静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的　探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　(1) 将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养,采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1(0·1、1 、10 ng/ml) 0、6、12、18、24 h后,对髁突软骨细胞增殖活性(PI值)的影响。(2)将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同浓度TGF-β1及5 kPa静张应力联合应用0、6、12 h后,对髁突软骨细胞增殖活性 (PI值)的影响。结果　不同浓度TGF-β1(0·1、1、10 ng/ml)在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应,对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12~18 h段,增殖峰值在18 h左右;在5 kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论　静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

静张应力对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节研究

目的　探讨静张应力环境对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同血清浓度及持续不同的静张应力(5 kPa、10 kPa)在0~12 h内对髁突软骨细胞增殖活性的影响。结果　低血清培养基中,随培养时间的延长,硅胶膜上髁突软骨细胞的增殖活性受到抑制;短期(2h)的静张应力(5 kPa、10 kPa)对髁突软骨细胞细胞周期的调控影响不大;0~10 h内5 kPa静张应力组软骨细胞增殖指数随着张应力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于10 h处;0~8 h内10 kPa静张应力组软骨细胞增殖指数随着张应力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于8 h处;5 kPa静张应力组较10 kPa静张应力组对髁突软骨细胞具有更大的促增殖作用。结论　静张应力可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

生长激素、张应力对兔下颌髁突软骨细胞增殖活性及功能的影响

下颌髁突软骨在颅面的生长发育中起着重要作用。功能矫形治疗中 ,下颌髁突软骨的生长改建一直是国内外学者关注的焦点。大量体内实验证明 ,功能矫形前伸下颌后 ,颞下颌关节及下颌髁突周围组织结构的生物力学环境发生改变 ,生长期动物下颌髁突软骨内的激素和生长因子 (如雌激素、胰岛素、睾酮、甲状腺素、甲状旁腺素、IGF 1、TGF β,PGE2等 )的含量和分布发生改变 ,髁突软骨细胞增生 ,下颌骨生长 ,达到功能矫形治疗错畸形的目的。大鼠下颌髁突软骨细胞体外培养研究发现 ,静张应力、压应力、bFGF、IGF l、TGF β以及静张应力与TGF β联合作用 ,在一定的力值范围、一定的时间内可以促进髁突软骨的增殖活性 ,且静张应力联合TGF β共同作用时的促增殖效应比单独使用TGF β更强 ,但随作用时间延长 ,逐渐表现出抑制作用。而外源性生长激素 (GH)及张应力能否促进体外培养兔下颌髁突软骨细胞的增殖活性及分泌功能 ,生长激素与张应力联合应用是否具有协同促进作用 ,目前尚未见报道。本研究通过兔下颌髁突软骨细胞体外培养 ,采用四点弯曲细胞力学加载仪 ,对细胞施加不同浓度的外源性生长激素和张应力 ,使用流式细胞仪和免疫组织化学方法 ,探讨生长激素和张应力在不同时间段对下颌髁突软骨细胞增殖活性及分     

rhIL—1β及TGF—β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的：探讨rhIL-1β及TGF－β对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL-1β及TGF－β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果：MTT检测，rhIL-1β（10，20ng/ml）处理软骨细胞48h后，可明显抑制软骨细胞增殖，经统计学检验，处理3－6d有显著性差异（P＜0．01,t检验）；加入TGF－β（10，20ng/ml)可明显拮抗rhIL-1β对软骨细胞增殖的抑制作用，并且浓度愈高对rhIL-1β的抑制作用愈强。PCNA检测，rhIL-1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低，随rhIL-1β的刺激浓度增加，阳性率明显降低；加入外源性TGF－β可以使PCNA的阳性率提高。结论：rhIL-1β对髁状突软骨细胞增殖具有报制作用，外源性TGF－β对该作用具有明显的拮抗效应。     

静压力对髁突软骨转化生长因子β1表达影响的体外研究

目的:观察静压力对体外培养髁突软骨细胞表达TGF-β1的影响。方法:解剖、培养SD大鼠髁突软骨,应用静压力加载装置对实验组软骨加载强度为10kPa的持续静压力1h。对照组除软骨不加力外,其它培养条件与实验组相同,加力完成后2组同时收集样本。用免疫组化技术检测2-实验组和对照组髁突软骨TGF-β1的含量和分布,用彩色病理图像分析仪检测髁突软骨各层TGF-β1表达的强度。结果:实验组的髁突软骨各层细胞TGF-β1表达均增强,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。其中成软骨细胞层改变最明显(P<0.01)。结论:静压力促进髁突软骨各层细胞TGF-β1表达增强,其中成软骨细胞层表达增强最为明显。     

