α7nAchR拮抗剂对海马神经元突触可塑性的研究

目的观察α7烟碱样乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7n AChRs)对原代海马神经元存活率及突触可塑性的调节作用。方法将原代培养的海马神经元随机分为对照组(正常培养无任何干预);α7胆碱能受体拮抗剂作用1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组。培养24 h的神经元换液后给予药物作用。作用终止后进行MTT代谢率和LDH漏出率检测。然后观察细胞模型突触的形态;Western blot检测神经颗粒素(Neurogranin,Ng)和神经调节素(Neuromodulin,Nm)的表达。结果 (1)MTT代谢率和LDH漏出率实验结果显示,相对于对照组,随着α7胆碱能受体拮抗剂作用时间延长其对海马神经元增殖的抑制作用更加明显;(2)在共聚焦显微镜下观察到,相对于对照组,α7胆碱能受体拮抗剂作用6 h后多突起神经元占总神经元的比例以及海马原代神经元突起长度明显低于对照组;(3)qRT-PCR和Western blot实验发现,相对于对照组,α7胆碱能受体拮抗剂作用6 h、12 h和24 h后Ng和Nm的表达均显著减少。结论 (1)α7胆碱能受体的拮抗剂明显抑制原代海马神经元的增殖及突触可塑性;(2)α7胆碱能受体的拮抗剂明显抑制原代海马神经元Ng和Nm的表达。     

细胞因子rhIL—1β,rhIL—2及rhIL—6对大鼠海马神经元营养作用的研究

本工作采用显微测量，图像分析和流式细胞分析方法，研究了细胞因子ｒｈＩＬ－１β，ｒｈＩＬ－２及ｒｈＩＬ－６对新生大鼠海马培养神经元突起生长发育，胞体生长状态，神经元存活数及培养过程中蛋白总量影响，结果显示，这３种细胞因子均对海马培养神经元的突起生长，胞体发育以及发育过程中神经元的蛋白质民具有明显的促进作用，并且在提高海马培养神经元存活，延长存活时间方面有较显著的效应，提示白介素类细胞因子ｒｈＩＬ－１     

神经营养因子NGF、BDNF对AD模型鼠海马移植的影响

目的:研究神经营养因子NGF、BDNF对AD模型鼠海马移植后行为和形态学变化。方法:24.只AD模型鼠随机分成4组:单纯胚基底前脑细胞悬液移植组(ST组)、含NGF或BDNF胚基底前脑细胞悬液移植组(NGF组)、(BD-NF组)和模型对照组(M组),移植后3月进行行为测试并比较移植区AchE细胞数和纤维密度,运用方差分析和SNK检验进行组间比较。结果:行为测试移植3组明显优于模型M组,含因子组又较ST组效果好(P<0.01),两因子组间差异无显著性(P>0.05);因子组存活细胞数均高于ST组,NGF组细胞数多于BDNF组(P<0.05),纤维密度两组相似(P>0.05)。结论:海马内存活胆碱能神经元能代偿受损胆碱能神经元的功能,改善动物的学习记忆功能;NGF、BDNF均能促进胆碱能神经元存活,增加AchE细胞数目和突起,但BDNF促进神经元突起延伸作用较好,而NGF则对神经元保护作用较强。     

白介素-2对海马神经细胞的功能调控

采用形态学、电生理学和生物化学等方法，研究了重组人白介素-2(rhIL-2)对新生大鼠海马培养神经元生长发育、平均蛋白总量、膜电活动以及细胞内游离钙离子浓度的影响。结果显示．rhIL-2对海马培养神经元的突起生长、胞体发育以及发育过程中神经元的蛋白质合成具有明显的促进作用，并且在提高海马培养神经元存活、延长存活时间方面有较为显著的效应。细胞内记录结果显示．rhIL-2可改变海马神经元的膜兴奋性，该作用可被纳洛酮减弱。提示阿片受体可能参与介导rhIL-2的作用过程。另外，采用fura-2荧光探针标记法发现，rhIL-2能够通过胞外钙离子的流入和胞内钙库的释放提高海马神经元胞浆内游离钙离子的浓度。上述研究结果初步表明，细胞因子rhIL-2能够调控海马神经元的功能活动。     

bFGF和EGF对体外培养新生大鼠海马神经元促生长作用的研究

研究不同浓碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对新生大鼠海马神经元生长活性的影响。方法取新生大鼠海马组织进行原代体外分离培养，从细胞形态学方面及应用ＭＴＴ法观察ｂＦＧＦ和ＥＧＦ对大鼠海马神经元的影响。结果ｂＦＧＦ能明显促进体外培养大鼠海马神经元存活及突起生长，ＥＧＦ也能促进其存活，尤以促进突起生长更为明显；     

