丁香酚通过PI3K/AKT信号通路减轻镰刀菌诱导的角膜炎症

目的：探讨丁香酚对镰刀菌(F.solani)诱导的小鼠真菌性角膜炎(FK)的保护作用,并初步探讨可能的潜在机制。

方法：采用改良的表层镜法制备FK小鼠模型。二甲基亚砜(DMSO)组大鼠右眼结膜囊涂抹等量DMSO(0.05%)。丁香酚组将丁香酚(160 μg/mL)涂抹至小鼠右眼结膜囊。类胰岛素生长因子-1(IGF-1)组除施用丁香酚外,还于右眼结膜囊涂抹PI3K/AKT通路激活剂IGF-1(10 nmol/mL)。分别在接种镰刀菌悬浮液的第1、3、5 d,于裂隙灯显微镜下观察角膜形态。采用苏木精伊红(HE)染色评估角膜组织病理损伤。测定角膜组织载菌量。酶联免疫吸附试验和蛋白免疫印迹用于分析炎症介质白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的水平和PI3K/AKT通路蛋白的表达。

结果：丁香酚治疗可改善FK小鼠的角膜炎形态症状和炎症反应,减轻角膜病理组织损伤和真菌负荷。在镰刀菌感染3 d,与DMSO组相比,丁香酚组角膜组织IL-6水平明显升高,而IL-1β水平明显降低(均P<0.05); 且丁香酚组角膜组织IL-6水平明显高于IGF-1组、IL-1β水平明显低于IGF-1组(均P<0.05)。在感染5 d,丁香酚组角膜组织中IL-6和IL-1β水平均明显低于DMSO组和IGF-1组(P<0.05)。与DMSO组相比,丁香酚组角膜组织中p-PI3K和p-Akt表达均明显降低(P<0.05); 且丁香酚组角膜组织p-PI3K和p-Akt表达明显低于IGF-1组(均P<0.05)。

结论：丁香酚可能通过抑制PI3K/AKT通路来减轻镰刀菌引起的角膜炎症,对小鼠镰刀菌角膜炎具有保护作用。     

Th1/Th2细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达

目的 通过检测Th1/Th2细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达水平,探讨机体免疫在该病发展中的作用. 方法应用角膜表层镜法建立Balb/c小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,在感染后第1、3、5、7天,裂隙灯显微镜观察角膜炎特点;HE染色观察角膜病理变化;半定量RT-PCR和ELISA检测角膜中Thl细胞因子(IFN-γL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)基因mRNA和蛋白的表达,半定量RT-PCR检测T-bet基因mRNA的表达;直线相关分析检测T-bet mRNA与IFN-比值的相关性. 结果角膜接种菌液后,早期角膜浸润混浊进行性加重,第5天后新生血管大量生长;HE染色可见第1、3天在角膜缘、角膜基质及前房中有大量的炎症细胞浸润,第5天后炎症细胞减少,角膜基质中纤维细胞逐渐增多;RT-PCR与ELISA检测结果表明,Thl细胞因子(IFN-γL-12)和Th2细胞因子(IL-4、IL-10)基因mRNA及蛋白在角膜接种菌液后均出现表达,且IFN-γL-12的表达显著强于IL-4、IL-10;IFN-γ/IL-4比值在第3天达最高值,而后逐渐降低;T-bet mRNA在第3天达最高值;T-bet mRNA的表达与IFN-γ/IL-4比值呈正相关(P＜0.05). 结论在真菌性角膜炎中,Thl/Th2型免疫应答共同参与调节机体的抗真菌免疫,但以Th1型应答为主;角膜感染真菌后第3天机体的免疫力达最强.     