应力下IGF-Ⅰ对颞下颌关节软骨的作用的研究进展

颞下颌关节应力敏感区中的髁突软骨与下颌骨发育和改建有着密切关系,髁突软骨在应力作用下能够响应力学刺激,从而促进髁突软骨细胞的增殖以及分化。胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor,IGF）-Ⅰ在髁突软骨生长发育中有着重要影响,通过与受体的结合,发挥生物学效应,而且IGF-Ⅰ在应力刺激下会促使髁突软骨合成,参与髁突的改建。本文主要阐述IGF-Ⅰ及其在应力作用下在颞下颌关节的相关表现,旨在进一步明确应力下IGF-Ⅰ在颞下颌关节软骨中的作用机制。     

生长因子对人髁突软骨细胞DNA及胶原合成的影响

目的:研究胰岛素样生长因子(IGF-)、碱性成纤维样生长因子(bFGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髁突软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法:采用体外细胞培养技术及同位素掺入法。结果:在0.4%新生小牛血清(NCS)条件下,bFGF对人髁突软骨细胞DNA合成有显著的促进作用,浓度在1ng/ml以上具显著性(P<0.05)。IGF-在10～100ng/ml呈剂量效应地促进3H-TdR的掺入,而TGF-β1无显著作用。bFGF在0.1～100ng/ml可显著促进人髁突软骨细胞3H-Proline掺入,最大效应剂量为10ng/ml(增加60%)。IGF-在10～100ng/ml能够明显促进细胞胶原合成,最大值在100ng/ml(增加98%)。TGF-β1在1～10ng/ml明显抑制3H-Proline掺入,最大抑制浓度为1ng/ml,抑制率约为24%。结论:生长因子可有效促进软骨细胞增殖及基质合成,为关节软骨损伤性疾患的治疗提供一种有效的途径     

不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨不同静压力对髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：对培养到第3代新生SD大鼠髁突软骨细胞加载0、12、24、36kPa静压力1h后立即收集样本，用流式细胞仪检测细胞凋亡与增殖指数的变化。结果：随着压力的增加（0、12、24、36kPa），除24kPa外，细胞增殖指数和凋亡指数在加力结束时（0h）均减少（P〈0．05），其中，细胞增殖指数在36kPa加力结束时减幅最大，细胞凋亡指数则在12kPa加力结束时减幅最大。结论：在0、12、24、36kPa力值范围内，软骨细胞增殖、凋亡与应力值存在一定的关系，但这并非是简单的线性关系。     

静压力下兔髁突软骨细胞COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达变化

目的 研究兔髁突软骨细胞对静压力的分子生物学响应。方法：体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞,使用形态学观察,COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色方法对P2代髁突软骨细胞进行鉴定;100kPa静压力条件下,分别对P2代髁突软骨细胞进行0、1、2、3和4 h的加压处理;采用CCK-8检测压力加载后各组细胞活性的变化;通过Western免疫印迹分析髁突软骨细胞COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果：兔髁突软骨细胞呈多角形,“铺路石”样排列,细胞爬片COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色鉴定结果为阳性。100kPa静压力加载1 h时,细胞活性显著降低（P=0.04）,但在2~4 h后,细胞活性恢复并与对照组无显著差异。Western印迹结果显示,压力加载3 h和4 h时,COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达显著升高。其中,在压力加载4 h组ALP的表达量比3 h组低。结论：兔髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有一定的适应能力,100kPa静压力加载4 h不会对髁突软骨细胞活性产生不可逆损伤。适宜的压力加载对髁突软骨细胞的成软骨和成骨能力有促进作用。髁突软骨细胞压力微环境的改变,可能影响颞下颌关节适应性改建和颞下颌关节紊乱病的病理过程。     

机械压力对大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性影响的体外研究

目的:建立体外培养细胞加力装置,在细胞水平探讨机械力作用下大鼠髁突软骨细胞功能代谢的变化。方法:采用流式细胞术检测不同时段、不同力值的机械压力对体外培养的大鼠髁突软骨细胞增殖活性的影响。结果:在一定时间、0～2.03×10-4Pa(0～207g/cm2)力值范围内,随着机械压力的增大,受压的下颌髁突软骨细胞增殖活性增高,以持续压力作用6h最为明显;当持续压力作用于下颌髁突软骨细胞24h后,细胞增殖活性则出现下降。结论:在一定时间、一定力值范围内,随着机械压力的增大,受压的下颌髁突软骨细胞增殖活性有逐渐增高的趋势;当持续压力作用超过一定的范围,细胞增殖活性则出现下降趋势     

