单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究Ⅱ

将血吸虫肠相关阳极抗原单克隆抗体1B10A标记过氧化物酶后用于Dot-ELISA检测了急、慢性血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90％、80.8％,除肺吸虫外,对其他主要的寄生虫病感染、非寄生虫感染性疾病及正常人无阳性反应。检测EPG>80病人血清中的抗原水平高于EPG<80者;病人经有效药物治疗后,粪检阳性者,大部分抗原检测转为阴性,其余抗原滴度呈不同程度下降。将该单克隆抗体与肠相关阴极抗原的单克隆抗体,分别检测同批血清,结果基本一致。将肠相关阳极抗原与阴极抗原的单克隆抗体联合应用,能增强某些弱反应。     

血吸虫病人治疗前后循环抗原水平的观察

检测血吸虫循环抗原,具有反映病人活动性感染的病原诊断意义,近年来随着单克隆抗体(McAb)的应用,已使该法成为血吸虫病血清学诊断的发展方向.为此,我们应用以日本血吸虫肠相关趋阴极抗原(CCA)的单克隆抗体建立的Dot-ELISA法对低感染度的慢性血吸虫病人进行了治疗前后血清CCA水平的检测,观察病人治疗前后循环抗原水平的变化,了解其反映感染度和疗效的意义.     

单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫病人循环抗原

制备抗日本血吸虫排泄分泌抗原单克隆抗体(McAb),应用于斑点酶联免疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原.血吸虫病人血清的阳性率为80.9％(152/188),其中EPG为1～24、25～99和≥100的病人检出率分别为76.8％、86、6％和100％。血吸虫病人经吡喹酮治疗1年以上粪检阴性者50例,均为阴性.并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人、丝虫病人和健康人血清均为阴性.McAb-Dot-ELISA操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。     

McAb-RIHA检测日本血吸虫循环抗原

目的观察单克隆抗体反向间接红细胞凝集试验(McAb-RIHA)检测血吸虫循环抗原的敏感性和特异性。方法采用McAb-RIHA双盲法测定正常人与各种类型血吸虫病人血清,同时进行交叉反应与重复性试验。结果McAb-RIHA检测正常人血清,假阳性率为2.17%;对急性、慢性及晚期血吸虫病人阳性率分别为99.39%、84.00%、28.57%,与粪检阳性病人阳性符合率为84.00%。急性血吸虫病人体内循环抗原含量高于慢性血吸虫病人及晚期血吸虫病人,反应滴度的平均几何均数为慢性血吸虫病人的13.3倍,晚期血吸虫病人的36.4倍;而不同感染度的慢性血吸虫病人体内循环抗原的滴度与粪虫卵数无明显关系。结论McAb-RIHA检测日本血吸虫循环抗原有较好的敏感性和特异性     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅰ

将血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体用于Dot—ELISA,共检测2175份血清,其中急性血吸虫病血清210份,阳性率为91.9％;慢性血吸虫病血清798份,阳性率为86.7％;正常人血清752份,假阳性率为1.1％;除肺吸虫病外,对其他寄生虫病或非寄生虫感染疾病血清无明显交叉反应。用单盲法Dot—ELISA检测3批血清,结果敏感性为86.5％～95.1％;特异性为96.9％～100.0％。检测流行区居民547份血清,Dot—ELISA阳性反应130份;粪检阳性72例。两者均为阳性者55例,相符率为76.4％。上述结果表明,Dot—ELISA检测循环抗原确实具有较好的敏感性与特异性,适于大规模应用及流行病学调查。     

DOt-ELISA用于急性血吸虫病的临床诊断

血吸虫循环抗原的检测可反映宿主体内活性感染、虫负荷量以及评价药物的治疗效果。严自助等将日本血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体用于D0t－ELISA检测各期血吸虫病患者,取得满意效果［‘j。我们用此法对gi例急性血吸虫病患者做了检测,同时做了粪孵、COPT、嗜酸性细胞计数等项检查,结果如下。卫材料和方法1．l材料①单克隆抗体D。t－ELISA试剂盒由中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供润急性血吸虫病患者血清来自本院门诊及住院病人;③肝吸虫病人血清由本院血防科提供;④正常人血清由本市兄弟医院提供。1．2操作方法用取样环…     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

Dot-ELISA检测血吸虫病人循环抗原的应用

日本血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体,用于斑点酶联免疫试验(Dot-ELISA)检测循环抗原,是近几年应用的新方法,在实验研究方面获得十分满意的结果,并研制出检测循环抗原的试剂盒,使用更为方便.本文应用中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原Dot-ELISA试剂盒,对其检测血吸虫病的应用价值进行了观察,结果如下.     

