血清镁离子酶法测定及在肝硬化病人中的应用

目的　评价丙酮酸激酶偶联乳酸脱氢酶测定血清镁离子方法 ,观察几种物质对镁测定的干扰及肝硬化病人血清镁离子水平。方法　应用丙酮酸激酶偶联乳酸脱氢酶反应测定血清镁离子。结果　该方法批内CV为 0 .63 % ,日间CV为 1.46% ,钾、氨、钙、锰、铜、锌、铁离子以及胆红素、甘油三酯和血红蛋白对镁离子测定无干扰。肝硬化组病人血清镁为 (0 .67± 0 .14 )mmol L ,对照组为 (0 .88± 0 .0 9)mmol L ,t =8.5 71,P <0 .0 1,两组差别具有显著的统计学意义。结论　该方法准确性好 ,灵敏度高 ,特异性强 ,抗干扰性强。低血镁 (2 1 3 3 ,63 .64 % )在肝硬化中较为常见     

丙酮酸激酶的离子激活

丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK,EC2.7.1.40)又称三磷酸腺苷、丙酮酸2-O-磷酸转移酶,是调节糖酵解的3个限速酶之一。PK在有锰离子和镁离子存在情况下催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸,这一原理被用来测定血清钾离子浓度。为了证实PK活性与血清阳离子之间的关系,特别是确定与此酶活性有关的无机离子,我们进行了PK的离子激活研究,测定钾、钠、钙、锂、锰、氨和镁7种离子对PK活性的影响。由于PK的反应产物丙酮酸并不能直接指示PK活性,因而需偶联LDH系统,通过测定NADH的衰减程度来间接指示PK活性。     

丙酮酸激酶法检测冰冻红细胞解冻后残留甘油含量研究

低温冰冻红细胞保存技术是红细胞保存的重要方法之一,通常使用甘油作为红细胞冰冻保护剂。甘油可以通过红细胞膜使溶液的冰点降低,具有冷冻保护作用,但是甘油对红细胞又有溶血作用,因此冰冻红细胞在输注前必须去除甘油,     

丙酮酸脱氢酶激酶PDK4在临床中的研究进展

丙酮酸脱氢酶复合物PDC可催化丙酮酸氧化脱羧,从而为三羧酸循环和脂质生物合成提供乙酰-CoA和NADH,其活性可被丙酮酸脱氢酶激酶PDK磷酸化灭活。本文主要介绍了PDK同工酶——PDK4在代谢性疾病,如糖尿病、脂质代谢异常以及血管钙化中的研究进展,并进一步对PDK4的调控机制进行总结,包括调控因子、激素水平以及基因多态性。     

石斛合剂对HepG2细胞葡萄糖激酶与丙酮酸脱氢酶活性的影响

目的 探讨石斛合剂促进葡萄糖代谢的酶学机制.方法 ①以5％、10％、15％石斛合剂的含药血清培养HepG2细胞24h,测定葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶活性;②以高浓度胰岛素培养HepG2细胞24h,继10％合药血清干预24h,测定葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶的活性.结果 石斛合剂的含药血清能提高HepG2细胞葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶的活性(P＜0.05);高浓度胰岛素能降低葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶活性(P＜0.05),石斛合剂的治疗能增加葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶的活性(P＜0.05).结论 高浓度胰岛素能诱发胰岛素抵抗,石斛合剂能提高葡萄糖代谢关键酶活性,缓解胰岛素抵抗.     

丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂的研究进展

肿瘤细胞通过抑制线粒体中丙酮酸脱氢酶复合物(pyruvate dehydrogenase complex, PDC)的活性,将葡萄糖经由糖酵解途径分解为生物大分子的合成中间体。在这一过程中,丙酮酸脱氢酶激酶(pyruvate dehydrogenase kinases, PDKs)发挥着关键作用。抑制肿瘤细胞中PDKs活性可以有效阻断这一代谢途径,同时起到激活线粒体氧化代谢、诱导细胞凋亡的作用。PDKs抑制剂的研究也成为药物化学领域研究热点之一,能够靶向经典结合位点的新颖结构不断被发现,部分化合物也进入了临床研究阶段。本文综述了近年来PDKs抑制剂的研究进展,旨在总结相关新化学实体的研发现状,并发掘其在临床中的应用价值。     

GC法测定丙酮酸乙酯的含量

摘 要 目的：建立测定丙酮酸乙酯原料含量的气相色谱法。方法: 色谱柱：Varian CP7502毛细管柱（25 m×0.25 mm,0.25 μm）;载气：氮气,流量为30 ml·min^-1;燃气：氢气,流量为40 ml·min^-1;助燃气：空气,流量为400 ml·min^-1;检测器：氢火焰离子化检测器（FID）;进样口温度：210 ℃;升温程序：初始温度为 40 ℃,以 15 ℃·min^-1的速度升至200 ℃;分流比：100∶1;进样量：1 μl。结果: 丙酮酸乙酯进样浓度在0.025 6~8.192 8 mg·mL^-1范围内与内标物的峰面积比值呈良好的线性关系（r=0.999 8）,平均加样回收率为99.99%,RSD为1.38%（n=9）。结论:建立的GC法准确、简便、快速、稳定性好,检测灵敏度高,适用于丙酮酸乙酯原料药的含量测定。     