人神经生长因子对大鼠中枢胆碱能神经元损伤后作用的实验研究

目的　研究人神经生长因子（ Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ） 对大鼠中枢胆碱能神经元轴突切断后的保护作用。方法　向双侧海马伞切断所致的痴呆大鼠脑室内注入 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ， 采用穿梭箱训练， 检测大鼠学习记忆功能恢复状况， 对脑内隔斜带复合体（ Ｓ Ｄ Ｂ） 中隔区（ Ｍ Ｓ） 胆碱能神经元采用胆碱乙酰基转移酶（ Ｃ Ｈ Ａ Ｔ） 免疫组化法观察其存活状态。结果　 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ 组大鼠术后两周内穿梭箱回避次数高于对照组（ Ｐ＜ ００１） ， 回避潜伏期短于对照组（ Ｐ＜ ００１） 。免疫组化及图像分析显示， 其胆碱能神经元存活状态优于对照组。结论　 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ 对大鼠中枢胆碱能神经元损伤具有短期保护作用； 减缓轴突切断引起的退行性变， 对痴呆大鼠学习记忆功能恢复有促进作用。     

锌对海马神经元毒性作用的机制研究

目的大量文献报道,锌在诸多神经系统疾病所致的神经元死亡过程中发挥了重要作用,但具体机制不清。本实验拟对锌的神经元毒性机制进行体外实验研究。方法在体外培养的海马神经元中加入锌(或)锌阻断剂,利用相差显微镜从形态学观察神经元损伤;Western blot法检测p38、泛素化蛋白的表达;用MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)比色法定量分析神经元的损伤;再加入锌和(或)p38抑制剂,观察泛素化蛋白表达的变化。结果锌对体外培养的海马神经元有明显的毒性作用;锌以明显的浓度依赖和时间依赖的方式诱导海马神经元中泛素化蛋白、p38的升高;抑制p38可减少锌诱导的泛素化蛋白的表达。结论高浓度的锌对神经元有毒性作用,它可能激活p38信号通路影响蛋白降解并最终导致神经元损伤。     

NRTN与GDNF联合神经干细胞移植对AD大鼠CREB和TrkB表达的影响

神经干细胞因可分化为各类神经细胞,为临床很多疾病提供了一个崭新的研究视野[1].阿尔茨海默病患者脑内神经病理改变的主要原因之一是淀粉样β蛋白使神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的过程受到抑制而不能实现结构修复.外源性神经干细胞成为补充阿尔茨海默病患者中枢结构内缺损神经细胞的一个重要来源.Neurturin(NRTN)是近些年发现的一种对多种神经细胞的正常生存及分化具有维持和促进作用的神经营养类蛋白因子,尤其是能够诱导神经干细胞向胆碱能类记忆相关神经细胞的转化,CREB是NRTN下游作用的一个因子,其磷酸化与非磷酸化比例失衡与海马区记忆认知障碍直接相关[2].GDNF能够促使损伤的胆碱能神经元恢复,具有细胞来源的特异性.幼稚神经细胞能被GDNF维持存活及向某些类型神经细胞诱导分化但成熟的神经细胞GDNF仅表现促进存活而不能诱导其分化,TrkB是GDNF调节突触活性与细胞分化进而影响大鼠海马结构和神经行为的一个重要蛋白靶点[3].     

JNK信号转导通路在Aβ25-35诱导大鼠原代海马神经元凋亡中作用机制的研究

目的 研究Aβ25-35诱导海马神经元凋亡的机制以及JNK抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK-c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法 将体外海马原代神经元培养至第7天，用β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)和JNK抑制剂(SP600125)对细胞进行处理。用光镜进行海马原代神经元形态学观察，MTT检测不同时间点的细胞活性，以及用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果 大鼠原代海马神经元经过Aβ25-35处理后，发生凋亡，细胞生存率呈时间依赖性下降，经过免疫学方法检测发现细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。MTT检测发现在使用SP600125后，细胞生存率上升，具有显著性差异。结论 体外原代海马神经元培养实验表明Aβ25-35在诱导原代海马神经元凋亡过程中，c-Jun氨基端激酶(JNK)及其底物转录因子c-Jun被激活。使用JNK抑制剂SP600125后，JNK和c-Jun均被抑制，且海马原代神经元的生存率明显提高，生存状态明显改善。研究表明JNK信号转导通路可能促成Aβ的细胞毒性作用。     