IGF-1信号通路相关蛋白在大鼠髁突软骨细胞增殖分化中的表达

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time PCR及Western印迹法检测细胞内IGF-1R、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。饥饿培养24 h后,实验组加入质量浓度为100 ng/mL的重组大鼠IGF-1细胞因子(rrIGF-1)继续培养24、48 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Real-time PCR技术检测各组髁突软骨细胞内IGF-1R、IGF-2R、Raf1、GSK-3、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、Bax、integrin、TGF-βmRNA表达情况;对照组培养液不加rrIGF-1。结果:各鼠龄组SD大鼠髁突软骨细胞内IGF-1表达均阳性,IGF-1R mRNA及蛋白表达相对平稳,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达逐渐增强,在出生14 d后表达下降(P<0.05)。加入100 ng/mL rrIGF-1后,髁突软骨细胞增殖速度显著增加,细胞凋亡减少,Real-time PCR结果显示实验组IGF-1R、GSK-3、Bax、integrin mRNA表达整体呈下降趋势;IGF-2R、Raf1、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、TGF-βmRNA表达水平总体呈上调趋势,差异有统计学意义。结论 :IGF-1介导的信号转导途径参与了髁突软骨细胞的增殖、分化以及软骨形成早期的调控,并可能与integrin、TGF-β等其他蛋白相互作用,共同参与髁突发育过程。     

rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF β对该作用具有明显的拮抗效应     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子-1(TGF-β_1)表达变化的研究

目的：检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子－１（ＴＧＦ－β１）分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。方法：实验组戴模拟临床功能矫治器，引导大鼠下颌前伸，并在实验后不同时期处死大鼠，取下髁突，应用免疫组织化学方法探测ＴＧＦ－β１在髁突中的含量及分布。结果：髁突各层软骨细胞均有ＴＧＦ－β１的分布，以成熟层阳性强度最高；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨细胞各层ＴＧＦ－β１的表达均增强。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性的影响

目的 探讨不同力值、不同时段体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性及功能状态的影响。方法 分离培养大鼠髁突软骨细胞至第三代，利用四点弯曲细胞力学加栽仪进行体外周期性单轴压应力加裁，力值为2000和4000μ strain，时间0、15、30、60、120和240min；采用流式细胞计量术和MTT四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下增殖活性的变化。结果 2000μ strain周期性单轴压应力作用120min后，细胞增殖活性逐步增强，SPF增加（P〈0．001）；4000μstrain周期性单轴压应力作用60min后，髁突软骨细胞SPF出现了一明显下降，相反G2期细胞比例增高（P〈0．001）；120min后S期、G2细胞比例开始恢复，240minSPF增加（P〈0．001）。加力后1、2、3天，实验组细胞的增殖活性与对照组相比无统计学差异。结论 2000ttstrain周期性单轴压应力刺激能促进大鼠髁突软骨细胞增殖活性逐步增强；而4000μ strain周期性单轴压应力能引起细胞增殖活性早期发生变化，表现为先抑制后促进。两组细胞增殖活性变化均为暂时性、可恢复的。     

透明质酸、TGF-β1对下颌骨髁突软骨增殖分化的影响

目的:研究透明质酸(HA)、TGF-β1因子对下颌骨髁突软骨增殖分化的影响.方法:取新生小鼠的下颌骨髁突软骨体外进行组织培养,按培养液内添加因子不同分为对照组、HA(0.5 mg/ml)、TGF-31(5 ng/ml)组,于培养1、2、4、6、8周后进行形态学观察、软骨面积测量、茜素红染色以及碱性磷酸酶染色研究.结果:对照组中髁突软骨在培养4周后软骨内开始出现高密度光阻射区,茜素红染色、碱性磷酸酶染色提示软骨基质出现了钙化、软骨内成骨的过程;HA组中髁突软骨内未出现高密度光阻射区,而髁突软骨面积却显著增大(P ＜0.05);TGF-β1组中髁突软骨在培养2周后提前出现了高密度光阻射区,然软骨面积无显著改变(P＞0.05).结论:在体外培养下,HA可以促进髁突软骨的增殖,对软骨细胞的肥大分化有一定的抑制作用,TGF-31在早期可显著促进髁突软骨细胞的肥大分化.     

雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖与碱性磷酸酶活性联合效应的研究

目的:探讨雌激素及压力对髁突软骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的联合刺激效应.方法:体外培养髁突软骨细胞分为对照、90kPa/1 h刺激、高、中、低浓度雌激素刺激及压力与各实验浓度雌激素联合刺激组,采用MTT法检测细胞增殖、酶动力学方法检测细胞ALP活性.结果:压力与雌激素都可促进MCCs的增殖与ALP活性,压力的存在并不影响外源性雌激素的促细胞增殖作用,但外源性雌激素可对压力的促增殖作用产生明显的抑制效应,双因素联合作用对ALP活性的促进作用最强.结论:雌激素与压力联合作用对髁突软骨细胞的增殖并不产生叠加效应,但对ALP活性显示出明显的叠加刺激效应.     

甲状旁腺相关蛋白及其受体PTH1R及Ihh信号在鼠胚髁突软骨中的分布特征

目的探讨甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)及其受体PTH1R及Ihh信号在髁突软骨发育过程中的分布特征及意义。方法取E14~18 d鼠胚,以免疫组化及原位杂交染色方法,检测PTH1R抗体及PTHrPI、hh mRNA在下颌髁突软骨发生过程中的分布特征。结果在鼠胚下颌髁突软骨发育过程中,PTHrP、PTH1R主要表达于软骨膜间质细胞、软骨细胞及大部分肥大软骨细胞中,Ihh主要位于肥大软骨细胞上层及其与扁平细胞层交界处,PTHrP及Ihh信号可能通过自分泌和(或)旁分泌作用调控髁突软骨细胞的增殖和分化。结论鼠胚下颌髁突软骨发育过程中,PTHrP、PTH1RI、hh的分布特征与其在生长板分布不同,提示PTHrP可能对髁突全层软骨细胞均具有增殖促进作用。     

甲状旁腺相关蛋白对鼠胚髁突软骨细胞增殖和分化的调控

目的 探讨甲状旁腺相关蛋白（PTHrP）对鼠胚髁突软骨细胞增殖和分化的影响。方法 在体外分离培养鼠胚髁突软骨细胞的基础上,观察PTHrP对其软骨结节形成、碱性磷酸酶（ALP）活性等的影响。结果 研究发现加入浓度分别为0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L的PTHrP后,0.01 nmol/L组与对照组相比,形成的软骨结节数量在统计学上无显著性差异（P>0.05）,而软骨结节数量从0.1 nmol/L组开始与对照组相比明显增加,统计学上
有显著性差异（P<0.05）。而ALP活性在0.1-10 nmol/L组与对照组相比明显升高,统计学上有显著性差异（P<0.05）。阻断其受体后,实验组和对照组软骨结节形成的数目明显减少（P<0.05）,而对其ALP活性的影响在实验组和对照组之间无显著性差异（P>0.05）。结论 PTHrP通过其受体具有促进髁突软骨细胞增殖和分化的作用,其调控机制与其在生长板软骨细胞及下颌膜内成骨中的作用相似。     

不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨不同加载频率的拉应力对髁突软骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离2周龄新西兰兔髁突软骨细胞,对细胞施加2 h/d,为期3 d的不同频率(0 Hz、0.1 Hz、0.5 Hz、1 Hz)的拉应力。采用CCK8检测细胞增殖水平,实时荧光定量RT-PCR检测Sox9、Runx2、VEGF的表达。结果:细胞增殖水平在静止性(0 Hz)组显著高于周期性加力(0.1~1 Hz)组和对照组;Sox9、Runx2、VEGF表达在0.5 Hz组和1 Hz组显著高于静止性(0 Hz)组和对照组。结论:不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化有差异性影响。     

双侧下颌牵张成骨对转化生长因子β1在颞下颌关节髁突表达的影响

目的　研究狗的双侧下颌牵张成骨中颞下颌关节髁突的形态改变及转化生长因子β1(TGF-β1)在髁突的 表达。方法　16只狗随机分为4组,每组4只,分别为牵张6 d组、牵张后固定2周组、牵张后固定8周组及正常对 照组。各实验组的牵张频率均为1 mm/d,1次/天。对每组动物的髁突标本进行苏木精-伊红染色及TGF-β1的免 疫组化染色观察。结果　苏木精-伊红染色可见实验组动物的髁突纤维软骨早期有不同程度的损伤,增殖带、肥 大带细胞增生活跃,软骨钙化层及其深层软骨成骨活跃;TGF-β1阳性染色主要定位在肥大带细胞胞浆、周围基质和 成骨反应活跃处的成软骨细胞、成骨细胞及周围基质。牵张后固定2周时这种改建修复现象最明显,8周时逐渐恢 复至正常对照组的表现。结论　双侧下颌牵张成骨对颞下颌关节髁突影响主要表现为髁突纤维软骨组织形态学 的改变和软骨、骨的改建活动,但随着固定时间的延长这种改变逐渐修复。