HPLC-荧光法测定人血清中顺式阿曲库铵的浓度

目的:建立测定人血清中顺式阿曲库铵浓度的方法。方法:血清酸化后采用二氯甲烷液-液萃取法处理,以高效液相色谱(HPLC)-荧光法进样测定,色谱柱为Kromasil100-5C18,流动相为1.0%三氟乙酸-乙腈(58∶42),流速为0.8ml/min,柱温为常温,荧光检测波长分别为280 nm(E x)、320 nm(E m)。结果:顺式阿曲库铵血药浓度在15.625² 000ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均提取回收率为78.78%2 000ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均提取回收率为78.78%⁸3.59%,平均方法回收率为98.58%83.59%,平均方法回收率为98.58%¹01.23%,日内、日间RSD均小于10%。结论:本方法操作简便、灵敏度高、重现性好、结果可靠,可满足临床上血清中顺式阿曲库铵血药浓度检测和药动学研究的需要。     

线粒体肌酸激酶同工酶的免疫印迹检测及在肺癌诊断中的应用

应用自制抗线粒体肌酸激酶同工酶(CK-mit)抗血清,建立了以琼脂糖电泳和免疫印迹分析来定性检测血清中CK-mit的方法。并检测了33例肺癌患者、31例其它肺部疾病患者(对照组)血清标本.结果显示肺癌组CK-mit阳性率明显高于对照组(57.6％比6.5％,P<0.001),同时检测了血清CK及CK-MB活力,两组间无显著差异(P>0.05),CK-mit阳性率在不同类型肺癌分别是鳞癌71.4％(10/14),小细胞癌66.7％(6/9)和腺癌30％(3/10)。CK-mit检测的灵敏度和特异度分别是57.6％和93.5％。提示CK-mit检测有助于肺癌的临床诊断。     

毛细管气相色谱法测定人血清及乳汁中二十二碳六烯酸的浓度

目的：建立一种简便、准确的毛细管气相色谱法测定血清和乳汁中二十二碳六烯酸DHA）含量的方法。方法：用甲醇－甲苯－乙酰氯在100摄氏度条件下，将标本中各种形式的DHA进行甲酯化，采用氰丙基聚甲基硅氧烷弹性石英毛细管柱，程序升温法进行分离；用氢火争离子化检测器进行检测，以C15：00为内标，以内标标准曲线法定量。结果：测定日内和日间变异系数，血清样品为1．5％－4．7％和5．5％－8．8％，乳 汁样品为3．6％和1．8％，回收率平均为91．6％，在10－250mg/L范围内线性关系良好（r=0.9994)，结论：该法样品用量少，前处理方法简单，准确、血清和乳汁中其他成分对DHA的测定无干扰，适用于临床检测和科研的需要。     

采用超滤前处理考马斯亮蓝法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量

目的：药品中外源性残留蛋白不仅影响药品质量,且严重威胁人用药安全。青霉素G酰基转移酶（简称PGA）是酶法工艺生产β-内酰胺抗生素过程中所用关键催化酶,有必要对其进行研究并严格控制终产品中的蛋白残留量。已有方法采用凝胶过滤法（GFC）对残留蛋白进行前处理,但该法存在富集效率低等诸多问题。本文探讨并尝试建立一种不同方式和原理的蛋白分离、富集方法,采用超滤前处理结合考马斯亮蓝（Bradford）法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量。方法：采用Amicon^®Ultra-15型超滤管（15 mL,截留分子量为3 kDa）对阿莫西林供试液进行前处理,离心力为5000 g（7000rpm）,对溶液进行净化并对蛋白进行浓缩富集,再采用Bradford法对浓缩液进行蛋白定量测定,检测波长为595 nm。结果：该法具有较好的专属性;蛋白浓度在1.0~100.0 μg·mL^-1（r=0.9921）内校正曲线（lg A~lg C）的线性关系良好;回收率>72%（n=3×3）;Bradford法最低检出限为0.1 μg·mL^-1,相当于0.0001%;Bradford法的精密度≤ 5.0%。结论：该方法准确、可靠,相比于已有方法,蛋白富集量更大、操作简便、设备要求低,可用于酶法工艺阿莫西林中残留蛋白的测定,对酶法工艺半合成抗生素中残留蛋白的质控及酶法工艺稳定性监测提供了一定技术指导。     