促红细胞生成素对β淀粉样蛋白诱导大鼠海马CA_1区锥体细胞线粒体细胞色素C释放的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对β淀粉样蛋白诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响及可能机制。方法采用大鼠海马内注射β淀粉样蛋白(Aβ)制作阿尔茨海默病(AD)模型。将SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及EPO处理组。Aβ大鼠海马内注射造模,然后在生理盐水组大鼠行脑室立体定向注射生理盐水,EPO处理组则行脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)。观察术后24小时海马CA1区神经元细胞色素C(Cyt C)的变化,以及术后7天海马CA1区细胞凋亡变化。结果 EPO处理组大鼠海马CA1区神经元Cyt C的表达明显高于生理盐水组(P<0.01),EPO处理组大鼠海马CA1区凋亡细胞较生理盐水组减少(P<0.01)。结论 EPO可以通过抑制Aβ1-40诱导海马CA1区锥体细胞线粒体Cyt C释放来抑制神经元凋亡。     

冈田酸抑制神经元轴突生长

目的研究蛋白磷酸酯酶2A（protein phosphatase2A，PP2A）抑制剂冈田酸（okadaic acid，OA）对胎鼠海马神经元轴突生长的影响，探讨PP2A在神经元轴突生成中的作用。方法实验分为二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）对照组和0A处理组，OA处理组依药物浓度又分为5、10、20、30、40nmol／L5个组，激光扫描共聚焦显微镜和普通光学显微镜观察海马神经元形态变化。结果对照组原代海马神经元培养48h后神经元轴突已经形成。当给予不同浓度的0A处理后普通光学显微镜下可见原代海马神经元突起生长均明显受到抑制，突起长度缩短随OA浓度增加抑制作用逐渐增强，对照组平均轴突长度为185pm，而不同浓度OA处理后则分别下降至150／μm、100,am、80ptm、75μm、50μm。结论OA抑制原代海马神经元轴突生长，提示PP2A在神经元轴突生成中起重要作用。     

阿托伐他汀对淀粉样β蛋白诱导大鼠原代海马神经元损伤保护作用的研究

目的探讨阿托伐他汀(atorvastatin,Ato)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的体外培养原代海马神经元损伤保护作用。方法选用出生0~24hSprague-Dawley大鼠乳鼠,解剖显微镜下分离海马,进行海马神经元体外培养,培养10d后用于实验。将培养的海马神经元分为3组:(1)正常对照组:加入含有1%(质量浓度)DMSO培养基;(2)Aβ1-42组:加入1.25μmol/L Aβ;(3)Aβ(1.25μmol/L)+不同浓度阿托伐他汀组(0.1、0.5、1、2.5μmol/L)。应用CellTiter-GloTM荧光细胞活性试剂盒检测培养海马神经元ATP含量,用以反映神经元活力;通过CytoTox-ONETM试剂盒测定培养细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用以测定神经元细胞膜的损伤程度;应用免疫荧光染色观察神经元突触素(SYP)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、bassoon蛋白表达。Western印迹法半定量检测海马神经元突触蛋白SYP、PSD-95、bassoon的改变。结果与正常对照组比较,培养10d海马神经元经1.25μmol/L Aβ1-42作用48h后,其ATP和LDH水平均明显降低(均P0.01),而0.5、1.0、2.5μmol/L Ato组能够明显抑制Aβ1-42引起的ATP和LDH水平降低(P0.01)。免疫荧光及Western blot结果显示,1.25μmol/L Aβ1-42可使海马神经元SYP、PSD-95、bassoon蛋白表达明显降低,而Ato能够明显抑制Aβ1-42引起的SYP、PSD-95、bassoon蛋白表达降低。结论 Ato对Aβ诱导的体外培养海马神经元毒性有保护作用,这种保护作用可能与Ato对抗Aβ1-42引起的海马神经元SYP、PSD-95、bassoon表达降低有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对β-淀粉样蛋白和H2O2致培养海马神经元损伤的保护作用研究

探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)和过氧化氢(H2O2)致海马神经元损伤的保护作用和机制，我们对培养海马神经元分别施加损伤或保护因素后，检测神经元存活率和细胞内游离钙离子浓度([Ca^2 ]i)。     