大黄素对烟曲霉菌性角膜炎模型大鼠的抗炎作用机制研究

目的：研究大黄素对烟曲霉菌性角膜炎模型大鼠的抗炎作用机制。

方法：建立烟曲霉菌性角膜炎模型,分为模型组和大黄素组,各8只,正常组10只。大黄素组采取大黄治疗,模型组和正常组采取等体积生理盐水治疗。观察大鼠角膜炎症指数、病理学特征,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、MAPK、NF-κB蛋白。

结果：大黄素组大鼠角膜炎症指数、角膜炎症细胞计数、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平、MAPK、NF-κB蛋白低于模型组,PPAR蛋白表达高于模型组(P<0.05)。

结论：大黄素通过调控PPAR、MAPK、NF-κB蛋白,改善TNF-α、IL-6、ICAM-1炎症因子水平,对烟曲霉菌性角膜炎大鼠起到抗炎作用。     

小鼠角膜抑制白念珠菌增生机制的探讨

真菌性角膜炎（fungal keratitis，FK）是严重危害视力的感染性角膜病。近年来随着抗生素、糖皮质激素等免疫抑制剂及化疗药物的广泛应用，眼部真菌感染的发病率在我国有逐年增多的趋势，已成为我国重要的致盲性眼病。研究FK发病机制时发现，实验性白念珠菌性角膜炎无需治疗就可以痊愈，其中感染引起的特异性免疫反应发挥着重要作用[1]。     

特异性促炎症消退介质在眼表疾病中的研究进展

特异性促炎症消退介质(SPM)是一类由多不饱和脂肪酸代谢产生并介导炎症消退反应的脂质介质。SPM信号分子及其受体在眼表组织与细胞高度表达,共同构成内源性SPM网络,对于维持眼表健康和免疫稳态具有重要作用。近年来研究表明,SPM及其类似物在促进角膜伤口愈合与角膜神经再生的同时,还可抑制角膜移植排斥反应、过敏性结膜炎、微生物角膜炎的免疫炎症反应,并有望成为治疗干眼的潜在性药物靶点,同时为眼表疾病的发病机制研究与临床诊治提供了新的思路。本文将就SPM在维持眼表稳态的重要作用及其在多种眼表疾病中的治疗潜力进行综述。     

羊膜移植对实验性单疱病毒角膜炎中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的探讨羊膜移植对单疱病毒性角膜炎中基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制剂(TIMP-1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法将40只Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,将5μL含有100×103pfuHSV-1病毒的DMEM滴于2组小鼠右眼划伤角膜表面建立单疱病毒性角膜炎模型,对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术;对照组不行羊膜移植。在羊膜移植术后0、2d、7d、14d处死动物,用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测2组小鼠MMP-9及TIMP-1在角膜中的分布及其平均光度值。结果羊膜移植组临床评分显示各时间点角膜上皮病变、角膜混浊和新生血管明显低于对照组。免疫组织化学染色对照组角膜中MMP-9在第2d出现表达,第14d达高峰。TIMl-1开始表达不明显,第7d出现表达,14d达高峰。羊膜移植组各时间点MMP-9表达低于对照组,而TIMP-1表达高于对照组。结论羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡,从而抑制和延迟HSV感染后单纯疱疹病毒性角膜炎的发生和发展。     

生物工程角膜移植术后排斥反应的临床及免疫病理观察:附5例报告

目的：对生物工程角膜移植术后发生免疫排斥反应患者进行激光共焦显微镜观察和免疫病理研究,初步探究生物工程角膜移植排斥反应的发生机制。

方法：回顾性病例研究。纳入2018-09/2020-12我院收治的感染性角膜炎行生物工程角膜移植术后发生免疫排斥患者5例5眼。裂隙灯检查角膜透明度、角膜新生血管; 激光共焦显微镜对角膜进行动态观察,记录免疫排斥反应后角膜上皮下朗格罕氏细胞和基质炎症细胞密度,并以对侧眼作为对照进行统计分析。行同种异体角膜移植时取下生物工程角膜,免疫组织化学染色后对CD4⁺细胞和CD8⁺细胞及炎症细胞的浸润和分布进行观察。

结果：激光共焦显微镜显示,术眼角膜上皮下可见大量活化郎格罕氏细胞,其活化比例与对侧眼比较有差异(χ²=38.29,P<0.001)。基质层大量炎症细胞,与对侧眼比较具有差异(t=32.5,P<0.05)。对生物工程角膜组织进行免疫组织化学染色和HE染色,角膜基质层均可见CD4⁺细胞和CD8⁺细胞,仅1眼角膜基质层可见大量嗜酸性粒细胞。