In vivo effect of nitrogen dioxide on the activities of glycolytic enzymes in red blood cells of rats

The effects of short-term exposure to NO2 on the glycolytic enzymes of rat red cells were examined. Exposure to 10 ppm NO2 resulted in decrease in activities of pyruvate kinase (PK) and phosphofructokinase (PFK) at day 1 and then increased progressively. Exposure to 4 ppm NO2 caused progressive increases in these enzyme activities from the first day. At day 5, the PK and PFK activities of exposed animals became higher than those of controls followed by decreasing to the control level at day 10. Red blood cells were fractionated according to their ages. The specific activities of PK and PFK decreased as red cells became older. 7-day exposure to 4 ppm NO2 resulted in elevation of PK and PFK activities in all red cell subfractions. In addition, the amount of youngest cells decreased concomitant with increases in those of older cells. These findings suggest that NO2 inhalation enhances red cell turnover.     

RP-HPLC法测定氨茶碱血清浓度

目的:建立测定氨茶碱血清浓度的方法。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为BDS C18,流动相为甲醇-水(15∶85),柱温为35 ℃,流速为1 mL·min-1,检测波长为275 nm。结果:氨茶碱有效成分茶碱血药浓度在0.5～42.5 μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),最低检测限为0.5 μg·mL-1;方法回收率为91.60%～95.00%,提取回收率为68.04%～70.77%;日内RSD≤2.20%,日间RSD≤3.28%。结论:本方法简便、准确、灵敏、重复性好,可用于氨茶碱血药浓度监测。     

1,6-二磷酸果糖镁对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的保护作用

研究 1 ,6-二磷酸果糖镁 ( FDP- Mg)对异丙肾上腺素 ( Iso)所致心肌损伤的保护作用 .大鼠 sc Iso( 8mg· kg-1· d-1,3d)造成心肌损伤模型 ,测定心肌组织和血清肌酸激酶 ( CK) ,乳酸脱氢酶( LDH) ,超氧化物歧化酶 ( SOD)活性及丙二醛( MDA) ,Mg2 ,P和 K 含量 .结果 :每天给予 Iso的同时给予 FDP- Mg( 2 50 - 1 0 0 0 mg· kg-1· d-1,3d)能明显降低血清 CK,LDH水平 ,抑制心肌组织中 CK,LDH释放 ,提高血清和心肌 SOD活性 ,降低MDA水平 ,提高心肌及血清 Mg2 和 P含量 ,降低血清 K 浓度。综合了 FDP- Na2 ( 530 mg· kg-1·d-1,3d)和硫酸镁 ( 1 50 mg· kg-1· d-1,3d)的作用特点。结果表明 ,FDP- Mg对 Iso所致大鼠心肌损伤具有保护作用 ,与其抗氧化及改善心肌代谢有关 .     

1,6-二磷酸果糖镁对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的保护作用

研究1,6-二磷酸果糖镁（FDP-Mg）对异丙肾上腺素（Iso）所致心肌损伤的保护作用. 大鼠sc Iso (8 mg·kg^-1·d^-1, 3 d)造成心肌损伤模型,测定心肌组织和血清肌酸激酶（CK）, 乳酸脱氢酶（LDH）, 超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）, Mg²⁺, P和K⁺含量. 结果：每天给予Iso的同时给予FDP-Mg（250-1000 mg·kg^-1·d^-1, 3 d）能明显降低血清CK,LDH水平,抑制心肌组织中CK,LDH释放,提高血清和心肌SOD活性,降低MDA水平,提高心肌及血清Mg²⁺和P含量,降低血清K⁺浓度。综合了FDP-Na₂（530 mg·kg^-1·d^-1, 3 d）和硫酸镁（150 mg·kg^-1·d^-1, 3 d）的作用特点。结果表明,FDP-Mg对Iso所致大鼠心肌损伤具有保护作用,与其抗氧化及改善心肌代谢有关.     

HPLC-荧光检测法测定美托洛尔的血药浓度

目的:建立以高效液相色谱-荧光检测法测定美托洛尔血药浓度的方法。方法:色谱柱为Symmetry C18,流动相为乙腈-水-三乙胺-磷酸(110:390:2.5:1.6),荧光检测波长为激发波长(Ex)=265nm、发射波长(Em)=298nm,流速为0.8mL.min-1,进样量为20μL。结果:美托洛尔血药浓度在2.0～100.0μg.L-1范围内线性关系良好(r=0.9996);低、中、高3种浓度的平均相对回收率分别为99.73%、98.21%、99.38%,日内RSD分别为2.89%、2.36%、1.32%,日间RSD分别为3.73%、3.03%、2.25%,最低检测限为1.0μg.L-1。结论:本方法精密、准确、特异性强、回收率高、操作简便,适用于临床血药浓度监测及药动学研究。