有氧训练对阿尔茨海默病模型大鼠海马齿状回神经发生的影响

目的：观察有氧训练对β淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠齿状回（DG）神经发生的影响。方法：SD大鼠48只,随机分为假手术组（侧脑室注射生理盐水）,有氧训练组（侧脑室注射Aβ25-35＋4周有氧训练）和实验组（侧脑室注射Aβ25-35）。3组大鼠行Morris水迷宫行为学检测,免疫组织化学方法检测海马DGBrdU阳性细胞数,以确定有氧训练对细胞存活的影响;微管相关蛋白免疫组化染色观察新生神经元的突起生长。结果：①与假手术组比,实验组逃避潜伏期显著延长（P〈0.05）;有氧训练组与实验组比,逃避潜伏期明显缩短（P〈0.05）;有氧训练组逃避潜伏期与假手术组比,差异无统计学意义。②与假手术组比,实验组DGBrdU阳性细胞数显著减少（P〈0.05）。③与假手术组比,实验组DG新生神经元突起的数量明显减少（P〈0.05）。④与实验组比,有氧训练可改善DGBrdU阳性细胞的显著减少（P〈0.05）、保护神经元突起的生长（P〈0.05）。结论：Aβ25-35能诱导AD大鼠模型的建立,损害新生神经元突起生长和新生神经元的存活;有氧训练可改善Aβ25-35损害的大鼠新生神经元突起生长和新生神经元的存活。     

阿尔茨海默病炎症发病机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一种常见的老年神经变性疾病，临床上表现为进行性认知功能障碍和精神异常。其病理特征为：神经元外的β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成老年斑(senile plaques，SP)。神经元内tau蛋白异常聚集形成神经纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)，脑皮质、海马胆碱能神经元及其突触大量丢失。累及的皮层动脉和小动     

左旋多巴和多巴胺对中脑原代细胞的毒性作用

目的：观察左旋多巴和DA对中脑原代培养细胞的毒性作用。方法：采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法，运用TH免疫荧光染色和[^3H]DA摄取率检测DA能神经元的存活数和功能；GFAP免疫荧光染色检测星形胶质细胞的存活数；以及MTT检测非DA能神经元的存活数。结果：左旋多巴或DA处理后的TH阳性和GFAP阳性细胞数以及细胞存活率均显著低于加药前基数，且呈剂量依赖性；同时残存细胞体积变小，突起减少，变短或断裂。TH阳性细胞和GFAP阳性细胞比非DA能神经元更易受损。结论：左旋多巴和DA对中脑原代细胞培养中的DA能神经元和非DA能神经元均有毒性作用。     

17-β雌二醇对大鼠海马神经元保护作用的实验研究

目的研究17-β雌二醇对大鼠海马神经元树突生长的影响及血清饥饿情况下对神经元存活率的影响。方法体外培养3d的海马神经元通过加入浓度为1nmol/L和2nmol/L的17-雌二醇,统计比较神经元树突的数目和长度;体外培养1d的海马神经元,加入17-雌二醇,培养6～7d后血清饥饿48h后进行NSE染色及MTT检测,检测神经元形态及神经元存活率。结果 17-雌二醇可显著增加存活神经元树突的长度和数量;并能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞减少,增加其存活率。结论 17-β雌二醇对大鼠海马神经元的生长发育及存活具有保护性作用。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和热休克蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法 ,观察低氧预处理对大鼠海马培养神经元缺氧耐受性和热休克蛋白(Hsp70 )表达的影响。结果显示 ,低氧预处理能诱导海马神经元对Hsp70的表达。经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Hsp70表达较对照组明显增强 ,神经元损伤程度减轻 ,神经元存活数明显高于对照组。本结果表明 ,低氧预处理可诱导海马培养神经元对Hsp70的表达 ,并使海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元的死亡     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐性和热休克蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法,观察低氧预处理对大鼠海马培养神经元缺氧耐受性和热休克蛋白（Ｈsp70)表达的影响。结果显示,低氧预处理能诱导海马神经元对Ｈsp70的表达。经低氧预处理的海马神经元缺氧－复氧后Ｈsp70表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组。本结果表明,低氧预处理可诱导海马培养神经元对Hsp７０的表达,并使海马神经元对缺氧产生耐受,减少缺氧－复氧后神经元的死亡。     

救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的　观察中药救脑益智胶囊对 D-半乳糖老化小鼠 (DGAM)海马神经元β-淀粉样肽 (β-amyloid,Aβ)及其相关蛋白表达的影响。方法　采用免疫组织化学染色和免疫印记方法 ,检测 DGAM模型海马神经元 Aβ、β-分泌酶、内质网 Aβ结合蛋白和早老蛋白 -1的表达水平 ,并观察中药救脑益智胶囊对 DGAM的保护作用。结果　对照组小鼠海马 CA1区神经元有少量 Aβ及其相关蛋白表达 ,而 DGAM海马 CA1区神经元 Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ,中药组上述各种蛋白的表达与对照组相比差异无显著性。结论　 DGAM海马神经元存在 Aβ及其相关蛋白表达的上调 ,中药救脑益智胶囊可明显改善模型动物中上述蛋白的异常表达 ,对神经元具有一定的营养和保护作用。