结论：生物工程角膜移植术后免疫排斥反应经免疫病理证实以T细胞介导的细胞免疫在发病机制中具有重要作用,对异种抗原的超敏反应可能参与其中。     

单纯疱疹病毒性角膜炎小鼠模型的建立及鉴定

目的：探讨建立不同感染时期HSK小鼠动物模型,为HSK的深入研究建立基础。方法：Balb/c小鼠125只麻醉后在显微镜下用刀片背面尖端于角膜＂#＂字划痕,其中100只小鼠接种HSV-Ⅰ病毒,另25只小鼠不接种病毒作为正常对照组。术后每天用10g/L荧光素钠染色后裂隙灯显微镜下观察角膜病变发生情况,并取角膜表面泪液进行HEK293T细胞检测以确定裂隙灯显微镜下有无病毒复制。对潜伏感染期小鼠模型采用紫外线B光照射以诱导HSK复发。结果：接种HSV-Ⅰ病毒的小鼠模型眼于接种后3d内全部出现急性上皮性角膜炎表现。经阿昔洛韦滴眼液治疗1wk后角膜炎症消失,但角膜和三叉神经节中PCR检测病毒仍为阳性。潜伏感染期小鼠模型经紫外线B光照射后也都在1wk内复发,并表现为以基质型角膜炎为主要临床表现的角膜病变。结论：采用角膜划痕法对Balb/c小鼠接种HSV-Ⅰ病毒和紫外线B光照射可以成功地制作出原发感染期、潜伏感染期和复发感染期等不同感染时期的HSK模型,而且操作相对简单、方便易行。     

马来西亚东西部感染性角膜炎研究

目的：评估马来西亚东西部三级医院感染性角膜炎流行病学及发病因素。

方法：收集来自马来西亚西部Sungai Buloh医院、吉隆坡综合医院和东部Queen Elizabeth医院、沙捞越州综合医院的感染性角膜炎患者207例。研究记录了危险因素。进行角膜刮片镜检和培养。

结果：马来西亚西部感染性角膜炎最普遍的风险因素是植物性损伤(28.5%)和非植物性损伤(18.3%)。27.7%的创伤病例与工作有关,其中外籍男性工作者占34.2%。马来西亚东部最普遍的风险因素是配戴隐形眼镜(32.9%)。马来西亚东西部绿脓假单胞菌是感染性角膜炎最常见的病菌。马来西亚西部最常见的真菌病原体是镰刀菌,占所有阳性真菌培养物的60%。

结论：马来西亚东西部公立医院细菌性角膜炎检出率较高,而东部隐形眼镜配戴则是常见风险因素(P<0.05),西部真菌性角膜炎检出率高。     

肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响

目的：观察抗真菌药物诱导的肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响。

方法：选用健康无眼疾的C57BL/6J雄性小鼠,将实验小鼠随机分为两组：对照组和两性霉素B组。对照组给予正常饮食,两性霉素B组给予添加两性霉素B的饮食,以诱导小鼠肠道真菌菌群失调,4wk后对两组小鼠角膜进行上皮创伤,使用荧光素钠染色角膜创伤区域,动态观察上皮修复情况,并利用免疫荧光染色观察角膜上皮细胞、炎症细胞变化,通过HE染色观察角膜厚度的变化。

结果：两性霉素B组与对照组相比,再上皮化速度和创伤修复延迟,炎症细胞明显减少,角膜上皮厚度变薄。

结论：肠道真菌菌群失调延迟角膜创伤的修复,降低角膜创伤后的炎症反应。     

The visual fields of the tawny owl, Strix aluco L

The uniocular retinal field of Strix aluco is highly asymmetrical. The maximum width of 124 degrees is less than that recorded in any other vertebrate. Maximum retinal binocular field width equals 48 degrees and the optic axes diverge by 55 degrees. Maximum binocularity occurs above the bill whose tip lies outside of the visual field. The cyclopean retinal field has a maximum width of 201 degrees. Limited data on the visual fields of the pigeon are also presented. All of these data are compared with visual field widths in other species and the significance of the owl eye's tubular shape, its nasad asymmetry, and the possible factors influencing binocular field width are discussed.     