检测血吸虫病人循环抗原及抗体的比较研究

采用单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测血吸虫循环抗原;间接血凝试验(IHA)、薄膜干卵片沉淀试验(PVC-COPT)检测血吸虫抗体;聚乙二醇(PEG)比浊法测定循环免疫复合物(CIC),并用PEG浓缩血清法作Dot-ELISA的检测.对急性、慢性、晚期血吸虫病人及健康人血清用以上方法作平行检测,同时与粪检进行了比较.     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原现场应用结果

嘉兴市郊区原为血吸虫病严重流行区,经30余年努力防治,已经达到消灭血吸虫病标准.粪检很难查到阳性病人.单克隆抗体Dot-ELISA检测循环抗原(以下简称Dot-ELISA)的方法具有较高的敏感性和特异性,其循环抗原的检出能反映宿主活动性感染.为此,以本法试用于现场,并同时采用IHA(红细胞间接凝集试验)及COPT(环卵沉淀试验)法比较,以评价其实用价值.材料与方法     

斑点—ELISA和独特型／抗独特型抑制试验...

A monoclonal antibody (designated 8SE) against membrane antigen of adult Schistosoma japonicum labeled with HRP was used in dot-ELISA (direct method) to detect schistosomal circulating membrane antigen. Sera from 48 parasitologically confirmed schistosomiasis cases were tested, 39 (81.3%) were positive. No false positive reaction was found in sera from 24 healthy controls. No cross reaction was detected in sera from clonorchiasis or paragonimiasis in 18 cases each. This results suggest that circulating membrane antigen does exist in patients with schistosomiasis and it might be used as a complementary method for diagnosis of schistosomiasis. A preliminary result of idiotype/antiidiotype interaction inhibition reaction for detecting circulating membrane antigen was also presented.     

斑点-ELISA和独特型/抗独特型抑制试验检测日本血吸虫病患者循环表膜抗原

将血吸虫成虫表膜机原的单克隆抗体8SE4联接辣根过氧化物酶制成结合物,用于直接法斑点-ELISA检测循环抗原。结果48例血吸虫病患者的阳性率为81.3％(39例),24例正常人未出现假阳性反应。检测华支睾吸虫及并殖吸虫病患者各18例,均无交叉反应。本结果证实日本血吸虫病患者血清中有循环表膜抗原存在。直接法斑点-ELISA方法简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为诊断日本血吸虫病的补充方法。本文还报告了独特型/抗独特型(8SE_4/抗8SE_4)抑制试验检测循环表膜抗原的初步结果。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分另伪３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性,抗原和单抗可规模化     

金标渗滤法快速检测血吸虫循环抗原的现场应用研究

将抗重组蛋白ＳＶＬＢＰ－ＩｇＧ用于ＤＩＧＦＡ检测２２２１例血清中血吸虫循环抗原,其中急性血吸虫病人血清７０份,慢性血吸虫病人血清３０７份,循环抗原检出率分别为１００％和６８．４％。非流行区健康人血清２００份,未见阳性反应。除肺吸虫外,与其它寄生虫或非寄生虫感染病人血清无明显交叉反应。用ＤＩＧＦＡ单盲法检测２批血清,结果显示对急性血吸虫病人的敏感性均为１００％;对慢性血吸虫病人的敏感性分别为６９．４     

血吸虫循环抗原检测及疗效考核价值

采用单克隆抗体(McAb)S31/32双夹心ELISA法检测感染不同寄生虫病人血清中循环抗原(CAg)427份,其中慢性血吸虫病188例,阳性检出率为95.2%,晚期血吸虫病阳性率4.5%(2/44),正常53人假阳性率5.7%.测定其他寄生虫感染患者及肝炎病人,除发现肺吸虫病、旋毛虫病和华枝睾吸虫病有交叉反应外,其它均呈阴性反应.同时,检测血吸虫病治疗前、后CAg,计495 份血清,慢性血吸虫病治疗前188例,阳性率95.2%,吡喹酮治疗后3、6、12和36个月,其阴转率分别为20.4%、31.9%、96.2%和87.7%.比较双夹心ELISA法和一步法ELISA检查CAg,无显著差异.测试结果提示,采用单抗S31/32建立的双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原有很高的敏感性和良好的特异性,病人在治疗后一年其阴转率高,有很好的疗效考核价值.     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。     

McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果

本文报告了用抗日本血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体致敏血球建立反向间接血凝试验,对66例急性血吸虫病,123例慢性血吸虫病,57例肝吸虫病,54例钩虫病和82例非疫区健康人血清的检测效果。结果显示,该方法检测急、慢性血吸虫病血清的敏感性分别达到98.5％和81.3％,与肝吸虫病血清交叉反应率为10.5％,与钩虫病血清未见交叉反应,与非疫区健康人血清仅有1.2％的假阳性反应。与平行对照的McAb-Dot-ELISA反应结果相比,两者在检测敏感性和特异性上差别均无显著意义,具有较高符合率,表明McAb-RIHA试验是一种诊断效率和可靠性较高的检测日本血吸虫病血清循环抗原的方法,尤其适宜基层和现场应用。