers (SO) ［P&lt;0.05, （18.31±2.89）% vs （1.89±0.74）%］, nonsense oligomers (NO) ［P&lt;0.05, （18.31±2.89）% vs （1.78±0.92）%］ and blank groups ［P&lt;0.05, （18.31±2.89）% vs （1.87±0.84）%］, while the sensitivity of tumor cells to mitomycin C was enhanced. The in vivo tumor inhibition rate of ASO plus MMC (&gt;50%) was more than that of ASO or MMC group alone (all P&lt;0.05). Conclusions The abating level of HSP70 expression can strengthen the sensitivity of BIU-87 to MMC. One of this effect might be related to the induction of apoptosis by abating HSP70 expression. Chin Med J 2005; 118(23):1965-1972