大株红景天对糖尿病视网膜病变大鼠眼血流影响的实验研究

目的：探讨大株红景天对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠眼血流的影响。

方法：将90只SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组各30只。模型组和干预组大鼠高糖高脂饲料喂养+链脲佐菌素(40mg/kg)腹腔注射，以构建DR模型大鼠，同时对照组大鼠基础饲料喂养+等量生理盐水腹腔注射。造模成功后，干预组大鼠注射大株红景天注射液(10mL/次，1次/d)，对照组和模型组大鼠注射等量生理盐水。连续干预治疗4wk。采用Laser Doppler Flowmetry激光血流仪检测大鼠眼部血流，采用TUNEL法检测大鼠视网膜细胞凋亡，采用 RT-PCR法和Western blot法检测大鼠视网膜组织血管内皮生长因子(VEGF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达。

结果：模型组和干预组大鼠全血粘度、全血粘度高切、全血粘度低切和血沉高于对照组(P<0.01)，而干预组大鼠各指标较模型组降低(P<0.01)。模型组和干预组大鼠PSV和EDC低于对照组(P<0.01)，RI高于对照组(P<0.01)； 而干预组大鼠PSV和EDC较模型组增加(P<0.01)，RI较模型组降低(P<0.01)。模型组和干预组大鼠视网膜细胞凋亡率大于对照组(P<0.01)，而干预组凋亡率较模型组降低(P<0.01)。模型组和干预组大鼠视网膜组织VEGF和GFAP 表达高于对照组(P<0.01)，GLAST表达低于对照组(P<0.01)； 而干预组大鼠VEGF和GFAP表达较模型组降低(P<0.01)，GLAST表达较模型组增加(P<0.01)。

结论：大株红景天注射液能显著改善糖尿病视网膜病变模型大鼠眼部血液流变学和血流动力学，减少模型大鼠视网膜细胞凋亡，下调视网膜组织VEGF和GFAP表达，上调GLAST表达。     

血-视网膜内屏障体外模型构建研究进展

血-视网膜内屏障是维持视网膜内环境稳态的重要结构基础,其完整的结构和功能仍缺乏更为深入的研究。体外血-视网膜内屏障模型具有可控、高效、快速、稳定等特点,已成为研究屏障具体构成和功能的一种有效工具。本文主要对血-视网膜内屏障的结构组成、功能以及体外模型的构建进行综述,有助于推进血-视网膜内屏障生理生化、病理药理及临床等方面的研究,并为糖尿病视网膜病变等眼底血管性疾病的研究提供一种共性与关键的实验基础。     

视网膜微血管内皮细胞的体外分离和培养方法新进展

体外分离与选择性培养视网膜微血管内皮细胞的方法有多种,其中新报道的组织块培养结合胶原酶消化法因操作简便、经济,获得的内皮细胞纯度较高、活性良好等优点而被广泛应用.受人眼球供体的限制,研究者通常会选用分离与人高度同源的鼠视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cell,RMVEC)进行体外实验.本文就目前常用的视网膜微血管内皮细胞体外培养方法从不同动物种属、添加因子、细胞纯化、体外鉴定等方面进行阐述,同时简要说明众多方法在操作过程中的优缺点,为研究人员选择合适的培养方法提供参考.     

人角膜内皮细胞的体外培养及其鉴定的研究进展

角膜内皮细胞对维持角膜的透明性和厚度起着关键性的作用。人体内角膜内皮细胞有限的增殖能力及角膜供体的短缺,使组织工程人角膜内皮的体外重建受到了关注。目前,人角膜内皮细胞的培养方法已基本成熟。但是体外培养的人角膜内皮细胞的功能评价及鉴定标准却尚未建立。本文就人角膜内皮细胞的体外培养及其鉴定的研究进展进行综述。     

结晶样视网膜色素变性中与CYP4V2基因相关的致病突变

目的：使用Sanger测序法鉴定2个中国结晶样视网膜色素变性(BCD)家系中CYP4V2基因的突变位点。

方法：收集2019-01/09临床诊断为BCD患者的临床相关资料。采集患者、患者家系成员的外周血,提取DNA,利用Sanger测序法鉴定突变位点。

结果：共收集2个BCD先证者,先证者均表现为渐进性视力下降,眼底均可见典型的结晶样物质沉积。测序发现先证者1及其患病的哥哥,妹妹均在CYP4V2基因上存在c.802-8_810del17insGC的纯合突变。而先证者2则在CYP4V2基因上存在c.219T>A(p.F73L)、c.802-8_810del17insGC杂合突变。

结论： 中国BCD患者中最常见的c.802-8_810del17insGC突变在先证者1家系中为纯合突变,是其家系的致病突变。而先证者2则携带了中国BCD患者最常见的c.802-8_810del17insGC杂合突变,同时先证者2还携带c.219T>A(p.F73L)错义突变,突变均影响了CYP4V2基因的正常编码,进而导致疾病。     

Pax6基因在视网膜母细胞瘤中的表达及临床意义

目的:探讨Pax6基因在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中的表达及临床意义。方法:选择我院2001-01/2012-12收存在眼科病理室的15例Rb组织切片设为观察组,再选取15例正常视网膜组织切片设为对照组。应用Western-Blot及RT-PCR(逆转录酶链反应)法分别对正常视网膜组织及Rb组织中的Pax6蛋白和Pax6 mRNA的表达进行检测,同时应用Western-Blot法对Pax6基因下游的BRN3b及MATH5促分化基因在蛋白水平的表达进行检测,最后进行组间比较,进而对Pax6基因在Rb中的表达及临床意义进行探讨。结果:观察组Pax6基因mRNA表达平均值为0.99±0.03,Pax6基因蛋白表达平均值为2.07±0.15,BRN3b蛋白表达平均值为0.195±0.016,MATH5蛋白表达平均值为0.190±0.031,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:异常表达的Pax6基因可能对Rb的出现起到促进作用。     

大龄近视患者行LASIK的体会

目的:探讨大龄近视伴调节力下降患者行准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)的手术设计对视力的影响。方法:屈光不正伴老视的患者32例63眼中27例53眼行单眼LASIK主视眼按最佳矫正远视力完全矫正,非主视眼近视欠矫-0.5～-2.00D,5例10眼双眼远视力全部矫正。观察术后3mo视力。结果:术后3mo,27例53眼远视力主视眼1.0～1.2,非主视眼0.3～0.6;近视力主视眼0.6,非主视眼1.0。5例10眼双眼远视力完全矫正。结论:LASIK矫正大龄调节力下降患者,在设计手术方案时需按患者要求、年龄等综合考虑。     

Properties of the visual pigments of the moth Manduca sexta and the effects of two detergents, digitonin and CHAPS

The three known visual pigments (P520, P450, P357) of the moth, Manduca sexta (Lepidoptera, Sphingidae), were extracted in two different detergents (2% digitonin, 6 or 12mM CHAPS). As is the case in unextracted membranes, the metarhodopsins are quite stable in CHAPS extracts, while in digitonin the metarhodopsins of P520 and P450 decay rapidly at 15° C to opsin and free retinal. The relative absorbance ratios are: 1.0:1.6 (P520:M485), 1.0:1.1 (P450:M485), and 1.0:0.8 (P357:M470). The relative amounts of the visual pigments found in digitonin extracts is 100:25:8 (P520:P450:P357); about 60 picomoles of P520 can be extracted from one Manduca retina.     

准分子激光原位角膜磨镶术治疗近视眼远期疗效分析

目的:评价准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)治疗近视眼的远期疗效。方法:对接受LASIK治疗近视术后≥8a的患者术前及术后的裸眼视力、屈光度、角膜曲率、角膜厚度及并发症等情况进行回顾性分析。按术前屈光度数分3组:A组-1.00~-6.00D者92眼,B组-6.25~-10.00D者68眼,C组≥-10.00D者27眼。结果:术后≥8a三组裸眼视力≥1.0者依次为73.9%,52.9%,22.2%,平均屈光度数分别为-0.21±0.06,-0.54±0.12,-2.33±0.36D。术后≥8a屈光度在±1.00D范围内占83.4%,±0.50D范围内占59.4%,A组与B,C组分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术后≥8a屈光度与术后1a比较,屈光度回退≥1.00D占9.09%。结论:LASIK治疗近视手术安全有效、预测性好,远期疗效稳定;特别是对于低中度近视眼患者可获得更为满意的治疗效果。